杀菌/通透性增加蛋白对脓毒症大鼠组织TNF-α表达的影响及意义

目的　探讨杀菌 /通透性增加蛋白 (BPI)对脓毒症动物肝、肺肾组织肿瘤坏死因子 α (TNF -α)表达及多器官功能障碍的影响与意义。方法　采用大鼠盲肠结扎穿孔 (CLP)造成脓毒症模型。动物分为正常对照组 (10只 )、CLP组 (2 0只 )及BPI治疗组 (2 0只 )。CLP后 12h和 2 4h处死动物 ,分别检测肝、肺、肾组织TNF αmRNA表达、TNF α蛋白水平和器官功能指标。结果　CLP后 12h动物肝、肺、肾组织TNF αmRNA表达均显著增强 ,分别为伤前基础值的 2 4 6倍 (P <0 0 5 )、 2 86倍 (P <0 0 1)、 2 2 7倍 (P<0 0 1) ,同时各组织TNF α水平迅速升高 (P <0 0 1)。重组BPI治疗可不同程度地抑制肝、肺、肾组织TNF -αmRNA表达上调 (P <0 0 5 ) ,12h各组织TNF α水平显著降低 (P <0 0 5 ) ,均恢复至伤前正常范围。此外 ,BPI组动物血清丙氨酸转胺酶、肌酐水平在CLP后 12h显著低于未治疗组 ,CLP后 2 4h肺组织髓过氧化物酶活性也明显下降 (P <0 0 1)。结论　严重腹腔感染早期应用重组BPI治疗有助于下调TNF α的过量表达 ,从而抑制机体过度炎症反应 ,防止多器官功能障碍的发生与发展     

低血压性二次脑损伤大鼠脑皮质第Ⅱ组代谢型谷氨酸受体改变及意义

目的 :研究弥漫性脑损伤 (DBI)及其合并低血压性二次脑损伤 (SBI)后脑皮质第 组代谢型谷氨酸受体 (m Glu Rs)各亚型变化及意义。方法 :SD大鼠 14 0只 ,随机分为正常对照、假手术、单纯 DBI及 DBI合并SBI组。在 Marm arou DBI模型基础上 ,制成低血压性 SBI模型。伤后 1、3、6、12、2 4、4 8和 72 h进行脑皮质m Glu R2 ,3m RNA原位杂交 ,计数阳性神经元数。结果 :与正常对照组相比 ,假手术组及单纯低血压组m Glu R2 ,3m RNA表达无明显改变 (P均 >0 .0 5 ) ;单纯 DBI组 m Glu R2 ,3在损伤 12 h后开始减少 ,4 8h降至最低 (P均 <0 .0 5 ) ;DBI合并 SBI组 m Glu R2 ,3m RNA表达伤后 6 h即开始减少 ,2 4 h降至最低 (P均 <0 .0 5 )。结论 :在 DBI及其合并 SBI过程中 ,m Glu R2 ,3m RNA表达降低 ,m Glu R2 ,3参与了 DBI和 SBI的病理生理过程 ,可能与脑保护有关。     

烧伤早期心肌组织几种炎症相关基因表达变化的实验研究

目的 :观察烧伤后心肌组织几种炎症相关基因表达变化 ,探讨其与心肌损害的关系。方法 :采用大鼠4 0 %体表面积 度烫伤模型 ,于伤后 0 h(正常组 )、1h、3h、6 h、12 h、2 4 h用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)方法检测心肌组织肿瘤坏死因子 α(TNFα)、白介素 1β(IL 1β)、诱导型一氧化氮合酶 (i NOS)及胞浆型磷脂酶 A2 (c PL A2 ) m RNA水平 ,四道生理记录仪监测左室收缩压 (L VSP)、左室舒张末压 (L VEDP)和左室压力最大上升 /下降速率 (± dp/dtmax)变化。结果 :烫伤后 1h TNFα和 c PL A2 m RNA表达显著上调 (P均 <0 .0 1) ,此后一直维持高表达状态 ;IL 1β m RNA于伤后 3h表达明显升高 (P<0 .0 1) ,伤后 12 h降至正常水平 ;i NOS m RNA水平除伤后 1h稍上调外 ,其余时间点反而下降。左室收缩功能 (L VSP、+dp/dtmax)和舒张功能 (L VEDP、 dp/dtmax)于伤后 3h显著下降 (P均 <0 .0 1) ,12 h达谷底。左心功能变化与 TNFα、c PL A2表达呈负相关 (P均 <0 .0 5 )。结论 :炎症相关基因 TNFα、c PL A2 及 IL 1β参与了烧伤后心肌局部失控性炎症反应 ,其上调表达可能是烧伤后心肌损害的重要原因之一。     

烫伤大鼠肠道防御素-5和相关酶转录表达及与细菌移位关系的探讨

目的　探讨烧伤对大鼠肠道防御素 5 ( RD 5 )及其活化所需的基质金属蛋白酶 Matrilysin表达的影响及与肠道细菌移位的关系。方法　 SPF级 Wistar大鼠 32只 ,随机分为对照组 (假烫组 ,n=8)和烫伤组 ( n=2 4 )。烫伤组大鼠均在背上造成 30 %总体表面积 度烫伤。伤后 8、2 4和 72 h切取末端回肠 ,利用逆转录聚合酶链反应 ( RT PCR)方法测定不同时间点 RD 5 m RNA及 Matrilysin m RNA表达变化。伤后 2 4 h同时取肠系膜淋巴结 ( ML N )、肝、脾、肺组织进行细菌培养 ,计算脏器细菌移位频率 ;取回肠观察帕内特细胞形态。结果　 RD 5 m RNA表达量在伤后 8h显著升高 ( P<0 .0 5 ) ,伤后 2 4 h降低 ,但仍高于对照组水平 ,而伤后 72 h则降至对照组以下 ;Matrilysin m RNA在伤后 8h和 2 4 h略有增高 ,但伤后 72 h表达显著增强( P<0 .0 5 )。伤后 2 4 h脏器细菌移位频率 ( 5 8.3% )显著高于对照组 ( 8.3% ) ,P<0 .0 1;帕内特细胞无明显形态学改变。结论　大鼠烫伤后早期肠道 RD 5 m RNA及 Matrilysin m RNA表达增强 ,但时相略有不同。这可能是机体对抗细菌移位的一种保护性反应     

脓毒症大鼠小肠功能变化的研究

目的　探讨脓毒症大鼠小肠屏障、吸收、通透及其蠕动功能的变化。方法　以 Wistar大鼠缺血再灌注复合内毒素血症制备动物模型。将动物随机分为正常对照 ( N)、肠系膜上动脉夹闭 1h后再灌注 1h( I/ R1)、2 h( I/ R2 )和 4 h( I/ R4 )以及再灌注 2 h后复合内毒素 2 h( I/ RL)共 5个组。分别测定各组动物血或小肠组织二胺氧化酶 ( DAO)、D 乳酸、D 木糖水平及肠蠕动 ,同时进行小肠普通光镜检查。结果　 I/ R1、I/ R4和 I/ RL组血浆 DAO活性均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ,小肠组织 DAO在 I/ R2和 I/ RL 组均显著降低( P均 <0 .0 5 ) ,从 N、I/ R1、I/ R2、I/ R4到 I/ RL,各组血浆 DAO和小肠 DAO的相关分析可见呈高度负相关( r= 0 .90 9,P<0 .0 0 1) ;I/ R 1、I/ R 2和 I/ RL组血浆 D乳酸均显著升高 ( P均 <0 .0 5 ) ;与 N组比较各组肠传输速度显著加快 ( P均 <0 .0 5 ) ;I/ R 1和 I/ RL组血中 D木糖浓度较 N组高 ,3h后仍高于 N组 ;血 DAO浓度与血 D乳酸浓度变化相关 ( r=0 .5 5 9,P<0 .0 5 )。结论　缺血再灌注后小肠的屏障、吸收、通透和蠕动功能均有不同程度的改变 ;缺血再灌注复合内毒素血症时再次加速或加重了小肠屏障、吸收、通透和传输功能的变化     

严重烫伤大鼠胞浆型磷脂酶A2表达变化及与心肌损害的关系

目的 :研究烫伤后心肌组织胞浆型磷脂酶 A2 (c PL A2 ) m RNA变化 ,探讨其与心肌细胞膜损伤的关系及意义。方法 :采用大鼠 4 0 %体表面积 度烫伤模型 ,伤后 0 (正常组 )、1、3、6、12、2 4小时不同时间点测定组织及血浆中肌酸激酶同工酶 (CK MB)活性及组织膜磷脂含量 ;采用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测c PL A2 m RNA水平的变化。结果 :与正常组比较 ,烫伤后大鼠血浆 CK MB活性明显升高的同时 ,伴组织 CKMB活性下降 ,以 6和 12小时最为明显 (P均 <0 .0 1) ;组织膜磷脂含量伤后 3小时显著降低 (P<0 .0 1) ,6小时降至最低 ;c PL A2 伤后 1小时表达明显增强 ,2 4小时仍维持高表达水平。膜磷脂含量变化与 c PL A2 m RNA、CK MB变化存在显著相关 (P<0 .0 5和 P<0 .0 1)。结论 :上调表达的 c PL A2 加剧细胞膜磷脂降解可能是烫伤后心肌损害的重要原因之一。     

蛋白酶体-C2亚基基因在烫伤脓毒症大鼠心肌内的表达及意义

目的　探讨烧伤脓毒症时动物心肌内蛋白酶体核心亚基C2亚基m RNA表达及蛋白降解的变化及意义。方法　雄性Wistar大鼠4 5只,随机分为烫伤组、脓毒症组及对照组。烫伤组大鼠使用沸水致背部30 %总体表面积 度烫伤;脓毒症组大鼠用同样方法烫伤后,立即腹腔注射内毒素(6 m g/ kg)制成烫伤脓毒症大鼠模型。通过高效液相荧光法检测心肌内三甲基组氨酸(3MH)的含量,用核糖核酸印迹杂交(Northern杂交)检测心肌内蛋白酶体C2亚基m RNA表达的变化。结果　脓毒症大鼠烫伤后2 h和6 h,单位心肌内3MH含量较对照组和烫伤组均显著升高(P均<0 .0 1) ;烫伤组大鼠伤后2 h与对照组比较差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,而伤后6 h较对照组显著升高(P<0 .0 1)。脓毒症大鼠伤后2 h和6 h心肌内蛋白酶体C2亚基m RNA表达较对照组和烫伤组均显著升高(P均<0 .0 1) ,烫伤组大鼠伤后2 h和6 h较对照组也均显著升高(P均<0 .0 1)。结论　严重烫伤特别是合并内毒素攻击后,早期动物心肌细胞内泛素蛋白酶体途径活性呈持续增强现象,蛋白降解率显著增加。这可能是烧伤脓毒症时心功能异常的蛋白代谢机制。     

犬肠缺血/再灌注时小肠对早期肠内营养耐受能力的实验研究

目的研究肠道低灌注状态下实施早期肠内营养(EEN)时小肠功能指标及耐受能力的变化。方法健康雄性杂种犬24只,夹闭肠系膜上动脉(SM A)1 h后恢复灌注造成肠缺血/再灌注(I/R)损伤,复流后4 h实施EEN,将瑞代营养液(4 m l.k-g 1.-h 1)经肠黏膜张力计管持续滴注3 h,如果动物出现肠道不能耐受症状(如呕吐、腹泻等)则停止,间隔6 h后再次实施EEN,直至动物肠道能够耐受为止。按随机数字表法将动物分成单纯EEN组、单纯I/R组、I/R后EEN组(I/R+EEN组),每组8只。检测小肠黏膜二氧化碳分压(P iCO2)、D木糖吸收量、小肠腔内压力判定小肠灌注和功能变化。结果肠I/R+EEN组肠道不能耐受发生率(87.5%)和严重程度均显著高于单纯EEN组(0)和单纯I/R组(12.5%)。实施EEN后,与单纯I/R组和单纯EEN组相比,I/R+EEN组小肠腔内压力及肠P iCO2均显著升高,而血浆D木糖吸收量显著降低(P均<0.01)。结论肠I/R能显著降低小肠对EEN的耐受能力,肠I/R后过早(<12 h)实施EEN能加重小肠I/R损伤,并进一步抑制小肠吸收和运动功能。     

休克期切痂对烫伤大鼠肝HMGB1表达及肝功能的影响

目的　探讨休克期切痂对烫伤大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1(HMGBl)表达及肝脏功能影响。方法　 30 %Ⅲ度烫伤Wistar大鼠随机分为 2 4h和 72h切痂植皮组。RT PCR和免疫组化染色法检测肝脏HMGBlmRNA/蛋白表达 ,同时检测血浆AST、ALT含量。结果　大鼠烫伤后肝组织HMGB1mRNA表达量增加 1～ 2 5倍 ,2 4h切痂组伤后 8d其水平较烫伤对照和 72h切痂组显著减少 (P <0 0 5 )。烫伤后大鼠肝细胞和枯否细胞HMGB1表达阳性率较正常大鼠均显著升高 (P <0 0 1) ,2 4h切痂组 4、 8dHMGB1表达阳性细胞数较烫伤对照和 72h切痂组均显著减少 (P <0 0 1)。同时 ,烫伤大鼠血浆AST和ALT水平升高 (P<0 0 5 ) ,而 2 4h切痂组伤后 4、 8d较烫伤对照组和 72h切痂组显著降低 (P <0 0 1)。结论　烫伤大鼠休克期切痂能够下调肝组织HMGB1表达 ,局部HMGB1诱生参与了肝损伤的病理生理过程。     

神经激肽-1受体在急性坏死性胰腺炎肺损害中的作用

目的 :研究神经激肽 1受体 (NK 1R)在急性坏死性胰腺炎 (ANP)大鼠肺组织中的表达 ,探讨该受体在 ANP肺损害中的作用。方法 :健康成年 Sprague Dawley大鼠按抽签法随机分为 ANP组 (90只 )和正常对照组 (30只 )。正常对照组开腹后只翻动胰腺 ,ANP组大鼠经胰胆管恒速逆行注射质量分数为 5 %的牛磺胆酸钠 (0 .1ml/ kg)制成 ANP大鼠模型。检测肺脏髓过氧化物酶 (MPO)的活性和肺脏毛细血管通透性 (L CP)。应用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)检测肺组织中 NK 1R m RNA水平 ,应用 Western Blot技术检测NK 1R的蛋白水平 ,以免疫组织化学方法进行 NK 1R的组织学定位。结果 :ANP组 6 h后肺组织 MPO和L CP水平即明显高于正常对照组。与正常对照组相比 ,ANP肺组织中 NK 1R m RNA和蛋白都过度表达 ;NK 1R m RNA表达分别与 MPO(r=0 .83,P<0 .0 1)和 L CP(r=0 .79,P<0 .0 1)水平相关。免疫组织化学检测显示 ,NK 1R的表达主要位于肺泡隔血管内皮细胞表面及部分肺泡 型、 型上皮细胞表面等处。结论 :ANP肺组织中 NK 1R的表达水平明显上调 ,导致中性粒细胞等炎性细胞聚集 ,加剧 ANP时的肺损害。     

一氧化氮对急性出血坏死性胰腺炎肝脏中Toll样受体2/4 mRNA表达的影响

目的探讨一氧化氮(NO)对于急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)时肝脏中T o ll样受体2/4(TLR 2/4)mRNA表达的影响。方法采用牛磺胆酸钠(TAC)逆行胰胆管注射制备AHNP肺损伤大鼠模型。动物分为假手术组、胰腺炎组和L精氨酸(L A rg)治疗组。假手术组于术后6 h,胰腺炎组和L A rg组分别于术后3、6、12 h取静脉血和肝组织,测定血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(A ST)、淀粉酶和肝组织NO,逆转录聚合酶链反应(RT PCR)方法检测不同时间点肝组织肿瘤坏死因子α(TNFα)、TLR 2/4mRNA表达变化。结果与假手术组比较,胰腺炎组大鼠3 h肝组织TLR 2/4 mRNA表达开始增高〔(1.970±0.362)×10-3,(175.000±0.111)×1-0 3比(1.150±0.725)×10-6,(11.450±1.724)×10-4,〕12 h表达达峰值〔(2.940±0.316)×1-0 3,(2 673.000±88.380)×1-0 3,P均<0.01〕;血清淀粉酶ALT、A ST 3 h后即升高,肝损伤加重,肝组织TNFαmRNA表达升高,NO浓度逐渐降低(P<0.05或P<0.01);给予L A rg治疗后,NO浓度升高(P<0.05),TLR 2/4 mRNA表达降低〔3 h:(0.351±0.153)×1-0 3,(135.000±22.310)×1-0 3;6 h:(2.100±0.535)×10-3,(187.000±26.850)×1-0 3;12 h:(2.620±0.208)×1-0 3,(1 959.000±270.000)×10-3;P<0.05或P<0.01〕,血清淀粉酶、ALT、A ST均降低,肝损伤减轻,肝组织TNFαmRNA降低(P<0.05或P<0.01)。结论AHNP时,肝组织内TLR 2/4 mRNA表达上调,肝组织损伤加重;NO可以明显抑制AHNP肝组织TLR 2/4 mRNA的表达。     

Recombinant bactericidal/permeability-increasing protein inhibits endotoxin-induced high-mobility group box 1 protein gene expression in sepsis

We investigated in vivo the effect of recombinant bactericidal/permeability-increasing protein (rBPI21) on high-mobility group box 1 protein (HMGB1) expression in sepsis and its potential mechanism. Using a sepsis model induced by cecal ligation and puncture (CLP), rats were randomly divided into four groups as follows: normal control group, sham-operated group, CLP group, and BPI treatment group. Animals were killed at designated time points, and blood and tissue samples from liver, lungs, kidneys, and small intestine were harvested to determine related variables. In addition, we observed the effect of treatment with rBPI21 on survival rate in septic rats. The results showed that endotoxin content and expression levels of HMGB1 and LPS binding protein/CD14 mRNA in various organs were significantly increased at 12 and 24 h after CLP, which can be attenuated by treatment with rBPI21 (P<0.05-0.01). Meanwhile, treatment with rBPI21 in septic rats can markedly reduce serum alanine aminotransferase, creatinine levels, and pulmonary myeloperoxidase activity at 12 and 24 h after CLP, increase diamine oxidase activity at both time points (P<0.05-0.01), and improve the 1- to 10-day survival rates in animals subjected to CLP (P=0.012). These findings suggest that treatment with rBPI21 can significantly reduce endotoxin contents and expression levels of HMGB1 and LPS binding protein/CD14 mRNA in various organs in sepsis induced by CLP, and can protect against multiple organ damage resulting from sepsis. The effect of rBPI21 inhibiting HMGB1 gene expression in sepsis might be associated with endotoxin-dependent mechanisms.     

JAK/STAT通路介导脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1 mRNA表达的研究

目的：探讨Janusk激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路对盲肠结扎穿孔术（CLP）所致脓毒症大鼠肝组织高迁移率族蛋白B1（HMGB1）mRNA表达和急性肝损害的影响。方法：采用CLP模型，大鼠随机分为正常对照组、CLP脓毒症组、JAK2激酶抑制剂AG490和STAT抑制剂雷帕霉素（RPM）处理组。采用逆转录多聚酶链式反应测定肝HMGB1 mRNA，全自动生化分析仪测定肝功能指标。结果：与正常对照组相比，CLP后6－48h HMGB1 mRNA表达显著升高（P＜0．01）；血清天冬氨酸转氨酶（AST）在6－48h增高明显（P＜0．05），丙氨酸转氨酶（ALT）、AST在24h升高非常显著（P＜0．01）。与CLP组相比，AG490预处理组24h HMGB1 mRNA和ALT水平显著下降（P均＜0．01），24h和48h AST亦明显降低（P均＜0．01）；同样，RPM干预后HMGB1 mRNA表达在6h 和24h显著抑制（P＜0．05和P＜0．01），ALT、AST在24h和48h均不同程度下降（P＜0．01和P＜0．05）。结论：抑制JAK／STAT通路活化可明显下调肝组织HMGB1 mRNA表达，并有助于减轻CLP所致急性肝损伤。     

脓毒症大鼠血清高迁移率族蛋白B1、Toll样受体4时间-浓度变化关系研究

目的检测不同时间点脓毒症大鼠血清高迁移率族蛋白B1（HMGB1）及Toll样受体4（TLR4）浓度,探讨脓毒症炎症反应的可能机制,寻找脓毒症早期诊断的潜在生物标志物。 方法以盲肠结扎穿孔（CLP）法构建脓毒症大鼠模型,随机分为CLP组,HMGB1干预组,TLR4干预组,以假手术组（麻醉后开腹翻动盲肠后关腹）及空白组（不做任何处理的正常大鼠）为对照。于CLP术后2、4、8、12、24、48 h以酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测试验动物血清HMGB1及TLR4蛋白浓度,分析其时间-浓度关系。 结果CLP组各检测时间点血清HMGB1浓度较空白组及假手术组明显升高（P<0.05）,于24 h达峰;予以HMGB1干预后,相比CLP组,其在术后4 h开始发挥作用,明显降低血清HMGB1浓度（P<0.05）;予以TLR4干预,相比CLP组,其在术后2~24 h内明显降低血清HMGB1浓度（P<0.05）,相比HMGB1干预组,TLR4抑制发挥作用开始时间更早（2 h,P<0.05）,作用更强（12、24 h,P<0.05）。血清TLR4蛋白浓度在CLP组呈双峰表达（8、24 h,P<0.05）;予以HMGB1干预,相比CLP组,其血清TLR4表达呈单峰（8 h,P<0.05）;予以TLR4干预,其血清TLR4变化较为复杂,再次呈现双峰状,峰值提前且增加（4、12 h,P<0.05）。 结论HMGB1可能通过TLR4信号通路发挥作用,脓毒症炎症级联反应、炎性细胞因子释放等信号转导通路是复杂的、相互交织的"cross-link"系统,单一改变某个/某些个信号转录调节因子作用有限。     

脓毒症小鼠心肌P-选择素基因的表达及意义

目的:探讨脓毒症时小鼠心肌P-选择素表达的改变及其意义.方法:雌性昆明小鼠72只,随机分为对照组(12只)、假手术组(12只)、盲肠结扎穿孔(CLP)组(48只),CLP法制备脓毒症模型,CLP后2、4、8和12 h处死动物分别留取血和心脏组织,采用双抗夹心酶联免疫法(ELISA)检测血清肌钙蛋白Ⅰ(cTnI),测心肌组织髓过氧化物酶(MPO)活性,采用实时荧光定量逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)法检测心肌组织P-选择素mRNA表达.结果:CLP组2、4、8和12 h心肌组织P-选择素mRNA表达进行性升高,与对照组和假手术组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而且CLP后心肌组织p-选择素mRNA表达水平与心肌组织MPO活性及血清肌钙蛋白Ⅰ浓度均呈显著正相关.结论:脓毒症时小鼠心肌损伤时,心肌组织P-选择素表达显著升高,可能与心肌组织中性粒细胞浸润及心肌损伤密切相关.     

JAK/STAT通路对烫伤脓毒症大鼠Toll样受体基因表达的调节作用

目的：探讨Janus激酶／信号转导和转录激活子（JAK／STAT）通路在烫伤脓毒症大鼠Toll样受体2（TLR2）基因表达调控中的意义。方法：Wistar大鼠38只随机分为正常对照组（n=6)、烫伤后金黄色葡萄球菌（金葡菌）感染组（n=12)、AG490拮抗组（n=20)和雷帕霉素（Rapamycin,RPM)拮抗组（n=10), 检测动物肝、肾、肺组织中TLR2和肿瘤坏死因子－α（TNF－α）基因表达的改变。结果：烫伤合并金葡菌攻击后0．5h和2h，动物肝、肾、肺组织中TLR2 mRNA表达显著增高（P＜0．05或P＜0．01）。RPM干预可有效抑制动脉肝、肾组织TLR2 mRNA表达，但对肺脏TLR2 mRNA表达无明显影响；而AG490拮抗组动物各组织中TLR2 mRNA表达与未干预组相比均无明显差异。烫伤合并金葡菌感染后2h大鼠肝、肺、肾组织TNF－α基因表达均显著升高（P均＜0．01）。给予RPM可明显抑制各组织中TNF－α mRNA表达（P＜0．05或P＜0．01），AG490拮抗组大鼠肝、肾组织中TNF－α表达亦均显著低于未拮抗组（P均＜0．01）。结论：烫伤后金葡菌感染可促进体内TLR2基因表达，STAT可能直接或通过其诱生的炎症介质参与了对TLR2 mRNA表达的调控。     

脓毒症早期大鼠肾上腺皮质功能变化及地塞米松的干预作用

目的 探讨脓毒症早期是否存在相对肾上腺皮质功能不全及其可能的发病机制,以及地塞米松替代治疗的时机.方法 雄性Wistar大鼠260只,随机均分为正常对照组、假手术组、模型组[行盲肠结扎穿孔术(CLP)制备脓毒症模型]、激素预处理组(CLP前腹腔注射10 mg/kg地塞米松)、激素治疗组(CLP后7 h腹腔注射10 ml/kg地塞米松),各组再分为2、4、6、8、12 h时间点.于8 h和12 h给予促肾上腺皮质激素(ACTH)刺激实验,于刺激前及刺激后30 min用放射免疫分析法测定血清皮质醇浓度;用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定肾上腺Toll样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的mRNA表达;透射电镜下观察肾上腺皮质束状带超微结构;其余大鼠观察12 h存活情况.结果 ①模型组、激素预处理组和治疗组刺激前血清皮质醇浓度显著高于正常对照组和假手术组,且预处理组明显高于模型组和治疗组(P均＜0.05),但ACTH刺激前后血清皮质醇浓度均无明显变化.②模型组肾上腺TLR4、TNF-α的mRNA表达较假手术组明显升高(P＜0.05或P＜0.01),激素预处理组和治疗组肾上腺TLR4、TNF-α的mRNA表达较模型组明显下降,且预处理组可降至假手术组水平.⑧模型组、激素预处理组和治疗组肾上腺皮质超微结构发生代谢性改变,其中以模型组为重.④激素预处理组、治疗组大鼠12 h生存率均明显高于模型组(76.92%、40.00%比33.33%,P＜0.01和P＜0.05),且激素预处理组高于治疗组(P＜0.05).结论 ①脓毒症早期即存在相对肾上腺皮质功能不全;②肾上腺TLR4、TNF-α mRNA的表达和超微结构变化可能参与了相对肾上腺皮质功能不全的发生;③地塞米松可以降低肾上腺TLR4、TNF-α mRNA的表达,减轻超微结构变化,提高生存率,改善预后,且早期应用效果更理想.     

还原型谷胱甘肽对脓毒症大鼠心肌组织中Toll样受体4表达的影响

目的:探讨还原型谷胱甘肽(glutathione,GSH)对脓毒症大鼠急性心肌损伤的保护作用及其机制。方法:采用盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立SD大鼠脓毒症致急性心肌损伤模型。按照随机数字表将大鼠随机分为正常组(n=6)、假手术组(n=18)、脓毒症组(n=18)、GSH干预组(n=18)。GSH干预组于CLP术后经尾静脉注射GSH60 mg/kg,共0.1 mL;假手术组和脓毒症组则给予等量0.9%氯化钠溶液。除正常组外,每组大鼠再按术后6 h、12 h、24 h分为3个亚组(每组各6只),各亚组组大鼠在CLP术后相应时间点采集血清及心肌组织标本。所有大鼠均于血标本采集完毕后处死。HE染色观察心肌组织病理改变;采用自动生化分析仪检测血清肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isoenzyme,CK-MB)的水平,采用实时荧光定量逆转录–聚合酶链反应法检测心肌组织Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)的mRNA表达。结果:与假手术组及正常组比较,脓毒症组大鼠术后6 h血清CK-MB水平和心肌组织TLR4 mRNA表达开始升高,12 h达到高峰,24 h仍明显升高,差异有统计学意义(P0.05),且术后24 h心肌组织HE染色显示肌纤维结构排列疏松紊乱,间质充血水肿,见大量炎性反应细胞浸润等损伤性改变;与脓毒症组比较,GSH干预组大鼠术后6 h血清CK-MB水平和心肌组织TLR4 mRNA表达已有所下降,术后12 h、24 h明显下降,差异均有统计学意义(P0.05),且术后24 h时心肌组织上述病理学损伤性改变也明显减轻。结论:心肌组织TLR4 mRNA的高表达在脓毒症致急性心肌损伤中起着重要的作用,而在脓毒症早期应用GSH干预可抑制心肌组织TLR4 mRNA的表达,对脓毒症致急性心肌损伤有保护作用。     

布托啡诺对感染性休克大鼠细胞因子的影响

目的 探讨布托啡诺对感染性休克大鼠的血流动力学指标及血清细胞因子的影响.方法 在武汉大学中南医院麻醉科实验室将健康雄性SD大鼠80只,随机(随机数字法)分为4组(n=20):假手术组(C组)、手术组(CLP组)、手术加布托啡诺组(CLP+B组)、假手术加布托啡诺组(B组).CLP组、CLP+B组分别注射生理盐水5 mL/kg和布托啡诺0.5 mg/kg后30 min采用盲肠结扎加穿孔法(CLP)制备感染性休克模型.C组、B组分别注射生理盐水5 ml/kg和布托啡诺0.5 mg/kg而不行CLP.每组取10只大鼠不采血,仅观察48 h死亡率.另10只分离右侧股动脉置管监测平均动脉压(MAP)和心率(HR),并于CLP后4、12、20 h经右侧股动脉采血1 mL,采用酶联免疫吸附试验检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)浓度.死亡率比较采用Fisher精确概率法,如果差异有统计学意义,则进一步采用bonferroni法进行多个样本率问的多重比较.结果 CLP组死亡率明显高于C组和CLP+B组(P＜0.05).CLP组MAP呈进行性下降,HR先快后慢,CLP+B组MAP下降幅度较小,HR波动小.CLP组和CLP+B组血清TNF-α、IL-6和IL-10水平高于其余各组(P＜0.05),且CIP组,TNF-α和IL-6水平高于CLP+B组(P＜0.05),IL-10水平低于CLP+B组(P＜0.05);B组各细胞因子水平与C组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 布托啡诺可以降低感染性休克大鼠死亡率,并通过降低血清促炎性细胞因子TNF-α和IL-6,增加抗炎性细胞因子IL-10浓度对感染性休克大鼠血流动力学稳定方面起到保护作用,而对正常大鼠血流动力学指标及细胞因子无影响.     

腹腔感染性脓毒症可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系

目的 通过动物脓毒症模型探讨可溶性髓样细胞触发受体(sTREM-1)与Janus激酶-信号转导和转录激活因子(JAK/STAT)通路的关系.方法 采用盲肠结扎穿孔(CLP)法制作大鼠脓毒症模型,大鼠随机(随机数字法)分为正常对照组(n=6)、假手术组(n=24)、CLP组(n=48)、JAK 2抑制剂(AG 490)组(n=48)和STAT3抑制剂(雷帕霉素,RPM)组(n=48).留取外周血行流式细胞仪分析CD4+ CD25+ Treg细胞/CD4+T细胞比值.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)测定肝组织sTREM-1 mRNA表达水平.结果 CLP后6h肝sTREM-1 mRNA表达即高于对照组和假手术组,且随时间变化逐渐升高.AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达在术后6h、24 h(1.572±0.051,2.063±0.025)较同时间点CLP组(1.592±0.036,2.082±0.021)差异无统计学意义(P＜0.05),而在48 h和72 h AG490组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(2.522±0.083,3.153±0.021)低于同时间点CLP组(2.592±0.055,3.204±0.013) (P＜0.05).术后6 h RPM组肝组织sTREM-1mRNA的表达(1.581±0.017)较CLP组差异无统计学意义(P＜0.05),而在术后24、48、72 h RPM组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(1.486±0.019,1.263±0.011,1.115±0.022)显著低于同时间点CLP组肝组织sTREM-1 mRNA的表达(P＜0.05).结论 sTREM-1因子与JAK/STAT通路有关,阻断JAK/STAT通路能够抑制sTREM-1 mRNA的表达,减缓脓毒症炎症反应的进展.