超声心动图评价骨髓细胞移植对兔梗死心肌局部收缩功能的影响和微血管新生效应

目的检测骨髓间质干细胞移植到梗死心肌后局部心肌运动特征和新生微血管的活体灌注状况。方法21只兔随机分成正常对照组、心肌梗死组和细胞移植组。结扎后2组兔冠状动脉左前降支,复制心肌梗死模型。梗死组心内注射培养基,移植组进行骨髓细胞移植。移植后4周检测抗Brdu、抗心肌特异性肌钙蛋白T(TroponinT)和抗因子染色结果,比较毛细血管密度。分别于结扎前、心肌梗死后和移植后运用组织多普勒技术测量3组兔左室前壁心肌运动速度。行心肌声学造影检查,观察局部心肌血流灌注状况。结果移植组心肌内可检测到大量Brdu阳性标记的细胞,抗TroponinT染色和抗因子染色阳性,毛细血管密度较梗死组显著增高。移植组左室前壁心肌Vs和VE较心梗组显著增高(P<0.05)。心肌梗死后左室前间壁造影剂充盈缺损,移植后该处心肌内可见少量造影剂回声,造影剂声学强度明显高于心肌梗死组(P<0.01)。结论骨髓间质干细胞移植可增强局部心肌收缩功能,改善心肌血流灌注。     

心肌声学造影检测缺血心肌干细胞移植后微血管新生效应

目的探讨骨髓干细胞移植于缺血心肌后,应用心肌声学造影技术检测其微血管新生效应的价值。方法18只兔随机分3组:细胞移植组(n=8,心梗后移植)、心肌梗死组(n=6,心梗后不治疗)、对照组(n=4,无心梗不治疗)。经静脉注射声学造影剂,检测各组动物心肌梗死区移植前后造影剂充盈状况、造影剂峰值强度。取心肌组织测定新生毛细血管密度。结果移植4周后,移植组缺血心肌内可见少量造影剂回声,心梗组未见造影剂回声,对照组造影剂充盈良好。造影剂峰值强度在各组间差异显著(P<0.01)。心肌内造影剂的声强度与病理检测的毛细血管密度存在正相关关系(r=0.77)。结论心肌声学造影技术能有效检测干细胞移植后的微血管新生效应,可作为临床上评价和随访细胞移植疗效的方法。     

心肌声学造影界定急性心肌缺血面积的实验研究

目的应用声学造影剂确定急性缺血心肌的临界点,探讨对心肌缺血面积的估测作用。方法选择健康杂种犬12只,建立开胸犬急性心肌缺血动物模型,经静脉注射声诺维造影剂并进行心肌声学造影(MCE)检查。在左心室心尖长轴二腔心切面,应用MCE的彩色M型曲线技术检测急性缺血心肌分别在前壁和下壁的临界点,以此为界在二维图像上描计出声诺维造影剂灌注缺损面积。启动Q-analysis软件,在左心室心尖长轴二腔心切面,将取样点置于心肌缺血区、临界区及正常心肌组织区,动态追踪此感兴趣区,选择每一心动周期舒张末期图像纳入分析,软件自动生成灌注强度曲线并拟合函数:Y=A(1-eβ2t)+C,得出曲线峰值强度(A),曲线斜率(β)和灌注量(A.β),每个区域的参数均取3次测量的平均值。通过计算局部组织蓄积的最大微泡数量(A)和造影剂在局部充填的速度(β)测定心肌相对血流量,并作为心肌血流灌注定量判断标准。结果 MCE所测定的左心室心肌缺血面积与美蓝染色后缺血面积实际参数高度一致(r=0.93,P=0.01)。回顾分析各个感兴趣点的定量指标,心肌正常灌注区的峰值强度(A)、曲线斜率(β)显著高于缺血区。缺血心肌区灌注量(A.β)较正常心肌区降低约70%,与心肌正常灌注区之间差异有统计学意义(P<0.05)。临界区灌注量(A.β)较正常心肌区降低约50%,与心肌正常灌注区之间差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MCE可用于心肌缺血面积的估测,测定心肌缺血范围,确定心肌缺血的临界点。     

自体骨髓基质细胞移植于缺血心肌的实验研究

目的 观察骨髓基质细胞自体移植到缺血坏死心肌局部细胞分化、血管新生和心功能改善状况。方法 30只日本大耳兔分成损伤对照组、心肌梗死组和细胞移植组。结扎梗死组和移植组兔冠状动脉左前降支，复制心肌梗死模型后梗死组心内注射培养基，移植组进行骨髓基质细胞移植。于移植后4周检测移植组抗Brdu染色、抗心肌特异性肌钙蛋白T(troponin T)染色和抗Ⅶ因子抗体的染色结果，比较毛细血管密度。分别于结扎前、结扎后和移植后4周测量3组实验兔的心脏形态大小和心功能。结果 移植组在移植区可检测到大量Brdu阳性标记的细胞，抗troponin T染色和抗Ⅶ因子染色阳性，毛细血管密度较梗死组显著增高，左室腔径则明显减小，心功能各项指标明显改善。结论 骨髓基质细胞移植入缺血坏死心肌能在局部分化成为类心肌细胞，促使血管新生，有效改善心功能。     

实时心肌超声造影评价冠状动脉搭桥术前后心肌灌注

目的应用Sono Vue经静脉实时心肌超声造影分析静息状态下冠状动脉搭桥前后心肌微血管灌注状况,评价冠状动脉搭桥后心肌微血管灌注的改善情况。方法15例拟行冠状动脉搭桥术的患者于术前1～5d及术后15～20d采用均匀缓慢经静脉注射Sono Vue进行实时心肌超声造影检查。造影图像取标准胸骨旁及心尖切面,包括心尖四腔观、两腔观、左心长轴观。用时间强度曲线分析造影图像。结果术前严重狭窄冠状动脉供血心肌的A值、k值和A×k值[分别为(4.50±2.61)dB、0.32±0.15、1.28±0.75]小于未见明显狭窄冠状动脉供血心肌的A值、k值和A×k值[(7.83±2.35)dB、0.45±0.15、3.52±1.50],差异有统计学意义(分别为P=0.001,P=0.02,P<0.001)。术前严重狭窄冠状动脉供血心肌的A值和A×k值在术后增大[分别为(4.50±2.61)dB对(6.06±2.52)dB,1.28±0.75对1.99±0.92;P值分别为P=0.02,P<0.001],同样相应的标化值术后大于术前(分别为0.52±0.22对0.78±0.32,0.37±0.18对0.58±0.20),差异有统计学意义(分别为P=0.018,P<0.001)。结论实时心肌超声造影可以检测严重狭窄冠状动脉供血心肌存在的心肌灌注异常,并且为评价冠状动脉搭桥术后心肌微血管灌注的恢复情况提供有价值的信息。     

超声造影剂对犬缺血再灌注心肌的靶向显像及其机制研究

目的用自制的靶向超声造影剂实现无创性地评价犬心肌缺血再灌注,同时研究其靶向性作用机制。方法将自行研制的表面活性剂超声造影剂“表活显”(surfactantfluorocarbon-filledmicrobubbles,SFCMB)与磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine,PS)结合,制备成靶向超声造影剂(SFCMB-PS),在实时心肌超声造影(MCE)条件下,用SFCMB-PS对犬心肌缺血再灌注模型进行延迟心肌显像。流式细胞术测定白细胞激活前和激活后与SFCMB-PS的结合情况以及在补体和β2整合素中的Mac-1缺乏时激活的白细胞与SFCMB-PS的结合情况。结果延迟心肌显像表明缺血再灌注区的造影剂回声较正常区的回声明显增强。流式细胞术证明了PS结合在造影剂微泡的表面,未激活的白细胞与微泡的结合率为(5.27±0.75)%,激活的白细胞与微泡的结合率为(39.67±6.83)%,结合率明显提高(P<0.01);补体和β2整合素中的Mac-1缺乏时,两者的结合明显受到抑制,结合率降到(12.27±1.66)%(P<0.01)和(10.90±2.40)%(P<0.01)。结论SFCMB-PS可以无创性地评价缺血再灌注损伤心肌的部位及其严重程度。SFCMB-PS是通过β2整合素中的Mac-1和补体介导途径与激活的白细胞结合并进入细胞内的。     

靶向微泡造影剂促进兔心肌梗死骨髓干细胞移植后血管新生及心肌力学改变

目的 应用斑点追踪技术评价靶向微泡造影剂注射后兔心肌梗死区域骨髓干细胞移植疗效。 方法 制备靶向微泡超声造影剂(携CD34单克隆抗体)。将36只新西兰大白兔随机分为对照组(单纯移植组)、普通造影剂组(移植+C组)及靶向造影剂组(移植+T组),分别于急性心肌梗死(AMI)前、AMI后3天、干细胞移植术后4周行心肌超声造影(MCE),采用彩色编码参数量化(PQ)技术对比各组干细胞移植前后梗死区域心肌灌注参数,同时对3组动物心肌梗死干细胞移植区域心肌的径向应变率(SrR)、圆周应变率(SrC)、旋转率(RotR)、收缩期S峰值及心肌扭转角度(Rot)进行斑点追踪分析,并于移植4周后检测微血管密度。 结果 干细胞移植后各心肌节段的A、β和A×β值均较本组内移植前改善,移植+T组改善最为明显(P均<0.05)。各组左心室前壁的SrR、SrC、RotR及Rot均较本组内移植前增高(P均<0.01),并与左心室射血分数相关。 结论 靶向微泡造影剂对兔骨髓干细胞移植后微血管新生具有一定作用。     

1,6-二磷酸果糖对大鼠心肌再灌注损伤的干预效应

目的:探讨1,6-二磷酸果糖(fructose1,6-diphosthate,FDP)的抗再灌注心肌损伤作用与脂质过氧化的关系。方法:实验于2003-06/07在大连医科大学中心实验室完成,选取健康SD大鼠60只,随机分成对照组、心肌缺血组、缺血再灌注组、缺血再灌注+FDP组和缺血再灌注+超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)组。采用硫代巴比妥酸法和肌酸固定法,分别测定丙二醛及血清肌酸激酶(creatinekinase,CK)在大鼠心肌缺血和再灌注条件下的含量变化。结果:心肌缺血组SD大鼠CK含量明显升高,(4684.27±533.44)nkat/L;缺血组再灌注血清丙二醛和CK含量急剧上升,分别为(3.90±0.73)μmol/g,(5784.49±883.51)nkat/L;缺血再灌注+FDP组和缺血再灌注+SOD组丙二醛和CK含量均显著降低,分别为(2.82±0.46)μmol/g,(3767.42±833.50)nkat/L;(3.22±0.72)μmol/g,(4234.18±766.82)nkat/L(P<0.01)。结论:再灌注心肌损伤加重;FDP对再灌注心肌损伤有明显的保护作用。     

心肌声学造影评价硝酸甘油对犬心肌缺血再灌注损伤的延迟保护作用

目的　探讨心肌声学造影 (myocardial contrastechocardiography,MCE)技术评价硝酸甘油对犬心肌缺血再灌注损伤的延迟保护作用的价值。方法　 12只健康成年杂种犬随机分成缺血再灌注组和硝酸甘油组 ,缺血再灌注组不给予任何药物 ,保持基础状态 ,单纯给与左冠状动脉前降支结扎 180 min,再灌注 12 0 min,在持续缺血和再灌注阶段行心肌声学造影 ,硝酸甘油组 ,用微量静脉泵以 2μg/(kg· min)速度静滴硝酸甘油 1h,2 4 h后结扎左冠状动脉前降支 ,其余步骤同缺血再灌注组。于左室乳头肌水平测定正常灌注区与缺血低灌注区心肌视频密度时间 -强度曲线参数 ,及缺血和再灌注阶段左室壁造影剂显影缺损区 (分别代表心肌危险区面积和坏死区面积 ) ,并与伊文思蓝及红四氮唑 (triphenyl tetrazolium chloride,TTC)心肌组织染色结果对照。结果　心肌造影时间 -强度曲线中 ,两组缺血低灌注区峰值强度 ,时间 -强度曲线下面积 ,比正常灌注区明显减低 ,峰值减半时间比正常灌注区延长 ,差异有显著性 ,缺血再灌注组、缺血低灌注区与正常灌注区心肌视频密度时间 -强度曲线参数比值较硝酸甘油组降低更明显 ,差异有显著性 ,MCE所测定的心肌坏死区面积与危险区面积之比与伊文思蓝及 TTC心肌组织染色结果成正相关。硝酸甘油可使心肌     

实时心肌超声造影评价急性心肌缺血的实验研究

目的 评价实时心肌超声造影(MCE)识别大鼠急性心肌梗死心梗范围的准确性,及定量分析缺血心肌血流灌注的特性.方法 雄性Wistar大鼠20只,结扎冠脉左前降支,制备急性心肌梗死(AMI)模型.分别采集基础状态及梗死状态下的RT-MCE 图像.分别在缺血区和灌注正常的心肌取感兴趣区,得出造影成像的强度-时间曲线,读出峰值视频强度PI、A、β、A·β值.结果 MCE显示梗死区灌注充盈缺损,灌注缺损区面积(30.67±6.42)%与病理染色证实的心梗面积相关性好(r=0.87).心梗区PI较正常灌注区低 (5.45±3.07) dB vs (23.03±5.27) dB (P<0.05).灌注缺损区的A、β、A·β值等均与正常心肌MCE灌注参数值间存在显著差异(P<0.05).结论 MCE能无创地准确估测梗死面积.梗死区MCE血流灌注指标显著降低.     

人脐带血间充质干细胞体外分离培养研究

目的:探讨人脐带血来源间充质干细胞体外分离及培养方法.方法:采用Ficoll-paque(1.077 g/ml)分离液密度梯度离心法结合直接贴壁分离人脐带血单个核细胞中间充质干细胞(MSCs),20?S/DMEM培养,培养至48 h换液并将其上清加入另一培养皿继续培养.观察2个时期细胞贴壁情况;应用流式细胞仪检测各时期细胞.结果:密度梯度法分离来脐血单个核细胞进行培养,可观察12 h即可见少量细胞贴壁生长,绝大部分MSCs在96 h内完成贴壁,经传代纯化第1、2个48 h贴壁细胞均可培养出形态呈较均一长梭形细胞.流式细胞仪检测:单个核细胞中CD44 细胞比例占7.1%、CD34 占28.9%,而在第1个48 h贴壁细胞CD44 、CD34 比例分别占47.2%、6.7%;而第2个48 h贴壁细胞CD44 、CD34 分别占53.3%、4.6%.结论:人脐血间充质干细胞能在体外分离培养,贴壁细胞稳定表达MSCs相关抗原.     

干细胞研究的近况

目前干细胞研究已成为热门话题。现简要叙述其近年的研究概况和一些有争议的问题。虽然干细胞真正在临床的应用存在不少问题 ,但干细胞的应用前景是乐观的     

全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性及优势

背景：骨髓来源的间充质干细胞含量极低,体外纯化、扩增活性好、分化潜能高的骨髓间充质干细胞,对进一步研究至关重要。目的：进一步验证全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化骨髓间充质干细胞的生物学特性、表型及多向分化潜能。方法：通过全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,进行形态学观察,流式细胞仪检测细胞标记物表达,分别进行成骨、成脂诱导分化。结果与结论：成功纯化、扩增了高细胞活性、高分化潜能的骨髓问充质干细胞。所得细胞呈成纤维细胞样;表达CD29、CD90,不表达CD45;成骨、成脂诱导分化后,茜素红染色、油红O染色阳性。证实全骨髓贴壁法操作简单、对细胞活性损伤小,可以得到高纯度、高活性、高分化潜能、生物学形态和特征稳定的骨髓间充质干细胞。     

骨髓贴壁细胞向破骨细胞的分化

背景：一般认为采用贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能够贴壁的细胞为间充质干细胞,并能分化成为成骨、成脂肪及成软骨细胞,其中贴壁的细胞是否有分化为破骨细胞的潜能尚不明确。 目的：检测贴壁分离法得到的小鼠骨髓中能贴壁的细胞是否能够分化为破骨细胞。 方法：采用贴壁法得到小鼠原代间充质干细胞,以及通过贴壁1-5d后得到不同时间贴壁的骨髓细胞。原代间充质干细胞及不同时间贴壁的骨髓细胞分别用普通培养基,及含m-csf和RANKL培养基,培养9 d后进行碱性磷酸酶和抗酒石酸酸性磷酸酶染色。原代间充质干细胞传代后,第2代间充质干细胞分为4组,分别用普通培养基、含m-csf培养基、含RANKL培养基及含m-csf和RANKL的培养基培养,9 d后进行碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色。 结果与结论：贴壁法得到较均一的间充质干细胞,原代及传代贴壁细胞的联合诱导组抗酒石酸酸性磷酸酶染色均为阳性,说明原代和传代的贴壁骨髓细胞中均有可以分化为破骨细胞的细胞。不同时间贴壁的细胞诱导后碱性磷酸酶及抗酒石酸酸性磷酸酶染色有差异,说明不同时间贴壁的细胞存在分化差异。     

Selective upregulation of MHC class I expression in metastatic colonies derived from tumor clones of a murine fibrosarcoma

Eighteen metastatic nodes derived from the wild-type (GR9) and from 4 different clones (G2, D8, B10, and B9) obtained from a fibrosarcoma were analyzed for H-2 class I and II expression, as well as for adhesion molecules (CD44, CDIIb, CD18, CD49, and CD54). When metastatic nodes were cultured, typed for H-2 antigens, and compared with the H-2 expression of the inducing tumor cell, H-2 Kd and Dd class I expression was greater in most nodes analyzed. In contrast, the Ld molecule remained negative, or showed a minor increase. Class II expression was negative in the wild-type and the tumor clones, and remained so in the metastatic colonies. Analysis of the adhesion molecules revealed no differences between the inducing tumor cells and the metastatic nodes. The only molecule expressed was CD44, which was present in all cells studied and was also inducible by interferon-gamma. The increase in H-2K and H-2D expression was associated with resistance to natural killer cytotoxicity, as observed in the G2 tumor clone and some autologous metastases, such as B9MP2, G2MK2, and G2MLI. In three independent clones of this tumor system (D8, BIOMP6, and B9MP6) we found that tumor cells treated with interferon-gamma had the same altered phenotype, i.e., a selective lack of response of the Ld molecule to induction. These findings add a cautionary note to the well-established idea that tumor cells may lose all class I antigens during tumor progression, and suggest that sometimes this may not be the case. The selective downregulation of Ld and upregulation of Kd and Dd class I expression may give some tumor cells means of escaping both cytotoxic lymphocyte and natural killer immune surveillance.     

不同来源内皮细胞生物学性状的比较

目的:比较大鼠胸主动脉来源的成熟内皮细胞和骨髓间充质干细胞(MSCs)来源的内皮细胞生物学性状及各自Akt表达的情况。方法:分离培养大鼠胸主动脉来源内皮细胞,诱导MSCs分化为内皮细胞,对2组细胞的细胞形态、增殖能力、成管能力进行比较,通过Western blotting比较其表面标记表达情况及Akt表达情况。结果:MSCs来源的内皮细胞形态学与成熟内皮细胞不尽相同,增殖能力和成管能力均强于后者。2组细胞均可表达内皮细胞的表面标记,但成熟内皮细胞表达强于分化而来的内皮细胞(P<0.05)。Akt表达在分化而来的内皮细胞明显高于成熟内皮细胞(P<0.05)。结论:MSCs分化而来的内皮细胞和成熟内皮细胞存在生物学性状和Akt表达差异。     

Cardiovascular disease: potential impact of stem cell therapy

Atherosclerotic vascular disease becomes a clinical problem when there is sufficient atherosclerotic plaque burden and/or endothelial dysfunction to cause a limitation of nutrient blood flow to tissues. However, once myocardial infarction has occurred, there is little, if any, way to stimulate the growth of new blood vessels or cardiac muscle to replace that which has been lost. The potential use of hematopoietic stem cells (HSCs) to treat cardiovascular disease has recently been suggested from preclinical and clinical studies. HSCs are precursors of all the blood cells, but they may also give rise to cells of the vascular system, endothelial cells in the form of endothelial progenitor cells (EPCs). Clinical trials have been conducted in patients with either acute myocardial infarction or limb ischemia to determine the initial effectiveness and safety of this treatment approach. These studies demonstrated the potential clinical effectiveness of this stem cell approach to the treatment of patients with acute myocardial ischemia and limb ischemia. Today, more preclinical studies are planned to elucidate the mechanism by which transplanted stem cells can home and differentiate into these endothelial cells and cardiac muscle cells. At the same time, new clinical trials are planned to evaluate both chronic, stable as well as acute myocardial ischemia and limb ischemia with CD34⁺ and CD133⁺ stem cells, as well as with further selected EPCs and mesenchymal stem cells.     

干细胞若干定义的相关探讨

背景：近10年来干细胞研究所取得的巨大进展，不仅影响和促进了生物学及其相关基础科学，而且还在医学、药物开发、农业等许多领域得到广泛的应用，目前已成为研究的热点问题。目的：在干细胞的定义上还存在一些需要探讨的问题，明确定义将有利于干细胞研究的快速发展。方法：回顾干细胞的发展和概念提出，特别是通过中英文权威定义的比较，提出作者的看法。结果与结论：干细胞的定义上还存在一些问题值得探讨，特别是一些中英文表述不同影响了理解。例如，“多能干细胞”对应译成两个单词：PluripotentStemCell和MultipotentStemCell，然而Pluripotent和Multipotent两个单词的英文意义不同。为了学术交流和沟通，作者提出将PluripotentStemCell称为“万能干细胞”，而保留MultipotentStemCell为“多能干细胞”的定义。以上结论供广大同仁探讨，以利于抛砖引玉。     

人多能干细胞的冷冻与保存

背景：人多能干细胞的出现与发展是近年来生物医学研究领域的重大突破。但其在基础，临床研究中的广泛应用还有诸多限制，建立安全有效标准化的冷冻保存方案是人多能干细胞广泛应用面临的重大挑战。目的：回顾人多能干细胞冷冻领域的研究进展，探索造成冷冻损伤的原因和机制及改进方式，致力于促进新的更有效的冷冻方案形成。方法：以“人多能干细胞、人胚胎干细胞、人诱导多能干细胞、玻璃化、程序化冷冻、慢冻法、冷冻保存”为中文检索词，以“humanpluripotentstemcells，humanembryonicstemcell，humanintroducedpluripotentstemcell，vitrification，programmedcryopreservation，slow-freezing，cryopreservation”为英文检索词，应用计算机检索中国知网全文数据库、万方全文数据库、维普（viP）期刊全文数据库、PubMed数据库有关人多能干细胞冷冻保存技术的文献，排除与研究目的无关及重复文献，保留58篇文献进一步总结分析。结果与结论：了解人多能干细胞冷冻过程中造成冷冻损伤的原因和机制，是寻找高效的冻存方案的关键。需要更清晰的了解冷冻过程中损伤的原理，改进和创新低温生物技术来避免各种冷冻损伤的发生并致力于探讨可重复的，高效的，符合GMP要求的，能大规模冻人多能干细胞的方案。     

细胞因子组合对脐血干 /祖细胞的调控作用

INTRODUCTIONIntheclinicalapplication,suchashematopoeticstemcellorpro-genitortransplantation,genetictherapyandtumordefecation,whetherthehematopoieticstemcellorprogenitorcankeeptheam-plificationacquiredmuchattention犤1犦.MATERIALSANDMETHODSSamplecollection23samplesofumbilicalbloodwerefromdepartmentofobstetricsandgynecologyofHuashanHospital.Anti-coagulationwithheparinandmeancollectiveamountwas50～100ml.Collectmonocytes(MNC)regularlywithin24hoursaftercollectionandreservethemafterwash…