中药复方对肝炎病毒抑制影响的血清药理学研究

目的:评价茵栀苦复方的抗肝炎药效,为临床应用提供药效学依据。方法:借助HepG2.2.15细胞模型,以血清药理学方法,测定水提物血清和醇提物血清对HbsAg、HbeAg的抑制率。结果:①两种药物血清对HepG2.2.15细胞上清分泌的HBsAg抑制率在第6 d达到最高峰,此后逐渐下降,但到第12 d仍然可测到较高的水平。②两种药物血清对HepG2.2.15细胞上清分泌的HBeAg抑制率第6 d达到最高峰,此后无明显下降,到第12 d抑制率仍维持在较高、较稳定的水平。结论:组方的水提取物和醇提取物都对HbsAg、HbeAg具有很高的抑制率,两者之间无明显差异。     

紫龙金逆转人膀胱癌细胞多药耐药研究

目的:研究中药紫龙金逆转人膀胱癌细胞多药耐药(Multidrug resistance,MDR)机理.方法:应用MTT法检测紫龙金的细胞杀伤作用,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2、Bax基因mRNA水平表达.结果:BIU-87/ADM细胞生存率为(98.00±1.48)％,加入紫龙金后(浓度分别...     

大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞增殖影响

目的观察大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞生长、细胞凋亡及细胞周期的影响。方法不同浓度的大蒜素作用于体外培养的ketr-3细胞。倒置显微镜下观察ketr-3细胞的形态学变化,采用四唑盐比色法(MTT)及流式细胞术(FCM)检测不同时期ketr-3细胞形态变化、增殖以及细胞凋亡的作用。结果大蒜素对肾细胞癌ketr-3细胞生长具有抑制作用,在作用24、48、72h点上不同浓度的大蒜素对ketr-3细胞的抑制率之间差异有统计学意义(P0.05)。大蒜素作用24 h即可检测到凋亡细胞,0.05 mg/m L、0.1 mg/m L、0.3mg/m L、0.5mg/m L药物组凋亡率分别为9.21%、27.43%、37.72%、46.52%,1mg/m L组的凋亡率最高,达到62.21%,而对照组仅为3.13%,差异有统计学意义(P0.05)。结论大蒜素能够诱导ketr-3细胞凋亡,阻滞细胞周期,抑制细胞增殖。     

血清药理学在中药复方配伍研究领域中的应用现状

<正>血清药理学是日本学者田代真一在1984年第一届和汉医学会上首次提出[1],指在动物经口服给药一段时间后采血,分离血清,用此含药血清进行体外药理实验的一种实验方法,它为科学地阐明中药复方的作用及其机制提供了新的研究理论[2]。1997年以王喜军为代表的科学研究者将中药血清药理学的概念与理论方法引入中国医药研究领域,中药血清药理学方面的研究随之开展起来。血清药理学较中药直接作用于体外实     

中药血清药理学研究进展

中药血清药理学是指将中药或中药复方经口给动物灌服一定时间后采集动物血液、分离血清,用此含有药物成分的血清进行体外实验的一种实验技术.本文对中药血清药理学实验动物的选择、动物给药方案、含药血清的处理、含药血清的添加量等方面进行了综述,并分别做出评价,阐明了血清药理学在现代中药,作为中药体外药效研究的重要性.     

中药复方药理研究方法进展--血清药理学

将动物的含药血清进行药理实验的方法,称为“血清药理学”。由于中药复方成分复杂,粗制剂直接用于体外药理试验时,所含有的各种杂质或鞣质成分及其本身的酸碱度都会影响体外细胞的生存环境,经常会造成一些假阴性或假阳性结果,因此其实验结论科学性较差,难以得到认可。实践证明,离体实验方法对于药理学研究十分重要,     

中药血清药理学研究初探

随着时代的进步 ,科学技术的发展 ,特别是医学模式的转变和全球疾病谱的改变 ,人们对卫生保健、提高生活质量的要求更加迫切 ,中医药由于在慢性病防治领域、养生保健方面具有明显的优势与特色而备受注目 ,然而受到自身体系及研究方法的制约 ,中医药学尚无突破性的飞跃。如何让中医药走向现代化、国际化是一项迫切的任务。 1 988年日本学者田代真一提出血清药理学这一概念 ,为中医药研究开辟了一条新途径 ,血清药理学引起了越来越多的重视 ,显示出一定的应用前景。1　血清药理学的优势血清药理学是指给动物灌胃或人服用一定量的中药或复方制…     

基于网络药理学和分子对接探究紫龙金片主要成分治疗非小细胞肺癌的作用机制

目的：利用网络药理学和分子对接的方法初步探究紫龙金片主要成分治疗非小细胞肺癌（NSCLC）的可能分子机制。方法：在中药系统药理学分析平台（TCMSP）中检索并提取紫龙金片主要成分（黄芪、当归、龙葵、丹参、半枝莲和郁金）的有效活性成分及相关作用靶点;通过GeneCards、DisGeNET以及OMIM数据库筛选出NSCLC相关基因作为疾病靶点。将有效成分靶点与疾病靶点取交集,运用STRING数据库构建疾病和药物共同靶点的蛋白-蛋白相互作用网络,使用Cytoscape 3.9.0软件CytoNCA插件筛选并明确紫龙金片主要成分治疗NSCLC的关键作用靶点。利用“clusterProfiler”R包对核心靶点基因进行GO和KEGG富集分析,并构建成分-靶点-通路网络图。最后对核心靶点及其相应成分进行分子对接验证。结果：通过筛选得到的药物有效活性成分175个,作用于860个靶点。药物靶点与疾病靶点的交集靶点共800个。通过Cytoscape 3.9.0软件蛋白互作网络的拓扑分析确定SRC、RELA、ESR1、HSP90AA1、EP300、STAT3、PIK3R1、AR、CREBBP、EGFR、...     

复方黄黛片中药血清药理学研究方法的建立

目的:建立复方黄黛片(CRNIT)中药血清药理学研究方法. 方法:以兔为含药血清的供体,以NB4,K562等人白血病细胞株为研究对象,采用析因设计,观察给药与否、血清灭活与否、血清浓度及培养时间各因素对白血病细胞株抑制率的影响及四因素间的交互作用. 结果:①正常、含药兔血清砷浓度分别为(0.010±0.001) mg/L和(0.110±0.006) mg/L(P<0.01);②给药与否、血清灭活与否、血清浓度、培养时间各因素不同水平间的差异有统计学意义,且四因素间有交互作用;③不同组合的兔血清在100～400 mL/L浓度下对NB4,K562细胞株的生长均有不同的抑制作用,抑制率与浓度间呈现出良好的依赖关系. 结论:① 0.75g/(kg*d)的剂量灌服于兔并给药5 d是制备复方黄黛片含药血清较为理想的给药方案;②给药与否、血清灭活与否、血清浓度、培养时间是构建CRNIT含药兔血清反应体系的关键因素;③对正常血清进行灭活处理有助于减少因动物健康生理状态与病理状态的差异而对实验结果产生的影响;未灭活的含药兔血清可全面展示复方黄黛片的抗白血病作用;④当反应体系中血清浓度为100～400 mL/L时,实验结果稳定.     

氯通道阻断剂NPPB对肾癌细胞系GRC-1生长的抑制作用

目的：研究NPPB对肾癌细胞系GRC—1增殖的抑制作用．方法：采用倒置光学显微镜观察、MTT比色实验、流式细胞仪检测细胞周期研究NPPB对肾癌细胞系GRC—1生长的抑制作用．结果：倒置光学显微镜观察和MTT比色实验显示NPPB对肾癌细胞系GRC—1的生长具有明显抑制作用，流式细胞仪检测NPPB使肾癌细胞系GRC—1绝大多数细胞的生长停滞于G0／G1期．结论：NPPB对肾癌细胞系GRC—1生长的抑制作用明显，其作用机制为NPPB抑制肾癌细胞系GRC—1的生长停滞于G0／G1期。     

双特异性磷酸酶-1过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭的影响

目的：构建携带人双特异性磷酸酶-1(dual specificity phosphatase-1,DUSP-1)基因的过表达慢病毒载体并包装病毒,感染人肾癌细胞株A498后观察DUSP-1的过表达对肾癌细胞株A498增殖和侵袭能力的影响。方法从pCMV6-XL5-DUSP-1质粒上获得目的基因片段,采用DNA重组技术将DUSP-1基因插入到慢病毒表达载体质粒Plv-EGFP(2A)Puro中,获得重组plv-EGFP(2A)Puro-DUSP-1载体。重组慢病毒表达质粒及辅助包装质粒pH1、pH2共转染293T细胞进行慢病毒包装,收集病毒上清并感染肾癌细胞株A498,利用Western blot检测细胞DUSP-1蛋白的表达情况。用MTS法检测细胞增殖能力的变化,Transwell法检测细胞侵袭能力的变化。结果成功构建携带DUSP-1过表达载体。包装病毒后成功感染A498细胞株,DUSP-1蛋白表达较对照A498细胞株显著上调。重组质粒组细胞在490 nm吸光值明显上升(P＜0.05);细胞侵袭试验中,重组质粒组的穿膜细胞数明显高于空载体组(P＜0.05)。结论成功构建了人DUSP-1基因的重组慢病毒表达载体pLV-EGFP(2A)Puro-DUSP-1,进行病毒包装后成功培养稳定高表达DUSP-1基因的肾癌细胞株;DUSP-1基因的过表达具有促进肾癌细胞株A498增殖和侵袭的作用。     

上皮细胞膜抗原在肾细胞癌和肾盂移行细胞癌中的表达

目的：了解上皮细胞膜抗原（EMA）在肾细胞癌及肾盂移行细胞癌不同临床分期和病理分级中的表达情况,寻求有助于鉴别二者的方法.方法：使用免疫组化方法检测67例肾细胞癌及24例肾盂移行细胞癌病人肿瘤中EMA表达.结果：EMA在肾细胞癌和肾盂移行细胞癌中均有明显阳性表达,肾颗粒细胞癌表达随临床分期升高而降低,肾盂移行细胞癌随临床分期的升高而升高,均有统计学意义（P＜0.05）;在T3、T4期肾透明细胞癌和肾盂移行细胞癌中,EMA的表达有显著性差异（P＜0.05）.结论：EMA在肾癌和肾盂癌中表达随细胞类型和分期分级不同而有差异,可在一定程度上反映肿瘤的恶性程度及预后;EMA可以作为鉴别高分期肾癌和肾盂移行细胞癌的一个依据.     

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制肾癌细胞增殖及肿瘤生长的体内外实验研究

目的 研究CpG寡聚脱氧核苷酸（CpG ODN）在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982（ODN1982）干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响.24只BALB/c裸鼠皮下接种Caki-1细胞建立荷瘤裸鼠模型,4 d后根据每周1次的治疗方式随机分为对照组（PBS）、ODN1982组（50μgODN1982）、小剂量CpG ODN1826组（25 μg CpG ODN1826）和大剂量CpG ODN1826组（50 μg CpGODN1826）,每组6只.于建模后35 d处死动物,比较各组荷瘤裸鼠的肿瘤体积、质量及肿瘤组织学改变;体外分离各组荷瘤裸鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测不同靶标比例（脾淋巴细胞：Caki-1细胞或脾淋巴细胞：小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞）的荷瘤裸鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结果 ODN1982对Caki-1细胞的体外增殖活性无显著影响;500μg/mL CpGODN1826干预可显著抑制Caki-1细胞增殖.至实验终止时点,小剂量和大剂量CpG ODN1826组荷瘤裸鼠的肿瘤体积显著小于ODN1982组和对照组（P＜0.05）;各组间肿瘤质量比较差异均具有统计学意义（P＜0.05）;组织学观察显示,小剂量和大剂量CpG 0DN1826组肿瘤组织较多炎性细胞浸润.当靶标比例为50∶1时,大剂量CpG ODN1826组裸鼠脾淋巴细胞对Caki-1细胞和YAC-1细胞的杀伤活性分别为（9.74±1.16）%和（79.65±5.23）%,显著高于对照组的（7.67±0.22）%和（10.12±3.03）%及ODN1982组的（7.66±0.93）%和（27.60±9.83）%（P＜0.05）.结论 CpG ODN对体外肾癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤组织生长均具有明显抑制作用,其机制可能与CpG ODN增强荷瘤裸鼠的固有免疫应答有关.     

CpG寡聚脱氧核苷酸抑制肾癌细胞增殖及肿瘤生长的体内外实验研究

目的 研究CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG ODN)在体内外对肾癌细胞增殖及肿瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制.方法 采用CCK-8法检测不同浓度CpG ODN1826和non-CpG ODN1982(ODN1982)干预对体外培养人肾透明细胞癌Caki-1细胞增殖的影响.24只BALB/c裸鼠皮下接种Caki-1细胞建立荷瘤裸鼠模型,4 d后根据每周1次的治疗方式随机分为对照组(PBS)、ODN1982组(50μgODN1982)、小剂量CpG ODN1826组(25 μg CpG ODN1826)和大剂量CpG ODN1826组(50 μg CpGODN1826),每组6只.于建模后35 d处死动物,比较各组荷瘤裸鼠的肿瘤体积、质量及肿瘤组织学改变;体外分离各组荷瘤裸鼠脾淋巴细胞,乳酸脱氢酶释放法检测不同靶标比例(脾淋巴细胞:Caki-1细胞或脾淋巴细胞:小鼠淋巴瘤细胞YAC-1细胞)的荷瘤裸鼠脾淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤活性.结果 ODN1982对Caki-1细胞的体外增殖活性无显著影响;500μg/mL CpGODN1826干预可显著抑制Caki-1细胞增殖.至实验终止时点,小剂量和大剂量CpG ODN1826组荷瘤裸鼠的肿瘤体积显著小于ODN1982组和对照组(P＜0.05);各组间肿瘤质量比较差异均具有统计学意义(P＜0.05);组织学观察显示,小剂量和大剂量CpG 0DN1826组肿瘤组织较多炎性细胞浸润.当靶标比例为50∶1时,大剂量CpG ODN1826组裸鼠脾淋巴细胞对Caki-1细胞和YAC-1细胞的杀伤活性分别为(9.74±1.16)%和(79.65±5.23)%,显著高于对照组的(7.67±0.22)%和(10.12±3.03)%及ODN1982组的(7.66±0.93)%和(27.60±9.83)%(P＜0.05).结论 CpG ODN对体外肾癌细胞增殖及荷瘤裸鼠肿瘤组织生长均具有明显抑制作用,其机制可能与CpG ODN增强荷瘤裸鼠的固有免疫应答有关.     

一种改进的肾透明细胞癌原代细胞培养方法

目的 对肾透明细胞癌原代培养方法进行改进,以获得纯度及活力更高、遗传表型与来源更相近的肾透明细胞癌细胞系.方法 将经过胶原酶消化法或机械法取得的肿瘤样本单细胞悬液,置入超低黏附培养板,用添加有丝分裂原等细胞因子的无血清培养基悬浮培养,离心滤除非肿瘤细胞和无成瘤能力肿瘤细胞,获得纯度高、异质性的肿瘤细胞囊球,囊球可以连续传代悬浮培养,也可转至常规培养条件培养,都可得到能连续传代的肿瘤细胞株.用流式细胞仪鉴定瘤球传代细胞,并与肾癌临床样本细胞进行表型比对.结果 与单纯机械法或胶原蛋白酶消化法分离细胞及含血清培养基培养的方法相比,本法成功率更高,获得的肾透明细胞癌细胞保持与临床样本相似的异质性分化类型和表面抗原表达,并且无杂细胞污染.培养的细胞可经历稳定的连续传代并用于肿瘤相关研究.结论 该方法简便易行,成功率高,培养的肾透明细胞癌细胞株可作为肾癌研究的良好实验模型.     

黄连素抑制肾腺癌细胞增殖及其分子机制

目的:观察黄连素对人肾癌细胞ACHN增殖的影响,并探讨其分子机制。方法:用MTT法检测黄连素处理后肾腺癌细胞增殖的变化,RIPA蛋白裂解液裂解肾腺癌细胞后提取总蛋白,BCA比色法测定蛋白浓度,将蛋白煮沸5min使其变性,取等量蛋白进行Western blot分析。结果:10μmol/L和20μmol/L黄连素显著抑制肾腺癌细胞ACHN的增殖。Western blot结果显示,黄连素处理后的肾腺癌细胞c-Fos表达量明显下调。但Western blot结果未见明显的剪切后的caspase 3,说明黄连素并不诱导肾腺癌细胞的凋亡。结论:本研究初步说明,黄连素通过下调c-Fos的表达抑制肾腺癌细胞ACHN的增殖。     

Effects of Peptide Nucleic Acids against Ki-67 Gene on the Proliferation and Apoptosis of Human Renal Carcinoma Cell Line

Ki-67 antigen is a DNA-binding protein which is an absolute requirement for proliferation of tumor cells[1]. Since transformation of malignant cells is frequently associated with high cell proliferation and proliferation is closely associated with the Ki-67 protein labeling index, this protein may serve as a potential target for cancer therapy although a causative involvement of Ki-67 ex-pression has not been conclusively demonstrated so far. PNAs are synthetic structure homologues of antise…