肺岩宁方介导Atg5对肺癌A549细胞自噬调控抗肺癌侵袭转移的实验研究

目的 探讨肺岩宁方（Feiyan Ning Decoction,FYN）通过介导Atg5（自噬相关靶向基因5,Autophagy-related gene 5）自噬相关基因调控人肺腺癌A549细胞自噬,及其对A549肺癌细胞增殖、迁移、侵袭等作用的影响。方法 肺岩宁方干预培养肺癌A549细胞,通过运用CCK-8(Cell Counting kit-8)细胞增殖实验检测肺岩宁方对细胞增殖抑制率的影响,显微镜下观察肺岩宁方作用后的细胞形态学改变;采用划痕实验检测肺岩宁方及自噬抑制剂氯喹（Chloroquine diphosphate salt,CQ）对肺癌A549细胞迁移能力;运用Transwell细胞侵袭实验检测肺岩宁方及氯喹对肺癌A549细胞侵袭能力;运用Western Blot检测自噬相关蛋白Atg5、LC3表达情况;运用透射电子显微镜观察肺癌A549细胞在肺岩宁方干预下的自噬结构形态改变情况。结果 CCK8检测试验结果：肺岩宁方能有效抑制A549细胞增值活力（P <0.01）,其优化浓度为200μg mL-1;划痕实验结果：与对照组比,肺岩宁方干预A549细胞迁移能力减弱（P...     

二冬膏含药血清对人肺癌A549细胞的抑制效应初探

目的探讨二冬膏含药血清对人肺癌A549细胞的抑制效应。方法采用中药血清药理学方法,选择高、中、低剂量的二冬膏水溶液以灌胃方式给药,获取二冬膏含药血清,以空白血清为对照,干预A549细胞,应用MTT法、划痕实验法及Transwell侵袭实验法检测二冬膏含药血清对A549细胞增殖、迁移及侵袭能力的影响。结果二冬膏高、中、低剂量组干预A549细胞24 h后均可不同程度抑制肺腺癌A549细胞增殖,差异有统计学意义(P0.05),并呈时间、剂量依赖性,以二冬膏中剂量组抑制作用最明显;二冬膏高、中、低剂量组A549细胞的迁移距离较空白组缩短,差异有统计学意义(P0.05),中剂量组细胞迁移距离最短;二冬膏高、中、低剂量组均能降低A549细胞的侵袭能力,差异有统计学意义(P0.05),中剂量组侵袭过膜的细胞数最少。结论二冬膏含药血清能抑制肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭能力,中剂量抑制作用最明显。     

消岩汤逆转肺癌顺铂耐药的机制研究

目的探讨消岩汤逆转肺癌顺铂(DDP)耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;si RNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Werstern blotting检测m RNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/si RNA-NC比较,A549/DDP/si RNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Westernblotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白(P-gp)和肺耐药相关蛋白(LRP)蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1(YAP1)、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

消岩汤药物血清对A549/DDP多药耐药逆转作用的研究

[目的]探讨消岩汤药物血清对接种S180昆明小鼠肿瘤的抑制作用,及对耐顺铂人肺腺癌细胞系A549/耐顺铂(DDP)的耐药逆转作用。[方法]通过建立小鼠肿瘤模型,观察消岩汤对小鼠S180移植肿瘤生长的影响;以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验(MTT)方法,探讨消岩汤对肺癌耐药细胞的多药耐药逆转作用。[结果]消岩汤高、低剂量组的抑瘤率分别是48.36%和27.87%;消岩汤荷瘤动物含药血清高、低剂量组分别与DDP合用时,对耐药细胞A549/DDP的杀伤作用分别是DDP组的1.78倍和1.57倍。[结论]消岩汤可改善小鼠生活质量,拮抗恶病质,并能够抑制肿瘤生长;消岩汤含药血清对A549及A549/DDP均有生长抑制作用,且能增强DDP对肺癌敏感细胞和耐药细胞的杀伤作用,具有耐药逆转作用。     

消岩汤介导TNKS抑制肺腺癌细胞生长的初步探讨

[目的] 探讨端锚聚合酶（TNKS）在消岩汤抗肺腺癌细胞作用中的表达及意义。[方法] 采用免疫组织化学检测37例肺腺癌患者癌及癌旁组织中TNKS的表达情况。实时荧光定量聚合酶联反应（qRT-PCR）检测梯度浓度消岩汤处理肺腺癌A549细胞后,TNKSmRNA水平的表达;CCK-8法、γ-H2AX细胞免疫荧光、DNA修复试验分别检测各组A549细胞的增殖、DNA损伤及DNA修复能力,划痕实验及Transwell小室分别检测各组A549细胞的迁移及侵袭能力。[结果] 1）TNKS蛋白在肺腺癌组织中的阳性表达率为63.00%,在癌旁组织中阳性表达率为18.92%,差异有统计学意义（P<0.05）。2）随消岩汤浓度升高,A549细胞中TNKSmRNA水平的表达降低。3）当TNKS被下调时,A549细胞增殖活性降低,γ-H2AX表达增强,细胞DNA修复能力、迁移和侵袭能力受抑制,同样给予消岩汤处理细胞后,结果与TNKS下调组一致。[结论] TNKS与肺腺癌细胞的增殖、DNA损伤修复、迁移和侵袭密切相关,消岩汤抗肿瘤作用可能与下调TNKS的表达有关。     

贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路减缓上皮-间质转化进程抑制人肺癌A549细胞侵袭及迁移的研究

目的探讨贝母素乙对人肺癌A549细胞侵袭及迁移的影响。方法采用终浓度为0、50、100、200μmol/L贝母素乙处理A549细胞,通过细胞侵袭实验、细胞划痕实验、实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法、ELISA法及Western blotting实验检测贝母素乙对A549细胞侵袭、迁移的影响及潜在机制。结果与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞穿膜数、细胞间划痕的愈合率及MMP-9、MMP-2表达显著下降(P0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的A549细胞E-cadherin m RNA表达明显增加(P0.01),而N-cadherin和vimentin mRNA表达均显著降低(P0.01);与对照组比较,除50μmol/L贝母素乙处理A549细胞24h后的FN蛋白表达无显著性变化外(P0.05),其余贝母素乙各浓度组在各时间点上的FN蛋白表达均显著下降(P0.05、0.01);与对照组比较,贝母素乙各浓度组的p-PI3K/PI3K、p-mTOR/mTOR值及100、200μmol/L贝母素乙组的p-Akt/Akt值显著下降(P0.05、0.01)。结论贝母素乙具有抑制A549细胞侵袭及迁移能力的作用,该作用与贝母素乙调控PI3K/Akt/mTOR通路活性进而减缓上皮-间质转化(EMT)进程有关。     

芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞生物学行为的影响

目的:观察芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞增殖、迁移及侵袭的影响。方法:体外培养肺癌A549细胞,按实验分组干预,采用MTT法检测细胞增殖、划痕试验观察细胞迁移,Transwell实验观察细胞侵袭情况。结果:芪连扶正胶囊含药血清对肺癌A549细胞的增殖抑制且呈时间、浓度依赖性,且与化疗联合有协同作用;各药组细胞迁移值均小于对照组,与之比较除芪连扶正胶囊低剂量组外均有显著性差异(P0.05);与顺铂组相比,芪连扶正胶囊各组迁移值均大于顺铂组(P0.01),而联合组迁移值小于顺铂组(P0.01);芪连扶正胶囊低、中、高剂量组、顺铂组及联合组的侵袭抑制率分别为8.87%、19.11%、24.57%、37.88%、47.10%。结论:芪连扶正胶囊含药血清可抑制肺癌A549细胞增殖、迁移、侵袭,具有抗肿瘤转移作用。     

消岩汤对A549/DDP细胞自噬及耐药蛋白的影响研究

[目的]通过消岩汤对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP多药耐药及自噬蛋白的影响,探究消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP的耐药逆转作用及探讨相关分子通路。[方法]建立稳定细胞耐药模型,连续灌胃不同浓度消岩汤10 d后,通过血清药理学的实验方法,提取药物血清,用含药血清作用于肺腺癌细胞耐药细胞A549/DDP,通过实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(QPT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Werstern Blot)检测A549/DDP耐药、自噬相关基因的表达及相关通路蛋白的变化。[结果]高剂量消岩汤,低剂量消岩汤和生理盐水作用于肺腺癌耐药细胞A549/DDP,检测A549/DDP细胞中耐药相关蛋白P-糖蛋白(P-gp)、肺抗药性相关蛋白(LRP)及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1m RNA和蛋白表达变化,发现高剂量组消岩汤处理细胞株后P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1 m RNA和蛋白均发生降低(P0.05),进一步发现消岩汤可影响AKT1-m TOR相关基因,消岩汤明显降低AKT1,m TOR蛋白的表达。[结论]消岩汤通过影响AKT1-m TOR分子通路进而影响耐药相关蛋白P-gp、LRP及自噬相关蛋白Beclin1,HMGB1基因的变化。     

石榴皮多酚通过调控miR-4316表达抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭实验研究

目的：探讨石榴皮多酚在肺癌中的抗肿瘤作用及可能机制。方法：RT-qPCR 检测肺癌组织中 miR-4316 表达水平。将肺癌细胞A549 分为石榴皮多酚-低组、石榴皮多酚-中组、石榴皮多酚-高组、对照 组、miR-NC 组、miR-4316 组、石榴皮多酚+anti-miR-NC 组、石榴皮多酚+anti-miR-4316 组。细胞迁移、增 殖及侵袭分别采用划痕愈合实验、平板克隆实验和CCK-8 法、Transwell 实验检测。结果：肺癌组织中miR- 4316 表达水平显著降低（P＜0.05）。石榴皮多酚（低、中、高） 组A549 细胞抑制率、miR-4316 水平较对照 组高,克隆形成数、划痕愈合率、侵袭数较对照组低（P＜0.05）。与miR-NC 组比较,miR-4316 组较miRNC 组A549 细胞抑制率更高（P＜0.05）,克隆形成数、划痕愈合率及侵袭数miR-4316 组较miR-NC 组 低（P＜0.05）。石榴皮多酚+anti-miR-4316 组较石榴皮多酚+anti-miR-NC 组A549 细胞抑制率更低（P＜ 0.05）,克隆形成数、划痕愈合率及侵袭数石榴皮多酚+anti-miR-4316 组较石榴皮多酚+anti-miR-NC 组 高（P＜0.05）。结论：石榴皮多酚通过上调miR-4316 表达来抑制肺癌细胞增殖、迁移及侵袭。     

金福安汤对人肺腺癌A549细胞生物学行为的影响

目的 观察金福安汤对人肺腺癌A549细胞增殖、p120ctn磷酸化、细胞黏附及迁移的影响并探讨其治疗肺癌的作用机制.方法 培养A549细胞,分为空白对照组,金福安汤低、中、高剂量组,环磷酰胺组,分别给予含空白血清和含药血清培养液干预.检测各组A549细胞OD值并计算抑瘤率;刺激A549细胞p120ctn磷酸化后,检测各组A549细胞p120ctn灰度值;并观察各组p120ctn磷酸化的A549细胞黏附和迁移.结果 金福安汤高、中、低剂量组A549细胞OD值与空白对照组比较差异有统计学意义,且呈剂量相关性(P＜0.05或P＜0.01);金福安汤中剂量组A549细胞p120ctn磷酸化程度较空白对照组显著降低(P＜0.05);金福安汤中、高剂量组A549细胞的黏附能力较空白对照组高(P＜0.05),金福安汤各剂量组A549细胞的迁移能力较空白对照组下降(P＜0.05).结论 金福安汤具有抑制A549细胞增殖及其p120ctn磷酸化、促进细胞黏附和抑制迁移的作用.     

消岩汤剂拆方配伍对肺腺癌A549细胞survivin和caspase-3表达的影响

目的 探讨消岩汤及其各拆方组分对人肺腺癌A549细胞株凋亡的影响及其机制.方法 将消岩汤按照功效进行拆方,分为清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组.以CCK-8法检测各拆方对A549细胞的最有效抑制浓度,采用Western blotting法测定Survivin、Caspase-3蛋白表达,RT-PCR法检测survivin与caspase-3基因表达.结果 消岩汤及其各拆方组分均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分具有诱导A549细胞凋亡的作用,其机制与下调survivin基因和蛋白表达有关,对caspase-3基因和蛋白表达影响不显著.结论 消岩汤及其各拆方组分体外均有明显的抑制A549细胞生长作用,消岩汤及其各拆方组分可通过下调survivin的表达诱导肿瘤细胞凋亡,清热解毒组方中药是其抗肿瘤作用主要组分.     

消岩汤对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡干预机制的研究

目的分析消岩汤干预下Survivin siRNA对肺腺癌A549实体荷瘤小鼠肿瘤细胞凋亡的影响。方法以人肺腺癌A549实体移植瘤裸鼠模型为研究对象,将消岩汤含药血清及siRNA转染后的A549细胞分别进行瘤内注射,通过流式细胞术观察小鼠体内细胞凋亡情况;免疫细胞化学法检测Survivin蛋白表达。结果 siRNA转染组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于消岩汤组,但显著低于消岩汤+siRNA转染组。siRNA转染组和消岩汤组均可诱导细胞凋亡,且siRNA转染组的诱导作用强于消岩汤组,消岩汤+siRNA转染组可协同增强诱导细胞凋亡作用。结论消岩汤联合Survivin siRNA可协同增强诱导细胞凋亡作用。     

消岩汤对耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞多药耐药相关蛋白的调控作用

目的探讨消岩汤含药血清对耐顺铂人肺腺癌A545659/DDP细胞多药耐药相关蛋白1(MRP1)、肺耐药蛋白(LRP)及其m RNA表达水平的影响,发现消岩汤对化疗耐药的作用靶点,为肺癌化疗耐药的临床治疗提供理论基础。方法 A549裸鼠皮下移植瘤模型ip给予等量生理盐水,2 mg/kg顺铂,消岩汤低、高剂量(20、40 g/kg)获得含药血清,选择耐顺铂人肺腺癌A549/DDP细胞系作为获得性耐药模型,采用Western blotting免疫印迹法及RT-PCR技术,检测各组含药血清作用下A549/DDP细胞多药耐药基因MRP1、LRP及其产物MRP1、LRP蛋白的表达水平。结果与对照组相比,随着血清中药物浓度的增加,消岩汤低、高剂量组LRP与MRP1蛋白表达逐渐减弱(P0.05)。LRP及MRP1 m RNA水平也有所下降(P0.05),且随着药物浓度的增加,基因表达抑制越明显。结论不同浓度的消岩汤含药血清对MRP1、LRP及其m RNA表达均具有不同程度的抑制作用,且浓度越高,抑制作用越明显,即与剂量呈正相关,揭示消岩汤逆转肺癌耐药可能与抑制MRP1和LRP蛋白功能有关。     

基于VEGF/PI3K/AKT通路探讨消岩汤联合阿帕替尼抑制胃癌MGC-803细胞增殖的作用机制研究

[目的] 明确消岩汤通过血管内皮生长因子（VEGF）/磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）/丝苏氨酸蛋白激酶（AKT）通路治疗胃癌的作用机制。[方法] 通过CCK-8检测消岩汤对MGC-803细胞增殖的影响;通过流式细胞术检测消岩汤对MGC-803细胞凋亡和周期的影响;通过蛋白免疫印迹（Westernblot）检测消岩汤、阿帕替尼及其联合用药作用于MGC-803细胞后VEGF/PI3K/AKT信号通路相关蛋白的表达。[结果] 消岩汤呈剂量依赖性抑制MGC-803细胞的增殖（P<0.05）,其半抑制浓度（IC₅₀）为63.56mg/mL;随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的总凋亡率逐渐升高（P<0.05）;随着消岩汤浓度的增加,MGC-803细胞的G0/G1期细胞所占百分比逐渐降低（P<0.05）,S期细胞所占百分比逐渐升高（P<0.05）,G2/M期细胞所占百分比变化不大（P>0.05）;与空白对照组比较,消岩汤组、阿帕替尼组及其联合用药组的p-PI3K、p-AKT、Bcl-2、血管内皮生长因子A（VEGFA）和血管内皮细胞生长因子受体2（VEGFR-2）蛋白的表达量显著下调（P<0.05）,Cleaved Caspase-9和Bax蛋白的表达量显著上调（P<0.05）,相较于单药组,联合用药组对相关蛋白的调控作用更强。[结论] 消岩汤能有效抑制人胃癌MGC-803细胞增殖,诱导凋亡以及S期阻滞,抗胃癌作用机制与其对VEGF/PI3K/AKT信号通路的调控相关。     

麦门冬汤加减联合顺铂对A549细胞化疗增敏的作用机制

目的:通过体外实验观察麦门冬汤加减(modified Maimendong Tang)联合顺铂(cisplatin)对人肺腺癌A549细胞增殖,凋亡及侵袭转移能力及对半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的蛋白表达量的影响,探讨麦门冬汤加减方化疗增敏的作用并研究其相关机制。方法:分别用麦门冬汤加减(15 g·L-1),顺铂(9 mg·L-1),联合药物干预肺腺癌A549细胞,实验分为空白组、麦门冬汤加减组、顺铂组、麦门冬汤加减+顺铂组。利用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同质量浓度(0,5,10,15,20,25 g·L-1)麦门冬汤加减和不同质量浓度(0,3,6,9,12,15 mg·L-1)顺铂干预A549细胞24,48,72 h后的增殖能力,检测各组A549细胞的增殖能力;流式细胞术分析各组的凋亡程度及周期的变化;划痕实验和transwell小室实验检测各组的侵袭转移能力;蛋白免疫印迹法检测各组Caspase-3,EGFR蛋白表达的变化情况。结果:与空白组比较,麦门冬汤加减,顺铂干预A549细胞后呈浓度依赖性、时间依赖性抑制细胞的增殖(P0.05);各药物组均能抑制A549细胞增殖能力,减弱划痕愈合能力,减少穿过transwell小室的细胞,促进细胞凋亡,下调Caspase-3,EGFR蛋白表达(P0.05)。与单独给药组比较,麦门冬汤加减与顺铂联合应用后更能明显抑制肺腺癌A549细胞增殖能力和更能诱导A549细胞的凋亡,G0/G1期的细胞增多更明显,S期的细胞明显减少(P0.05);联合用药后,细胞划痕愈合能力明显减弱,穿过transwell小室的细胞明显减少,Caspase-3,EGFR的蛋白表达量下降更明显(P0.05)。结论:麦门冬汤加减与顺铂合用后抑制肺癌细胞A549增殖及侵袭转移能力,诱导细胞凋亡,两者存在协同增敏作用,其相关机制可能与下调Caspase-3,EGFR的蛋白表达相关。     

消岩汤剂拆方配伍对A549肺腺癌细胞体外生长抑制作用研究

[目的]探讨消岩汤及各拆方组对人肺腺癌A549细胞的体外生长的作用机制,探究消岩汤剂中最有效的作用成分和浓度。[方法]消岩汤全方和根据功效拆分的清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组,以CCK-8检测A549肺腺癌细胞的细胞增殖活性。[结果]各组均有明显的抑制细胞活性作用,抑制强度依次为:全方组、清热解毒组、活血化瘀组、益气扶正组。[结论]消岩汤及其拆方组在体外实验中均能抑制A549肺腺癌细胞细胞生长,消岩汤全方组当浓度达到50 g/L时达到最大抑制率为85.60%。清热解毒组药物在抗肿瘤作用方面,与全方接近,提示清热解毒组中药为体外实验中全方抗肿瘤作用最有效组分。     

消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响

[目的]分析消岩汤含药血清介导下Survivin siRNA对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响,探究其抑瘤机制。[方法]在Invitrogen公司的网上设计系统中设计靶向Survivin基因的siRNA序列,并将其转染A549细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测消岩汤以及转染组对A549细胞生长抑制的情况,免疫组化法观察A549细胞Survivin蛋白的表达情况,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。[结果]MTT法显示消岩汤具有抑制A549细胞生长的作用,其作用具有一定的时间依赖性,转染中药组的抑制率显著高于转染对照组及非转染中药组。经免疫组化法检测,转染对照组对Survivin蛋白表达的抑制率明显高于非转染中药组,但显著低于转染中药组。流式细胞术检测结果显示消岩汤及重组质粒以诱导细胞晚期凋亡为主,转染中药组A549细胞凋亡率显著高于其他各组。[结论]消岩汤可诱导A549细胞的凋亡,联合应用转染靶向Survivin基因的重组质粒可增强其体外诱导A549细胞凋亡的作用。     

消岩汤联合对症维持治疗晚期非小细胞肺癌的回顾性研究

目的通过回顾性研究,探讨消岩汤维持治疗晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cance,NSCLC)的疗效。方法收集2013年1月1日—2017年12月30日期间于天津中医药大学第一附属医院治疗的晚期NSCLC患者。根据当时采用的治疗手段,筛选到消岩汤加减方联合对症治疗组(治疗组)46例与对症治疗组(对照组)50例。对两组患者生存情况进行分析,比较两组患者Karnofsky(KPS)评分,分层分析探讨性别、年龄、吸烟史、饮酒史、组织学分级、化疗方案、病理类型、中医证型、脉管侵袭、软组织侵袭等因素与患者预后的相关性。结果治疗组晚期NSCLC患者中位无进展生存期(mPFS)与对照组比较,显著延长(P0.05);两组患者中位总生存期(mOS)比较,无统计学意义(P0.05);与对照组比较,治疗组患者生存质量显著改善(KPS评分显著提高,P0.05),其中,肺鳞癌、无脉管、无软组织侵袭、痰热阻肺证患者疗效最佳(P0.05)。结论消岩汤加减方联合对症治疗维持治疗晚期NSCLC患者具有延长无进展生存期(PFS)、改善患者生存质量的效果,最佳受益人群为肺鳞癌、无脉管及软组织侵袭的痰热阻肺证患者。