结缔组织生长因子对肾小管上皮细胞转分化的调节机制

目的 观察结缔组织生长因子（CTGF）对体外培养的人肾小管上皮细胞转分化的直接影响,并探讨阻断内源性CTGF表达对转化生长因子- β1（TGF-β）诱导人肾小管上皮细胞转分化的干预效果,以阐明CTGF在肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法 体外培养人近曲小管上皮细胞（HKC）。在观察CTGF对HKC的直接作用时,将HKC细胞分为三组：（1）对照组;（2）小剂量CTGF组：培养液中加入重组人CTGF（rhCTGF）,终浓度为2．5μg／L;（3）大剂量CTGF组：rhCTGF终浓度为5．0μg／L。在探讨CTGF在TGF-β诱导HKC转分化中的作用时,将细胞分为4组：（1）正常对照组;（2）TGF-β刺激组（培养液加入重组人TGF-β1蛋白,浓度为10．0μg／L）;（3）TGF-β1＋CTGF正义寡核苷酸（ODN）组（先以CTGF正义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激）;（4）TGF-β1＋CTGF反义ODN组（先以CTGF反义ODN转染HKC,再加TGF-β1刺激）。用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定HKC α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）和Ⅳ型胶原（col Ⅳ）mRNA水平的变化;间接免疫荧光方法检测HKC胞浆内α—SMA的表达;流式细胞仪检测α—SMA阳性细胞百分率;ELISA方法测定培养液上清中col Ⅳ的浓度。结果 不同浓度rhCTGF作用于HKC24h后,α-SMAmRNA水平显著升高（P〈0．01）,而colⅣmRNA表达水平明显下降（均P〈0．01）;刺激48h后,胞浆α—SMA表达明显增强,流式细胞仪测得三组细胞α-SMA阳性百分率依次为：2．4％、38．9％、65．5％（P〈0．01）;ELISA结果表明,rhCTGF抑制了colⅣ的分泌（P〈0．01）。TGF-β1可诱导HKC高表达CTGF和α-SMA。转染后6h,CTGF反义ODN可显著抑制HKC表达CTGF和α-SMA mRNA（P〈0．01）。转染后48h,CTGF反义ODN可明显抑制胞内α-SMA蛋白合成。结论 CTGF在体外能刺激肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞（MyoF）转分化,而CTGF反义ODN的导人可有效抑制TGF-β1诱导的转分化过程。因此,CTGF可能是调节肾小管上皮细胞转分化的重要因子。     

囊素五肽对人肺成纤维细胞细胞外基质及转化生长因子β1／Smad信号通路的影响

目的观察囊素五肽（BP5）对转化生长因子β1（TGF-1）刺激的人肺成纤维细胞分泌的细胞外基质以及对转化生长一β1／Smad信号通路的影响,探讨囊素五肽抗肺纤维化的机制。方法HLF细胞分为阴性对照组、TGF- β1 刺激组、TGF-β1＋BP5药物干预组（三组均用TGF-β1刺激后分别使用不同浓度BP52．5、5及10μg／mL进行干预）。免疫荧光法测定细胞α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的表达,Westernblot方法检测collagen—Ⅰ、p-Smad2／3、p-Smad3和Smad7蛋白的表达。结果TGF—β1刺激细胞经免疫荧光标记显示α-SMA阳性表达,说明人肺成纤维细胞在TGF-β1刺激下转化为肌成纤维细胞（MF）,TGF-β1刺激同时加BP5不同药物浓度组中,10μg／mL的BP5药物浓度能显著减少细胞增殖转化。经TGF-β1刺激后,人肺成纤维细胞collagen—Ⅰ[（1．402±0．158）比（0．605±0．367）]、p-Smad2／3[（1．457±0．111）比（0．815±0．039）]、p-Smad3[（1．320±O．147）比（0．623±O．128）]蛋白表达较刺激前表达明显增多（P〈0．01）,Smad7表达较对照组降低[（0．613±0．107）比（0．865±0．063）,P〈0．05）];与TGF-β1处理组相比,BP5可抑制由TGF-β1刺激人肺成纤维细胞引起的collagen—Ⅰ蛋白[（0．718±0．049）比（1．402±0．t58）]、p-Smad2／3[（0．696±0．031）比（1．457±0．111）]p-Smad3[（0．766±0．006）比（1．320±0．147）]表达上调（P均〈0．01）,而Smad7的蛋白表达明显增加[（1．237±0．173）比（0．614±0．107）,P〈0．05]。结论BP5可能通过抑制TGF—β1／Smads信号通路激活,下调TGF-β1刺激下人肺成纤维细胞的collagen-Ⅰ及d—SMA蛋白的表达,提示BP5可能对肺纤维化具有一定的干预作用。     

骨形成蛋白-7对MCP-1诱导人肾小管上皮细胞转分化和TGF-β1-Smad 3信号转导的作用

目的探讨骨形成蛋白-7（BMP-7）对单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）诱导体外培养人肾小管上皮细胞转分化的作用,并初步探讨该作用与转化生长因子-β1（TGF-β1）、Smad3表达变化的关系。方法将体外培养HK-2细胞分为以下各组：阴性对照组;阳性对照组：TGF-β1（5ng／ml）处理;MCP-1（0．1,1,10及50ng／ml）组,BMP-7组（0．1,1,10,50ng／ml）;MCP-1（1ng／ml）加BMP-7（50ng／ml）组;MCP-1（1ng／ml）加MCP-1中和抗体（5μg／ml）组。应用半定量RT—PCR方法检测HK-2细胞α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）mRNA表达,ELISA方法测定上清液中Ⅰ型胶原分泌,Western blot方法检测HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达。结果MCP-1（0．1,1ng／ml）组HK-2细胞α—SMAmRNA表达较阴性对照组明显增强（P〈0．01）。ELISA方法测定MCP-1（0．1,1ng／ml）组上清液中I型胶原分泌明显高于阴性对照组（P〈0．01）。MCP-1中和抗体与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后。HKC细胞α—SMAmRNA表达几乎被完伞抑制（P〈0．001）,而BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后HK-2细胞α—SMAmRNA表达仅部分被抑制（P〈0．01）;MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后Ⅰ型胶原分泌较MCP-1（1ng／ml）组明显降低（P〈0．05）。Western blot方法检测显示,MCP-1（1ng／ml）组HK-2细胞TGF-β1及Smad3表达水平均较阴性对照组明显上调（P〈0．01）。MCP-1中和抗体或BMP-7（50ng／ml）与MCP-1（1ng／ml）共同作用24h后,HK-2细胞TGF-β1表达均分别比MCP-1（1ng／mL）单独作用明显下调,以MCP-1中和抗体的作用更强（P〈0．01,P〈0．05）;在MCP-1中和抗体或BMP-7作用24h后,Smad3表达也有类似下调（P〈0．01,P〈0．05）。结论MCP-1能诱导体外培养的HK-2细胞发生转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达上调有关。BMP-7能部分抑制MCP-7诱导HK-2细胞转分化,该作用可能与TGF-β1及Smad3表达部分下调有关;间时提示MCP-1诱导的转分化可能涉及非TGF—β依赖的细胞信号传导途径,需进一步研究。     

成肌纤维细胞在哮喘气道重塑中的作用及地塞米松对其的影响

目的：探讨成肌纤维细胞（MF）在哮喘气道重塑中的作用并观察地塞米松对其的影响。方法：SD大鼠30只，随机分为哮喘组（A组）、生理盐水对照组（C组）和地塞米松治疗组（D组），每组10只。利用卵白蛋白（OVA）／Al（OH）。致敏与OVA雾化吸八激发建立大鼠哮喘模型。免疫组化测定肺组织中支气管上皮下成肌纤维细胞的α-平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达含量，并使用图像分析技术进行积分光密度（10D）定量分析测定。ELISA法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中TGF-β1和IFN—γ的浓度。结果：①定量分析测定的10D值显示A组支气管上皮下MF的α—SMA表达量较C组显著增加（P〈0．01），D组表达量较A组减少（P〈0．05）。②ELISA法测定结果：A组BALF中TGF-β1浓度较C组显著升高（P〈0．01），D组较A组浓度降低（P〈0．01），但仍高于C组（P〈0．05）。A组BALF中IFN—γ浓度较C组显著降低（P〈0．01），D组较A组浓度高（P〈0．01），但仍低于C组（P〈0．05）。结论：MF在气道重塑形成中起重要作用。地塞米松可能通过减少TGF-β1，增加IFN—γ的产生，抑制MF增殖和表达，起到抗哮喘气道重塑的作用。     

金雀异黄素对TGF-β1诱导大鼠肾系膜细胞CTGF表达的影响

目的了解金雀异黄素（genistein，Gen）对转化生长因子（TGF）β1诱导大鼠肾系膜细胞（MCs）结缔组织生长因子（CTGF）表达的影响。进一步探讨金雀异黄素抑制肾纤维化的机制。方法将体外培养的MCs分为4组：正常对照组，未加任何刺激因素；Gen组，Gen的终浓度分别为50、100μmol／L；TGF-β1组，终浓度为5ng／mL；TGF-β1＋Gen组，TGF-β1和Gen的终浓度分别同前。刺激MCs24h后，采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内CTGFmRNA的水平，Westernblot法测定细胞内CTGF蛋白的表达。结果与对照组比较，Gen组CTGFmRNA的水平和蛋白的表达无显著性差异（P〉0．05），而TGF—β1组CTGFm—RNA的水平和蛋白的表达明显增加（P〈0．01）；与TGF-β1组比较，50μmol／L和100μmol／L的Gen能明显抑制TGF—β1诱导的CTGFmRNA的水平和蛋白表达，以100μmol／LGen效果最显著（P〈0．01）。结论Gen能部分抑制TGF—β1诱导CTGF的基因和蛋白的表达，提示金雀异黄素可能通过阻抑CTGF表达减少细胞外基质的积聚，具有潜在的抗肾纤维化作用.     

姜黄素对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1及Caspase-3表达的影响

目的：观察姜黄素（Cur）对四氯化碳诱导大鼠肝纤维化及对其肝组织转化生长因子-β1（TGF-β1）及半胱天冬酶-3（Caspase-3）表达的影响．方法：采用皮下注射400g／L四氯化碳复制模型,造模后给予姜黄素治疗,观察肝组织病理改变并进行肝纤维化分级和血清生化学检测;免疫组化法测定肝组织中TGF-β1及Caspase-3蛋白表达的变化,RT-PCR检测肝组织中TGF-β1mRNA表达．结果：Cur治疗组大鼠肝纤维化程度较模型组显著减轻（P〈0．01）;并且大鼠血清ALT（nkat／L）,AST（nkat／L）,ALP（nkat／L）水平明显降低[（757±234）惦（1677±252）,（2776±238）VS（4865±403）,（1850±191）掷（4310±728）,P〈0．05或P〈0．01],A／G比值提高[（0．89±8．06）US（0．60±7．48）,P〈0．05];Cur治疗组TGF-β1mRNA,TGF-β1表达较模型组显著下降[（3．13±1．55）粥（9．56±2．01）,（0．32±0．12）傩（0．87±0．40）,P〈0．05或P〈0．01];Caspase-3表达较模型组显著升高[（5．47±1．06）US（1．56±0．61）,P〈0．05]．结论：Cur对四氯化碳诱导的大鼠肝纤维化具有显著的治疗作用,其作用机制可能与抑制TGF-β1表达、促进Caspase-3表达相关．     

转化生长因子-β1诱导小鼠足细胞凋亡实验研究

目的探讨转化生长因子-β1（TGF-β1）是否能诱导小鼠足细胞株凋亡以及诱导凋亡的途径。方法（1）体外培养小鼠足细胞株;（2）应用不同浓度（10^-1～104ng／L）TGF-β1诱导小鼠足细胞凋亡;（3）10^3ng／LTGF-β1诱导不同时间（12、24、48h）后观察足细胞凋亡情况;（4）采用流式细胞仪检测AnnexinV、Caspase3;（5）实时定量PCR及Western印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）、Smad2、Smad3、Smad7mRNA及蛋白质的表达情况。结果（1）小鼠足细胞在不同浓度（10^-1～10^4ng／L）TGF-β1刺激下,细胞凋亡率明显高于正常对照组（均P〈0.05）;（2）随着TGF-β1浓度增加、凋亡时间增加,足细胞凋亡率增高（P〈0．05）;p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7mRNA表达增加;TGF-β1 103ng／L为最佳诱导小鼠足细胞凋亡浓度,24h为最佳诱导凋亡时间;（3）与正常对照组比较,10^3ng／LTGF-β1诱导后Caspase3阳性细胞比率显著增加（P〈001）．p38MAPK、Smad2、Smad3、Smad7蛋白质表达亦显著增加（P〈0．01）。结论TGF-β1能诱导小鼠足细胞凋亡,呈浓度及时间依赖性。TGF-β1通过Smad通路、p38MAPK通路以及线粒体通路诱导小鼠足细胞凋亡。     

抗增殖蛋白抑制转化生长因子-β1诱导的肾脏成纤维细胞增殖和表型改变

目的 研究抗增殖蛋白（prohibitin,PHB）在肾间质纤维化发生中的作用。方法（1）检测48例原发性肾小球肾炎患儿肾组织中PHB蛋白表达,并比较其与肾小管间质损伤程度的相关性。（2）观察PHB在大鼠肾脏成纤维细胞（NRK-49F）中亚细胞定位,以Western印迹和RT-PCR测定NRK-49F受到转化生长因子B1（TGF-β1）刺激后PHB表达的变化。（3）构建PHB表达质粒并转染,观察PHB对NRK-49F细胞周期以及表达α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白质和mRNA的影响。结果 （1）PHB蛋白主要表达于肾间质细胞和肾小管上皮细胞的胞质,随肾小管间质损伤程度加重而逐渐减弱（组间比较,均P〈0．01）,PHB表达量与肾小管间质损伤程度显著负相关（r=-0．802,P〈0．01）。（2）激光共焦显微镜下见PHB主要分布于NRK49F的细胞质,细胞核亦有较弱表达。TGF-β1刺激后PHB蛋白和mRNA表达均下调,呈现时间和剂量依赖关系（组间比较,P〈0．01）。（3）成功构建PHB真核表达质粒,转染48h细胞中PHB蛋白量升高约2．54倍（与未转染组比较,P〈0．01）。（4）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的细胞增殖,使更多的细胞处于G0／G1期（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对未受刺激的细胞无影响（P〉0．05）。（5）转染PHB基因明显抑制TGF—β1所诱导的α-SMA蛋白质和mRNA表达（与TGF-β1组比较,P〈0．01）,而对α-SMA基础表达无影响（与TGF-β1组比较,P〉0．05）。结论 PHB在肾组织中的表达水平可以反映肾小管间质损伤程度．外源性PHB显著抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞增殖和表型改变。     

血管紧张素-（1-7）对TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞Smad3、Smad7 mRNA表达的影响

目的：观察血管紧张素-（1—7）对TGF-β1诱导幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖以及Smad3、Smad7mRNA表达的影响。方法：分离培养SD仔鼠心脏成纤维细胞,以Ang-（1—7）、TGF-β1、Ang-（1—7）＋TGF-β1组、TGF-βI型受体抑制剂等干预,通过WST-1法检测细胞增殖,RT—PCR测定心脏成纤维细胞Smad3、Smad7mRNA的表达。结果：①与空白对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的OD值增加（P〈0．05）;与TGF-β1组比较,0．001～1．0μmol／L血管紧张素－（1-7）和5μg／TGF-β1共同干预后OD值逐渐降低（P〈0．05）。②与对照组比较,TGF-β1组心脏成纤维细胞的Smad3mRNA表达升高（P〈0．05）,Smad7mRNA表达降低（P〈0．05）。结论：血管紧张素-（1—7）能有效抑制TGF-β1引起的心脏成纤维细胞的增殖,其作用不通过TGF-βI型受体介导。     

阿托伐他汀对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞分化的影响

【目的】观察阿托伐他汀对肺纤维化大鼠的肺成纤维细胞增殖的影响及其对TGF-β1诱导的大鼠肺成纤维细胞表型分化的影响。【方法】建立Wistar大鼠肺纤维化模型,1周后取肺组织进行成纤维细胞原代培养,细胞经鉴定后以不同浓度的阿托伐他汀对试验组细胞进行干预,采用MTT法测定细胞增殖情况;TGF-β1诱导细胞分化,同时给予不同浓度阿托伐他汀干预,免疫细胞化学染色（SP）法检测药物对肌成纤维标志物-αSMA表达的影响。【结果】MTT结果显示：各剂量组中不同干预天数所测得的OD值之间存在显著差异（P〈0.01）。各时间点所测OD值与不同用药物剂量之间存在交互作用（P〈0.01）。各剂量组对细胞的抑制作用之间存在显著差别（P〈0.01）。免疫细胞化学染色结果显示：药物因素对-αSMA的表达量有影响（P〈0.01）,区组因素对-αSMA的表达量有影响（P〈0.01）。【结论】阿托伐他汀可抑制肺纤维化大鼠肺成纤维细胞的增殖,同时可抑制TGF-β1诱导的成纤维细胞的分化,这主要表现在抑制细胞增殖、改变其形态、减少肌成纤维细胞的标志性产物-αSMA的产生上。     

宫颈癌中PAI-1、TGF-β1的表达及临床意义

目的：探讨纤溶酶原激活物抑制物1-（PAI—1）、转化生长因子-β1（TGF-β1）在宫颈癌中的表达及其在宫颈癌发生、发展中的作用。方法：采用Envision二步免疫组织化学方法检测宫颈癌石蜡包埋组织（63例，分为原位癌组、高分化组、中低分化组）与正常宫颈石蜡包埋组织（15例．对照组）中PAI—1、TGF-β1的表达。结果：（1）PAI-1在对照组、宫颈原位癌组、高分化组、中低分化组中的阳性表达率分别为0（0／15）、75．00％（6／8）、51．85％（1427）、82．14％（23／28）；对照组0（0／15）与宫颈癌组68．25％（43/63）间PAI—1蛋白阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）；宫颈癌各组间PAI—1蛋白阳性表达串差异有统计学意义（P〈0．01），PAI—1与病理分级有相关性。（2）TGF-β1在对照组、宫颈原位癌组、高分化组、中低分化组的细胞胞浆中的阳性表达率分别为13．33％（2／15）、95．00％（2／8）、48．15％（13，27）、71．43％（20，／28）：对照组13．33％（2／15）与宫颈癌组55．56％（35／63）间TGF-β1蛋白阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）；TGF—β1存各组间细胞胞浆中阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01），与病理分级有关；而在各组细胞外基质中的阳性表达率分别为13．33％（2／15）、37．50%（3／8）、22．22％（6／27）、42．86％（12／28）；对照组与宫颈癌组33．33％（21/63）间基质中TGF-β1表达率差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）在宫颈癌中TGF-β1对PAI-1的表达有正协同作用（r=0．282．P〈0．05）；其表达率与年龄、民族无关。结论：在宫颈癌组织中PAI-1、TGF-β1的异常表达提示与肿瘤的发生、发展密切相关，并促进肿瘤的浸润与转移，联合检测PAI—1、TGF-β1有可能成为预测子宫颈癌发展及预后的重要指标。     

消癖丸干预二甲基亚硝胺诱导大鼠肝纤维化的效应及其机制

目的：探讨消癖丸干预二甲基亚硝胺（dimethylnitrosamine,DMN）诱导的大鼠肝纤维化的作用。方法：采用0．5％的DMN溶液2mL／kg体质量腹腔注射,每周连续注射3d,每日1次,共4周,制备大鼠肝纤维化模型。第3周开始模型大鼠随机分为模型对照组和消癖丸组,消癖丸组给予消癖丸煎剂灌胃,模型对照组给予等量的生理盐水。治疗2周后,观察大鼠肝功能、肝组织病理学改变及肝纤维化相关指标α平滑肌肌动蛋白（alpha—smooth muscle actin,α-SMA）、转化生长因子β1（transforming growth factor-β1,TGF—β1）、组织金属蛋白酶抑制剂1（tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1）和血红素氧合酶1（heme oxygenase-1,HO-1）表达的变化。结果：（1）与正常大鼠比较,造模2和4周时模型大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（alanine aminotransferase,ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性逐渐升高（P〈0．01或P〈0．05）,4周时血清总胆红素（total bilirubin,TBil）含量显著增加（P〈0．05）;与4周模型组比较,消癖丸组血清AIT、AST、ALP、TBil水平均显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。（2）模型大鼠肝组织炎症反应及胶原沉积逐渐加重,4周时部分大鼠肝组织已形成完整包绕的假小叶结构,肝组织羟脯氨酸（hydroxyproline,Hyp）含量显著增加（P〈0．01）;与4周模型组比较,消癖丸组肝组织炎症、胶原沉积明显减轻,肝组织Hyp含量显著降低（P〈0．05）。（3）模型大鼠肝组织α-SMA蛋白表达逐渐增加,4周时显著高于2周模型组（P〈0．01）;聚合酶链式反应分析显示,肝组织α—SMA、TGF—β1、TIMP-1和HO-1mRNA的表达随着模型的进展逐渐升高（P〈0．01）;与4周模型组比较,消癖丸组肝组织α-SMA蛋白的表达及α—SMA、TGF-β1、TIMP-1、HO-1mRNA的表达均显著降低（P〈0．01或P〈0．05）。结论：消癣丸能够显著抑制DMN诱导大鼠肝纤维化的进展,且这一作用机制可能与抑制肝星状细胞活化有关。     

尿酸对人肾小管上皮细胞HK-2纤维化相关调控因子的影响

目的观察不同浓度尿酸对人肾小管上皮细胞（HK-2）相关纤维化调控因子的影响,探讨建立尿酸诱导的人肾小管上皮细胞纤维化模型,为尿酸性肾纤维化疾病的研究提供细胞模型。方法以不同浓度的尿酸刺激HK-2细胞6,12,24,36h,MTT检测细胞活性抑制率;Real-TimePCR检测TGF-β1、CTGF、α—SMAmRNA的表达,观察尿酸对HK-2细胞的促纤维化作用;26mg／dL浓度尿酸刺激HK-2细胞24h,免疫组织化学检测TGF-β1、CTGF、α—sMA蛋白的改变。结果尿酸刺激后细胞活性抑制率与对照组比较明显升高（P＜0．05）,呈时间依赖性;尿酸刺激后TGF-β1、CTGF、α-SMA的表达量与对照组比较明显增加（P〈0．05）,并呈剂量依赖性;尿酸刺激后TGF-β1、CTGF、α—SMA蛋白的表达量与对照组比较明显增加（P〈0．05）。结论尿酸可抑制HK-2细胞增殖;采用尿酸诱导HK-2细胞,可建立肾纤维化的细胞模型。     

TGF-β1对人粘连成纤维细胞增殖与COL-Ⅰ合成的影响

目的考察TGF-β1对人粘连成纤维细胞（ATF）增殖与COL-Ⅰ合成的影响。方法通过人体腹膜粘连组织原代培养获取ATF,将不同剂量的TGF-β1与ATF共培养48h,MTT法测定细胞增殖活性,ELISA法测定培养基中COL-Ⅰ的含量。结果TGF-β1 0．5～40ng／mL剂量组的ATF增殖活性均高于0ng／mL剂量组,差异有统计学意义（P〈0．01）。TGF-β1 10、20ng／mL剂量组的COL-Ⅰ含量与0ng／mL剂量组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论TGF-β1可明显提高人ATF的增殖活性与COL-Ⅰ合成水平。     

重组人白介素-10对TNF-α诱导的血管外膜成纤维细胞syndecan-4蛋白表达的影响

目的观察重组人白介素-10（IL-10）对肿瘤坏死因子-α（TNF-α）刺激的血管外膜成纤维细胞（NIH／3T3细胞）增殖和syndecan-4蛋白表达的影响。方法采用体外培养的NIH／3T3细胞,分别应用终质量浓度为20ng／mL TNF-α、100ng／mL IL-10、200ng／mL IL-10、100ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α、200ng／mL IL-10联用20ng／mL TNF-α作用24h,并设对照组进行比较,采用MTS／PMS法确定NIH／3T3细胞的增殖状态,利用Western blot蛋白免疫印迹法测定NIH／3T3细胞中syndecan-4蛋白的表达。结果（1）MTS／PMS法测定各组细胞增殖率统计分析显示：与对照组比较,TNF-α组能显著刺激NIH／3T3细胞的增殖（P〈0．001）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的增殖均无明显作用（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF—α组比较,NIH／3T3细胞增殖均显著减少（P〈0．01）。（2）Western blot蛋白免疫印迹法测定显示：与对照组比较,TNF—α组能显著刺激NIH／3T3细胞中的syndecan-4蛋白表达（P〈0．05）,而IL-10不同剂量组单独应用对NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达均无明显影响（P〉0．05）。IL-10联合TNF-α共同作用组与TNF-α组比较,NIH／3T3细胞的syndecan-4蛋白表达显著降低（P〈0．001）。结论IL—10可明显抑制TNF-α诱导的NIH／3T3细胞增殖及细胞syndecan-4蛋白的表达。     

松弛素对TGF—β诱导的内皮细胞间质化的抑制作用

目的：探讨松弛素（RLX）对TGF-α诱导的内皮细胞间质化现象的影响。方法：采用体外分离的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）作为体外细胞模型,通过TGF—β 10ng／mL诱导内皮细胞间质化,100ng／mL和200ng／mLRLX分别预处理,再与TGF—β联合培养48h。光镜下观察细胞形态学改变,CCK-8实验和transwell实验检测细胞增殖和迁移能力,免疫荧光单双染技术观察vimentin和CD31的表达变化,蛋白免疫印迹技术观察各实验组vimentin、CD31、ve—cadherin和α-SMA的蛋白表达。结果：阴性对照组内皮细胞呈铺路石样生长,TGF—β诱导组细胞形态向梭形转化,呈扩散迁移趋势。与阴性对照组相比,TGF—β诱导组细胞增殖、迁移能力明显增强;而RLX可抑制TGF—β诱导的增殖和迁移。免疫荧光单染结果显示,与阴性对照组相比,TGF—β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin明显上升;与SGF—β组相比,RLX联合TGF—β处理组CD31表达上调而vimentin表达下调。免疫荧光双荣结果显示,阴性对照组以内皮性质的细胞为主,仅存在少量的CD31和vimentin双阳性细胞;TGF—β诱导组双阳性细胞明显增多;与TGF—β组相比,RLX联合TGF—β处理组间质效应的双阳性细胞下调,而内皮效应的双阳性细胞增多。蛋白免疫印迹结果显示,与阴性对照组相比,TGF—β诱导组内皮细胞特异性蛋白CD31（0．36±0．076vs0．88±0．086）和ve—cadherin（0．54±0．046vs1．09士0．13）表达下调而间质细胞标志性蛋白vimentin（0．72±0．102vs0．21±0．081）和α-SMA（0．88±0．084vs0．24±0．046）明显上升（P〈0．05）;与TGF—β组相比,RLX联合TGF—β处理组CD31（0．67±0．09、0．59±0．12vs0．36±0．076）和ve-cadherin（0．85±0．09、0．72±0．064 vs 0．54±0．046）表达上调,而vimentin（0．56±0．0u、0．48±0．06 vs 0．72±0．102）和α—SMA（0．65±0．081、0．54士0．032 vs 0．88±0．084）表达下降（P〈0．05）,且呈剂量依赖性。结论：RLX可抑制TGF—β诱导的内皮细胞向间质化细胞转化。     

转化生长因子-β1对瘢痕成纤维细胞的调节及意义

目的 研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对瘢痕成纤维细胞中纤维粘连蛋白(FN)和肌动蛋白(α—actin)表达的诱导作用，探讨TGF-β1与瘢痕挛缩的关系。方法 采用细胞培养、免疫组化、图像分析技术，观察在不同含量TGF-β1的作用下，瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达情况。结果 不同含量的TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞表达FN和α—actin的作用不同，分别以25～100μg／L和10～50μg／L为有效；与正常瘢痕组织相比，增生性瘢痕的成纤维细胞在表达FN和α—actin方面，对TGF-β1的反应更为敏感，差异均有显著性意义(P＜0．01)。结论 TGF-β1诱导瘢痕成纤维细胞FN和α—actin的表达增加可能与瘢痕挛缩有关。     

转化生长因子β1／整合素连接激酶信号通路在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素对其的干预效应

目的：研究转化生长因子β1整合素连接激酶（transforming growth factor-betal／integrin-linked kinase,TGF-β1／ILK）信号通路在白细胞介素β1（interleukin-1β,IL-1β）诱导的大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化（tubular epithelial-myofibroblast transdifferentiation,TEMT）中的作用,并探讨大黄素是否是通过抑制TGF-β1/ILK信号通路而影响TEMT。 方法：以雄外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株（NRK52E）为研究对象,分为空白对照组、大黄素对照组、IL-1β诱导组、大黄素阻断组、TGF-β1Ⅰ型受体阻断剂（SB431542）阻断组、大黄素和SB431542共同阻断组、大黄素预处理组和大黄素逆转组。NRK52E细胞在上述处理因素下培养48h后,在倒置相差显微镜下观察细胞形态变化;免疫组化双标法检测细胞表型标志物α平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）和E-钙黏连素（E-cadherin）的表达;免疫组化单染法检测NRK52E细胞TGF-β1和ILK的表达,采用图像分析软件定量分析免疫组化染色结果;酶联免疫吸附测定法测定NRK52E细胞分泌的纤维连接蛋白（fibronectin,FN）含量。结果：与空白对照组比较,IL-1β诱导TEMT的同时TGF-β1和ILK表达增加（P〈0．05）,大黄素可明显抑制IL-1β诱导的上述变化（P〈0．05）。阻断TGF-β1信号通路后,IL-1β诱导的TEMT明显受抑,且ILK表达减少。与大黄素阻断剂组比较,大黄素预处理不能预防IL-1β诱导的TEMT,大黄素不能逆转IL-1β诱导的TEMT。相关分析显示,TGF-β1表达与α-SMA、FN、ILK表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。ILK表达与α-SMA、FN表达呈正相关,与E-钙黏连素表达呈负相关。结论：1L-1β通过激活TGF-β1／ILK信号通路蛋白而诱导TEMT,大黄素通过抑制TGF-β1／ILK信号通路蛋白而抑制IL-1β诱导TEMT。     

过氧化物酶增生物激活受体γ激动剂对肝星状细胞α1(Ⅰ)胶原表达的影响

目的观察过氧化物酶增生物激活受体γ（PPARγ）激动剂15d—PGJ2对肝星状细胞株（HSC-T6）前胶原α1（Ⅰ）表达的影响，以进一步探讨PPARγ在肝纤维化进程中的作用机制。方法体外培养HSC—T6细胞。取对数生长期的细胞分为空白对照组、TGF-β对照组和15d-PGJ2处理组，TGFp对照组和15d—PGJ2处理组均给予TGF-β因子（终浓度3ng／ml）共孵育6h。15d—PGJ2处理组再用1、2、3μmol／L的PPARy激动剂15d—PGJ2作用24h。应用RT—PCR、Westernblot方法观察分析各组间肝星状细胞PPARy、前胶原α1（Ⅰ）基因表达的变化。结果15d—PGJ2能够显著上调PPARymRNA和蛋白的表达水平，15d-PGJ2处理组的相对吸光度值较空白对照明显升高（P〈0．05），而TGF—β对照组与空白对照组差异无显著性意义（P〉0．05）。在TGF-β刺激下，TGF-β对照组前胶原α1（Ⅰ）mRNA水平均升高，同空白对照组相比差异有显著性意义（P〈0．05）；15dPGJ2处理组细胞前胶原α1（Ⅰ）mRNA水平与空白对照组相比差异无显著性意义（P〉0．05），但与TGF-β8对照组相比，其表达明显受抑制（P〈0．05）。结论PPARy激动剂15d—PGJ2能够通过上调PPARy表达而抑制前胶原α1（Ⅰ）转录，提示PPAR7可抑制肝纤维化的发生发展。     

小G蛋白Rac1在马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中的作用及意义

目的：探讨马兜铃酸（从）致肾小管上皮细胞损伤的机制及小G蛋白Racl在此过程中发挥的作用。方法：以溶剂作为对照组,从以浓度10μg／mL作用于大鼠肾小管上皮细胞NRK-52E,培养24h后,WST-1法检测细胞增殖的抑制率;Hoechst33258染色观察细胞核的形态变化;细胞免疫荧光染色检测Ⅲ型胶原和Racl蛋白的表达;real—time RT—PCR检测TGF—D1mRNA的表达;ELISA法检测细胞培养上清液中Racl和TGF—β1含量,并分析两者相关性。结果：从可明显抑制NRK-52E细胞增殖,并诱导细胞凋亡。从以10μg／mL处理NRK-52E细胞24h后,TGF—β1 mRNA的表达明显升高（p〈0．05）,并且细胞外基质成分Ⅲ型胶原的表达明显增加（P〈0．05）。此外,从也可诱导小G蛋白Racl的表达（P〈0．05）。相关分析显示,AA诱导NRK-52E细胞损伤过程中,Racl的表达量与TGF—β1的分泌水平呈现明显正相关（r=0．967,P〈0．01）。结论：从诱导肾小管上皮细胞出现纤维化样改变,同时伴有Racl蛋白的高表达;Racl及其介导的信号通路可能被TGF-β1的高表达所活化,进而参与从所致的胶原累积过程。