免疫组织化学和RT-PCR法检测乳腺癌骨髓和前哨淋巴结微小转移的临床研究

目的探讨免疫组织化学(IHC)和RT-PCR法检测乳腺癌骨髓和前哨淋巴结(SLN)微小转移的灵敏度及临床意义。方法留取乳腺癌改良根治术腋窝淋巴结HE染色证实阴性的病人的胸骨骨髓血和SLN,分别采用IHC和RT-PCR方法检测其微小转移情况。结果62例中,骨髓样本RT-PCR检测15例阳性表达,其中9例IHC检测也为阳性,二者结果有较好一致性(kappa=0.6945),检出率有统计学差异(P=0.0412);SLN样本RT-PCR法有13例KT19mRNA表达,其中7例IHC检出KT19阳性细胞,二者结果一致性较好(kappa=0.6483),检出率有统计学差异(P=0.0412);骨髓和SLN同时表达KT19mRNA仅3例,无显著相关(P=0.796);原发肿瘤大小和骨髓KT19mRNA表达率有关联(P=0.003)。结论常规检查未发现远处和腋窝淋巴结转移,骨髓和SLN可检出微小转移,RT-PCR较IHC更灵敏,肿瘤大小与骨髓微小转移有关联。由于骨髓和腋窝淋巴结微小转移不一定同步出现,选用灵敏方法对不同组织同时进行检测可能更具临床价值。     

乳腺癌骨髓微转移状况与ER PR VEGF 及Cath-D等因子的关系

目的:检测乳腺癌骨髓组织CK19 mRNA的表达,判断骨髓微转移状况,探讨其与各因子的关系.方法:采用RT-PCR法(一步法)检测骨髓组织中CK19 mRNA表达;用免疫组化SP法检测乳腺癌组织中ER、PR、Cath-D、C-erbB-2及VEGF的表达.结果:102例乳腺癌患者骨髓组织CK19 mRNA表达阳性率56.9%.骨髓CK19 mRNA表达随乳腺癌组织中ER及PR蛋白表达增强而降低(P＜0.05,P＜0.01);随Cath-D、VEGF蛋白表达增强而呈增高趋势(P＜0.005,P＜0.05);但与C-erbB-2表达状况无关.结论:乳腺癌骨髓微转移与癌组织中某些生物学因子表达有关;这些因子决定癌细胞的生物学行为.     

非小细胞肺癌患者外周血和骨髓中LUNX基因表达的临床意义

[目的]探讨非小细胞肺癌（NSCLC）患者外周血和骨髓微转移的肺特异性X蛋白（LUNX）基因诊断的临床意义.[方法]应用荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术,对42例肺癌患者和12例肺良性病变患者的外周血和骨髓中LUNX基因mRNA表达进行检测.[结果]42例肺癌患者有14例在外周血中检测到LUNX基因mRNA的表达,阳性表达率为33.3%,有10例在骨髓中检测到LUNX基因mRNA的表达,阳性表达率为23.8%.LUNX mRNA的表达与CK-19基因mRNA的表达率无显著性差异（P＞0.05）.外周血和骨髓微转移与肺癌组织学类型、细胞分化程度及TNM分期均存在密切关系（P＜0.05）.[结论]外周血和骨髓LUNX基因mRNA的表达是检测肺癌微转移的一个有价值的指标,为制定治疗方案和评估预后提供重要参考依据.     

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CK-19mRNA的临床意义

目的:探索取材于乳腺癌患者外周血诊断微转移的方法。方法:66例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血,分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提,运用RT-PCR技术进行CK-19 mRNA的检测。结果:以RT-PCR终产物出现460bp条带定为阳性。66例乳腺癌患者CK-19mRNA有24例表达,总阳性率为36.36％。37例乳腺良性疾病者CK-19mRNA无一例表达。两组有统计学意义(x2=17.54,P<0.001)。结论:RT-PCR检测CK-19 mRNA可以用于临床诊断乳腺癌患者外周血中微转移。     

乳腺癌患者骨髓GalNAcT mRNA的检测及其临床意义

目的：研究乳腺癌患者骨髓β1，4-N-乙酰半乳糖胺转移酶（GalNAcT）mRNA的表达，探讨其作为乳腺癌骨髓微转移检测指标对临床的应用价值。方法：对40例乳腺癌患者的骨髓及外周血采用巢式RT—PCR方法检测GalNAcT mRNA表达，同时以免疫组化的方法检测骨髓标本中细胞角蛋白（cytokeratin，CK）的表达。结果：40例患者骨髓中GalNAcT mRNA阳性表达17例（42．5％），外周血阳性表达7例（17．5％）；10例血液系统良性疾病患者骨髓和15例健康志愿者外周血中GaINAcT mRNA均为阴性。免疫组化结果显示：40例乳腺癌骨髓中有11例（27．5％）CK阳性，其GalNAcT mRNA都阳性；有6例（15．0％）CK阴性而GalNAcT mRNA阳性。结论：RT—PCR和免疫组化都是检测乳腺癌患者骨髓微转移的可靠的方法，但前者的敏感性高于后者。GalNAcT mRNA可作为一种新的肿瘤标志物来检测乳腺癌患者骨髓微转移。     

早期乳腺癌血清VEGF水平与骨髓微转移的相关性及临床意义

目的 检测早期乳腺癌患者血清中VEGF及骨髓标本中CK19的表达水平,探讨二者的相互关系及临床意义.方法 应用ELISA法分别检测6例乳腺纤维腺瘤及64例乳腺癌患者血清中VEGF的水平,同时抽取相应的骨髓血标本,应用实时定量逆转录-聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测标本中CK-19的表达水平,并进行相关性分析.结果 VEGF在乳腺癌患者血清中的表达水平明显高于乳腺纤维腺瘤患者,二者差异显著(P=0.012);在HER2阳性患者中,血清VEGF水平明显高于HER2阴性患者(P=0.016).CK19在乳腺纤维腺瘤患者骨髓标本中未见表达,在乳腺癌患者骨髓血中,阳性表达24例(37.5%),而骨髓中CK19阳性的乳腺癌患者血清VEGF水平显著高于CK19阴性的患者(110.46±90.65 vs 70.88±77.13,P=0.038),且二者的表达呈正相关.结论 早期乳腺癌患者血清VEGF水平与骨髓微转移密切相关,提示VEGF可能参与了肿瘤细胞的侵袭和播散,可作为早期乳腺癌微转移的血清学指标.     

曲妥珠单抗对HER-2阳性早期乳腺癌骨髓微转移的影响

目的：检测HER-2阳性的早期乳腺癌患者应用曲妥珠单抗（Trastuzumab）治疗前后骨髓微转移的改变,探讨HER-2基因及Herceptin对骨髓微转移的影响。方法：应用实时定量逆转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测15例HER-2阳性乳腺癌及18例HER-2阴性乳腺癌患者术前及化疗后骨髓CK19的表达水平,其中10例HER-2阳性乳腺癌患者在化疗结束后,继续应用Herceptin治疗,3月后再次抽取骨髓标本,qRT-PCR检测CK19的表达水平。结果：手术前,14例HER-2阳性乳腺癌患者骨髓CK19表达阳性（93.3%）,而HER-2阴性患者8例CK19表达阳性（44.4%）,二者差异显著（P=0.000）。化疗后,12例HER-2阳性乳腺癌患者CK19表达阳性（80.0%）,而HER-2阴性患者3例表达阳性（16.7%）,二者差异显著（P=0.000）。10例HER-2阳性乳腺癌患者化疗后继续应用Herceptin治疗3月后,骨髓CK19的表达明显下降（102.78±98.24 vs 66.92±49.18,P=0.036）。结论：HER-2基因的表达与早期乳腺癌患者骨髓微转移密切相关,而Herceptin可以降低骨髓微转移病灶,提示骨髓微转移情况可以作为Herceptin治疗疗效的早期预测指标。     

Bone marrow micrometastases detected by RT-PCR for mammaglobin can be an alternative prognostic factor of breast cancer

Purpose. To evaluate a new prognostic factor of breast cancer, bone marrow micrometastases which was detected by RT-PCR for mammaglobin, a sensitive molecular marker of breast cancer, was examined. Materials and methods. One hundred and eleven samples from stage I–III breast cancer patients were examined. Bone marrow micrometastases and clinicopathological parameters, which were age, tumor size, lymph node metastasis and status of the estrogen receptor, were evaluated for the prognostic factor by statistical analysis. Results. Median follow-up time was 21.1 months. Thirty-three (29.7%) out of 111 samples were RT-PCR positive. Eight cases (24.2%) in this group showed recurrent lesions in the distant organs. Whereas six (7.7%) out of 78 RT-PCR negative patients had distant recurrences. In the premenoposal patients, and in the patients with axillary lymph node metastases, RT-PCR positive cases showed significantly higher distant recurrent rate. Bone marrow micrometastases, axillary nodal status, and estrogen receptor were independent prognostic factors for breast cancer by both univariate and multivariate analysis. Conclusions. Bone marrow micrometastases detected by RT-PCR for mammaglobin can be a useful predictive marker for early distant recurrence of breast cancer.     

应用RT-PCR检测乳腺癌患者外周血CEA mRNA和CK-19 mRNA的研究及意义

目的：检测乳腺癌患者外周血中CEA mRNA和CK-19 mRNA的表达，建立取材于外周血早期诊断乳腺癌微转移的方法。方法：65例乳腺癌和37例乳腺良性疾病患者的外周血，分离其有核细胞后进行细胞总RNA的抽提，运用果式RT-PCR技术进行CEA mRNA和CK-19 mRNA的检测。结果：以     

hMAM mRNA和CK19 mRNA联合检测乳腺癌骨髓微转移

目的：检测乳腺癌患者骨髓中的human mamglobin（hMAM）mRNA和CK19 mRNA表达,探讨乳腺癌患者早期骨髓微转移与临床病理学因素的关系.方法：采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR一步法）法检测骨髓组织中hMAM mRNA和CK19 mRNA的表达.结果：102例乳腺癌患者骨髓hMAM mRNA、CK19 mRNA表达阳性者分别为37.3%和56.9%,均高于良性乳腺疾病患者骨髓组织中的表达（P=0.043,P=0.002）.两者的阳性表达率与肿瘤大小、临床分期和组织学分级呈显著相关,P值分别为0.000、0.001、0.020、0.003、0.031和0.001;与淋巴结转移状况、年龄和月经状况无关,P值分别为0.101、0.255、0.111、0.110、0.492和0.187.结论：乳腺癌微转移与肿瘤大小、临床分期和组织学分级有关,hMAM mRNA和CK19 mRNA均可作为检测乳腺癌骨髓微转移标志,且两者间存在一致性.     

早期乳腺癌血清VEGF水平与骨髓微转移的相关性及临床意义

目的：检测早期乳腺癌患者血清中VEGF及骨髓标本中CK19的表达水平,探讨二者的相互关系及临床意义。方法：应用ELISA法分别检测6例乳腺纤维腺瘤及64例乳腺癌患者血清中VEGF的水平,同时抽取相应的骨髓血标本,应用实时定量逆转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）方法检测标本中CK-19的表达水平,并进行相关性分析。结果：VEGF在乳腺癌患者血清中的表达水平明显高于乳腺纤维腺瘤患者,二者差异显著（P=0.012）;在HER2阳性患者中,血清VEGF水平明显高于HER2阴性患者（P=0.016）。CK19在乳腺纤维腺瘤患者骨髓标本中未见表达,在乳腺癌患者骨髓血中,阳性表达24例（37.5%）,而骨髓中CK19阳性的乳腺癌患者血清VEGF水平显著高于CK19阴性的患者（110.46±90.65 vs 70.88±77.13,P=0.038）,且二者的表达呈正相关。结论：早期乳腺癌患者血清VEGF水平与骨髓微转移密切相关,提示VEGF可能参与了肿瘤细胞的侵袭和播散,可作为早期乳腺癌微转移的血清学指标。