肺炎支原体RNA和DNA检测在儿童支原体感染诊断中的应用评价

目的评价比较肺炎支原体(MP)的RNA和DNA的检测在儿童支原体感染诊断中的应用效果.方法选取2017年10月至2018年12月某院收治的86例肺炎患儿作为研究对象,对所有患儿在入院24 h内进行采集咽拭子标本,并分别用肺炎支原体RNA实时荧光核酸恒温扩增检测技术(MP-SAT)检测RNA和肺炎支原体DNA实时荧光定量PCR(MP-DNA)法检测DNA.并与最终诊断结果对比,比较MP的RNA和DNA的检测在儿童支原体感染诊断中的应用效果.结果经最终诊断,86例患儿中MP感染阳性49例,MP感染阴性37例.其中MP-SAT检测诊断的MP感染阳性者43例,阴性34例;MP-DNA检测的MP感染阳性者31例,阴性27例.MP-SAT检测诊断儿童MP感染的灵敏度、特异度、准确性分别为87.76%,91.89%,89.53%,MP-DNA检测诊断儿童MP感染的灵敏度、特异度、准确性分别为63.27%,72.97%,67.74%,MP-SAT检测诊断的灵敏度、特异度、准确性均高于MP-DNA检测诊断,差异有统计学意义(P<0.05).结论在儿童支原体感染的初期诊断中,RNA实时检测的灵敏度和准确性更高.     

EB病毒IgM、IgG及DNA检测在儿童呼吸道感染性疾病中的诊断价值分析

目的分析EB病毒(EBV)IgM、IgG及EBV-DNA在儿童呼吸道感染性疾病中的诊断价值。方法选取400例呼吸道感染患儿作为观察组,100例非呼吸道感染住院患儿作为对照组,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测患儿的EBV-IgM和IgG,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测病毒DNA。比较观察组和对照组患儿的EBV-IgM、IgG及EBV-DNA阳性率,评价不同指标的诊断价值。结果观察组患儿EBV-IgM阳性率51.00%,EBV-IgG阳性率58.50%,EBV-DNA阳性率56.25%;对照组患儿EBV-IgM阳性率4.00%,EBV-IgG阳性率11.00%,EBV-DNA阳性率5.00%,差异具有统计学意义(P0.05)。EBV-IgM灵敏度51.00%,特异度96.00%,曲线下面积0.617;EBV-IgG灵敏度58.50%,特异度89.00%,曲线下面积0.583;EBV-DNA灵敏度56.25%,特异度95.00%,曲线下面积0.642。结论 EBV-IgM、IgG及EBV-DNA在儿童呼吸道感染中具有诊断价值。     

荧光定量基因扩增检测呼吸道分泌物中呼吸道合胞病毒

呼吸道合胞病毒（RSV）是婴幼儿病毒性肺炎和毛细支气管炎最重要的病原体之一。本研究应用TaqMan技术建立了测定呼吸道分泌物中RSVRNA的实时荧光定量逆转录PCR（FQ-RT-PCR）法，并对本院住院的106例RSV感染的疑似患儿进行了检测。为RSV感染的早期诊断以及RSV感染的临床诊断提供了新的诊断依据。     

实时荧光定量PCR在儿童肺炎支原体感染中的诊断价值

目的探讨实时荧光定量PCR(RTFQ-PCR)在儿童肺炎支原体(MP)感染中的诊断价值。方法选取106例肺炎患儿,采集静脉血,以间接荧光免疫法(IFA)检测MP-Ig M表达;采集咽拭子标本,以RTFQ-PCR检测MP DNA拷贝数。以血清学检测结果为诊断标准,观察RTFQ-PCR诊断MP的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,及其在检测不同年龄段患儿MP感染中的准确性;比较MP-Ig M阳性和阴性患儿的MP-DNA拷贝数差异。结果 1 RTFQ-PCR诊断灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为90.48%、93.02%、95.00%、89.96%。绘制受试者工作曲线(ROC曲线),曲线下面积为0.740;2 RTFQ-PCR诊断6岁以上患儿MP感染的灵敏度和准确率高于1岁以下患儿(P0.01);3 MP-Ig M阳性组DNA拷贝数对数显著高于阴性组拷贝数对数(P0.01)。结论 RTFQ-PCR诊断儿童MP感染具有较好的准确性,其荧光拷贝数越大越支持MP感染的诊断,对发病早期及年龄较大的患儿可能具有更高的诊断价值。     

血清淀粉样蛋白A、降钙素原和全量程C-反应蛋白联合检测诊断儿童早期呼吸道感染的价值

目的探讨血清淀粉样蛋白A(SAA)、降钙素原(PCT)和全量程C-反应蛋白(hs-CRP+CRP)联合检测对儿童早期呼吸道感染的诊断价值。方法选取2018年7月至2019年12月在乐昌市中医院就诊的155例住院患儿,将其中75例非呼吸道感染患儿作为非感染组,80例呼吸道感染患儿作为感染组,并筛选同期于我院体检的健康儿童70例作为正常对照组。比较三组体内血清SAA、PCT和hs-CRP+CRP的水平;比较单独检测SAA、PCT和hs-CRP+CRP的灵敏度和联合检测(SAA+PCT+hs-CRP+CRP)的灵敏度。结果非感染组、感染组血清SAA、PCT和hs-CRP+CRP水平显著高于对照组(P<0.05)。血清SAA水平升高幅度比PCT、hs-CRP+CRP更明显(P<0.05);单独检测SAA敏感度为97.50%,特异度为16.00%;单独检测PCT敏感度为87.50%,特异度为89.33%;单独检测hs-CRP+CRP敏感度为91.25%,特异度为52.00%。联合检测(SAA+PCT+Hs-CRP+CRP)的敏感度为97.50%,特异度为93.33%。结论SAA、PCT、hs-CRP+CRP可作为细菌感染的诊断指标,对于儿童呼吸道感染,患者体内SAA升高比PCT、hs-CRP+CRP更为明显;联合检测较单独检测的敏感度及特异度更高,可在呼吸道感染早期诊断中发挥最大效能并为后续治疗提供有效依据。     

人巨细胞病毒IE抗原快速免疫荧光检测法在先天性人巨细胞病毒感染筛查中的应用

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)IE抗原快速免疫荧光检测法在先天性HCMV感染筛查中的应用价值。 方法收集2017年1至12月安徽省妇幼保健院产科352例新生儿唾液标本和足底干血片标本。使用病毒分离培养和HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法检测新生儿唾液标本;使用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测足底干血片标本HCMV-DNA。以病毒分离培养的结果作为标准,比较HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法和足底干血片标本荧光定量PCR法在检测先天性HCMV感染中的检验效能。 结果352例唾液标本共分离5例阳性标本,阳性率为1.42%;而荧光定量PCR检测足底干血片标本仅4例阳性,阳性率为1.14%;HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法检测的结果与病毒分离完全一致。足底干血片荧光定量PCR检测的敏感度为80%,特异度为100%;HCMV IE抗原快速免疫荧光检测的敏感度为100%,特异度为100%。HCMV IE抗原快速免疫荧光检测的敏感度高于足底干血片荧光定量PCR检测,但差异无统计学意义(Z＝0.94,P＝0.350)。 结论HCMV IE抗原快速免疫荧光检测可能是更准确的先天性HCMV感染早期诊断方法。     

5种结核分枝杆菌检测方法的临床应用价值研究

目的评价5种结核分枝杆菌检测方法对肺结核的辅助诊断价值。方法统计2018年1-10月在广州医科大学附属第一医院住院的患者,分为临床诊断肺结核患者和临床诊断非结核普通住院患者共209例,用结核培养法、PCR-荧光探针法、结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)法、抗酸染色法、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)法分别进行检测,比较这5种方法在临床诊断中的价值。结果结核培养法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、T-SPOT.TB法、Xpert MTB/RIF法阳性率分别为16.8%、23.4%、39.2%、53.0%、52.2%。结核培养法灵敏度为52.17%,特异度为100.00%;抗酸染色法灵敏度为42.45%,特异度为96.67%;PCR-荧光探针法灵敏度为76.00%,特异度为97.98%;T-SPOT.TB法灵敏度为91.67%,特异度为79.80%;Xpert MTB/RIF法灵敏度为99.09%,特异度为100.00%。结论Xpert MTB/RIF法是最值得推荐的方法,也是唯一可以作为诊断结核感染的分子生物学方法,如果能够联合这几种方法,可以快速、准确地对结核感染进行诊治。     

单管双重巢式聚合酶链反应及基因测序技术鉴别呼吸道合胞病毒A,B亚型

目的建立呼吸道合胞病毒(RSV)A,B亚型的鉴别方法,以供临床科研应用。方法运用荧光定量聚合酶链反应技术(FQ-PCR)筛选出2015~2017年50例住院儿童咽拭子RSV阳性标本;根据RSV的G蛋白编码基因核苷酸序列设计单管双重巢式PCR引物进行基因分型;其A,B亚型产物经测序与GeneBank库中核苷酸序列进行比对分析鉴定;采用卡方检验对结果进行统计学分析。结果50例咽拭子RSV阳性患儿呼吸道合胞病毒A,B亚型及混合感染率分别为82.00%,14.00%和4.00%,差异有统计学显著性意义(χ2=81.06,P0.01);RSV分型结果与基因测序结果完全符合。结论深圳东部地区以A亚型流行为主,混合感染并存;单管双重巢式聚合酶链反应(PCR)及基因测序技术适用于RSV的A,B亚型鉴别,具有灵敏度高、特异度强和准确率高的特点。     

核酸测序法与荧光PCR法测定HBV基因分型比对试验分析

目的 对核酸测序方法和荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的灵敏度、特异度和分型准确性进行比对分析.方法 核酸测序方法作为金标准与荧光PCR法检测结果进行分析,计算乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的灵敏度、特异度和分型准确性.结果 200例样本中,金标准检测结果阳性78例;在这78例中,荧光PCR法检测结果阳性78例,荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）检测的灵敏度为100.00%;金标准检测结果阴性122例,荧光PCR法检测结果阴性121例,荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）检测的特异度为99.18%.荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的分型准确性为100%.荧光PCR法和金标准方法的分型检测结果,无统计学差异.结论 荧光PCR法具有高灵敏度、高特异度、防污染能力强、自动化程度高、速度快等优点,适合用于传染病监测和临床使用的乙型肝炎病毒（HBV）的分型快速检测.     

SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测DNA甲基化方法的建立

近期，表观遗传学与肿瘤发生关系的研究日益增多。DNA甲基化是表观遗传学的重要组成部分，并已成为肿瘤早期诊断的研究热点。甲基化特异性PCR（MSP）是检测DNA甲基化的常用方法之一，该方法灵敏度和特异度高，但操作繁琐，难以自动化。TaqMan荧光定量PCR法，即Methylight在MSP的基础上设计1条TaqMan探针，该方法的准确性和检测的灵敏度都很高。然而，因需要设计合成特异的探针而使其的应用受限，而且TaqMan探针昂贵。本研究建立SYBRGreenⅠ荧光定量PCR（FQ—PCR）检测DNA甲基化的方法，通过临床标本检测和对比试验，以证明其与Methylight的检测效能，以便为DNA甲基化检测的临床应用提供工具。     

小儿上呼吸道感染两种EBV检测方法对比分析

目的 比较检测EB病毒(EBV)的两种方法的优缺点.方法分别采用免疫荧光技术和荧光探针PCR技术对270例小儿上呼吸道感染的不同样本进行EBV的检测.结果 270例患儿中EBV-DNA、VCA-IgG、VCA-IgM阳性率分别为34.8%、87.8%、0.4%.结论两种方法各有特点,荧光探针PCR检测EBV-DNA方法样本易取,时间短,准确性、敏感度均好,是值得推广的一项技术.     

个旧市儿童呼吸道感染常见病毒检测及分析

目的检测并分析个旧市儿童呼吸道病毒感染流行情况。方法采用直接免疫荧光法对2384例患儿进行RSV、FLUA、FLUB、PIV1、PIV2、PIV3、ADV病毒抗原检测,并分析结果。结果2384例呼吸道感染患儿中呼吸道病毒阳性353例,阳性率为14.81%。不同季度患儿的呼吸道病毒合计阳性率有显著差异(P<0.05),一季度和四季度的阳性率高于其他季度。不同季度患儿的RSV、FLUA、FLUB、PIV3阳性率有显著差异(P<0.05)。结论儿童RSV感染的阳性率最高,一季度和四季度是儿童呼吸道病毒感染高发期。     

苏州地区儿童呼吸道合胞病毒感染的流行病学研究

目的 调查苏州地区儿童呼吸道合胞病毒（RSV）感染的流行现状及其影响因素,为RSV感染的防治提供依据.方法 收集苏州大学附属儿童医院2008年5月～2011 年4月三年间因呼吸道感染住院的患儿痰标本18,170例,采用直接免疫荧光法检测RSV抗原.结果 18,170例呼吸道感染患儿中,RSV阳性者2,773例,阳性检出率15.26%,82.87%的RSV感染发生在12月以下患儿;男女比例1.97：1（P＜0.001）,发病高峰集中在每年的12月至次年的3月;12月以内母乳喂养儿较非母乳喂养儿RSV阳性检出率低,年龄小于6月或在流行季节出生、被动吸烟、母亲吸烟、兄妹数量等均可增加RSV的感染率.结论 苏州地区儿童RSV感染的流行状况与国内和国外温带城市情况基本一致,冬春季为流行高峰,0～12月龄组的患儿RSV感染所占比例最大.母乳喂养具有保护作用,男性、被动吸烟、母亲吸烟、多兄弟姐妹、年龄小于6月或在流行季节出生等因素均增加患儿RSV感染风险.     

TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应检测肺炎支原体方法的建立

目的 建立敏感、特异的TaqMan-MGB探针实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time PCR)快速检测方法,为临床标本中肺炎支原体快速检测提供技术支持。方法 选取肺炎支原体重复序列RepMP23中保守区域设计、合成特异性扩增引物和TaqMan-MGB探针,建立并优化real-time PCR检测方法。对优化后的方法使用标准浓度核酸进行扩增效率、灵敏度及特异度评价,并与已报道的肺炎支原体荧光PCR方法进行比较。结果 本研究建立的TaqMan-MGB探针荧光PCR方法对肺炎支原体的检测限为0.2 cfu,比普通TaqMan real-time PCR检测限(3～5 cfu)提高了一个数量级。其检测标准曲线的循环阈值(Ct) 与模板拷贝数呈良好的线性关系(R2=0.999)。用该方法扩增23种呼吸道常见病原菌染色体及人类染色体,结果均为阴性,特异度为100%。结论 TaqMan-MGB探针real-time PCR方法可快速、灵敏、特异地检测肺炎支原体,有很好的应用前景与价值。     

荧光定量PCR方法检测儿童下呼吸道感染的人博卡病毒

目的建立并应用检测儿童下呼吸道感染病人博卡病毒的荧光定量PCR方法。方法选择人博卡病毒的NS1基因作为目标基因,设计荧光定量PCR引物和检测探针,以重组质粒为标准品建立标准曲线,从而建立特异性检测人博卡病毒的荧光定量PCR方法,并对该方法的特异性、灵敏度、重复性进行评价;应用该方法对下呼吸道感染患儿的痰或吸痰、咽拭子及血清标本进行定量检测。结果本研究以人博卡病毒NS1基因中85bp的特异性保守片段为目标基因建立荧光定量PCR检测方法,质粒标准曲线的相关系数为0.999,灵敏度可达到50拷贝;应用该方法对下呼吸道感染患儿的痰或吸痰、咽拭子和血清标本进行定量检测,在176例痰或吸痰标本中检测到7例阳性标本,阳性率达到3.98%(7/176),另64例咽拭子标本中未检测到阳性标本,总阳性率为2.92%(7/240),240例血清标本均未检测到阳性标本。结论建立的荧光定量PCR方法可以特异、快速、灵敏地对儿童下呼吸道感染的人博卡病毒进行定量检测。痰或吸痰标本较咽拭子或血清标本更适用于人博卡病毒感染的核酸检测。     

门诊和住院患儿呼吸道病毒感染的比较研究

目的 比较门诊和住院患儿呼吸道病毒感染的异同,为临床早期诊断和对症治疗提供依据.方法 采用直接免疫荧光法对7种常见呼吸道病毒进行检测,比较门诊和住院患儿阳性检出率并分析影响因素.结果 门诊患儿呼吸道病毒检测阳性率达47.0%,显著高于住院患儿的23.7%,门诊和住院患儿均以呼吸道合胞病毒(RSV)感染为主,门诊患儿流感病毒(FLU)A、B其次,而住院患儿则为副流感病毒(PIV)Ⅲ型(PIV-Ⅲ)和腺病毒(ADV)次之,PIV-Ⅰ未检出,PIV-Ⅱ仅在住院患儿中检出1例.门诊患儿FLU感染率显著高于住院患儿,RSV感染率则低于住院患儿.结论 直接免疫荧光法检测呼吸道病毒具有较高的敏感性和特异性,与临床特征吻合度高.     

荧光定量PCR与PP65抗原检测在诊断儿童巨细胞病毒活动性感染的比较

目的用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和pp65抗原检测儿童人巨细胞病毒(HCMV)感染,并对其诊断HCMV活动性感染进行比较评估。方法分析924例HCMV血清学检测阳性的儿童的全血HCMV-DNA荧光定量PCR及HCMV-pp65抗原检测结果,与临床诊断的符合程度进行比较。结果全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的一致率为81.17%,其标准误为0.39,Kappa值为0.60;PCR检测HCMV感染的灵敏度为98.4%,特异度为97.3%,Youden指数为0.957,PVP和PVN分别为0.961和0.989;pp65抗原检测用于检测HC-MV感染的灵敏度为59.2%,特异度为100%,Youden指数为0.592,PVP和PVN分别为1.00和0.782。结论全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的结果有较好的一致性,诊断HCMV感染PCR检测的灵敏度较pp65抗原检测的灵敏度要高,而后者的特异度较前者高。二种方法都可用于CMV活动性感染的诊断。     

高通量荧光PCR组合方法鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素的方法建立及评估

目的 建立一种高效、特异的荧光探针熔解曲线方法，用于鉴定16种金黄色葡萄球菌肠毒素。 方法 根据金黄色葡萄球菌肠毒素SEA ~ SEQ特异基因序列设计不同杂交连接探针，建立金黄色葡萄球菌肠毒素检测体系，评估其最低检出限、特异度、可重复性等指标。 与普通PCR方法比较，采用荧光探针熔解曲线方法对本实验室的158株食物中毒金黄色葡萄球菌进行检测，评估新方法的灵敏度和特异度。 结果 荧光探针熔解曲线方法最低检出限为0.80 ~ 2.15 ng/μl，特异度为100.0%，无交叉荧光信号产生，变异系数＜1%。 与普通PCR方法比较，新方法的灵敏度为95.4%，特异度为100.0%，Kappa值为0.88。 结论 荧光探针熔解曲线技术检测金黄色葡萄球菌肠毒素的方法可覆盖金黄色葡萄球菌16种肠毒素，具有快速、准确、特异性高的特点。      

探讨荧光定量PCR法与免疫胶体金法用于骨质疏松症手术住院患者感染监控的诊断价值

目的 本研究旨在探讨荧光定量聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction, PCR）法与免疫胶体金法检测用于骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控的临床效果。方法 选取2020年3月—2023年4月曲靖市第一人民医院收治的180例骨质疏松症进行手术治疗疑似住院感染患者作为研究对象,所有患者均先后接受荧光定量PCR法与免疫胶体金法检测,以细菌培养结果作为金标准,比较两种方法的检出率,评估两种检查方法的诊断效能。结果 荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.67%、89.19%、98.60%、94.29%、97.24%,免疫胶体金法分别为82.78%、43.24%、93.01%、61.54%、86.36%,荧光定量PCR法的检验准确度、灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值均明显高于免疫胶体金法检验,差异有统计学意义（χ2=18.827、17.458、5.567、10.124、11.533,P均<0.05）。结论 荧光定量PCR法检验在骨质疏松症进行手术治疗住院患者感染监控中具有良好的诊断效能。在骨科住院患者感染监控中予以...     

苏州地区急性呼吸道感染患儿呼吸道合胞病毒抗原的检测及其意义

呼吸道合胞病毒(RSV)是引起婴幼儿急性下呼吸道感染的重要病原.我们用直接免疫荧光技术对2001～2006年苏州地区因急性呼吸道感染就诊的门诊及住院患儿13 793例进行鼻咽分泌物的RSV抗原检测,探讨其感染特点,报道如下.