支气管哮喘患者外周血TH1、TH2、TH17及Treg细胞相关细胞因子的表达及意义

目的研究支气管哮喘患者T_H1、T_H2、T_H17及Treg细胞相关炎性因子的变化规律。方法采用多重蛋白定量技术(CBA法)检测支气管哮喘患者及健康对照人群血清中T_H1、T_H2、T_H17及Treg细胞相关细胞因子的蛋白质表达。结果在支气管哮喘患者血清中转化生长因子β(TGF-β)、白细胞介素2(IL-2)、IL-4、IL-6、IL-17A的表达水平明显高于健康对照人群,且差异有统计学意义(P0.05)。在支气管哮喘患者与健康人群血清中IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。结论支气管哮喘患者外周血中TGF-β、IL-2、IL-4、IL-6、IL-17A的表达水平明显升高,推测存在TH1、TH2、TH17及Treg细胞的比列失衡。     

TH 1/TH 2、TH 17/Treg轴失衡在儿童神经母细胞瘤进展中的作用

目的探讨外周血辅助性T细胞(T helper cell,T_Hcell)亚群在儿童神经母细胞瘤(Neuroblastoma,NB)患儿初诊时的表达及T_H1/T_H2、T_H17/Treg轴失衡的临床意义。方法选取2015年5月至2017年6月于首都医科大学附属北京儿童医院确诊的NB患儿以及健康儿童为研究对象,流式细胞术检测NB患儿初诊时及健康儿童体检时外周血标本中T_H1细胞、T_H2细胞、T_H17细胞、Treg细胞的比例,并用非参数检验进行统计学分析。结果 NB组患儿的外周血CD4+T细胞中T_H1细胞[8.20(4.90,13.80) vs 13.05(9.83,17.80),Z=-5.40,P0.05]和T_H17细胞[0.30(0.20,0.60) vs 0.78±0.56,Z=-4.11,P0.05]的比例较健康儿童明显下降,T_H2细胞[0.70(0.40,1.10) vs 0.50(0.30,0.88),Z=-2.49,P0.05]和Treg细胞[6.75(5.60,8.70) vs 5.24±1.92,Z=-3.70,P0.05]的比例较健康儿童明显升高。NB患儿主要临床症状,如危险度,肿瘤原发部位,受累部位等不影响T_H细胞亚群比例的变化(P0.05)。结论 NB患儿外周血中辅助性T细胞亚群比例较健康儿童出现明显轴失衡情况; NB患儿在诊断初期的主要临床症状不影响T_H细胞亚群的比例变化。     

miR-99a对类风湿性关节炎及TH17/Treg细胞的影响

目的探讨类风湿性关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)中miR-99a的表达与辅助性T细胞17(T helper cell 17,T_H17)、调节性T细胞(regulatory cells, Treg)比率失衡的关系。方法收集于我院就诊的RA患者80例,分为活动期RA组(42例)和稳定期RA组(38例),以体检健康者42例作为健康人对照组。流式细胞术测定各组外周血PBMC中T_H17、Treg细胞数;ELISA法检测各组血清IL-17、IL-6、TFN-α、IFN-γ、IL-4和IL-10的表达水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分别测定T_H17和Treg细胞特异性转录因子RORγt和FoxP3 mRNA以及RA患者PBMC中miR-99a的表达水平;western blot检测各组RORγt和FoxP3蛋白的表达水平。结果与健康人对照组相比,活动期和稳定期RA患者的T_H17细胞数、RORγt mRNA和蛋白质的表达水平均显著升高,Treg细胞数及FoxP3 mRNA和蛋白质的表达水平均显著降低(P均0.01)。活动期RA患者血清IL-17、IL-6、TNF-α、IFN-γ的表达水平均显著升高,而IL-4和IL-10的表达水平均显著降低(P均0.01)。此外,活动期RA患者T_H17细胞中miR-99a的表达水平显著升高,Treg细胞中miR-99a的表达水平显著降低(P均0.01)。Pearson相关分析结果显示,RA患者T_H17细胞中miR-99a与RORγt mRNA的表达水平呈正相关(r=0.721,P0.01),Treg细胞中miR-99a与FoxP3 mRNA的表达水平呈正相关(r=0.815,P0.01)。结论 RA患者T_H17和Treg细胞中miR-99a的表达与T_H17、Treg细胞发育分化关键转录因子RORγt、FoxP3密切相关,miR-99a可能通过影响RORγt和FoxP3,参与RA患者T_H17/Treg细胞比率失衡。     

原因不明复发性流产患者外周血Th17和Treg细胞频率及其细胞因子水平变化

目的:探讨原因不明复发性流产(URSA)患者外周血Thl7和Treg细胞频率及其细胞因子水平变化.方法:应用流式细胞技术检测URSA患者外周血Thl7和Treg细胞频率;应用ELISA方法检测URSA患者外周血Thl7细胞因子(IL-17、IL-23)和Treg细胞因子(TGFβ1和IL-10)水平.结果:URSA患者Thl7细胞在外周淋巴细胞和CD4+T细胞中的频率显著高于正常早孕者(P<0.01);而URSA患者Treg细胞在外周淋巴细胞和CD4+T细胞中的频率显著低于正常早孕者(P<0.01).URSA患者血清中IL-17、IL-23水平明显高于正常早孕者,而TGF-β1、IL-10水平显著低于正常早孕者(P<0.01).结论:URSA的发生与外周血中Thl7和Treg细胞密切相关.     

TH17细胞及IL-17在原发性抗磷脂综合征中的表达及临床意义

目的观察T_H17细胞及相关细胞因子IL-17在原发性抗磷脂综合征(PAPS)中的表达水平,并初步探讨其临床意义。方法收集32例PAPS患者及33例健康对照者静脉血标本,分离外周血单个核细胞(PBMC),流式细胞术检测T_H17细胞百分率,ELISA法检测血浆IL-17的表达水平,并分析IL-17水平与PAPS患者临床病理特征及实验室指标[抗心凝脂抗体(a CL)、抗β2糖蛋白Ⅰ(β2GPⅠ)和狼疮抗凝物(LA)]的关系。结果 PAPS患者外周血T_H17细胞百分率为(1.98±0.78)%,血浆IL-17水平为(60.72±18.71)pg/m L,均显著高于健康人对照组(P均0.01),且T_H17细胞百分率与血浆IL-17水平呈正相关(r=0.586,P0.01)。PAPS患者血浆IL-17水平与患者a CL、抗β2GPⅠ抗体和LA均无明显相关性(P均0.05)。与近期(≥3月)无相关临床事件发生的PAPS患者相比,新近(≤1月)发生动脉血栓事件的患者血浆IL-17水平差异无统计学意义(P=0.074),静脉血栓和血小板减少的PAPS患者IL-17蛋白水平显著升高(P0.01)。结论 T_H17细胞及IL-17与PAPS血栓形成和血小板减少密切相关,提示T_H17细胞及IL-17参与了PAPS脉管症状的发病机制。     

类风湿关节炎患者外周血TH17与Treg细胞的变化

目的 探讨外周血辅助性T细胞17（TH17）与调节性T细胞（Treg）在类风湿关节炎（RA）发生、发展中的变化。 方法 选取RA患者活动组25例、稳定组20例及健康人对照组25例,采用流式细胞术及定量PCR的方法,分别从蛋白质水平与mRNA水平检测其外周血CD4+T细胞IL-17及FoxP3的表达。 结果 活动组RA患者外周血CD4+T细胞IL-17蛋白质及mRNA表达水平显著高于稳定组（P<0.01）,稳定组又显著高于健康人对照组（P<0.01）。活动组RA患者外周血CD4+T细胞FoxP3蛋白质及mRNA表达水平显著低于稳定组及健康人对照组（P<0.01）,但稳定组FoxP3表达与健康人对照组差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 RA患者外周血中存在TH17/Treg细胞失衡,且这种变化与疾病的进程相关。     

原因不明反复自然流产患者外周血TLR2、TLR4表达及CD4+ CD25+ Treg细胞的变化

目的探讨原因不明反复自然流产(URSA)患者外周血TLR2、TLR4的表达及CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞变化的关系。方法用实时荧光定量PCR及流式细胞术检测35例URSA患者、24例妊娠孕妇外周血单个核细胞(PBMC)中TLR2、TLR4mRNA及其蛋白质的表达;流式细胞术检测CD4+CD25+Treg细胞的比例,并分析表达TLR2、TLR4蛋白与CD4+CD25+Treg细胞的相关性。结果 URSA组PBMC中TLR2、TLR4 mRNA分别为0.52±0.04、3.26±1.37;表达TLR2、TLR4蛋白的PBMC比例分别为(32.36±4.18)%、(41.29±3.67)%;与妊娠对照组相比,URSA组外周血TLR4 mRNA及表达TLR4蛋白的PBMC比例差异显著(t分别为19.84和21.85,P均<0.05);URSA组CD4+CD25+Treg细胞的比例为(2.75±0.62)%,显著低于妊娠对照组的(5.17±0.65)%,差异有统计学意义(t=48.40,P<0.01);URSA患者表达TLR4蛋白的PBMC与CD4+CD25+Treg细胞的比例降低呈显著相关(r=0.724,P<0.05)。结论 URSA患者外周血中低表达的CD4+CD25+Treg细胞、高表达的TLR4可能参与了URSA的发生。     

原发免疫性血小板减少症患者Th17细胞和调节性T细胞检测的意义

目的探讨Th17细胞和调节性T细胞(Treg)在原发免疫性血小板减少症(ITP)患者中的意义。方法选取32例初诊ITP患者,其中位年龄49(18~70)岁;30例健康对照,中位年龄42岁(20~65岁)。用流式细胞术检测外周血Th17细胞及Treg细胞分别占淋巴细胞的比例;用ELISA法检测血浆中IL-6和IL-17的水平。并分析ITP患者Th17细胞、Treg细胞、IL-6和IL-17的水平与PLT的相关性。结果 (1)ITP患者Th17细胞比例明显高于健康对照(2.81%±1.33%vs.0.35%±0.75%,P<0.05);Treg细胞比例明显低于健康对照(0.70%±0.39%vs.1.26%±0.24%,P<0.05);Treg/Th17比值明显低于健康对照(0.27±0.17 vs.3.76±0.87,P<0.05);ITP患者血浆中IL-17和IL-6水平均明显高于健康对照,分别为(24.07±2.22 pg/ml vs.15.89±2.23 pg/ml,P<0.05)和(75.12±4.06 pg/ml vs.49.75±4.19 pg/ml,P<0.05)。(2)ITP患者外周血Treg细胞比例与IL-6、IL-17水平均呈显著负相关(r=-0.423,P<0.05;r=-0.456,P<0.05);IL-6与IL-17水平呈显著正相关(r=0.368,P<0.05);Th17细胞及Treg细胞呈显著负相关(r=-0.417、P<0.05)。Th17细胞比例与IL-6、IL-17水平不具相关性(r=-0.272,r=-0.104,P>0.05)。(3)ITP患者Th17细胞比例、IL-6水平和IL-17水平与血小板计数呈显著负相关(r=-0.365,P<0.05;r=-0.353,P<0.05;r=-0.464,P<0.01);Treg细胞比例与血小板计数不具相关性(r=-0.101,P>0.05)。ITP患者Th17细胞比例、IL-6水平与骨髓颗粒型巨核细胞比例呈显著正相关(r=0.371,P<0.05;r=0.359,P<0.05);Treg细胞比例、IL-17水平与骨髓颗粒型巨核细胞比例不具相关性(r=-0.230,P>0.05;r=-0.043,P>0.05)。结论 ITP患者Treg/Th17细胞平衡失调可能是影响其发生发展的一个重要因素,Th17细胞与疾病的严重程度相关。     

强直性脊柱炎患者外周血TH细胞亚群和细胞因子的检测及其临床意义

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者外周血辅助性T细胞(TH)亚群和细胞因子的变化水平及其临床意义。方法用流式细胞术分析27例AS患者及30例体检健康者外周血TH1、TH2和TH17细胞亚群的比例;流式微球阵列技术(cytometric beadarray,CBA)检测血清IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、TNF、IFN-γ和IL-17A的水平。结果 AS组TH1和TH17细胞的百分率显著高于健康人对照组(P均<0.01),而TH2细胞差异无统计学意义(P>0.05)。AS患者血清IL-2、IL-6、TNF和IFN-γ表达水平也明显高于健康人对照组(P均<0.01),但IL-4、IL-10和IL-17A无显著性差异(P均>0.05)。结论 AS患者TH细胞亚群失衡,表现为TH1和TH17细胞比例及IFN-γ、TNF、IL-2和IL-6水平升高。     

结核性盆腔炎患者外周血TH17/Treg细胞的表达

目的了解结核性盆腔炎患者外周血T_H17/Treg细胞免疫应答情况,探讨其在结核性盆腔炎发病中的作用。方法采用胞内流式细胞术分别检测46例结核性盆腔炎患者治疗前外周血T_H17和Treg细胞的表达水平,以健康育龄期妇女25例作为对照,并对28例患者抗结核治疗3个月和6个月后T_H17/Treg细胞的变化情况进行随访检测。结果结核性盆腔炎患者外周血T_H17细胞的百分比为(3.26±1.30)%,明显低于对照组(4.92±1.71)%(P0.01),Treg细胞的百分比为(5.18±1.53)%,明显高于对照组(3.26±1.10)%(P0.01);结核性盆腔炎患者治疗6个月后T_H17细胞表达水平(4.67±1.75)%明显高于治疗前(3.26±1.30)%及治疗3个月(3.70±1.06)%,差异均有统计学意义(P均0.01);治疗6个月后Treg细胞表达水平为(3.93±0.94)%,明显低于治疗前(5.18±1.53)%及治疗3个月(4.94±1.51)%,差异有统计学意义(P均0.01);治疗6个月后Treg细胞仍高于对照组(P0.05);治疗前T_H17/Treg细胞的比值较对照组明显降低(P0.01),治疗3个月后升高不明显,治疗6个月后T_H17/Treg细胞的比值(1.18±0.34)%较治疗3个月(0.77±0.21)%和治疗前(0.55±0.13)%升高明显(P均0.01),但仍未恢复至正常水平(P0.01)。结论 T_H17/Treg细胞参与了结核性盆腔炎患者的免疫应答,并存在T_H17/Treg的失衡状态。     

胃癌患者TH1/TH2漂移的研究

目的观察胃癌病人外周血TH1/TH2细胞及其细胞因子水平的变化,为肿瘤的免疫治疗提供实验依据.方法应用ELISPOT法检测TH1/TH2细胞,ELISA法检测细胞因子.结果胃癌病人TH1细胞及其细胞因子降低,TH2细胞及其细胞因子升高,TH1/TH2比值降低.正常人外周血单个核细胞加IL-12和抗IL-4单抗组,TH1细胞阳性率增加,TH2细胞阳性率降低,TH1/TH2比值升高;加IL-4和抗IFN-γ单抗组TH1细胞阳性率降低,TH2细胞阳性率升高,TH1/TH2比值降低(P＜0.05).结论胃癌病人TH1细胞受抑制,TH2细胞亢进,导致机体的抗肿瘤免疫应答受抑制.利用IL-12诱导TH1细胞的增殖,有可能恢复TH1/TH2平衡.     

血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤12例临床分析

为了探讨血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤(AITL)的临床、病理特征及预后情况,回顾性分析了经病理检查证实的12例AITL患者的临床特点、病理形态及免疫表型、治疗和生存情况。结果表明:12例患者主要症状为全身淋巴结肿大,9例伴有发热等全身症状。确诊依据淋巴结活检,病理组织学呈现淋巴结结构破坏,免疫母细胞增生,树枝状血管增生的特点,免疫表型全部为成熟外周T细胞性。12例患者均用CVP为主的化疗方案,总有效率58%。3年生存率为25%,全组中位生存25个月。结论:AITL临床过程呈侵袭性,进展快,中位生存期短,预后差,应探索更为有效的治疗方案。     

T细胞中TCR Vα40与TCR Dδ3,Jδ1和ψJα重排的特点

利用巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞、4例分选的外周血CD3^ 细胞和7例心胸外科手术的非免疫性疾病和非肿瘤病人的正常胸腺细胞DNA的TCR Vα40基因与Jδ1，Dδ3和ψJα重排的情况，从对不同含量DNA的PCR分析，了解其重排分布频率。结果显示，TCR Vα40分别与Jδ1，Dδ3和ψJα重排均可见于多6数外周血T细胞和胸腺细胞中，对不同含量DNA的PCR分析显示TCR Vα40重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。研究结果提示，TCR Vα40-ψJα的重排最常见于成熟和未成熟T细胞中，而TCR Vα40-Dδ3则在未成熟T细胞中发生频率更高。     

银屑病患者 Th17和 Treg细胞及其相关细胞因子的表达

目的：探讨银屑病患者辅助性T细胞17（Th17）和调节性T （Treg）细胞及其相关因子表达的临床意义。方法用流式细胞术检测28例轻度和25例重度银屑病患者及25名健康对照者外周血中Th17和Treg细胞的比例;用逆转录聚合酶链反应（PCR）检测维甲酸相关孤儿受体γt（RORγt）和抗人叉头状转录因子（Foxp3） mRNA的表达;用酶联免疫吸附试验（ ELISA）检测血浆Th17和Treg相关细胞因子白细胞介素17（ IL-17）和转化生长因子β（ TGF-β）的水平。结果与健康对照组比较,银屑病患者组Th17细胞比例、RORγt的mRNA水平及IL-17的浓度显著上升,且重度组显著高于轻度组（P＜0．05）;而重度银屑病患者Treg细胞、Foxp3 mRNA和血浆TGF-β浓度均较健康对照组和轻度组显著降低（ P＜0．05）。结论 Th17和Treg细胞的比例及其相关因子的表达可作为银屑病病情进展的标志。     

阵发性睡眠性血红蛋白尿症患者T细胞亚群及其数量与功能的研究

本研究探讨阵发性睡眠性血红蛋白尿症（PNH）患者T细胞免疫状态及GPI^＋T细胞、GPI—T细胞的数量与功能。采用流式细胞术检测22例PNH患者及18名正常对照T细胞亚群、Th细胞亚群、GPI^＋T细胞、GPI—T细胞分别在CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞和CD8^＋T细胞群中的比例及其CD69的表达。结果显示,PNH患者CD4^＋T细胞占CD3^＋T细胞的比例[（47．7670±13．91139）％]较正常对照组[（54．9592±7．11678）％]降低,CD8^＋T细胞占CD3^＋T细胞的比例[（52．2767±13．90395）％]较正常对照组[（45．2418±6．75306）％]升高,差异均有显著性（P〈0．05）;CD4^＋／CD8^＋比值倒置,以PNH．AA患者最为明显（0．77763±0．409153）,与正常对照组（1．26356±0．348878）相比,差异有显著性（P〈0．05）。PNH患者Th1细胞比例[（16．9136±6．78899）％]较对照组[（4．4600±1．81879）％]升高,差异有显著性（P〈0．05）,PNH—AA患者Th1细胞比例变化[（22．8000±5．45244）％]较发作性PNH患者[（12．0083±2．20770）％]曼为显著,Th2细胞比例[（4．75824±．98441）％]较正常对照组[（3．7960±1．13810）％]无明显变化。PNH患者体内存在一群GPI—T细胞,其占CD8^＋T细胞的（14．67974-11．96718）％,占CD4^＋T细胞的（3．92414-2．46263）％,其占CD8^＋T细胞的比例较占CD4^＋T细胞的比例升高更为明显。PNH患者CD8^＋GPl^＋T细胞[（17．67881±8．562493）％]、CD8^＋GPI—T细胞[（15．86575±7．279743）％]、CD4^＋GPI^＋T细胞（4．65431±1．984378）％]、CD4^＋GPI—T细胞[（4．93181±1．730001）％]c1969的表达均高于正常对照组[CD8^＋T细胞（4．68038±1．216645）％,CD4^＋T细胞（1．77339±0．645259）％],差异有显著性（P〈0．05）,GPI^＋T细胞CD69的表达与GPI—T细胞相比,差异并无显著性。结论：PNH患者存在T细胞免疫功能亢进,其可能是造成骨髓衰竭的原因,但与T淋巴细胞组分中含有PNH克隆可能无关。     

CAPD腹膜炎时白细胞、T细胞亚群及白蛋白之间的相关性

目的探讨持续性非卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)患者发生急性腹膜透析相关性腹膜炎时血和腹膜透析液白细胞计数、T淋巴细胞亚群和白蛋白的变化,以及相互之间的关系。方法对2006年1月至2008年3月期间因腹膜透析相关性腹膜炎住院的22例CAPD患者(男12例,女10例,平均62.6岁)进行研究,收集腹膜炎发生后第1、3、6、9、12d的血液和腹膜透析液标本,分别检测血液和腹膜透析液白细胞总数、分类、T淋巴细胞亚群及白蛋白。血T淋巴细胞亚群对照组为同期健康体检人群24例(男13例,女11例,平均60.2岁)。结果与对照组比较,CAPD相关性急性腹膜炎不同时间点血CD3CD8(+)%明显降低,血CD4/CD8明显增高,差异均有统计学意义(P0.05);血白细胞与腹膜透析液白细胞、血CD4/CD8与腹膜透析液CD4/CD8、腹膜透析液白细胞和腹膜透析液白蛋白均呈正相关(相关系数分别为0.404,0.976,0.434,均P0.01)。22例患者中腹膜透析液培养阳性17例(77.3%),其中革兰氏阴性杆菌9例(52.9%),革兰氏阳性球菌7例(41.2%),霉菌1例(5.9%)。结论CAPD相关性急性腹膜炎时腹膜透析液白细胞计数和中性粒细胞百分比升高与经腹腔白蛋白丢失增加呈正相关;腹膜炎时血CD4/CD8比值增高,提示患者细胞免疫被激活;革兰氏阴性杆菌已成为我院CAPD相关性腹膜炎的主要致病菌。     

急性缺血性脑卒中患者外周血Th17/Treg细胞亚群 水平的变化及临床意义

目的：探讨外周血辅助性T细胞-17（Th17）/调节性T细胞（Treg）细胞亚群在急性缺血性脑卒中（AIS） 患者的水平变化及临床意义。方法：符合纳入标准的AIS患者190例纳入观察组,健康体检者60例纳入对 照组;根据美国国立卫生院脑卒中量表（NIHSS）评分将观察组分为轻度亚组61例,中度亚组64例,重度亚 组65例;根据mRS评分纳入预后良好亚组139例,纳入预后不良亚组51例。采用流式细胞仪检测并比较各 （亚）组外周血Th17/Treg细胞水平,酶联免疫吸附法检测并比较相关细胞因子（IL-17,TGF-β）;评价Th17/ Treg 细胞亚群水平对 AIS 患者预后不良的预测价值。结果：观察组患者外周血 Th17、Th17/Treg 比值及 IL-17 水平明显高于对照组（P＜0.05）,Treg 细胞亚群和 TGF-β水平显著低于对照组（P＜0.05）。外周血 Th17、Th17/Treg比值及IL-17水平比较,重度亚组最高,中度亚组次之,轻度亚组最低（P＜0.05）;Treg细胞 亚群和TGF-β水平比较,重度亚组最低,中度亚组次之,轻度亚组最高（P＜0.05）。预后不良组患者外周血 Th17、Th17/Treg比值及IL-17水平明显高于预后良好组（P＜0.05）,Treg细胞亚群和TGF-β水平显著低于预 后良好组（P＜0.05）。ROC曲线分析显示,外周血Th17细胞和Treg细胞水平对AIS患者预后不良预测的敏 感性分别为78.01%和79.17%,特异性分别为82.50%和74.50%。结论：外周血Th17/Treg细胞亚群与AIS的 病情严重程度及预后密切相关,对于AIS患者病情严重程度及预后的评估,具有一定的临床应用价值。