玻璃化冷冻囊胚复苏移植与玻璃化冷冻胚胎复苏后继续培养至囊胚移植的妊娠结局比较

目的比较玻璃化冷冻囊胚复苏后移植与玻璃化冷冻胚胎复苏后继续培养至囊胚移植的临床妊娠结局。方法回顾性分析2013年1月至2014年12月在郑州大学第二附属医院生殖中心行玻璃化冷冻复苏后移植囊胚的不孕症患者134例(134个周期)的妊娠情况,其中卵裂期胚胎培养至囊胚冷冻复苏后移植者79个周期(A组),卵裂期胚胎冷冻复苏后继续培养至囊胚再移植者55个周期(B组)。比较2组患者临床妊娠率、着床率及早期流产率。结果 A组79个周期,复苏囊胚数151个,存活囊胚数133个,复苏率88.08%(133/151);获得可移植囊胚72个周期,妊娠周期46个,妊娠率为63.89%(46/72),着床率51.56%(66/128),早期流产率为15.21%(7/46)。B组55个周期227个胚胎,复苏存活170个胚胎,复苏率74.89%(170/227);其中45个周期共形成可移植囊胚93个,囊胚形成率为54.70%(93/170);获得妊娠周期23个,妊娠率为51.11%(23/45),着床率为36.56%(34/93),早期流产率13.04%(3/23)。A组囊胚复苏率高于B组卵裂期胚胎复苏率(P<0.05),且A组着床率显著高于B组(P<0.05),但2组临床妊娠率、流产率、异位妊娠率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论玻璃化冷冻囊胚复苏移植能获得较高的着床率和妊娠率,囊胚可能是玻璃化冷冻胚胎的较好阶段。     

不同玻璃化冷冻载体对人卵巢组织冷冻效果的影响

目的: 比较不同的玻璃化冷冻载体对人卵巢组织冷冻效果的影响,为人卵巢组织玻璃化冷冻方案的选择提供理论基础和实验参考依据.方法: 预处理人卵巢皮质切成10 mm×1 mm×1 mm大小,随机分为新鲜组(A组)、针浸润玻璃化冷冻组(B组)、表面玻璃化冷冻组(C组)和直接覆盖玻璃化冷冻组(D组).A组直接予以固定、组织切片及HE染色;B、C、D 3组采用不同玻璃化冷冻载体冷冻后,投入液氮保存2个月,采用快速复温法解冻后予以固定、切片及染色.行形态学分析,通过计算各组卵巢组织切片中正常形态始基卵泡率,比较各组冷冻效果.结果: 4组共计数809个始基卵泡,其中正常形态始基卵泡率分别为:A组96.12%,B组88.14%,C 组80.00%,D组81.25%.行玻璃化冷冻的3组卵巢组织正常形态始基卵泡率均明显小于A组(P< 0.01);而B组、C组和D组正常形态始基卵泡率差异均无统计学意义(P >0.05).结论: 玻璃化冷冻后人卵巢组织正常形态始基卵泡率较新鲜组织下降,但仍能较好地保存人类卵巢组织,可用于人类卵巢组织的冷冻保存.     

两组冷冻保护剂对卵裂期胚胎玻璃化冷冻效果的研究

目的：评价两组玻璃化冷冻保护剂对卵裂期胚胎的冷冻效果。方法以体外受精-胚胎移植周期患者受精后第3天废弃胚胎为实验对象,共102枚胚胎入选,随机分为乙二醇＋丙二醇（EG＋PROH）组52枚,乙二醇＋二甲基亚砜（EG＋DMSO）组50枚。比较观察两组玻璃化冷冻保护剂对卵裂期胚胎冷冻解冻后胚胎的复苏效果。结果玻璃化冻融后两组在复苏率上无显著差异,但在完整胚胎复苏率和卵裂球复苏率上EG＋PROH组显著高于EG＋DMSO组（P＜0.05）。结论对于卵裂期胚胎的玻璃化冷冻,选用EG＋PROH作为冷冻保护剂可取得较好的效果。     

3种不同载体对卵母细胞玻璃化冷冻效果的影响

目的以小鼠成熟卵母细胞(MⅡ期)为试验对象,应用3种不同载体对其行玻璃化冷冻,旨在分析载体对冷冻效果的影响。方法采用玻璃化冷冻技术冻存昆明种小鼠成熟卵母细胞,设新鲜对照组和玻璃化冷冻组,玻璃化冷冻组又分为开放式脉管(OPS)组、自制麦管组和Cryoleaf组。比较冻融后鼠卵的存活率、受精率、卵裂率及囊胚形成率。结果新鲜对照组和玻璃化冷冻组的受精率、卵裂率差异无统计学意义,但囊胚形成率差异有统计学意义(P<0.05);OPS组与自制麦管组的鼠卵存活率、受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;OPS组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义;自制麦管组与Cryoleaf组比较,存活率差异有统计学意义(P<0.05),而受精率、卵裂率、囊胚形成率差异均无统计学意义。结论载体的不同会对卵母细胞玻璃化冷冻效果形成一定程度的影响。     

玻璃化冷冻时间对冻胚移植妊娠结局的影响

目的 探讨不同玻璃化冷冻时间对冻胚复苏及移植妊娠结局的影响。方法 回顾性分析进行冻胚移植(FET)的550例患者的临床资料,根据胚胎不同玻璃化冷冻时间分为A、B、C、D、E共5组,A组239例,玻璃化冷冻时间≤3个月;B组138例,3个月<玻璃化冷冻时间≤6个月;C组74例,6个月<玻璃化冷冻时间≤1年;D组75例,1年<玻璃化冷冻时间≤5年;E组24例,玻璃化冷冻时间>5年。比较不同冷冻时间胚胎移植的一般临床资料、胚胎复苏结局及临床妊娠结局。结果 相较于A、B、C组,D组胚胎存活率、胚胎完好率显著降低(P<0.05);相较于A、B组,E组的胚胎存活率、胚胎完好率及解冻后/冷冻前优质胚胎率均显著降低(P<0.05);E组的胚胎完好率较C组显著降低(P<0.05);E组的解冻后/冷冻前优质胚胎率显著低于D组(P<0.05)。各组间移植优质胚胎后的胚胎种植率、临床妊娠率、活产率、流产率及早产率差异无统计学意义。移植优质卵裂期胚胎后,E组早产率较B组显著增高(P<0.05)。移植优质囊胚后,C组早产率较A组显著增高(P<0.05)。...     

玻璃化冷冻方法三种冷冻载体冻存卵裂期胚胎效果的比较

目的应用冷冻环、冷冻膜和自制麦管片三种冷冻载体,采用玻璃化冷冻方法冻存昆明小鼠卵裂期胚胎,比较三种载体的冻存效果。方法采集通过体外受精在体外培养第2天得到的4-8细胞期的昆明小鼠胚胎247个,对其中177个按载体不同随机分为冷冻环组59个,冷冻膜组59个,自制麦管片组59个;剩余的新鲜胚胎70个作为对照组,比较冻融后鼠胚的复苏率和囊胚形成率。结果冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的胚胎复苏率分别为98.3%、98.3%和94.9%,三组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;冷冻环组、冷冻膜组和自制麦管片组的囊胚形成率分别是84.5%、86.2%和82.1%,三组比较无统计学差异（P〉0.05）;新鲜对照组囊胚形成率为94.3%,与冷冻环组、冷冻膜组分别比较无统计学差异（P均〉0.05）,与自制麦管片组有统计学差异（P〈0.05）。结论采用玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵裂期胚胎,使用冷冻环和冷冻膜作为冷冻载体具有复苏率高、囊胚形成率高的优点,更适合应用于临床。     

两种玻璃化胚胎冷冻方法对不同品系小鼠胚胎冷冻结果比较

目的 探讨EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法对不同品系小鼠胚胎冷冻的效果。方法6个品系小鼠（KM、ICR、BALB/c、C57BL/6J、OB/OB、LAP/rtTA0F59）的2-cell胚胎分别用EFS和DAP两种玻璃化冷冻方法进行冷冻和复苏,比较两种冷冻方法的胚胎复苏率和着床率。结果 6个品系小鼠冷冻胚胎EFS方法的平均复苏率为69.97%（47.9%～83.6%）,DAP方法的平均复苏率47.23%（26.3%～76.7%）EFS方法明显优于DAP方法。其中KM、ICR和BALB/c小鼠EFS方法的冷冻复苏率显著高于DAP方法（P<0.01）;冻融胚胎移植后EFS方法的平均着床率27.23%（1.75%～45.0%）,DAP方法的平均着床率31.43%（7.0%～46.3%）。除KM、ICR小鼠外,其他4个品系小鼠的着床率DAP方法高于EFS方法。结论 KM和ICR远交群小鼠胚胎适合用EFS方法冷冻保存;C57BL/6J、OB/OB、LAP/rtTA0F59三个品系小鼠DAP方法优于EFS方法,但差异不大; BALB/c小鼠两种玻璃化冷冻方法的冻融胚胎着床率均较低,需进一步研究。     

冷冻载体对小鼠卵母细胞玻璃化冷冻效果影响的研究

目的探讨不同冷冻载体对小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻回收率、复苏率和解冻后胚胎发育潜能的影响。方法以小鼠卵母细胞为实验材料,以玻璃化冷冻方法冻存小鼠卵母细胞,分别以冷冻叶片（A）组、冷冻小钩（B）组、电镜铜环（C）组、自制冷冻叶片（D）组为冷冻载体冷冻小鼠卵母细胞,通过对解冻后卵子回收率、复苏率、卵子受精率及早期胚胎发育率等分析判断冻存效果。结果回收率D组明显低于其他3组,差异有统计学意义（P〈0.01）;D组与其他3组卵母细胞冷冻保存后卵子复苏率、胚胎受精率、继续发育潜能的比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 4种玻璃化冷冻载体都是小鼠卵母细胞快速玻璃化冷冻保存中可行的冷冻载体,自制叶片组的卵子回收率明显低于其他3组,需更进一步熟练叶片制作的技术和实验人员操作技能。     

囊胚玻璃化冷冻预平衡时间对辅助生殖妊娠结局的影响

目的 探讨囊胚激光皱缩后缩短玻璃化冷冻预平衡时间对临床妊娠及新生儿结局的影响。方法 回顾性分析2018年1月至2021年12月于海口玛丽医院进行囊胚复苏移植患者的临床资料,从中筛选501例患者518个移植周期。根据实验室囊胚玻璃化冷冻技术标准操作程序修订前后的预平衡时间将其分为A组（9~10min）和B组（7~8min）,比较两组间的妊娠结局和新生儿结局。结果 两组患者的年龄、移植胚胎数、卵泡刺激素、体质量指数、不孕年限、原发不孕比例、移植日内膜厚度和内膜方案比较,差异均无统计学意义（P>0.05）;两组的囊胚存活率、着床率、临床妊娠率、活产率、早期流产率、多胎妊娠率、母体并发症比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。两组的新生儿性别比、孕周、早产儿比例、出生体质量、低出生体重儿、巨大儿、剖宫产、出生缺陷比较,差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 囊胚激光皱缩后,缩短玻璃化冷冻预平衡时间不影响囊胚复苏移植的妊娠结局。     

玻璃化冷冻技术在全胚胎冷冻中的应用价值

目的：观察采用玻璃化冷冻技术行全胚胎冷冻后解冻移植患者的临床结局,并与同期新鲜周期移植患者相比较,探讨玻璃化冷冻技术在全胚胎冷冻并行复苏移植中的应用价值。方法：全胚胎冷冻组为体外受精(IVF)未移植患者40个周期,新鲜周期组为同期体外受精及胚胎移植（IVF-ET）患者300例,对2组的平均移植胚胎数、优质胚胎数、子宫内膜厚度、雌二醇（E2）水平、临床妊娠率进行比较。结果：2组之间在平均移植胚胎数、优质胚胎数、子宫内膜厚度方面的差异均无统计学意义（P＞0.05）;新鲜周期组的E2水平明显高于全胚胎冷冻组（P<0.05）, 临床妊娠率明显低于全胚胎冷冻组（P<0.05）。结论：玻璃化冷冻技术是一种简便、可靠、高效的胚胎冷冻技术;对于符合要求的患者,全胚胎冷冻并适时行冻胚移植是可行的胚胎移植策略,值得临床深入研究和推广。     

Modified vitrification method for cryopreservation of human ovarian tissues

Background Vitrification is a prospective technology in ovarian tissue cryopreservation, but it is still in an initial stage. This study was conducted to investigate a modified vitrification protocol for human ovarian tissue, which can be used as an alternative to preserve fertility for young women with cancer who have to undergo cytotoxic therapy and sterilization. Methods Ovarian tissue samples were collected from 15 patients and randomly allocated to groups of fresh, vitrification, and conventional slow freezing. A modified carrierless vitrification method was applied. The proportion of morphologically intact follicles in fresh ovarian tissues was compared with that in warmed/thawed tissues. The initial growth of the follicles and the concentrations of estradiol and progesterone were detected to determine the viability and endocrine function of the cryopreserved tissues. Results The proportion of morphologically intact primordial follicles in the fresh group （97.6%） was significantly higher than that in the other two groups （vitrification group 80.3% and slow-freezing group 72.6%, P〈0.001）. In both the vitrification and slow-freezing groups, estradiol and progesterone were secreted continuously during 2-week culture in vitro, the proportion of primary follicles were both significantly increased compared to the fresh group. No statistically significant differences existed between the two groups after cryopreservation in the proportion of both primordial and primary follicles, and the concentrations of estradiol and progesterone （P〉0.05）. Conclusion The modified vitrification method for cryopreservation of human ovarian tissues is effective, simple, and inexpensive.     

人类卵子改良程序化冷冻和玻璃化冷冻的比较研究

【】目的：研究两种冷冻方法对人类卵子冻融结果的影响。方法：分为程序化冷冻卵子与玻璃化冷冻卵子两组,对于卵子冻融后的复苏率、受精率以及优质胚胎率等指标进行比较。结果：程序化冷冻组卵子的复苏率(71.05%,108/152)显著低于(P<0.05)玻璃化冷冻组(81.75%,103/126),但优质胚胎率(41.07%,23/56)显著高于(P<0.05)玻璃化冷冻组(30.23%,13/53),而受精率、卵裂率及囊胚形成率无统计学差异。结论：玻璃化冷冻卵子可以获得较高的复苏率,但使用改良程序化冷冻试剂盒冻融卵子,可能较玻璃化冷冻获得更好发育潜能。     

EDS-40玻璃化液冻存小鼠4细胞胚胎的研究

目的研究玻璃化液EDS-40对冻贮小鼠4细胞胚胎的效果。方法①EFS-40和EDS-40玻璃化溶液的玻璃化测试。②随机将4细胞小鼠胚胎,在25℃室温下分别加入EDS-40和EFS-40玻璃化溶液,玻璃化后装管并迅速投入液氮中。对照组置于程序冷冻仪中进行程序化冷冻。各组均冻存3个月后,在25℃的水浴中复温后,用培养液反复洗涤后移入培养孔板培养,观察胚胎存活率及卵裂率。结果两种玻璃化溶液能达到玻璃化效果;EFS-40、EDS-40及对照组冷冻复温后的存活率分别87.8%、93.47%、80.77%;EFS-40、EDS-40及对照组冻胚的卵裂率分别:79.83%、86.53%、69.23%。结论 EDS-40玻璃化液冻贮小鼠4细胞胚胎的效果明显优于EFS-40,是一种理想的玻璃化液。     

超低温慢速冻存与玻璃化冻存对大鼠骨髓细胞DNA合成功能的影响

目的 :研究超低温慢速冻存和玻璃化冻存对大鼠骨髓细胞的DNA合成功能的影响。方法 :采用3H TdR掺入的方法对慢速和玻璃化冻存后的大鼠骨髓细胞DAN合成功能进行比较。结果 :慢速冻存 1d、5d、10d、2 0d与新鲜对照相比 ,在DAN合成功能上差异无显著性 ;而玻璃化冻存组与慢速冻存组相比 ,短期差异无显著性 ,10d后 ,每分钟脉冲数 (cpm)值显著下降 (P <0 .0 1)。结论 :常规慢速冻存后的骨髓细胞损伤较小 ,DNA合成水平较高 ;玻璃化冻存在短期内具有一定的可行性     

平皿-微滴法玻璃化冷冻保存小鼠胚胎

目的 :使用平皿 微滴法玻璃化冷冻小鼠 8～ 12细胞胚胎 ,检验该方法对胚胎的冻存效果。方法 :胚胎在EG2 0 中平衡 3min ,EFS4 0 中平衡 1min ,将含有胚胎的小于 0 .5 μl的EFS4 0 微滴吹于 35mm平皿上并立即直接浸入液氮保存。结果 :解冻后胚胎回收率达到 98.1% ,透明带无破损 ,冷冻后存活率为 95 .2 %。冻融胚胎体外发育和体内发育能力与对照组胚胎比较差异无显著性 (84 .3%对 90 .1% ,12 .1%对 13.5 % ,P >0 .0 5 )。结论 :小鼠 8～ 12细胞胚胎可以用平皿 微滴法有效地进行玻璃化冻存。     

小鼠胚胎冷冻研究

目的 探讨小鼠胚胎冷冻保存方法。方法 用EG40、ES40、EFS403种冷冻液进行小鼠胚胎快速冷冻，比较解冻后胚胎的发育率、孵化率、着床率。结果 EFS40冷冻液冷冻效果最好，与对照组相比无明显差异；ES40其次，EG40效果最差。结论 EFS40冷冻液适合用于小鼠胚胎冷冻保存。     

玻璃化法超低温保存怀山药种质的技术研究

目的研究怀山药种质资源的玻璃化超低温保存技术。方法以B号怀山药带芽茎段为材料进行玻璃化超低温保存,并采用培养法检测保存后材料的成活率,从而筛选出最佳的玻璃化超低温保存技术体系。结果B号怀山药带芽茎段玻璃化超低温保存较佳的技术体系是继代生长60d的怀山药无菌苗置4℃冰箱低温锻炼7d;在无菌条件下切取1~1.5cm的带芽茎段,转至含5%蔗糖 3%甘露糖的培养基内,置4℃冰箱预培养2d;用60%的PVS1(22%甘油 13%乙二醇 13%聚乙二醇 10%二甲基亚砜)在0℃处理60min,再用100%的PVS1在0℃条件下处理60min,随即迅速投入液氮;保存24h后,在37℃水浴中快速化冻,用含7%蔗糖的MS培养液洗涤4次,每次停留10min;转至再生培养基(MS KT2mg/L NAA0.02mg/L)再培养,成活率可达75%以上,再生苗与常温苗形态指标差异不大。结论本试验成功地建立了怀山药种质资源玻璃化法超低温保存的技术体系,为怀山药种质资源的长期保存提供了一条有效途径。     

麦管玻璃化法冷冻保存人诱导多能干细胞

目的:麦管玻璃化法冷冻保存人诱导多能干细胞(induced pluripotent cells,iPS细胞).方法:将机械法切割的iPS细胞团块,依次在10%玻璃化冷冻液和20%玻璃化冷冻液中处理后保存于20%的冷冻液中,封装于0.25 ml麦管并快速置于液氮中保存.解冻时将iPS团块依次置入0.2 mol/L蔗糖溶液...