荧光定量PCR与RT-PCR技术检测HCV-RNA的比较观察

目的 比较荧光定量ＰＣＲ与ＲＴ－ＰＣＲ（定性）检测不同检材中的ＨＣＶ－ＲＮＡ,评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值。方法 采用荧光定量ＰＣＲ及ＲＴ－ＰＣＲ（定性）技术同时检测了７１例血液透析患者的血清,血浆,淋巴细胞、尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果 血清、淋巴细胞,尿液标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４６．３８％,８０．００％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－Ｐ     

荧光定量PCR检测外周血中JAR细胞的探讨

目的 建立灵敏可靠的外周血中检出滋养细胞肿瘤细胞的方法，为早期诊断滋养细胞肿瘤的转移奠定实验基础。方法 在已知数量的ＪＡＲ细胞掺入１０ｍｌ外周血中建立肿瘤细胞血行转移实验模型，荧光定量逆转录－聚合酶链反应（ＦＱ－ＲＴ－ＰＣＲ）定量检测ＪＡＲ细胞的β－ｈＣＧ－ｍＲＮＡ。结果 ＦＱ－ＲＴ－ＰＣＲ可检测到相当于１个ＪＡＲ细胞表达的β－ｈＣＧ－ｍＲＮＡ量，但当ＪＡＲ细胞被掺入１０ｍｌ外周血中时，细胞数〉１     

RT—PCR检测肿瘤标志物PGP9.5

应用ＲＴ－ＰＣＲ技术，以神经内分泌蛋白基因产物９．５（ＰＧＰ９．５）为肿瘤标志物，评价了这一检测系统的效果。琼脂糖凝胶电泳分析ＲＴ－ＰＣＲ产物发现神经母细胞瘤细胞株均为阳性，正常人外周血阴性，其敏感度达１个瘤细胞／１０＾７外周血多形核细胞。临床上测定３９例患儿外周血、骨髓及组织标本证实ＲＴ－ＰＣＲ检测ＰＧＰ９．５为一敏感特异的测定方法。     

逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）检测汉坦病毒（HTV）

目的探讨ＲＴ－ＲＣＲ、双ＭｃＡｂ夹心法ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡ三种方法检测汉坦病毒ＲＮＡ及抗原的敏感性。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ、双ＭｃＡｂ夹心法ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡ三种方法检侧汉坦病毒Ａ９株细胞培养物中病毒ＲＮＡ和抗原。结果ＲＴ－ＰＣＲ敏感性最高，种毒后１天即可检出病毒ＲＮＡ；其次为ＥＬＩＳＡ，种毒后２天可检出冻融细胞上清内的病毒抗原；ＩＦＡ检出感染细胞内病毒抗原的最短时间为７２小时。ＰＣＲ产物的序列分析结果表明，该毒株与汉坦病毒７６－１１８株Ｍ片断的同源性为８１．８％，从而验证了ＲＴ－ＰＣＲ的特异性。结论ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性高于双ＭｃＡｂ夹心法ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡ。     

逆转录聚合酶链式反应（RT－PCR）检测汉坦病毒（HTV）

目的探讨ＲＴ－ＲＣＲ、双ＭｃＡｂ夹心法ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡ三种方法检测汉坦病毒ＲＮＡ及抗原的敏感性。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ、双ＭｃＡｂ夹心法ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡ三种方法检侧汉坦病毒Ａ９株细胞培养物中病毒ＲＮＡ和抗原。结果ＲＴ－ＰＣＲ敏感性最高，种毒后１天即可检出病毒ＲＮＡ；其次为ＥＬＩＳＡ，种毒后２天可检出冻融细胞上清内的病毒抗原；ＩＦＡ检出感染细胞内病毒抗原的最短时间为７２小时。ＰＣＲ产物的序列分析结果表明，该毒株与汉坦病毒７６－１１８株Ｍ片断的同源性为８１．８％，从而验证了ＲＴ－ＰＣＲ的特异性。结论ＲＴ－ＰＣＲ的敏感性高于双ＭｃＡｂ夹心法ＥＬＩＳＡ和ＩＦＡ。     

RT—PCR原位杂交检测GFi—1基因在胸腺的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ原位杂交检测ＧＦｉ－１基因在胸腺细胞中的表达。结果表明，ＣＦｉ－１基因仅在不成熟的Ｔ淋巴细胞中表达，在成熟的Ｔ细胞中ＣＦｉ－１基因保持静止，说明ＧＦｉ－１基因的表达在Ｔ细胞成熟过程中起着重要作用，同时，也助于Ｔ细胞淋巴瘤的诊断与鉴别诊断。     

用逆转录—多聚酶链反应检测白血病患者多药耐药基因的表达

作者应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测２５例急性白血病患者骨髓细胞中ｍｄｒ１基因的表达。以Ｋ５６２敏感细胞和体外诱导的耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２分别作为阴性和阳性对照，发现复发和未缓解患者中ｍｄｒ１表达增高者占９０．０％（１０／１１），而初治患者中仅为２１．４％（３／１４），ｍｄｒ１表达增高化疗效果差。应用单克隆抗体ＪＳＢ－１检测Ｐ－１７０结果与ＲＴ－ＰＣＲ一致。此ＲＴ－ＰＣＲ具有高度敏     

RT—PCR技术检测外周血中的肿瘤细胞

外周血中肿瘤细胞的检测是判断肿瘤病人复发，转移和疗效的有价值指标。ＲＴ－ＰＣＲ技术可以敏感，特异地检出外周血中存在的肿瘤细胞。本文综述了ＲＴ－ＰＣＲ技术检测外周血中肿瘤细胞的一些应用。     

用逆转录－多聚酶链反应检测白血病患者多药耐药基因的表达

作者应用逆转录－多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测２５例急性白血病患者骨髓细胞中ｍｄｒ＿１基因的表达。以Ｋ５６２敏感细胞和体外诱导的耐药细胞株Ｋ５６２／Ａ０２分别作为阴性和阳性对照，发现复发和未缓解患者中ｍｄｒ＿１表达增高者占９０．９％（１０／１１），而初治患者中仅为２１．４％（３／１４），ｍｄｒ＿１表达增高者化疗效果差。应用单克隆抗体ＪＳＢ－１检测Ｐ－１７０结果与ＲＴ－ＰＣＲ一致。此ＲＴ－ＰＣＲ具有高度敏感性，可以检出２Ｐｇ的ｍｄｒ＿１ｃＤＮＡ，对于检测白血病ｍｄｒ＿１的表达是一种灵敏、特异的方法。     

RT—PCR检测BCR—ABL基因中的几个问题

ＲＴ－ＰＣＲ是检测ＢＣＲ－ＡＢＬ蠹合基因的主要手段。本文阐述了不同临床表型的ＢＣＲ－ＡＢＬ蠹合基因及其ＲＴ－ＰＣＲ检测常遇到的几个问题（即结构的正确评估和质量控制）。     

半巢式PCR检测淋巴细胞白血病微小残留病

半巢式ＰＣＲ检测淋巴细胞白血病微小残留病徐兵，周淑芸，孙竞免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因重排可作为Ｂ－淋巴细胞白血病的克隆标志，一次ＰＣＲ方法检测ＩｇＨ重排敏感性可达１０￣（－４）～１０￣（－５）水平，我们采用更灵敏的半巢式多聚酶链反应（ＰＣＲ）检测了...     

庚型肝炎病毒和GB病毒感染的实验室诊断

ＨＧＶ和ＧＢＶ是近两年发现的新肝炎病毒，引起非Ａ－Ｅ肝炎。目前实验室检测ＨＧＶ和ＧＢＶ感染主要造ＲＴ－ＰＣＲ。本文不ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＧＶ和ＧＢＶ ＲＮＡ的临床标本处理，引物设计，扩增条件，产物检测和目前临床应用研究予以介绍。     

RT-PCR检测BCR-ABL基因中的几个问题

ＲＴ－ＰＣＲ是检测ＢＣＲ－ＡＢＬ蠹合基因的主要手段。本文阐述了不同临床表型的ＢＣＲ－ＡＢＬ 蠹合基因及其ＲＴ－ＰＣＲ检测常遇到的几个问题（即结果的正确评估和质量控制）。     

特异核酸捕获RT-PCR技术建立及在HCV RNA检测中的应用

目的 解决ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法的重复性较差问题,使其成为常规实验室检测方法。方法 采用亲合素生物素系统将ＨＣＶ特异的核酸片段包被在微孔板上,利用特异核酸捕获样本中的ＨＣＶＲＮＡ然后进行逆转录和ＰＣＲ扩增,从而建立了特异核酸捕获ＲＴ－ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ方法,并与酶消化法和抽提法进行比较,评价其敏感性、特异性、重复怀及抗污染能力。结果 特异性核酸获ＲＴ－ＰＣＲ获得的电要带较为清晰,其特     

柯萨奇B组病毒RNA PCR的改进

应用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测患者血清中柯萨奇Ｂ组病毒ＲＮＡ，在反应中采用了逆转录活性的聚合酶（ＲＴ－Ｔａｑ酶），使逆转录和ＰＣＲ一次加样完成，并对心脏病患者进行了检测，现将结果报告如下。１材料与方法１．１病人来源均为本院住院病人，经临床...     

急性白血病患者白血病细胞DNA拓扑异构酶Ⅱ活性与多药耐药？…

探讨急性白血病患白血病细胞ＤＮＡ拓扑异构酶Ⅱ活性与多药耐药的关系。方法：采用溴乙锭荧光法与１７例初治化疗前及２０例化疗后的急性白血病患外周血或骨髓白血病细胞ＤＮＡ ＴｏｐｏⅡ活性进行测定，采用抗多药耐药单抗ＪＳＢ－Ｉ检测１８例化疗后患ｐ－糖蛋白表达，采用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ｍｄｒ－１基因表达。     

骨髓涂片微量融合基因RNA的RT-PCR分析

探讨利用常规储藏的骨髓涂片进行ＲＮＡ分析的可能性。利用ＲＴ－ＰＣＲ法对６例具有不同融合基因的白血病患者的ＲＮＡ转录本进行检测。６例标本均获阳性结果。因此，对于保存的血片／病理切片进行特殊基因的ＲＴ－ＰＣＲ检测切实可行     

骨髓涂片微量融合基因RNA的RP—PCR分析

探讨利用常规储藏的骨髓涂片进行了ＲＮＡ分析的可能性。利用ＲＴ－ＰＣＲ法对６例具有不同融合基因的白血病患者的ＲＮＡ转录本进行检测。６例标本均获阳性结果。因此，对于保存的血片／病理切片进行特殊基因的ＲＴ－ＰＣＲ检测切实可行。     

微量淋巴细胞毒试验与PCR检测HLA—B27的比较

比较微量淋巴细胞毒试验与ＰＣＲ检测ＨＬＡ－Ｂ２７的方法，从中找出一种实用，可靠的方法为临床诊强直性脊柱炎提供依据。方法分别用微量淋巴细胞试验和ＰＣＲ对５０份临床怀疑ＡＳ的病人标本进行检测ＨＬＡ－Ｂ２７。结论无优质抗血清的情况下，可用ＰＣＲ代替微量淋巴细胞毒试验检测ＨＬＡ－Ｂ２７。     

IL—2和（或）IL—3重组腺病毒直接体内注射对大剂量化疗后小鼠造血 …

目的；检测应用直接腹腔注射白细胞介素２（ＩＬ－２）重组腺病毒和（或）白细胞介素３（ＩＬ－３）重组腺病毒方法对化疗后小鼠造血功能恢复的影响。方法：正常小鼠腹腔注射大剂量环磷酰胺２４小时后，直接腹腔注射ＩＬ－２重组腺病毒和ＩＬ－３重组腺病毒，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测相应细胞内细胞因子ｍＲＮＡ，并持观察小鼠外周血白细胞，股骨单个核细胞、骨髓ＣＦＵ－ＧＭ的恢复情况。结果：腹腔注射Ａｄ－Ｉ