骨碎补提取物促小鼠成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖、分化和钙化作用的研究

目的 :探讨中药骨碎补有无促进成骨细胞增殖、分化和钙化的作用。方法 :制备骨碎补的水、醇提取液。小鼠成骨细胞株MC3T3 E1作为药物筛选的细胞模型 ;用MTT法和流式细胞术测定不同浓度的骨碎补水、醇提取液的促细胞增殖作用 ;采用ALP活性和骨钙素定量检测分别观察上述药物提取液的促细胞分化作用 ;以Vonkossa钙化染色法了解上述药物提取液的促细胞钙化作用。结果 :0.01,1mg·L^-1骨碎补水提液能促进MC3T3 E1细胞数量增加 (P <0 .0 5 ) ;0.01,1mg·L^-1骨碎补水提液和醇提液能使S期细胞百分率升高、G1期细胞百分率减少 ;1,10 0mg·L^-1骨碎补醇提液能使细胞ALP的活性升高 (P <0.05 ) ;100mg·L^-1骨碎补醇提液能明显促进细胞骨钙素合成和分泌 (P <0 .001) ;1mg·L^-1骨碎补水提液及 0.01mg·L^-1骨碎补醇提液均可促进细胞钙化 (P <0.05 )。结论 :骨碎补水相和醇相提取物中分别存在有较高活性的促成骨细胞增殖、分化和钙化的物质。     

蛇床子素预防去卵巢大鼠骨质疏松形成的实验研究

 目的观察蛇床子素对去卵巢大鼠骨质疏松的影响。方法以尼尔雌醇为对照观察蛇床子素对双侧卵巢切除大鼠体重、子宫重量、子宫内膜腺体数;血清Ca²⁺,P,ALP,E₂,CT,TGF-β₁,BGP;大鼠股骨骨密度的影响。结果与模型组相比,蛇床子素各剂量组大鼠体重、子宫重量、子宫内膜腺体数未见明显变化,血清P含量下降,血清Ca²⁺,E₂,CT,TGF-β₁和BGP升高。蛇床子素组大鼠股骨骨密度较模型组明显增加。结论蛇床子素能提高去卵巢大鼠股骨骨密度,防止骨质疏松的发生,其作用机制可能与增加血清CT,TGF-β₁和BGP含量等有关。     

固本增骨方对去卵巢大鼠血清BGP、TRACP-5b及骨质量的影响＊

目的 观察固本增骨方对去卵巢大鼠血清BGP、TRACP-5b及骨质量的影响，探讨固本增骨方防治绝经后骨质疏松症的作用机制。方法 卵巢切除法建立大鼠骨质疏松模型，随机分为模型对照组、戊酸雌二醇组、固本增骨方高、中、低浓度组，选取同龄大鼠作为空白对照组。用药干预12w后，腹腔麻醉，采用双能X线骨密度测量仪计算大鼠全身骨密度；ELISA法检测大鼠血清骨生成代谢指标BGP及骨吸收代谢指标TRACP-5b；解剖分离左侧股骨标本，置于AG-X系列台式电子万能试验机，计算骨生物力学性能指标；激光共聚焦显微镜扫描各组股骨组织游离[Ca²⁺]i浓度。结果 与空白对照组相比，模型组大鼠全身骨密度值显著下降，股骨最大载荷和弹性模量明显降低，差异有统计学意义（P < 0.05）。与空白对照组比较，模型组大鼠BGP、TRAP-5b含量明显升高（P < 0.05）；给予药物干预后，与模型组相比，戊酸雌二醇组和固本增骨方各组BGP、TRAP-5b含量均明显下降（P < 0.05）；且固本增骨方高浓度组优于低浓度组（P < 0.05）；与模型组对比，戊酸雌二醇组和固本增骨方不同浓度组可显著增加全身骨密度值，明显提高股骨最大载荷和弹性模量、[Ca²⁺]i浓度，差异有统计学意义（P < 0.05）。固本增骨方高浓度组与低浓度组比较有统计学差异（P < 0.05），呈量效依赖关系。固本增骨方各组与戊酸雌二醇组比较差异无统计学意义（P > 0.05）。结论 固本增骨方可降低去卵巢大鼠模型血清BGP、TRAP-5b含量，改善全身骨密度，提升骨生物力学性能，增加骨组织中游离[Ca²⁺]i浓度，从而发挥对绝经后骨质疏松症的防治作用。     

L-荷包牡丹碱对大鼠胃底肌条收缩效应的影响

目的 :研究L-荷包牡丹碱 (L-D)对 5-HT ,Histamine,K⁺ ,Ca²⁺ 引起的大鼠胃底肌条收缩效应的影响。方法 :采用大鼠胃底肌条的离体实验法 ,观察L-D对其收缩效应的影响。结果 :L-D及罂粟碱 (pap)对 5 HT ,His tamine ,K⁺ 及Ca2⁺诱发的大鼠胃底肌条的收缩均有显著的对抗作用。呈现非竞争性拮抗。在无Ca²⁺ 液中两药均能抑制 5 HT诱发的收缩 ,提示两药对胃底肌条依赖细胞内Ca²⁺所致收缩均有显著的抑制 ,当恢复细胞外Ca2⁺ 浓度后 ,L-D对胃底肌条依赖细胞外Ca²⁺ 的收缩有抑制作用 ,而 pap无影响。 结论 :L-D具有松弛胃底肌条的作用。     

紫金莲醇提物2种萃取部位镇痛作用机制探讨

目的: 探讨紫金莲醇提物2种萃取部位对甲醛致痛大鼠模型的镇痛作用及机制。方法: 56只SD大鼠随机分6组,每组8只,分别设为正常组,模型组,紫金莲醇提物乙酸乙酯部位高(乙高组30 mg·kg^-1)、低(乙低组15 mg·kg^-1)剂量组,紫金莲醇提物正丁醇部位高(正高组,15 mg·kg^-1)、低(正低组,8 mg·kg^-1)剂量组。各给药组按剂量ig大鼠,给药7 d,每日1次。第7天末次给药40 min后,除正常组外,其余各组大鼠左后足跖sc 10%甲醛溶液50 μL/只,建立大鼠甲醛致痛模型。观察紫金莲2种活性部位对甲醛致痛模型大鼠痛行为的影响,生化法检测大鼠血清谷氨酸和Ca²⁺含量,免疫组化法检测大鼠脑和脊髓c-fos阳性细胞表达和P物质(SP)含量。结果: 与正常组比较,模型组大鼠表现出了典型的两时相痛行为学反应,且在脑和脊髓中检测到了大量的c-fos阳性细胞,P物质(SP),升高血清谷氨酸及Ca²⁺含量有显著性差异(P<0.05),表示造模成功。与模型组比较,紫金莲乙低组(15 mg·kg^-1)和正低组(8 mg·kg^-1),对大鼠第一时相伤害反应疼痛有显著的抑制作用(P<0.05),使大鼠血清谷氨酸和脑c-fos蛋白表达显著下降(P<0.05),血清Ca²⁺含量显著升高(P<0.05);紫金莲醇提物乙高组(30 mg·kg^-1)和正高组(15 mg·kg^-1)显著降低大鼠脊髓c-fos蛋白表达(P<0.05);紫金莲醇提物乙高、乙低组和紫金莲醇提物正高、正低组都能显著降低SP在大鼠脑和脊髓中的表达(P<0.05)。结论: 紫金莲醇提物2种萃取部位对大鼠甲醛致痛模型均有镇痛作用,其镇痛机制可能与抑制体内谷氨酸的升高,抑制细胞内Ca²⁺浓度升高及降低c-fos,SP在中枢神经系统内的表达有关。     

染料木素对雌激素缺乏诱发的大鼠骨质疏松症的作用研究

 目的观察染料木素对实验性去卵巢大鼠诱发的骨质疏松症模型的治疗作用。方法SD雌性大鼠行去卵巢术后,随机分为正常对照组,模型组,骨疏康(GSK)组,尼尔雌醇组,染料木素大、中和小剂量组,每组10只。各组动物给予盐酸四环素25mg·kg^-1连续3d,同时给予治疗用药,剂量为GSK 5g·kg^-1,尼尔雌醇为1.5mg·kg^-1,染料木素分别为18,9,4.5mg·kg^-1,以上给药除尼尔雌醇每周1次外其他各组均为每日1次。给药后12周后进行相关指标的测定。结果①染料木素4.5,9mg·kg^-1连续给药12周可使其股骨干重、灰重、骨钙及股骨和腰椎骨密度显著增加,与模型组比较具有显著差异(P<0.05或P<0.01);②染料木素4.5,9mg·kg^-1连续给药12周可显著改善模型大鼠的股骨及椎骨最大载荷、最大桡度、弹性载荷、弹性桡度(P<0.05或P<0.01);③染料木素低、中剂量用药12周后可明显增加模型大鼠骨小梁面积百分比(BV/TV%)、骨小梁厚度(Tb.Th)和骨小梁数目(Tb.N),减小骨小梁间隔(Tb.Sp)(P<0.05或P<0.01);④染料木素低、中剂量给药12周后,可使模型大鼠的血清ALP水平下降,尿Ca/Cr、Pyd/Cr水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论染料木素对模型动物的骨密度、骨生物力学及相关生化指标都具有改善作用,具有较好的抗骨质疏松作用。     

绵萆薢对去卵巢大鼠骨代谢改变的干预作用

目的：探讨绵萆薢对去卵巢大鼠骨代谢的影响。方法：3月龄雌性未孕大鼠30只,随机分为假手术组,去卵巢组,己烯雌酚组(4.3×10^-4 g·kg^-1·d^-1),绵萆薢高、中、低剂量组(4,2,1 g·kg^-1·d^-1),每组均为5只大鼠。连续给药12周后,取血、尿用于血清雌二醇(E₂)、钙(Ca)、磷(P)、骨钙素(BGP)、碱性磷酸酶(ALP),尿钙/肌酐(Ca/Cr)、磷/肌酐(P/Cr)、脱氧吡啶啉/肌酐(DPD/Cr)的测定；分离子宫并称重,测量股骨骨密度和生物力学指标。结果：绵萆薢各剂量组子宫指数均明显高于模型组(P<0.01)。去势大鼠血清ALP,BGP,尿DPD/Cr,Ca/Cr含量均比假手术组明显升高(P<0.05),而绵萆薢各剂量组血清BGP,ALP,尿DPD/Cr,Ca/Cr含量均低于模型组。各组血Ca,P,尿P/Cr均无显著性改变。去势组大鼠骨密度为(0.032±0.007) g·cm^-2,与假手术组比较显著降低(P<0.01),绵萆薢各剂量组骨密度与模型组大鼠比较均明显升高(P<0.05,P<0.01)。去势大鼠最大载荷、挠度、最大应变分别为(125.78±15.48) N,(1.87±0.22) mm,(9.34±1.10)%,均显著低于假手术组(P<0.05,P<0.01)；各剂量绵萆薢可以不同程度地提高其最大载荷、最大应力。结论：绵萆薢可降低骨转换,使去卵巢大鼠骨丢失得到改善。     

双苯氟嗪对大鼠脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca2+]i的影响

 目的研究双苯氟嗪(Dip)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑神经细胞胞浆Ca²⁺浓度([Ca²⁺]_i)变化的影响。方法将400pmol的内皮素-1(ET-1)灌注到大鼠大脑中动脉附近制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,以Fura-2/AM作为钙荧光指示剂,双波长荧光分光光度法检测灌注ET-1后不同时间大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的变化及Dip对灌注ET-1后4h胞浆[Ca²⁺]_i变化的影响,并采用TYC染色法观察了Dip对灌注ET-1后24h脑梗死范围的影响。结果灌注400pmolET-1诱发大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后,大鼠大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i明显升高,并于灌注EF-1后4h达峰值,随着再灌注时间的延长,胞浆[Ca²⁺]_i逐渐降低;Dip20,40mg·kg^-1可以明显降低灌注ET-1后4h大脑皮层和纹状体神经细胞胞浆[Ca²⁺]_i的升高(P<0.01),Dip10mg·kg^-1组虽表现出一定的降低胞浆[Ca²⁺]_i的作用,但与溶剂组比较,差异无显著性(P>0.05);对脑梗死范围的测定结果显示,Dip可以缩小脑梗死范围,其作用呈现明显的剂量依赖关系(r=0.9797,P<0.01)。结论Dip对抗脑缺血再灌注损伤后胞浆[Ca²⁺]_i升高可能是其产生神经保护作用的重要机制。     

鹿茸总多肽对维A酸致骨质疏松大鼠的防治作用

 目的观察鹿茸总多肽(TVAP)对维A酸诱导大鼠骨质疏松的影响。方法通过ig维A酸70 mg·kg^-1·d^-1,连续14d,建立大鼠骨质疏松模型。造模同时sc TVAP 60,40,20 mg·kg^-1·d^-1,治疗30 d后,处死动物。取血分离血清,测定血清钙(Ca)、磷(P)、碱性磷酸酶(ALP);取左侧股骨,计算骨重系数和测定骨Ca,P含量;取右侧股骨,测定中段和下1/3处骨密度;取左侧胫骨,做骨组织形态计量测定。结果与模型组比较,TVAP明显改善维A酸诱导大鼠的骨Ca含量降低(P<0.01),骨重系数下降(P<0.001)和骨密度降低(P<0.05,P<0.01)以及骨病理形态发生的明显改变:平均骨小梁宽度(MTPT)变窄(P<0.001)、平均骨小梁间距(MTPS)变大(P<0.05)、松质骨体积(TBV)降低(P<0.01)等骨质疏松改变。但对血中反映骨代谢状况的生化指标Ca,P含量和ALP活性无明显影响。结论TVAP能纠正维A酸所致骨重建的负平衡状态,使骨量增加,骨组织显微结构趋于正常,对大鼠骨质疏松有防治作用。     

水飞蓟宾对成年大鼠分离的心肌细胞质膜Ca2+通道 活性的影响

 目的：观察药物水飞蓟宾对分离的成年大鼠心肌细胞钙通道阻滞效应。方法：用成年大鼠分离的心肌细胞，以放射性同位素⁴⁵Ca²⁺作示踪，通过对经细胞膜Ca²⁺流入测定，研究药物水飞蓟宾对钙通道的抑制效应，并与钙通道阻滞剂维拉帕米对照。结果：维拉帕米组Ca²⁺流入的平均抑制效应为30%左右（P<0.001),水飞蓟宾组为36.50%左右(P<0.001)。结论：药物水飞蓟宾能显著阻滞分离的成年大鼠心肌细胞胞膜钙通道。     

左、右归丸对去卵巢骨质疏松症大鼠模型骨密度及骨代谢的影响

目的:观察左、右归丸对去卵巢骨质疏松模型大鼠骨密度及骨代谢的影响。方法:通过切除6月龄SPF级SD雌性大鼠双侧卵巢的方法建立绝经后骨质疏松症大鼠模型。造模10周后,将80只模型大鼠随机分为左归丸高、中、低剂量组(n=10),右归丸高、中、低剂量组(n=10),阳性药组(n=10),模型组(n=10),造模时只切除腹腔内部分脂肪组织而未切除卵巢的实验大鼠设为假手术组(n=10),并分别ig给予相应药物或蒸馏水,各给药剂量分别为左、右归丸高剂量组20 g·kg-1·d-1;左、右归丸中剂量组10 g·kg-1·d-1;左、右归丸低剂量组5 g·kg-1·d-1;阳性药组为戊酸雌二醇片0.1 mg·kg-1·d-1;假手术组和模型组ig 10 m L·kg-1·d-1生理盐水。干预10周后,检测实验大鼠股骨骨密度(BMD)、骨组织形态学改变,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定大鼠血清骨碱性磷酸酶(BALP)、骨钙素(OC)、骨保护素(OPG)的含量。结果:与假手术组相比较,模型组大鼠BMD,OPG显著降低,而BALP,OC显著升高(P0.05),其病理改变与绝经后骨质疏松症患者改变一致;与模型组相比较,左、右归丸干预组大鼠BMD增加,骨组织形态改善,血清OPG含量升高、血清BALP,OC含量降低(P0.05)。结论:左、右归丸能够抑制骨吸收,纠正骨代谢失衡对绝经后骨质疏松症具有一定的治疗作用。     

益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响

目的:探讨益气活血壮骨方对去势大鼠骨吸收与骨形成的影响。方法:将45只大鼠随机分为假手术组(A组)、模型组(B组)、益气活血壮骨方组(C组)、乐力胶囊组(D组)和骨松宝组(E组),每组9只。假手术组仅开腹缝合,其余4组做卵巢切除术。术后4周,A、B组大鼠以生理盐水灌胃(10 mL.kg-1),C组大鼠以益气活血壮骨方灌胃(9.6 g.kg-1),D组大鼠以乐力胶囊灌胃(0.15 g.kg-1),E组大鼠以骨松宝灌胃(8 g.kg-1),每天1次,连续给药12周。12周后处死大鼠,腹主动脉取血测定大鼠骨密度、骨矿含量、白细胞介素6、骨钙素及碱性磷酸酶。结果:益气活血壮骨方组骨密度及骨矿含量高于模型组,白细胞介素6、碱性磷酸酶和骨钙素含量低于模型组;益气活血壮骨方组白细胞介素6含量低于乐力胶囊组和骨松宝组;模型组骨密度、骨矿含量、白细胞介素6、骨钙素及碱性磷酸酶与其它组比较有统计学差异;假手术组与乐力胶囊组骨密度及骨矿含量、白细胞介素6和碱性磷酸酶比较有统计学差异。结论:益气活血壮骨方可抑制去势大鼠骨吸收,促进骨形成,从而阻止骨量丢失。益气活血壮骨方抑制破骨细胞分化增殖和骨吸收的作用强于乐力胶囊和骨松宝。     

Antiosteoporotic chemical constituents from Er-Xian Decoction, a traditional Chinese herbal formula

AIM OF THE STUDY: Er Xian Decoction (EXD), a traditional Chinese medicine formula, has long been used for the treatment of osteoporosis and menopausal syndrome in China. The present study was designed to investigate the antiosteoporotic constituents of EXD, and evaluate their antiosteoporotic effects in ovariectomized rats. MATERIALS AND METHODS: Osteoblasts in neonatal calvaria cultures and osteoclasts derived from rat marrow cells were used to bioactivity-guided screen the active constituents. The proliferation of osteoblast was assayed by MTT methods. The activity of ALP and TRAP was measured by p- nitrophenyl sodium phosphate assay. The antiosteoporotic effects of icariin (1), anemarsaponin B II (8) and berberine (6) were verified by using OVX rats model. The bone mineral density (BMD) was measured by dual-energy X-ray absorptiometry using the small animal scan mode. The undecalcified longitudinal proximal tibial metaphysical (PTM) sections were cut and stained for the bone histomorphometric analysis. RESULTS: Bioactivity-guided fractionation has led to the successful isolation of antiosteoporotic constituents, i.e., icariin (1), icariside I (2), baohuoside I (3), mangiferin (4), neomangiferin (5), berberine (6), anemarsaponin B (7), anemarsaponin BII (8), anemarsaponin C (9), anemarrhenasaponin I (10), rubiadin-1-methyl ether (11) and obaculactone (12) from EXD. Further study showed that icariin (1), anemarsaponin BII (8) and berberine (6) increased the BMD in ovariectomized rats, and icariin (1) not only increased the bone formation, but also inhibited bone resorption; anemarsaponin BII (8) mainly increased bone formation and berberine (6) only inhibited the bone resorption in ovariectomized rats. CONCLUSION: Our findings demonstrate that multiple ingredients are responsible for antiosteoporotic activity in traditional Chinese medicine formula Er-Xian decoction.     

淫羊藿素与RANKL蛋白靶点结合抑制破骨细胞分化抗骨质疏松作用研究

目的探讨淫羊藿素(IT)与核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)蛋白靶点结合能力,并阐明其抗骨质疏松作用机制。方法采用分子对接技术模拟并预测RANKL与IT的相互作用,并通过切除大鼠双侧卵巢制备骨质疏松模型,评价IT对模型大鼠体质量、骨吸收血清指标碱性磷酸酶(ALP)和抗酒石酸盐酸性磷酸酶-5b(TRACP-5b)、骨密度(BMD)以及骨组织形态的调节作用。结果 IT可与靶蛋白RANKL发生稳定对接,IT组大鼠体质量较模型组显著降低(P0.05),IT能显著降低模型大鼠血清ALP、TRACP-5b水平(P0.01),显著降低模型大鼠股骨表面积与体积比值(BS/BV)、骨小梁分离度(Tb.Sp)值(P0.01),显著增加BMD、骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th N)、骨小梁数目(Tb.N)值(P0.01)。结论 IT能通过与RANKL蛋白靶点结合,抑制破骨细胞分化并发挥抗骨质疏松作用。     

乌鸡白凤丸对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响

目的:观察乌鸡白凤丸去卵巢大鼠骨质疏松症的影响.方法:采用去卵巢的方法建立大鼠骨质疏松症模型以骨钙素,碱性磷酸酶,骨密度,血磷和血总钙等指标评价.结果:乌鸡白凤丸(1.0g·kg-1,2.0g·kg-1,4.0g·kg-1)能有效预防去势大鼠骨质丢失,增加骨密度;减缓大鼠去势所致的增重效应;能有效预防去势大鼠子宫及肾上腺萎缩;对血钙含量、碱性磷酸酶无明显影响,但可回升血磷含量;可明显升高大鼠血清雌二醇、降钙素含量,降低血清骨钙素含量,有较好的防治骨质疏松效果.结论:乌鸡白凤丸对去卵巢大鼠骨质疏松症具有一定的保护作用.     

健骨片对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨微结构及骨强度的影响

目的:研究健骨片对去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢、骨质微结构及骨强度的作用。方法:将50只雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=10),模型组(n=10),戊酸雌二醇片组(n=10),健骨片低剂量组(n=9),健骨片高剂量组(n=9)。除假手术组外,其余各组行卵巢切除建立大鼠骨质疏松模型,术后各组分别灌服相应药物或蒸馏水,给药剂量分别为戊酸雌二醇片组(0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1)),健骨片低剂量组(0.35 g·kg~(-1)·d~(-1)),健骨片高剂量组(1.05 g·kg~(-1)·d~(-1)),连续12周。每周测定大鼠体重,给药结束后酶联免疫吸附测定(ELISA)测定大鼠血清骨钙素(OC)。测定血清碱性磷酸酶(ALP),抗酒石酸酸性磷酸酶(Str ACP),钙(Ca),磷(P)。Micro-CT扫描重建股骨微结构,检测骨矿含量(BMC),组织骨矿含量(TMC),骨密度(BMD),组织矿物质密度(TMD),骨体积分数(BV/TV),骨小梁数量(Tb N),骨小梁分离度(Tb Sp),骨小梁厚度(Tb Th)。三点弯曲法测定股骨刚度及最大载荷。结果:与假手术组比较,模型组大鼠血清OC,ALP显著升高,血清Ca,P明显降低(P0.05,P0.01);股骨远心端及中点骨小梁稀疏,缺失严重,BMC,TMC,BMD,TMD,BV/TV明显降低(P0.05,P0.01);股骨最大载荷显著降低(P0.05)。与模型组比较,健骨片低、高剂量组均明显降低血清OC及ALP,升高血清Ca,高剂量组明显升高血清P(P0.05,P0.01);骨参数分析显示,低、高剂量明显升高股骨BMC,TMC,BMD,BV/TV(P0.05,P0.01),高剂量组明显降低Tb Sp(P0.05);低、高剂量组均明显增加股骨刚度及最大载荷(P0.05,P0.01)。结论:健骨片可影响去卵巢骨质疏松大鼠骨代谢,从而改善骨微结构,增加骨强度。     

升麻三萜皂苷对破骨细胞形成分化的影响及机制研究

目的 探究升麻三萜皂苷（Cimicifuga triterpene saponins）对破骨细胞形成分化和骨吸收功能的影响,并基于网络药理学探讨其作用机制。方法 采用CCK-8法测定升麻三萜皂苷阿克特素、升麻环氧醇苷、升麻醇对骨髓巨噬细胞（bone marrow macrophages,BMMs）增殖活性的影响;抗酒石酸酸性磷酸酶（tartrateresistant acid phosphatase,TRAP）染色测定破骨细胞数目;磷酸苯二钠法测定破骨细胞的TRAP活性;鬼笔环肽染色观察破骨细胞F-actin环的形成;甲苯胺蓝染色检测破骨细胞在牛皮质骨骨片上形成的骨吸收陷窝;Western blotting分析破骨细胞标志基因和蛋白的表达。采用GeneCards和DisGeNET数据库获取破骨细胞功能的靶点,应用Cytoscape 3.7.1软件,采用蛋白互作的方式,筛选升麻三萜皂苷调控破骨细胞功能的核心靶点,并采用DAVID 6.8对核心靶点进行基因本体（gene ontology,GO）功能及京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析。结果 升麻三萜皂苷对BMMs增殖无显著影响,升麻三萜皂苷阿克特素、升麻环氧醇苷、升麻醇均可减少破骨细胞的数目,抑制破骨细胞TRAP活性和F-actin环的形成,显著抑制破骨细胞活化T细胞核因子1（nuclear factor of activated T cells 1,NFATc1）、原癌蛋白Fos（oncogene Fos,c-Fos）、基质金属蛋白酶9（matrix metalloproteinase 9,MMP9）和组织蛋白酶（cathepsin K,CTSK）的表达（P＜0.05、0.01）,减少破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝的面积（P＜0.01）。网络药理学分析表明升麻三萜皂苷主要通过丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MAPK）通路调控破骨细胞的骨吸收功能。结论 升麻三萜皂苷通过MAPK通路抑制BMMs诱导的破骨细胞的形成分化和骨吸收,可为抗骨质疏松新药的研发提供先导化合物。     

鹿骨多肽对地塞米松诱导的骨质疏松大鼠骨微结构的影响

目的探讨鹿骨多肽对地塞米松诱导的骨质疏松模型大鼠骨微结构的影响。方法以im地塞米松诱导糖皮质激素性骨质疏松(glucocorticoid-induced osteoporosis,GIOP)模型。同时ig不同剂量(250、125、62.5 mg/kg)的鹿骨多肽,连续75 d。检测血清生化指标;采用micro CT方法对胫骨近端骨小梁结构进行三维分析;HE染色观察股骨远端组织病理形态。结果鹿骨多肽可以增加GIOP模型大鼠血清Ca~(2+)、骨钙素(BGP)水平,使血清P3+、碱性磷酸酶(ALP)和甲状旁腺激素(PTH)水平下降。鹿骨多肽虽有降低GIOP模型大鼠血清降钙素(CT)的趋势,但与模型组比较没有统计学意义。GIOP大鼠骨小梁变细,中断、游离端增多,数量减少,间隙增宽,空间结构破坏增加,而鹿骨多肽的干预能明显改善上述骨显微结构指标。结论鹿骨多肽能够抑制地塞米松诱导的钙磷代谢失衡,降低ALP,升高BGP,抑制骨吸收和促进骨形成,并且改善GIOP大鼠病理学改变和显微结构,对骨质疏松大鼠具有保护作用。     

Anti-osteoporosis activity of Cibotium barometz extract on ovariectomy-induced bone loss in rats

Ethnopharmacological relevance

Recent research has confirmed that Cibotium barometz could inhibits osteoclast formation with no affect on BMM cell viability. However, the in?uence of Cibotium barometz on osteoporosis in animals is relatively unknown. The purpose of this study is to systemically investigate the effects of Cibotium barometz extract (CBE) on ovariectomy-induced osteoporosis in rats.

Materials and methods

A total of Seventy-two 3-month-old female Sprague-Dawley rats were used and randomly divided into sham-operated group and five ovariectomized (OVX) groups: OVX with vehicle; OVX with 17β-estradiol (E2, 25 μg/kg/day); OVX with CBE of graded doses (100, 300, or 500 mg/kg/day). Daily oral administration of E2 or CBE began 4 weeks after the surgery and lasted for 16 weeks. Bone mass, bone turnover and strength were analyzed by DEXA, biochemical markers and three-point bending test. The trabecular bone microarchitecture was evaluated by MicroCT.

Results

CBE prevented total BMD decrease in the femur induced by OVX, which was accompanied by a significant decrease in skeletal remodeling, as was evidenced by the decreased levels of the bone turnover markers, such as osteocalcin (OC), alkaline phosphatese (ALP), deoxypyridinoline (DPD), and urinary Ca and P excretions. The treatment could also enhance the bone strength and prevent the deterioration of trabecular microarchitecture.

Conclusions

The present study indicated that Cibotium barometz extract might be a potential alternative medicine for the prevention and treatment of postmenopausal osteoporosis.