肺癌组织 p53 基因突变的研究

目的：探讨肺癌发生的分子遗传学机理，了解肺癌中ｐ５３基因突变的情况。方法：采取聚合酶链反应（ＰＣＲ）及聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）结合银染技术，对２０例肺癌组织中ｐ５３基因外显子５～８进行了突变分析。结果：ｐ５３基因突变１２例，占总人数６０％（１２／２０），分布于外显子５～８。其中第７外显子６例，第８外显子４例，第５、６外显子各１例。鳞癌突变率５０％（３／６），腺癌突变率６０％（６／１０），小细胞肺癌突变率７５％（３／４）。结论：ｐ５３基因突变与肺癌的发生发展有关。     

非小细胞肺癌p16基因突变与表达的研究

pl6蛋白最初是从各种肿瘤病毒转化的细胞中鉴定出的一种CDK4相关蛋白l’］。p］6基因被发现后,已有一些文献『‘－’］对其在肺癌中出现的基因缺失和突变进行了报道,但关于原发性肺癌中p16基因的突变和表达与患者的病理及临床资料相结合的研究目前还少见报道。本文采用?..     

周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液p53基因突变及其临床意义

目的:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53突变及其作为分子诊断标记的可行性.方法:DHPLC分析46例支气管肺泡灌洗液标本(33例肺癌,13例对照)p53基因Exon5～9突变.结果:肺癌组p53突变检出率36.36%(15/33),对照组未检出一例,两组p53突变率比较具有明显差异(P＜0.05);p53突变作为肺癌诊断分子标记,灵敏度36.36%(12/33),特异度100%(13/13).结论:DHPLC分析周围型非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液标本p53基因热点突变可以作为周围型肺癌诊断的分子标记,但在支气管肺泡灌洗液标本检测单一基因突变不能满足临床诊断的需要.     

应用PCR-SSCP银染法检测肺癌p53基因的突变

目的：探索并建立一套适用于临床检测的ｐ５３基因突变的分析方法，探讨肺癌发生发展与ｐ５３基因突变的关系，为临床诊断和治疗提供分子依据。方法：采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法对２２例肺癌患者ｐ５３基因的第６、第７外显子进行分析。结果：全部患者组织标本经ＰＣＲ扩增，均获得特异的ｐ５３基因扩增产物，进一步对第６第７外显子应用ＳＳＣＰ进行突变分析，不同组织类型肺癌的ｐ５３基因突变率各不相同，第７外显子的突变率（２７．３％）高于第６外显子（９．１％）。结论：ＰＣＲ－ＳＳＣＰ银染法是适于肺癌患者ｐ５３基因突变分析的简捷、快速而可靠的检测方法，通过进一步研究，将为肺癌的早期诊断、鉴别诊断和预后判断提供有价值的分子指标。     

Detection of K-ras and p53 mutations in bronchoscopically obtained malignant and non-malignant tissue from patients with non-small cell lung cancer

Molecular screening may increase the likelihood to identify early malignant lesions in non-small cell lung cancer. However the presence of gene mutations in non-malignant bronchial tissue has remained controversial. The present study was carried out to investigate systematically the presence of mutations of the K-ras and p53 gene in bronchial biopsies taken during routine bronchoscopy of normal as well as tumour tissues from a series of 40 patients with histologically verified non-small cell lung cancer (NSCLC). K-ras mutations were analysed with specific detection oligonucleotides, p53 mutations were examined by SSCP analysis. In all biopsies the wildtype of both K-ras and p53 could be detected. The overall frequency of mutations was 14 (35%) with 2 K-ras mutations (5%) and 12 mutations of the p53 gene (30%). In 3 cases (1 ras mutation, 2 p53 mutations) the same mutation could be shown in the tumour biopsy and in the distant normal control. In another case only the normal appearing tissue had a mutation of the p53 gene. All other mutations could be detected in the tumour tissue only. Our data confirm that K-ras mutations and p53 can be detected not only in malignant but also in non-malignant bioptic samples from patients with NSCLC. The use of molecular screening for the early detection of lung cancer may be a promising new approach.     

非小细胞肺癌 BALF 中 RAR-β基因甲基化与p53突变检测及相关性研究?

目的：探讨非小细胞肺癌患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中 RAR-β基因甲基化与 p53基因突变检测的临床意义及二者的相关性。方法收集非小细胞肺癌患者(肺癌组)85例及良性疾病患者(良性疾病组)70例的 BALF 标本,采用甲基化特异性 PCR(MSP)方法检测 BALF 中的 RAR-β基因甲基化,PCR 结合 DNA 测序法检测 p53基因突变。结果肺癌组 BALF 中RAR-β基因甲基化率及 p53基因突变率分别为49.4%、36.5%,均显著高于良性疾病组(P <0.01);(Ⅰ+Ⅱ)期 RAR-β基因甲基化率(32.5%)高于同期 p53基因突变率(12.5%)(P <0.05);(Ⅲ+Ⅳ)期 RAR-β基因甲基化率及 p53基因突变率均显著高于(Ⅰ+Ⅱ)期(P <0.01);发生 RAR-β基因甲基化的肺癌患者 p53基因突变率更高(P <0.01);发生 p53基因突变的肺癌患者RAR-β基因甲基化率更高(P <0.01)。结论检测非小细胞肺癌患者 BALF 中 RAR-β基因甲基化与 p53基因突变有助于肺癌的诊断。     

人食管癌及其癌旁组织p53基因外显子4—8的突变分析

目的：了解抑癌基因p53在人食管癌及其癌旁组织中的突变,尤其是p53外显子4的变异。方法：采用PCR-SSCP和DNA测序等方法对24例人食管鳞状细胞癌术后标本进行了p53基因外显子4-8的突变分析。结果：在食管癌组织及癌旁组织幸免被检测的15列标本中,分别有40.0%(6/15)和46.7%(7/15)发生了突变,两者差异无显著性,食管癌组织标本中有50%（9/18）的突变发生在外显子4。另外,有4例在食管癌组织及癌旁组织中同时检测出p53基因突变,年龄,性别,术前治疗（放射治疗,化学药物治疗）,肿瘤的部位等对癌组织的突变率并不产生影响。结论：在人食管癌及其癌旁组织中,p53基因的突变几率差异无显著性,年龄,性子4的突变可能产生了尤为重要的作用。     

Ha-ras、p53基因变异与膀胱癌预后关系的探讨

采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ技术检测了３９例膀胱癌及７例正常膀胱组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异，并结合临床分期、病理分级等参数进行了综合分析。结果表明，膀胱癌组织中Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异率分别为３６％、３０．８％，两者均显著高于正常对照组（Ｐ＜０．０５）；且与分级分期呈正相关。复发肿瘤的Ｈａ－ｒａｓ基因突变率显著高于原发肿瘤；６例标本同时呈现Ｈａ－ｒａｓ基因与ｐ５３基因突变。提示Ｈａ－ｒａｓ基因、ｐ５３基因变异及相互作用在很大程度上参与了膀胱癌的发生及演变，并与其生物学行为密切相关，有望成为判断肿瘤恶性程度、自然病程及预后的评估指标     

肺癌组织p53和K-ras基因突变及其表达产物检测的意义

目的：研究肺癌组织中ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ 基因突变、蛋白表达,以及二者的关系． 方法：应用 Ｐ Ｃ Ｒ Ｓ Ｓ Ｃ Ｐ和免疫组织化学方法分别检测肺癌组织中的ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因突变和蛋白表达． 结果：肺癌组织中检测到ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因的突变分别为５３％ 和１４％ ,肺癌组织中检测到ｐ５３ 蛋白和 ｐｒａｓ ２１ 蛋白的积聚分别为５８％ 和１９％ ． 结论：ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因突变与肺癌发生关系密切,其基因突变与蛋白的积聚之间存在一致的关系,但并非完全对应． ｐ５３ 和 Ｋｒａｓ基因突变及其表达产物的检测对肺癌患者有一定的辅助诊断意义．     

p53基因失活与大肠腺癌病理改变的关系

目的探讨ｐ５３基因失活与大肠腺癌Ｄｕｋｅｓ分期、转移等病理改变的关系。方法Ｓｏｕｔｈｅｍｂｌｏｔ和ＲＦＬＰ分析大肠腺癌组织中１７ｐＬＯＨ的改变：ＲＴ－ＰＣＲ－ＳＳＣＰ检测大肠腺癌ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变;两种单抗（ＰＡｂ２４０．ＰＡｂ１８０１）ＬＳＡＢ免疫组化方法检测大肠腺癌ｐ５３蛋白表达,ＳＰＳＳ下Ｆｉｓｈｅｒ'ｓｅｘａｃｔｔｅｓｔ处理结果。结果１０９例大肠腺癌中,１７ｐＬＯＨ与Ｄｕｋｅｓ＇Ｄ期和远处转移有关（Ｐ＜０．０１）;１８７例大肠腺癌中,ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变与Ｄｕｋｅｓ'Ｃ期和淋巴结转移有关（Ｐ＜０．０１）;１００例大肠腺癌中,ＰＡｂ２４０和ＰＡｂ１８０１单抗阳性率分别为７６％和６２％,两种单抗相加总阳性率为８２％。ｐ５３蛋白高表达与Ｄｕｋｅｓ＇分期及癌转移间的关系无统计学意义（Ｐ＞０．０５）。结论ｐ５３基因失活参与大肠腺癌的病理发展各阶段和转移行为;高频率的ｐ５３基因ｃＤＮＡ突变和高频率１７ｐＬＯＨ的出现,分别提示Ｄｕｋｅｓ'Ｃ期和Ｄｕｋｅｓ'Ｄ期的病理阶段形成,这两种ｐ５３基因的改变分别提示淋巴结转移和远处转移的分子生物学标记。免疫组化方法可检测突变型ｐ５３基因产物高表达,对大肠肿瘤良恶性细胞鉴别     

Detection of p53 gene mutations in sputum samples and their implications in th e early diagnosis of lung cancer in suspicious patients

目的　评价痰标本检测p5 3基因点突变方法及其作为肺癌早期临床诊断监测指标的真实性和可靠性。方法　用PCR SSCP 银染法检测 5 4例原发性肺癌患者和 114例良性肺疾患者痰标本中p5 3基因第 5 - 8外显子的点突变 ,同时进行痰涂片细胞学检查。结果　p5 3突变在肺癌组检出率为 5 5 5 6 % (30 /5 4 ) ,非肺癌组检出率为 1 75 % (2 /114) (P <0 0 0 1)。痰标本检测p5 3基因突变作为肺癌临床诊断监测指标的灵敏度 5 5 5 6 %、特异度 98 2 5 %、阳性似然比 31 75。肺癌组p5 3阳性检出率 5 5 5 6 % (30 /5 4 )与痰涂片瘤细胞阳性检出率 35 19% (19/5 4 )比较 :差异性有显著意义 (P <0 0 5 ) ,关联性有极显著意义 (P <0 0 1)。肺癌组p5 3检出率与性别、吸烟指数、病理分型、疾病分期均无明显关系 ,但与年龄有密切关系 ,高龄患者 ( 6 0岁 )检出率高 (P =0 0 2 )。非肺癌组一例慢性阻塞性肺病 (COPD)患者检测到E5突变 ,随访四年 ,确诊为肺鳞癌。结论　PCR SSCP 银染法检测痰标本p5 3突变可以在可疑肺癌患者 (如吸烟者合并慢性肺疾患 )中作为一项随访监测指标 ,将有助于肺癌早期临床诊断。     

应用PCR-SSCP方法检测胸水细胞中p53基因突变鉴别良恶性胸水

目的 探讨胸水细胞中ｐ５３基因突变的检测对鉴别良恶性胸水的价值。方法 应用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ方法对３４例肺癌患和１６例良性肺部疾病患的胸水细胞中的ｐ５３基因突变情况进行了检测,同时进行了胸水的瘤细胞学检查和部分肺癌组织的ｐ５３基因突变检测,并将结果进行了比较。结果 在４７．０％９１６／３４）的肺癌患的胸水细胞中检测到ｐ５３基因的突变,在３７．５％（６／１６０的瘤细胞学检查阴性的肺癌患的胸水细     

错配修复基因hMLH1、hMSH2及p53在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨人类错配修复基因hMLH1、hMSH2及D53在肺癌组织中的表达及意义。方法运用免疫组织化学sP法对56例肺癌组织中hMLH1、hMSH2及p53的表达进行检测。结果56例肺癌组织中hMLH1的阳性表达率为35％，hMSH2阳性表达率为28．6％，分化程度高者阳性率显著高于分化程度低者（P〈0．01），有淋巴结转移者hMLH1及hMSH2阳性率低于无淋巴结转移者（P〈0．05），不同病理组织学类型之间hMLH1及hMSH2表达无显著差别（P〉0．05）；56例肺癌组织中，p53阳性率为51．8％，分化程度低者p53阳性率高于分化程度高者（P〈0．05），有淋巴结转移者p53阳性率高于无淋巴结转移者（P〈0．01），不同病理组织学类型之间p53阳性率无差别（P〉0．05）；hMLHI及hMSH2阴性表达者的p53阳性率高于hMLH1及hMSH2阳性表达者（P〈0．05）。结论hMIH1及hMSH2基因的缺陷及p53的表达与肺癌的发生发展过程并与分化程度及有否淋巴结转移有关。     

人类错配修复基因hMSH2及p53在肺癌组织中的表达及意义

目的探讨人类错配修复基因hMSH2及p53在肺癌组织中的表达及意义。方法运用免疫组织化学SP法对56例肺癌组织中hMSH2及p53的表达进行检测。结果56例肺癌组织中hMSH2阳性表达率为28.6%,分化程度高者阳性率显著高于分化程度低者（P〈0.01）,有淋巴结转移者hMSH2阳性率低于无淋巴结转移者（P〈0.05）,不同病理组织学类型之间hMSH2表达差异无统计学意义（P〉0.05）;56例肺癌组织中,p53阳性率为51.8%,分化程度低者p53阳性率高于分化程度高者（P〈0.05）,有淋巴结转移者p53阳性率高于无淋巴结转移者（P〈0.01）,不同病理组织学类型之间p53阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）;hMSH2阴性表达者的p53阳性率高于hMSH2阳性表达者（P〈0.05）。结论hMSH2基因的缺陷及p53的表达与肺癌的发生发展过程并与分化程度及有否淋巴结转移有关。     

增殖细胞核抗原和p53在肺癌组织中的表达及临床意义

目的 研究增殖细胞核抗原（PCNA）和p53在肺癌组织中的表达及其临床意义。方法 应用免疫组织化学SABC法检测肺癌患者肿瘤组织中PCNA和p53的表达，并探讨其与肿瘤发生及恶性行为之间的关系。结果 肺癌组织中p53蛋白阳性表达率为70％，较正常组有显著性差异（P＜0．01），p53蛋白阳性表达率在淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者（P＜0．01），在不同组织学分级和病理分期的肺癌组织间p53的表达无差异性。肺癌组织PCNA标记指数随组织学分级和病理分期的增高而增高（P＜0．01），有淋巴结转移者较无淋巴结转移者显著增高（P＜0．01），p53阳性表达者PCNA标记指数显著高于p53表达阴性者（P＜0．01）。结论 p53蛋白表达与肺癌的发生和淋巴结转移密切相关；PCNA与肺癌的生长及恶性行为有关。     

P53、P16、Bcl-2基因及产物在原发性肺癌中的表达及其临床病理意义

目的 :探讨原发性肺癌 Mtp5 3、p16、Bcl- 2的异常表达与肺癌发生、发展的关系 ,以及它们之间的调控关系。 方法 :用免疫组化技术检测 (L SAB) 114例原发性肺癌组织中 p5 3、p16、Bcl- 2的表达。并用 PCR技术对 6 2例 p16蛋白丢失的肺癌组织中 p16外显子 2 (p16 E2 )的缺失进行分析。 结果:p5 3蛋白异常表达与肺癌组织学类型、分化程度无关 (P >0 .0 5 ) ,但与淋巴结转移情况有关 (P >0 .0 5 )。 p16蛋白阳性表达率与肺癌的组织学类型无关 ,但是其表达水平与非小细胞肺癌 (NSCL C)的细胞分化程度和淋巴结转移密切相关 (P <0 .0 5 )。 NSCL C中 p16E2的缺失率为 45 .2 %,其缺失水平随淋巴结转移和组织学分级的升高而升高 (P <0 .0 5 )。 SCL C(小细胞肺癌 )和正常肺组织中无 p16 E2的缺失。 Bcl- 2在小细胞肺癌中阳性率 6 2 .2 %显著高于 Sq Ca(鳞癌 )的 2 5 %和 Ad Ca(腺癌 )的 9.1%(P <0 .0 5 ) ,与细胞分化程度和淋巴结转移情况无关。另外 ,p5 3与 p16蛋白之间存在调控关系。 结论 :(1) p16、p5 3、Bcl- 2的异常参与肺癌的发生、发展过程。 (2 ) p16基因及产物的异常表达与 NSCL C的组织学分级和淋巴结转移相关 ,可能参与 NSCL C的发生、发展和转移过程。 (3) Bcl- 2反映 SCL C的分之生物学行为和临床     

HPV16、HPV18感染及p53蛋白过度表达与肺癌的相关性研究

为研究人乳头瘤病毒１６和１８型（ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８）感染及ｐ５３基因突变与肺癌的关系，应用经病理学证实的肺癌活组织，行聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测癌组织中的ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；并用ＬＳＡＢ免疫组化法检测相应蜡块标本中ｐ５３蛋白的过度表达。在４８例肺癌组织标本中未检出ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８；ｐ５３蛋白表达呈阳性，阳性率为５４．２％（２６／４８），其中鳞癌６６．７％（１８／２７），腺癌５７．１（４／７），小细胞癌３３．３％（１／３），大细胞癌３３．３％（２／６），类癌２０．０％（１／５）。提示肺癌的发生可能与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染无关，而与ｐ５３基因突变有关，尤以与鳞癌和腺癌关系密切     

非小细胞肺癌组织中RASSF_(1A)和p16基因启动子甲基化研究

目的:研究肺癌新型侯选抑癌基因Ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)和p16基因在非小细胞肺癌(NSCLC)中的甲基化情况,揭示两基因表达失活的机制,为NSCLC的基因诊断和治疗寻找新途径。方法:用甲基化特异性PCR(MSP)方法对96例NSCLC患者癌组织及相应的远癌正常肺组织中RASSF1A和p16基因启动子甲基化状态进行检测。结果:(1)96例NSCLC组织RASSF1A甲基化率48.96%,p16基因34.38%,96例远癌正常肺组织均未发现此两基因甲基化。(2)RASSF1A甲基化率鳞癌组(64.29%)高于腺癌组(37.04%,P<0.05);p16基因甲基化率50岁以上组(44.93%)高于50岁以下组(7.41%,P<0.05),鳞癌(61.90%)高于腺癌(12.96%,P<0.05),有淋巴结转移组(46.67%)高于无淋巴结转移组(13.89%,P<0.05)。(3)RASSF1A与p16基因启动子CPG岛甲基化呈正相关(r=0.256,P<0.05)。结论:RASSF1A和p16在NSCLC尤其是鳞癌中频繁甲基化,可能是两基因表达失活的主要原因。     

nm23、p53基因突变与膀胱癌生物学特性的关系

检测膀胱癌组织中nm23和p53基因外显子突变情况,寻找有助于准确预测局部肿瘤进展、分型、预后情况的临床参照指标。 方法应用PCR－SSCP检测28例膀胱癌术后存档蜡块组织中nm23及p53基因外显子突变情况,并与膀胱癌的病理及临床指标进行相关性研究。结果nm23及p53基因突变率分别为14.3％及17.99％。nm23及p53基因突变均发生在低分化组及有淋巴结转移病例。nm23和／或p53基因突变与UICC临床分期和淋巴结转移均呈正相关(P     

肺癌病人痰细胞中p16基因高甲基化分析

目的　分析肺癌病人痰标本中p16基因启动子区域异常高甲基化的改变情况 ,评价该指标作为肺癌辅助诊断分子标记物的价值。方法　运用半巢式甲基化特异性PCR技术 ,检测 94例原发性肺癌病人痰标本和部分对应肿瘤组织 ,以及 10例慢性炎病例痰标本中p16基因启动子区域的甲基化改变。结果　 74%的肺癌病人痰标本中检测到了p16基因异常高甲基化 ,与传统细胞学相比 ( 4 6.8%) ,痰标本中p16基因异常高甲基化对肿瘤的检出率灵敏度更高 (P <0 .0 1) ;痰细胞中p16甲基化检测和细胞学相结合 ,对肿瘤的检出率可达 86.17%( 81 94)。如果痰标本中p16基因启动子区域发生高甲基化 ,其对应的肿瘤组织中p16基因亦为高甲基化。 10例慢性炎病人痰标本中仅 3例检测出p16基因甲基化。结论　痰标本中p16基因甲基化是临床肺癌辅助诊断的有效分子生物标记物之一。