胸腺内注射异基因抗原诱导免疫耐受的实验研究

目的探讨胸腺内注射异基因抗原在建立特异性移植免疫耐受中的作用.方法自供体C57BL/6小鼠脾细胞中提取的H-2抗原,注入受体Balb/c小鼠胸腺内,1w后移植供体C57BL/6小鼠皮肤及无关供体C3H小鼠皮肤.观察皮肤存活时间,同时做单向混合淋巴细胞培养(mixedlymphocyteculture,MLC)、细胞介导的淋巴细胞毒(cellmediatelymphocytotoxic,CML)、迟发型超敏反应(delayedtapehypersensitivity,DTH)的检测.结果实验组移植皮肤平均存活时间(mediansurvivaltimes,MST)＞70d,对照组MST为12.6±1.69d,移植C3H皮肤的无关供体组MST为13.4±1.42d.耐受小鼠淋巴细胞对供体淋巴细胞刺激的反应性减弱,而对无关供体淋巴细胞的刺激呈正常反应,耐受小鼠对供体靶细胞的CML作用、DTH反应特异性降低.显示出胸腺内注射抗原诱导耐受的特异性.结论胸腺注射异基因H-2抗原可以诱导特异性皮肤移植耐受.     

抗MHC-Ⅰ类分子单抗促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的通过静脉注射异基因脾细胞和抗H-2b单抗加腹腔注射环磷酰胺诱导成年B6小鼠对异基因皮肤移植物产生免疫耐受.方法经C57BL/6(H-2b,B6)小鼠尾静脉注射BALB/c小鼠(H-2d)脾细胞,2 d后腹腔注射环磷酰胺(CP),随后2次尾静脉注射抗小鼠的H-2b单克隆抗体,然后进行皮肤移植,并于耐受30d对受体B6小鼠作混合淋巴细胞反应(mixed lymphocyte reaction,MLR)、迟发型超敏反应(delayed type hypersensitivity,DTH)等耐受状态检测.结果 BALB/c小鼠的皮肤移植物在耐受B6小鼠中存活期特异延长.MLR和DTH检验证明:B6小鼠对BALB/c小鼠的脾细胞产生特异性耐受,对无关第3者KM小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫反应.结论抗MHC-Ⅰ类分子单克隆抗体可明显促进"细胞+CP"诱导的异基因皮肤移植耐受;克隆排除是诱导耐受的主要因素.     

新生小鼠移植耐受的诱导及其机理探讨

本文用去T细胞的同种细胞及杂交一代(F_1)细胞成功地建立了新生小鼠移植耐受模型。通过耐受小鼠脾淋巴结细胞体内过继转移试验及移植物抗宿主反应试验(GVHR),对耐受的机理进行了探讨。实验结果表明,新生期诱导的移植耐受是特异性的,耐受的维持与T抑制细胞(Ts)参与的主动抑制机理有关。     

腺病毒载体介导的CTLA4-Ig基因转移促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的　探讨CTLA4 Ig重组腺病毒 (AdCTLA4 Ig)促进“脾细胞 (spleencells ,SP) 环磷酰胺 (cyclophosphamide ,CP)”系统诱导移植耐受的作用及其机制。方法　BALB c(H 2 d)小鼠经尾静脉注射C57BL 6(H 2 b,B6)小鼠脾细胞和AdCTLA4 Ig颗粒 ,48h后腹腔注射环磷酰胺 ,并同天进行皮肤移植 ,于耐受 2 5d时对受体小鼠进行混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)、迟发型超敏反应 (delayedtypehypersensitivity ,DTH)等耐受状态的检查。结果　B6小鼠的皮肤移植物在耐受的BALB c小鼠中存活期特异延长。MLR和DTH检验证明BALB c小鼠对B6小鼠的脾细胞产生特异性耐受 ,对无关第三者ICR小鼠的脾细胞仍表现出强烈免疫应答。结论　AdCTLA4 Ig颗粒可以明显促进“细胞 环磷酰胺”诱导的异基因皮肤移植耐受 ;克隆排除和克隆无能是耐受诱导的主要因素     

TLSFJM在体内对同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖和杀伤细胞分化的影响

目的：探讨JM急性T淋巴细胞白血病细胞分泌的抑制因子(TLSJM)对BALB／C小鼠胸腺发育的影响及其在体内对同种异体抗原诱导的小鼠辅助性T细胞(Th)增殖及杀伤性T细胞(CTL)分化的影响。方法：建立小鼠同种异基因型肿瘤排斥模型，实验小鼠腹腔注射含TLSFJM的JM细胞培养上清，对照小鼠注射RPMI1640。无菌取小鼠脾脏细胞，分别以^3H-TdR掺入法和^51Cr释放法检测T细胞增殖和CTL的分化。结果：①TLSFJM明显抑制多克隆刺激剂PHA联合IL-2诱导的小鼠胸腺细胞增殖；②体内注射TLSFJM明显抑制多克隆刺激剂PHA联合IL-2诱导的小鼠T细胞活化、增殖；③TLSFJM在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖；④TLSFJM在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠CTL分化。结论：TLSFJM在体内能有效抑制同种异体抗原诱导的小鼠T细胞增殖和小鼠CTL分化。     

抗MHC—I类分子单抗促进异基因小鼠皮肤移植耐受

目的：通过静脉注射异基因脾细胞和抗H－2^b单抗加腹腔注射环磷酰胺诱导成年B6小鼠对异基因皮肤移植物产生免疫耐受，方法：经C57BL／6（H－2b,B6)小鼠尾静脉注射BALB／c小鼠（H－2b)脾细胞，2d腹腔注射环磷酰胺（CP），随后2次尾静脉注射抗小鼠的H－2b单克隆抗体，然后进行皮肤移植，并于耐受30d对受体B6小鼠作混合淋巴细胞反应（mixed lymphocyte reaction MLR)，迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH)等耐受状态检测。结果：BALB／c小鼠的皮肤移植物在耐受B6小鼠中存活期特异延长，MLR和DTH检验证明，B6小鼠对BALB／c小鼠的脾细胞产生特异性耐受，对无关第3者KM小鼠的脾细胞仍表现出强烈的免疫反应。结论：抗MHC－1类分子单克隆抗体可明显促进“细胞＋CP”诱导的异基因皮肤移植耐受，克隆排除是诱导耐受的主要因素。     

小鼠肝浸液、脾浸液对体外人淋巴细胞功能和小鼠SRS瘤细胞生长的影响

本文报道小鼠肝浸液能强烈抑制人的淋巴细胞对植物血凝素(PHA)、刀豆素A(ConA)以及同种异型抗原所诱导的增生反应,而经60％饱和的硫酸铵盐析肝浸液组分,在相等蛋白浓度时,比原先的肝浸液有更强的抑制活性。说明选择性盐析能部分纯化肝脏免疫抑制因子。小鼠肝浸液还能抑制小鼠SRS瘤细胞在体外的生长,但抑制强度远不如对淋巴细胞反应的抑制。虽然肝浸液对同种和异种淋巴细胞增生反应有强大抑制作用,但是并未观察到对人T细胞花环形成功能的影响。小鼠脾细胞浸出液虽能显著地抑制同种淋巴细胞增生反应,但却不能明显抑制人的淋巴细胞对PHA和同种异型抗原的应答反应,也不能抑制小鼠SRS瘤细胞在体外的生长。     

门静脉输注供体脾细胞诱导基因大鼠心脏移植耐受

目的通过门静脉输注同种异基因脾细胞、腹腔给予环磷酰胺诱导同种心脏移植耐受 ,并探讨其耐受机理。方法经门静脉给予受体大鼠 3× 10 8个异基因供体脾细胞 ,2 d后腹腔注射 80 m g/kg的环磷酰胺 ,10 d后实施心脏移植手术。观察、记录移植物的存活时间 ,通过 ML R、DTH、IL- 2逆转实验及过继性转移实验 ,探讨耐受机理。结果异基因心脏移植物的存活时间明显延长 ;ML R和 DTH实验证明 :受体大鼠的免疫应答受抑制 ,且该耐受表现为供体特异性 ;IL- 2逆转实验、过继性转移实验表明 :该耐受与克隆失活、抑制细胞和“感染”耐受机理有关。结论本诱导方案对于大鼠心脏移植存活时间的延长是一有效的方法 ,移植耐受的形成涉及多种机制。     

移植免疫中T细胞疫苗作用机制的初步分析

为分析Ｔ细胞疫苗同种兔疫抑制作用的机制，在体外观察了Ｔ细胞疫苗免疫小鼠细胞免疫应答能力的改变，分别在ＭＩＣ实验中，观察了免疫小鼠血清和免疫小鼠脾细胞对同种应答细胞反应能力的影响。结果表明：免疫小鼠淋巴细胞ＣｏｎＡ转化反应能力及同种抗原反应能力均显著降低，免疫小鼠血清及其脾细胞不同程度地抑制了同种应答细胞的反应能力，但以上作用并未表现出抗原特异性。     

活化脾细胞免疫诱导同系小鼠低反应性——抑制细胞作用的分析

用ConA活化脾细胞主动免疫同系小鼠,观察了免疫鼠脾细胞在体内外对细胞免疫反应的影响。结果表明,免疫小鼠脾细胞对有丝分裂原以及同种抗原的应答能力比正常小鼠脾细胞弱;它既能抑制抗原非特异性的淋巴细胞转化,又能显著抑制MLR中反应细胞的增生,并且通过过继转输给受者可引起同种移植物存活期延长。提示:免疫小鼠的免疫低反应性形成与体内抑制细胞的诱生有关。     

CFSE标记抗原特异性CD4+CD25+T细胞在胰岛移植体内归巢的研究

目的:观察抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞在小鼠同种异体胰岛移植后体内的分布特点,探讨抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞免疫调节可能机制。方法:构建小鼠同种异体胰岛移植模型。CFSE对抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞标记,经尾静脉输注。用组织冰冻切片和流式细胞术动态了解CFSE标记的抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞在受体内的分布和增殖变化。结果:抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞联合胰岛移植组胰岛移植物平均生存期为(34.57±17.15)d,较胰岛移植组生存时间(10.6±1.82)d,差异有统计学意义(P<0.01)。抗原特异性CD4 CD25 Treg细胞在各级淋巴结均有能定居,但是胰腺淋巴结定居的细胞数量明显多于其他淋巴结。结论:抗原特异性Treg细胞抑制STZ诱导的糖尿病小鼠的急性移植排斥反应,细胞抑制功能与细胞在体内淋巴结的归巢有关。     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅰ.同种特异T细胞疫苗诱导的细胞免疫水平低下

在体外实验中观察了同种特异T细胞疫苗（TCV）免疫鼠T淋巴细胞对同种抗原和有丝分裂原（ConA）的反应能力。B6同种抗原特异TCV免疫的BALB/c小鼠对B6同种抗原的反应（MLR）能力明显变抑制,对无关第三者同种抗原AKR的反应能力也显著下降,表明存在抗原非特异性的抑制作用。在BALB/c同种抗原特异TCV免疫的B6小鼠中,获得一致的结果。在观察两组TCV免疫动物T细胞对Cond诱导的淋巴细胞增殖实验中,与正常小鼠 T细胞反应性比较,TCV免疫动物 T细胞的增殖能力显著下降,表现为抗原非特异作用。此与MLR中ConA-T细胞免疫动物的结果相一致。在CML实验里,同种抗原特异TCV免疫小鼠的脾细胞体外诱导同种CTL活性明显受到抑制,CTL 活性十分低下。体外实验结果表明:同种特异TCV免疫小鼠可诱发同种抗原反应和对ConA诱发的增殖反应能力显著低下,表现为抗原非特异性作用。     

小鼠同种抗原特异性T杀伤细胞对移植物抗宿主反应的影响

根据诱导培养的 CTL 能特异地杀伤带有原刺激抗原的靶细胞这一特性,我们用体内 GVHR 抑制实验来验证诱导培养的效应细胞的功能,发现经效应细胞处理的小鼠脾细胞引起GVHR 的能力明显降低(此效应同样显示出 H-2特异性,并可被抗 Thy 1或抗 Lyt 2抗体消除,与体外实验结果相一致)。     

可调控表达IL-2基因骨髓基质细胞促进异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建

目的　探讨可调控表达IL 2基因的骨髓基质细胞系对异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建的促进作用。方法　构建四环素诱导的表达小鼠IL 2基因的逆转录病毒载体 ,转染包装细胞PT6 7,感染骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,构建可诱导表达IL 2基因的工程化骨髓基质细胞系QXM SC1tet on IL 2。受体小鼠C5 7BL 6 (H 2 b)经γ射线致死剂量照射后 ,输入供体BALB c(H 2 d)骨髓细胞1× 10 7 只 (去除T细胞 ) ,同时输注骨髓基质细胞QXMSC1tet on IL 2 5× 10 5 只。灌服多西环素 (Dox)诱导IL 2表达。于骨髓移植 (BMT)后 30d、6 0d检测小鼠脾细胞对ConA的反应强度 ,空斑形成细胞(PFC)数和迟发型超敏反应 (DTH) ,脾细胞中T辅助细胞前体频数 (HTLp)及移植后小鼠脾脏T细胞亚群CD4 + CD8+ 的比值 ,评价BMT后免疫功能的恢复情况。结果　成功建立四环素诱导IL 2基因表达的基因工程化骨髓基质细胞系QXMSC1tet on IL 2。异基因BMT、联合输注QXMSC1tet on IL 2能显著提高BMT小鼠脾细胞对ConA的反应 ,增加脾脏淋巴细胞HTLp及PFC数目 ,并使DTH反应增强 ,改善小鼠脾脏T细胞亚群CD4 + CD8+ 的比值。结论　共输注可调控表达IL 2基因的骨髓基质细胞可促进异基因移植小鼠免疫功能重建。     

白芍总甙对小鼠抑制性T细胞的作用

本文用过继性转移系统和McAb间接免疫荧光法等观察白芍总甙(TGP)对小鼠抑制性T细胞(Ts细胞)的作用。一、对超适量二硝基氟苯(DNFB)诱导Ts细胞的作用正常供体ICR小鼠腹部均匀涂以1%DNFB300μ1超适量免疫(SOI),诱导特异性Ts细胞。第5天将供体鼠脾细胞4×10~7经静脉转移给同系     

胸腺内注射异基因抗原诱导鼠异体骨移植的免疫耐受

背景:同种异体骨同其他异体组织一样具有抗原性,移植后可引起以细胞免疫为主的排斥反应,应用免疫抑制剂可抑制免疫排斥反应的发生,但对机体有一定的不良影响。目的:探讨胸腺内注射异基因抗原在建立特异性骨移植免疫耐受中的作用。方法:取60只Wistar大鼠随机分为3组,均制作骨缺损模型,供体异基因胸腺内注射组于同种异体骨移植前胸腺内注射受体大鼠脾细胞MHC抗原,同时另设自体骨移植组、同种异体骨移植加用免疫抑制剂组为对照,移植后观察切口情况。移植后1,2,4,6周进行X射线检查,苏木精-伊红染色,可溶性白细胞介素2受体、混合淋巴细胞培养免疫学检测。结果与结论:大体表现、X射线及组织学检查见供体异基因胸腺内注射组、自体骨移植组表现相近,均有炎性细胞浸润及新骨形成。同种异体骨移植加用免疫抑制剂组再生血管较少,骨愈合延迟,炎性细胞浸润明显,移植骨逐渐吸收,无新骨形成。证实了异基因MHC抗原注入小鼠胸腺内,能成功诱导受体对供体鼠骨移植物的耐受。免疫学检查各项数据表明供体异基因胸腺内注射的成骨效果接近于自体骨移植组,优于同种异体骨移植加用免疫抑制剂,证实了胸腺内注射异体MHC抗原可诱导对供体骨移植物的免疫耐受。     

同种特异T细胞疫苗诱导移植物存活期延长的研究——Ⅱ.抗独特型T细胞免疫反应

同种特异T细胞疫苗(TCV)免疫诱导出同种免疫反应低下,同种移植物存活时间显著延长,推测其作用机制可能是同种特异TCV免疫诱导机体抗同种特异TCV(独特型)T细胞的上调.实验证实了“抗TCV-T细胞”的存在.以同种特异TCV免疫动物可诱导出对TCV特异的细胞增殖反应.TCV免疫小鼠淋巴细胞能特异杀伤TCV细胞.将TCV免疫小鼠脾细胞作为调节细胞,观察到它能显著地抑制同种MLR,表明它是一“抑制性T细胞”.这些结果提示,同种特异TCV免疫可诱导机体免疫网络中独特型-抗独特型的上调,产生了同种反应T细胞的独特型T细胞,从而保护同种移植物免受同种反应性T细胞的攻击使同种移植物存活时间显著延长.     

骨密质来源间充质干细胞对小鼠T 细胞增殖、分化及其表面趋化因子受体表达的影响

目的:观察同种异基因骨密质来源间充质干细胞(CB-MSCs)对小鼠T细胞增殖和分化的影响,探讨其发挥免疫调解作用的分子机制。方法:在体外建立骨密质来源MSCs与异基因小鼠脾淋巴细胞(SP)共培养体系,用MTS/PES法和流式细胞术观察MSCs对SP增殖、凋亡和细胞周期的影响。此外,我们也检测了MSCs共培养对SP中调节性T细胞(Treg)比例以及趋化因子受体CCR5、CCR7和CXCR3表达的影响。结果:异基因骨密质来源MSCs能明显抑制PHA刺激的小鼠SP增殖,其抑制能力呈剂量依赖性;MSCs能够明显抑制共培养体系中SP细胞自发凋亡,并诱导细胞周期G0/G1期阻滞;MSCs与SP共培养后,能明显提高SP中Treg的比例(P0.01);显著下调T细胞表面CCR5和CXCR3的表达以及明显上调CCR7的表达。结论:异基因CB-MSCs可以明显抑制SP细胞增殖,其机制主要涉及细胞周期G0/G1阻滞而并非诱导凋亡。此外,CBMSCs能通过上调Treg比例和调控趋化因子受体表达等多种途径,来发挥免疫调节作用。     

IL-3、IL-6联合转基因的基质细胞促进异基因小鼠骨髓移植后的免疫重建

探讨转染IL 3和IL 6基因的骨髓基质细胞系QXMSC1对异基因骨髓移植 (BMT )小鼠免疫功能重建的促进作用。用逆转录病毒载体将小鼠IL 3和IL 6基因转染到骨髓基质细胞系QXMSC1(H 2 d) ,分别建立基质细胞系QXMSC1IL 3、QXMSC1IL 6及QXMSC1IL 3/IL 6 ,供体BALB/c(H 2 d)小鼠骨髓去除T细胞 ,致死量照射 (9 0Gy)受体小鼠C5 7BL/ 6 (H 2 b)后 ,输入供体骨髓细胞 (1× 10 5/只 )的同时输入基质细胞QXMSC1IL 3/IL 6 (5× 10 5/只 )。在骨髓移植后 30d、 6 0d ,检测BMT小鼠脾细胞对LPS、ConA的反应强度、脾细胞中辅助性T淋巴细胞前体频数 (HTLp )、杀伤性T淋巴细胞前体频数 (CTLp )、抗体生成细胞 (PFC )的能力及对迟发型超敏反应 (DTH )的能力来评价BMT后免疫功能的恢复情况。异基因BMT并输入基质细胞系QXMSC1IL 3/IL 6可明显增强BMT后淋巴细胞对LPS、ConA反应强度 ,小鼠对异基因小鼠脾细胞DTH反应增强 ,脾淋巴细胞HTLp、CTLp及PFC数明显增加。基质细胞QXMSC1可作为有效的基因载体明显促进异基因骨髓移植小鼠免疫功能重建。联合转入IL 3和IL 6对BMT后免疫功能的恢复有协同作用     

门脉注射异基因脾细胞诱导免疫耐受机制的研究

本实验检查了门脉注射异基因脾细胞后，受体鼠耐受的诱导及其可能的机制。结果表明，门脉注射２×１０￣７个异基因脾细胞可以诱导供体特异性混合淋巴细胞反应（ＭＬＲ）及细胞毒Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ）耐受。接受异基因脾细胞门脉注射的受体鼠肝脏淋巴细胞可以非特异性地抑制ＭＬＲ，但却抑制供体特异性ＣＴＬ的产生，以ａ－Ｈ－２Ｋ￣ｂ单克隆抗体清除其中的供体细胞可以完全清除对供体特异性ＣＴＬ产生的抑制，但只能部分地（５Ｏ％左右）清除其对ＭＬＲ的非特异性抑制作用，这一结果肯定了“Ｖｅｔｏ”细胞及供体细胞中自然抑制活性在门脉耐受诱导中的作用。此外还观察到ＣＤ８￣＋脾细胞是抑制供体特异性ＣＴＬ产生的主要细胞。