βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的差异表达及其意义

目的：测定转化生长因子β（TGF-β）诱导分子βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中的表达情况。方法：培养人肝癌细胞T7721（转染并稳定高表达HAb18G／CD147）、7721（未转染HAb18G／CD147）、人肝细胞癌细胞系（HHCC）和正常人张氏肝细胞QZG，提取总RNA，设计合成特异性引物，以β-肌动蛋白（β-actin）作为内参照，检测βig-h3 mRNA的差异表达情况。结果：逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）结果显示，TGF-β诱导分子βjg-h3的mRNA在人肝癌细胞中的表达水平明显高于正常肝细胞（P〈0．01），其在人肝癌细胞系中的表达水平依次为HHCC〉T7721〉7721，在正常肝细胞QZG中表达水平最低。结论：证明了βig-h3 mRNA在人肝癌细胞系中高表达，为进一步探讨βjg-h3在肝癌细胞黏附和转移过程中的作用机制奠定了基础。     

HAb18G／CD147胞外近膜区与integrinβ1亚基MIDAS位点结合调节肝癌细胞恶性表型

肝癌相关抗原HAb18G／CD147分子与整合素integrin α3β1、integrin α6β1之间存在着相互作用，但其作用机制还未得到阐明。     

Differential expression of βig-h3 in human hepatoma cell lines

Objective：To observe the differential expression of TGF-β-induced gene human clone 3 （βig- h3） in human hepatoma cell lines. Methods：Human hepatoma cells HHCC, 7721, T7721 constructed by stably transfectiug HAb18G/CD147 cDNA into 7721 and normal human liver cell QZG were cultured as previously. RT-PCR and western blot were used to investigate the differential expression of βig-h3 in human hepatoma cell lines and normal liver cell. Results ：The results of RT-PCR suggested that the expression of βig-h3 mRNA in human hepatoma cells was higher than that in normal human liver cell QZG（P〈0.01）, and its expression level in human hepatoma cells in turn was HHCC〉T7721〉7721. Moreover, the similar results of βig-h3 protein expression were testified by western blot. Conclusion：This study demonstrates that the expression of βig-h3 in hepatoma cell lines is higher than that in normal liver cell QZG, which provides a sound basis for exploring the function of βig-h3 in processes of adhesion and metastasis of human hepatoma cells.     

高转移人肝癌细胞系转移相关因子的表达活性

目的 观察分析新建立的人肝癌转移细胞系（ＭＨＣＣ９７）转移相关因子ｍＲＮＡ和蛋白表达水平,以探讨其转移的可能机制。方法 利用裸鼠人肝癌转移模型（ＬＣＩ－Ｄ２０）的瘤组织,通过体外２获得首株高转移人肝癌细胞系,除对其基本生物学特性进行观察外,还采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和免疫组织化学技术（ＡＢＣ法）观察转移相关因子在ＭＨＣＣ９７细胞及其裸鼠肝内移植瘤和肺转移灶中的表达水平。结果 该细胞     

β-catenin在肝癌中的表达和意义

目的β-catenin在胞内异常表达常见于多种原发性肿瘤,本研究拟观察β-catenin在原发性肝癌中的表达,探讨β-catenin在原发性肝癌发生发展中的作用。方法免疫组织化学Envsion法检测33例肝细胞癌及其癌旁组织,22例胆管细胞癌,20例转移性癌及20例正常肝组织中β-catenin蛋白的表达。结果β-catenin蛋白在肝细胞癌胞膜/胞质/胞核的阳性表达率分别是72%(24/33),76%(25/33)和39%(13/33);在胆管细胞癌胞膜/胞质/胞核的阳性表达率分别为86%(19/22),86%(19/22)和45%(10/22);在转移性癌胞膜/胞质/胞核的阳性表达率分别是80%(16/20),90%(18/20)和40%(8/20);在癌旁和正常肝组织中胞膜/胞质/胞核的表达率分别是58%(19/33),67%(22/33),0%(0/33)和60%(12/20),70%(14/20),0%(0/20)。β-catenin蛋白胞膜/胞质/胞核在肝细胞癌和胆管细胞癌中的表达与癌旁和正常肝组织胞膜/胞质/胞核的表达两两比较差异有统计学意义(P=0.000)。结论β-catenin的过表达提示其在原发性肝癌的发生发展过程中起着促癌的作用。     

TRAF3在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)在肝细胞癌(简称肝癌)发生、发展中的意义。方法采用免疫组化方法检测50例原发性肝癌组织、12例癌旁肝组织及10例正常肝组织中TRAF3蛋白的表达,分析其与肝癌的临床病理参数的关系。Western blot法检测TRAF3在肝癌高分化细胞系HepG2、低分化细胞系SMMC7721和人正常肝细胞系L-02中的表达差异。结果 TRAF3主要定位于细胞质,其阳性率在正常肝组织(100%)及癌旁组织(91%)明显高于肝细胞癌组织(52%)。TRAF3在肝癌的表达与临床分期相关,与患者性别、年龄、癌灶数目、肿瘤大小、瘤栓有无、乙肝表面抗原(HBsAg)阴阳性、甲胎蛋白(AFP)、肿瘤包膜是否完整均无关。TRAF3总蛋白在正常肝细胞系中的表达量明显高于肝癌细胞系,且在肝癌高分化的细胞系中表达量高于低分化细胞系。结论 TRAF3在肝癌中的表达明显下调,且在肝癌中的表达水平与肝癌的侵袭程度相关,提示TRAF3可能抑制肝癌的浸润和转移。     

CD147分子与MMPs在肝癌细胞系中表达的相关性

目的 研究CD147与MMPs(基质金属蛋白酶）在肝癌细胞系中表达的相关性。方法 流式细胞仪检测正常肝细胞QZG及不同肝癌细胞系（BEL－7402，QGY－7404，SMMC－7721，HHCC和HHCC－9204）中CD1474 表达；酶谱法分析其产生MMPs的含量及活性。结果 正常肝细胞株QZG中CD147表达阴性，其余5株肝癌细胞系CD147表达阳性；MMP－2和MMP－9在QZG和肝癌细胞系中均表达，但在肝癌细胞系中表达明显增高；MMP－9以酶原和活性形式表达，MMP－2仅以酶原形式表达；统计学分析CD147和MMPs表达成正相关。结论 CD147可作为判断肝癌细胞具备高侵袭转移潜能的标志。     

HAb18G／CD147在激活的人脐静脉内皮细胞表达上调促进肿瘤血管生成

以前的研究证实HAb18G/CD147分子是一个在多种恶性肿瘤细胞表面高表达的质膜糖蛋白,与肿瘤的恶变显著相关。但该分子在内皮细胞的作甩尚未被揭示。本研究发现,HAh18G／CD147在激活的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）表达显著增强。     

Cyr61与β-catenin在肝癌组织和细胞株中表达的相关性研究

目的 研究Cyr61与β-catenin在肝细胞肝癌和肝癌细胞株中的表达及其相关性,探讨二者在肝癌发生中的作用.方法 采用免疫组化法检测32例肝细胞肝癌患者肝癌组织中Cyr61与β-catenin蛋白的表达水平;免疫组化法和RT-PCR检测正常肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2、QGY-7701、H22中Cyr61与β-catenin蛋白与mRNA的表达水平;并比较二者的相关性.结果 65.63%(21/32)肝癌标本Cyr61蛋白阳性表达,71.88%(23/32)肝癌标本β-catenin蛋白阳性表达,二者合并阳性表达有56.25%(18/32),合并阴性表达有18.75%(6/32),Cyt61表达与β-catenin表达呈正相关(r=0.425,P<0.05);正常肝细胞株L02及肝癌细胞株HepG2、QGY-7701、H22中Cyr61与β-catenin mRNA与蛋白均有表达,二者表达一致性达100%.结论 Cyr61与β-catenin在肝癌和肝癌细胞株中高度一致阳性表达,提示Cyr61的表达可能与Bβ-eatenin的表达有关,二者可能在肝癌的发生中起到重要作用.     

肝癌细胞系MHCC97亚群中甲胎蛋白的表达差异

目的：探讨甲胎蛋白（AFP）在不同肝癌细胞亚群中的表达差异．方法：应用流式细胞荧光激活分选法将肝癌细胞分成边缘群（SP）及非边缘群（Non—SP）2个细胞亚群,采用免疫细胞化学方法观察AFP在2个不同肝癌亚群中的表达变化及含量．结果：SP细胞仅占细胞总体的1．8％,SP细胞AFP表达明显高于Non—SP细胞（P〈0．01）．结论：AFP在肝癌细胞中表达有差异,强阳性多数分布在SP细胞亚群中,进一步证实了肿瘤的异质性．     

ESM-1和MMP-3表达与肝癌侵袭转移的关系

目的 探讨内皮细胞特异性分子-1(ESM-1)和基质金属蛋白酶-3(MMP-3)表达与肝细胞癌(HCC)侵袭转移的关系.方法 应用免疫组织化学方法与图像分析系统检测ESM-1和MMP-3在40例HCC组织(实验组)及15例肝内胆管结石患者肝组织(对照组)的表达水平;分析HCC组织中ESM-1、MMP-3的表达与临床病理特征的关系及两者之间表达水平的相关性.结果 ESM-1、MMP-3在HCC组织中均高水平表达,对照组未见阳性表达,实验组与对照组间表达差异均有显著性(P<0.05);ESM-1在HCC组织中的表达与甲胎蛋白含量、肝硬化、肿瘤大小、分化程度、门静脉侵犯及TNM分期有关(P<0.05);MMP-3在HCC组织中的表达与门静脉侵犯、HBV感染、肿瘤大小、分化程度及TNM分期有关(P<0.05);ESM-1与MMP-3在HCC组织中的表达呈正相关(r=0.641,P<0.05).结论检测ESM-1、MMP-3在HCC中的表达可能有助于对HCC侵袭和转移的评估.     

人类β3-糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在恶性血液系统肿瘤细胞中的表达差异及其原核表达和鉴定

目的研究一种新的人类β3-糖基转移酶β3GnT8/β3GalT7在恶性血液系统肿瘤细胞中mRNA水平的表达情况,并在原核体系中克隆和表达。方法运用半定量RT-PCR方法研究人β3GnT8/β3GalT7在13种恶性血液系统肿瘤细胞中的表达谱,以其中表达该基因最高的THP-1细胞的cDNA为模板,克隆目的基因,构建重组表达载体,并在大肠杆菌中诱导表达。经超声裂菌,尿素溶解包涵体,过Ni-NTA琼脂糖层析柱纯化,透析复性浓缩后进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western blot验证。结果 K562、U937、THP-1和NB4细胞株均较高效表达β3GnT8/β3GalT7,其中THP-1细胞株表达最高;并成功构建原核表达载体pQE30-β3GnT8/β3GalT7,表达出相应的重组蛋白。结论人β3GnT8/β3GalT7在13株细胞中表达有显著差异,并获得大量较纯的目的蛋白,其分子量与预测相符,为单克隆抗体制备及进一步研究该基因的生物学功能奠定了基础。     

皮肤鳞状细胞癌转移灶中基质金属蛋白酶的表达

目的 :探讨皮肤鳞状细胞癌 (SCC)转移病灶中基质金属蛋白酶 (MMPs)的表达及其与basigin/CD147表达间的关系。方法 :运用免疫组化法检测 14例转移SCC中MMPs和basigin/CD147的表达 ,并通过免疫印迹法证实basi gin/CD147在转移SCC中的表达。结果 :正常皮肤和淋巴结中基本无MMPs表达 ,而 14例转移SCC的肿瘤细胞和基质细胞中均有MMPs的表达增高。 14例转移SCC中的 8例肿瘤细胞上basigin/CD147阳性染色 ,4例有强阳性染色。肿瘤细胞中basigin/CD147表达与基质细胞中MMP 1,MMP 2 ,MMP 3和MTI MMP的表达间均存在显著相关性 (P值分别为 0 0 12 ,0 0 2 4,0 0 47和 0 0 2 6 )。免疫印迹法证实转移SCC中basigin/CD147的表达增高。结论 :肿瘤细胞和基质细胞来源的MMPs均在皮肤鳞癌转移灶中发挥作用 ,肿瘤细胞中的basigin/CD147可能诱导基质细胞中MMPs的增高表达。     

β-catenin、GSK3β在食管癌中的表达及其与食管癌浸润和转移的关系

目的:探讨β-catenin、GSK3β蛋白在食管癌组织中的表达变化,并分析其与病理学分级、浸润深度和淋巴结转移的关系。方法:应用免疫组织化学(IHC)SP法检测45例食管鳞状细胞癌组织及15例食管正常粘膜组织中β-catenin、GSK3β的表达。结果:β-catenin在癌组织中的阳性表达率明显高于正常组织(P<0.05);与淋巴结转移呈正相关(P<0.05)。GSK3β在癌组织中的阳性表达率明显低于正常组织(P<0.05);并与浸润深度(P<0.05)和淋巴结转移有关(P<0.05)。食管鳞状细胞癌中β-catenin蛋白与GSK3β蛋白的表达呈显著负相关(P<0.05)。结论:综合检测β-catenin和GSK3β对探讨食管鳞状细胞癌分化浸润转移和评估预后具有一定参考价值。     

β-catenin、GS及GPC3在肝细胞癌中的表达及意义

目的观察β-catenin、GS及GPC3在肝细胞癌中的表达,探讨它们在肝细胞癌(HCC)诊断中的价值。方法 应用免疫组化EnVision法检测87例HCC、40例肝内胆管细胞癌(ICC)和70例癌旁良性肝组织中β-catenin、GS及GPC的表达。结果 ①β-catenin、GS及GPC在HCC中的阳性率分别为72.41%、87.36%和73.56%;在ICC中的阳性率分别为70.0%、40.0%和2.5%;在癌旁良性肝组织中的阳性率分别为15.71%、5.71%和2.86%;β-catenin、GS及GPC3在HCC组织中的表达显著高于癌旁良性肝组织(P＜0.05);GS及GPC3在HCC组织中的表达显著高于ICC肝组织(P＜0.05)。②仅GPC3在HCC不同病理分化程度有统计学意义(P<0.05)。③在HCC中β-catenin及与GPC3表达呈正相关(rs=0.229,P<0.05),β-catenin及与GS的表达不具有呈不相关性(rs=0.164,P＞0.05),GS及与GPC3蛋白表达不具有相关性呈不相关(rs=0.153,P＞0.05)。结论 β-catenin、GS及GPC异常表达在HCC的发生、发展中具有重要作用;GS联合GPC3有助于鉴别HCC、ICC及癌旁良性肝组织。     

糖原合酶激酶-3β在肝癌细胞迁移过程中的作用

目的通过调节糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)来观察其对肝癌细胞迁移能力的影响,研究GSK-3β在肝癌细胞迁移过程中发挥的作用。方法分别应用GSK-3特异性抑制剂LiCl和SB216763抑制GSK-3β的活性,或转染GSK-3βWT、GSK-3βS9A、GID5-6质粒影响GSK-3β的活性,通过划痕实验、小室迁移实验、微管组织中心体(MTOC)实验等观察处理前后肝癌细胞系SMMC-7721和Hep3B迁移能力的改变,并用免疫细胞化学法观察肝癌细胞迁移后磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)的分布。结果划痕实验发现,用LiCl和SB216763处理后,SMMC-7721细胞的相对迁移率分别下降36.44%和41.78%,Hep3B细胞的相对迁移率都下降26.66%。转染GSK-3βWT后,GSK-3β和pGSK-3β表达上调,SMMC-7721细胞相对迁移率降为61.27%;转染GSK-3βS9A后,GSK-3β表达上调,pGSK-3β变化不明显,SMMC-7721细胞相对迁移率降为38.61%;转染GID5-6后,GSK-3β变化不明显,pGSK-3β表达增多,SMMC-7721细胞相对迁移率降为36.49...     

皮肤鳞状细胞癌转移灶中基质金属蛋白酶的表达

目的：探讨皮肤鳞状细胞癌（SCC）转移病灶中基质金属蛋白酶（MMPs)的表达及其与basigin/CD147表达间的关系。方法：运用免疫组化法检测14例转移SCC中MMPs和basigin/CD147的表达，并通过免疫印迹法证实basigin/CD147在转移SCC中的表达。结果：正常皮肤和淋巴结中基本无MMPs表达，而14例转移SCC的肿瘤细胞和基质细胞中均有MMPs的表达增高。14例转移SCC中的8例肿瘤细胞上basigin/CD147阳性染色，4例有强阳性染色。肿瘤细胞中basigin/CD147表达与基质细胞中MMP－1，MMP－2，MMP－3和MTI－MMP的表达间均存在显著相关性（P值分别为0．012，0．024，0．047和0．026）。免疫印迹法证实转移SCC中basigin/CD147的表达增高。结论：肿瘤细胞和基质细胞来源的MMPs均在皮肤鳞癌转移灶中发挥作用，肿瘤细胞中的basigin/CD147可能诱导基质细胞中MMPs的增高表达。     

黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响

目的探讨黄芩甙对人肝癌BEL-7402细胞系侵袭和转移的影响及其机制.方法应用细胞培养技术培养BEL-7402细胞,不同浓度黄芩甙处理肝癌细胞,通过Boyden小室模型测定其侵袭力、粘附力,细胞迁移实验测定细胞运动能力,同时观察细胞形态,流式细胞术测定肝癌细胞MMP2、TIMP2、integrin β1、E-cd表达的改变.结果黄芩甙能明显抑制肝癌细胞侵袭力、粘附力及运动能力(P＜0.05),随浓度提高作用增强.形态学观察发现,黄芩甙处理组细胞形态较圆,伪足数目较少.黄芩甙处理组MMP2阳性表达细胞减少,TIMP2阳性表达细胞增多,MMP2/TIMP2比值下降;integrin β1表达增加,E-cd的表达则减低(P＜0.05).结论黄芩甙能抑制肝癌BEL-7402细胞侵袭与转移,其机制可能与直接抑制细胞迁移运动,抑制细胞基质溶解相关基因蛋白MMP2表达,促进TIMP2表达及抑制粘附分子E-cd的表达,促进integrin β1表达有关.     

肝细胞肝癌组织中 SnailmRNA和蛋白的表达

目的  检测肝癌组织中 SnailmRNA和蛋白的表达及其与肝癌侵袭转移的关系。方法  采用免疫组织化学方法检测70例肝癌组织及其癌旁组织中Snail蛋白的表达,采用RT-PCR方法检测40例新鲜肝癌组织及其癌旁组织中SnailmRNA的表达, 并结合临床病理指标进行分析。结果  肝癌组织中Snail的阳性表达率高于癌旁组织中(P<0.05 ), 且癌组织中 Snail阳性表达率与包膜侵袭、门脉侵袭及肝内转移情况有关(P<0.05 )。肝癌组织中SnailmRNA的阳性表达率高于癌旁组织 (P<0.05 ),且癌组织中 SnailmRNA的阳性表达率与包膜侵袭、门脉侵袭情况有关(P<0.05 ),而与肝内转移情况无关(P＞0.05 )。结论  肝癌的癌变、侵袭、转移可能与Snail蛋白及 mRNA的高表达有关,抑制Snail的表达,有望成为治疗肝癌的新靶点。     

GSK3β在胃癌中的表达

目的通过观察糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)蛋白在胃癌组织中的表达变化,探讨GSK3β在胃癌中的临床意义。方法应用免疫组织化学(IHC)SP法检测45例胃癌组织中GSK3β蛋白的表达变化。结果 GSK-3β蛋白在胃癌中的阳性率为40.00%,明显低于正常组织(P<0.05)。GSK-3β的蛋白改变与胃癌的TNM分期、分化程度以及淋巴结转移有关联(P<0.05)。结论 GSK-3β的降低参与了胃癌的发生,GSK-3β的检测对评估预后具有一定参考价值。