SM7微卫星标记快速多态分析行Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病的基因诊断

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对４个Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤⅠ）家系２４名个体的ＳＭ７（一种与ＡＤＰＫＤⅠ基因紧密连锁的微卫星标记）多态性进行连锁分析，其中３个家系得到了明确结果，ＰＣＲ扩增条带清晰，致病基因连锁关系明确。认为本法是一种快速、廉价、有效的ＡＤＰＫＤⅠ基因诊断方法。     

地成人型多囊肾病家系成员进行症前基因诊断

目的 探讨对中国成人型囊肾病（ＡＰＫＤ）家系成员进行症前基因诊断的方法。方法 应用ＰＣＲ技术扩增与ＰＫＤＩ位点紧密连锁的微小卫星体ＤＮＡ遗传传标记，基因连锁的家系分析。结果 对一个ＡＰＫＤ家系中的无临床症，且Ｂ超检查呈阴性结果的６个孩子做了症前基因诊断；５个孩子（５－１５岁）携带ＰＫＤＩ基因；仅１个１１岁女孩是正常的个体。结论 能够应用ＰＣ译中国的成人型多囊肾病家系成员快速，准确地做出症前基因诊断     

改良聚合酶链反应法快速诊断常染色体显性遗传型多囊肾病

目的：检测微小卫星体ＳＭ７快速诊断常染色体显性遗传型多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）。方法应用改良二温式聚合酶链反应（ＰＣＲ）法扩增与ＰＫＤ１位点紧密连锁的微小卫星体ＳＭ７,并对１０个家系进行基因连锁分析。结果在１０个家系１０３个家庭成员中,２９例先证者,９例无症状者通过基因连锁分析得到确诊,结论改良二温式ＰＣＲ法检测微小卫星体ＳＭ７可早期快速诊断ＡＤＰＫＤ。     

成人型多囊肾病的基因诊断

应用人１６号染色体上α－珠蛋白基因３’ＨＶＲ（Ｄ１６ｓ８５）为探针，对三个成人型多囊肾病（ＡＰＫＤ）家系进行限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）连锁分析，结果三个家系均对α－珠蛋白基因３’ＨＶＲ提供信息，并对家系３中一成员成功地进行了症状前诊断，确定该成员（１０岁）携带致病基因的风险为５％。说明α－珠蛋白基因３’ＨＶＲ探针可用于中国人群中ＡＰＫＤ的症状前诊断和产前诊断，同时证明此法是目前成人型多囊肾病症状前诊断和产前诊断最有效的手段。     

超前缺血对培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤保护作用的实验研究

观察超前缺血（ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｗｉｔｈｉｓｃｈｅｍｉａ，ＰＣＩ）对培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，Ｉ－Ｒ）损伤的影响。发现（１）心肌细胞经ＰＣＩ后，其ＡＴＰ含量及培养液ＬＤＨ无明显变化；（２）经ＰＣＩ诱导的心肌细胞，持续３ｈ缺糖、缺氧，其ＡＴＰ消耗较对照组显著减少；（３）复灌期ＰＣＩ组ＡＴＰ含量增加，ＬＤＨ下降；（４）在各时相［Ｃａ＋＋］ｉ与对照组比较无明显变化，但ＬＰＯ于复糖、复氧后显著降低。结果提示：有限次数短暂ＰＣＩ对心肌细胞代谢及膜通透性无损伤作用；ＰＣＩ能提高细胞对长时间缺氧的耐受能力，减轻缺氧心肌Ｉ－Ｒ损伤。其机理可能是：心肌细胞作为一独立的基本功能单位，经ＰＣＩ诱导，细胞内抗氧自由基系统酶的活性增加，减轻了氧自由基的损伤效应。     

Alport综合征一家系中新的COL4A5基因突变

目的了解我国Ｘ伴性显性（ＸＤ）遗传Ａｌｐｏｒｔ综合征（ＡＳ）中ＣＯＬ４Ａ５基因突变特点。方法应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）－变性梯度凝胶电泳（ＤＧＧＥ）和直接测序的方法，对来自７个ＸＤ－ＡＳ家系１０个成员和１００个正常人外周血ＤＮＡ标本进行了ＣＯＬ４Ａ５基因４３号外显子的检测。结果在一个家系中发现４１４２Ｃ→Ｔ（Ｐｒｏ１３１４Ｓｅｒ）的转换突变，先证者与其弟、其母均发现有此异常。结论表明该突变为一遗传     

超前缺血对培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤保护作用…

观察超前缺血（ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇｗｉｔｈｉｓｃｈｅｍｉａ，ＰＣＩ）对培养乳鼠心肌细胞缺血再灌注（ｉｓｃｈｅｍｉａ－ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ，Ｉ－Ｒ）损伤的影响。发现（１）心肌细胞经ＰＣＩ后，其ＡＴＰ含量及培养液ＬＤＨ无明显变化；（２）经ＰＣＩ诱地的心肌细胞，持续３ｈ缺糖，缺氧，其ＡＴＰ消耗较对照组显著减少，（３）复灌期ＰＣＩ组ＡＴＰ含量增加，ＬＤＨ下降，（４）在各时相（Ｃａ＾＋＋）ｉ与对     

ACE基因多态性与2型糖尿病肾病关系的研究

目的：明确血管紧张素Ｉ转换酶（ＡＣＥ）基因插入／缺失（Ｉ／Ｄ）多态性与２型尿病及其肾病发生及进展的关系。方法：ＡＣＥ基因内含子１６的一个２８７ｂｐ的Ａｌｕ顺序Ｉ／Ｄ型为多态标志，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增基因片段，１％琼脂糖凝胶电泳检测ＰＣＲ产物。结果：（１）２２１例２例糖尿病与１００例正常对照组之间基因型分布无显著性差异；（２）２型糖尿病未合并肾病与合并肾病及肾功不全（ＲＦ）等各亚组之间基因型频率和等位基因频率无显著性差异。结论：ＡＣＥＩ／Ｄ多态性与２型糖尿病肾病和肾功能不全的发生无关。     

肾病综合征患儿人类白细胞抗原—DRB1基因分型

为进一步明确人类白细胞抗原（ＨＬＡ）与肾病综合征的关系，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）／顺特异的寡核苷酸（ＳＳＯ）探针的方法对２３名上海地区激素敏感型肾病综合征患儿进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因的频率分析。发现ＨＬＡ－ＤＲＢ１０７与该病相关，ＨＬＡ－ＤＲＢ１０９与该病的频复发相关，用ＰＣＲ／ＳＳＯ分型方法可精确分析与肾病综合征相关的ＨＬＡ等位基因。     

成人型多囊肾病致病基因PKD1区新DNA片段的定位克隆

目的 为了分离成人型多囊肾病致病基因ＰＫＤ１区近侧端新的探针。方法 采用定向跳跃克隆ＰＣＲ技术分离了一个ＤＮＡ片段，通过反向ＰＣＲ、缺失杂交定位，限制性内切酶谱分析以及ＤＮＡ序列分析，并与ＰＫＤ１区物理图谱及最新的ＤＮＡ数据库比较。结果 证实该克隆片是一个新的ＤＮＡ序列，位于ＰＫＤ１区ＮＫ９２．６ＳＨ１．０近侧的ＭｌｕⅠ位点处，距克隆起始位点ＡＪ１约４０ｋｂ。结论由于位点位于ＰＫＤ１可能存在的一另     

冷停搏液冠状静脉灌注保护缺血心肌的实验研究

采用左前降支（ＬＡＤ）梗阻心肌缺血模型，２４只杂种犬依冷停搏液灌注方法分为４组，即主动脉灌注（ＡＰ）、右房灌注（ＲＡＰ）、冠状静脉窦灌注（ＣＳＰ）、主动脉灌注加冠状静脉窦堵塞（ＡＰＣＳＯ），每组６只。结果表明，冠状静脉灌注（ＲＡＰ、ＣＳＰ、ＡＰＣＳＯ）均明显增加有ＬＡＤ梗阻时缺血心肌保护。缺血时梗阻ＬＡＤ区心温维持较低；缺血后心电图恢复正常，心肌组织有氧代谢标志酶—琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）保持较高活性（＋＋＋～＋＋＋＋），心脏指数（ＣＩ）和左室搏出功指数（ＬＶＳＷＩ）恢复较佳。相反，ＡＰ对梗阻ＬＡＤ区心肌不能提供足够的心肌保护。缺血时对ＬＡＤ区降温差；缺血后心电图Ｓ－Ｔ段明显抬高，ＳＤＨ活性减弱（＋），无氧糖酵解标志酶—乳酸脱氢酶活性增高（＋＋＋），ＣＩ和ＬＶＳＷＩ恢复较差。     

慢性肾小球肾炎与HLA免疫遗传强关联

目的 评估人类组织相容性抗原（ＨＬＡ）在慢性肾小球肾炎所致肾功能衰竭病人中的免疫遗传学本质。方法 用单抗免疫磁珠ＨＬＡ－Ｉ类分型和ＰＣＲ－ＳＳＰ－ＨＬＡ－Ⅱ类分型技术，对广东地区２１９例汉族慢性肾小球肾炎病人和４０６例健康人进行ＨＬＡ－Ｉ，Ⅱ类抗原频率，基因频率，单倍型频率，风险系数等分析，结果 疾病组ＨＬＡ－Ｂ１３，Ｂ３５，Ｂ５５，ＤＲ７，ＤＲ１０，ＤＲ１２，ＤＱ７基因频率和Ａｌｌ－Ｂ６０，Ａｌ     

人膀胱癌多重抗药性逆转的实验研究

为探讨膀胱癌多重抗药性逆转机理，应用阿霉素（ＡＤＭ）大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞。通过测定细胞内ＡＤＭ聚积量和钙离子浓度，发现ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量显著低于ＢＩＵ８７细胞（Ｐ＜００５）；维拉帕米（ＶＰＬ）、奎宁能使ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量增加（Ｐ＜００５），两者协同应用基本上可逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性。结果表明：（１）细胞内ＡＤＭ聚积量减少是抗药细胞的重要变化，在细胞抗药性发生机理中可能起主导作用，（２）ＶＰＬ、奎宁能逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性，可能与增加细胞内ＡＤＭ聚积量有关，与钙通道无关。     

肾病综合征患儿人类白细胞抗原－DRB1基因分型

为进一步明确人类白细胞抗原（ＨＬＡ）与肾病综合征的关系，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）／顺序特异的寡核苷酸（ＳＳＯ）探针的方法对２３名上海地区激素敏感型肾病综合征患儿进行了ＨＬＡ－ＤＲＢ１等位基因的频率分析，发现ＨＬＡ－ＤＲＢ１０７与该病相关（Ｐ校正Ｐｃｏｒｒ＝９．０２×１０－３，相对危险度，ＲＲ＝８．１５），ＨＬＡ－ＤＲＢ１０９与该病的频复发相关（Ｐｃｏｒｒ＝２．５１×１０－２，ＲＲ＝２０．７７），用ＰＣＲ／ＳＳＯ分型方法可精确分析与肾病综合征相关的ＨＬＡ等位基因。     

多普勒能量图监测移植肾急性排斥

为探讨彩色多普勒能量图（ＣＤＥ）在监测移植肾急性排斥中的应用价值，对７１例移植肾作ＣＤＥ及常规彩色多普勒血流成像（ＣＤＦＩ）等检查，其中２２例经临床及病理证实发生了急性排斥（ＡＲ）。结果表明：根据ＣＤＥ可以诊断急性排斥，其灵敏度比ＣＤＦＩ高。若ＣＤＥ与ＣＤＦＩ结合，则诊断ＡＲ的准确性更进一步提高。多次ＣＤＥ检查动态观察移植肾可预测ＡＲ的转归和监测抗排斥的效果。认为ＣＤＥ检查是目前肾移植术后较实用的一种监测手段。     

维生素E通过抑制二酰基甘油-蛋白激酶C通路对糖尿病大鼠肾脏的保护作用

近年来，有关细胞内信息传导与细胞功能调节在糖尿病并发症的研究中越来越引起人们的重视。二酞基甘油（ＤＡＧ）和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）是细胞内重要的信息传导系统，ＤＡＧ－ＰＫＣ通路活性异常在糖尿病肾病发病机制中起着关键性作用［１］。以往研究发现，维生素Ｅ对糖尿病大鼠肾脏有保护作用［２］。本研究中，我们探讨维生素Ｅ对肾脏的保护作用是否同纠正ＤＡＧ－ＰＫＣ通路活性异常有关。 一、材料和方法 １．实验动物分组及模型制作：体重２００～２５０ ｇ，雄性 ＷＳＩＳＩ大鼠５０只（山东大学实验动物中心提供），随机分为正常对…     

CsA,MPA和RPM对CD28通路共刺激后淋巴细胞IL—4mRNA表达？…

目的 观察环孢素Ａ（ＣｓＡ）霉酚酸（ＭＰＡ）和雷帕霉素（ＲＰＭ）对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。方法 以ＰＣＲ扩增方法获得了ＩＬ－４特异的ｃＤＮＡ片段，并将其克隆至ＰＧＥＭ－３Ｚ载体中，以此作为探针对ＲＴ－ＰＣＲ产物进行杂交定量，比较三种免疫抑制剂对ＣＤ２８通路共刺激后淋巴细胞ＩＬ－４ｍＲＮＡ表达的影响。结果 以抗ＣＤ３ｍＡｂ＋抗ＣＤ２８ｍＡｂ共刺激后，发现淋巴细胞稳定地     

两种新型IFNα的克隆、表达及其抗骨肉瘤活性

目的 构建两种新型ＩＦＮ突变株及其母体的原核表达系统,表达后对比检测其抗骨肉瘤活性。方法 以重组噬噬菌体ｐＣＡＮＴＡＢ５Ｅ－ＩＦＮｓ为模板,ＰＣＲ扩增出两种ＩＦＮα１ｃ／８６Ｄ突变株及其母体的ＤＮＡ序列,插入原核表达载体ｐＢＶ３２０３。表达、纯化后进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测其免疫活性、ＭＴＴ比色法对比检测其抗骨肉瘤细胞（ＯＳ７３２）增殖的活性。结果 酶切及ＰＣＲ鉴定     

多药耐药基因在泌尿系统肿瘤细胞系中的表达

目的检测泌尿系统肿瘤多药耐药基因及其产物的表达。方法对肾颗粒细胞癌细胞系ＧＲＣ１，肾透明细胞癌细胞系ＲＣＣ９４９，膀胱移行细胞癌细胞系ＢＩＵ８７、Ｔ２４、ＥＪ，前列腺癌细胞系ＰＣ３ｍ和对照的白血病细胞系ＨＬ６０进行免疫细胞化学和逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测。结果只有ＧＲＣ１同时表达Ｐ糖蛋白（ＰＧＰ）和ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ，其他肿瘤细胞系均无表达。结论泌尿系肿瘤细胞系多数无ＰＧＰ也没有ＭＤＲ１基因ｍＲＮＡ水平的表达，只有ＧＲＣ１例外     

内皮素受体拮抗剂防治缺血性急性肾衰的实验研究

为探讨内皮素（ＥＴ）受体拮抗剂对缺血性急性肾衰（ＩＡＲＦ）的防治作用，对大鼠ＩＡＲＦ模型，再灌注６０分钟自股动脉分别灌入生理盐水，选择性内皮素Ａ受体（ＥＴＡ）拮抗剂ＰＤ１４７９５３和非选择性内皮素受体（ＥＴＲ）拮抗剂ＰＤ１４５０６５，观察肾皮质血流、肾功能和肾组织学改变。结果：与对照组比较，ＥＴＲ拮抗剂可明显增加肾缺血再灌注后的肾皮质血流（Ｐ＜０．０１），减轻肾功能损害（Ｐ＜０．０１）及组织学改变，其中以非选择性ＥＴＲ拮抗剂效果更好。结果认为：ＥＴ升高及其两种受体亚型的上调是ＩＡＲＦ发生发展的重要因素，外源性提供ＥＴＲ拮抗剂阻断ＥＴ生物学作用是防治ＩＡＲＦ的又一新途径。