内毒素对脐静脉内皮细胞分泌功能的影响

目的 探讨内毒素对脐静脉内皮细胞分泌功能的影响。方法 选择体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）为研究对象，分别用内毒素，L－左旋精氨酸和硝基左旋精氨酸进行处理，并检测上清液中内皮素－1（ET－1）和一氧化氮（NO）含量。结果 内毒素使ET－1和NO含量增加；NO则使ET－1的含量降低。结论 内毒素能导致人脐静脉内皮细胞损伤，使ET－1和NO的合成和释放增加；NO则抑制ET－1的合成和释放。     

内毒素对血管内皮细胞分泌功能的影响

目的　探讨内毒素对脐静脉内皮细胞分泌功能的影响。方法　选择体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）为研究对象,分别用内毒素、Ｌ左旋精氨酸和硝基左旋精氨酸进行处理,并检测上清液中内皮素１（ＥＴ１）和一氧化氮（ＮＯ） 含量。结果　内毒素使ＥＴ１ 和ＮＯ 含量增加;ＮＯ 则使ＥＴ１的含量降低。结论　内毒素能导致人脐静脉内皮细胞损伤,使ＥＴ１ 和ＮＯ的合成和释放增加;ＮＯ则抑制ＥＴ１ 的合成和释放。     

机械压力对人脐静脉内皮细胞ET-1、NO合成的影响和意义

目的探讨压力增高对血管内皮细胞分泌血管活性物质功能的影响及其在门静脉高压症发病机制中的作用。方法用RT-PCR方法半定量研究人脐静脉内皮细胞ET-1、eNOS、i-NOS mRNA的表达;用硝酸还原酶法检测各组细胞培养液中NO代谢产物NO2-/NO3-的含量,免疫荧光标记激光扫描共聚焦显微镜检测培养细胞的ET-1蛋白表达。结果ET-1和eNOS mR-NA在正常培养的内皮细胞中即有表达,iNOS mRNA则几乎无表达。生理水平压力刺激下各组各待测基因mRNA表达与对照组无显著性差异。超生理范围压力刺激后,ET-1 mRNA有显著性升高。eNOS mRNA在40 mm Hg 24 h后才有显著性差异。iNOS mRNA在不同条件下均无显著变化。在细胞培养液中分别加入细胞外钙螯合剂EGTA、PKC抑制剂后,则见ET-1、eNOS mRNA表达下降。结论压力增高可刺激血管内皮细胞合成ET-1、NO,其作用在转录水平,其作用机制分别与PKC信号通路和细胞外钙浓度有关。门静脉压力增高与血管内皮细胞合成ET-1、NO增多之间存在相互作用。     

内毒素对人脐静脉内皮细胞形态和功能-的影响

目的 研究内毒素对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）形态和功能的影响,探讨内毒素对血管内皮细胞的激活全身性炎症反应、脓毒症、多器官功能衰竭中的作用。方法 以体外培养的人脐静脉内皮细胞为模型,应用倒置显微镜观察内毒素对HUVEC形态的影响;ELISA双抗夹心法测定IL－6的含量;应用免疫荧光染色法,激光共聚焦扫描显微镜观察细胞间粘附分子－1（ICAM－1）的表达。结果 内毒素可明显改变HUVEC的形态,使其发生梭状变形。刺激HUVEC分泌IL－6的最小剂量为1ng/ml,呈剂量依赖性增加,8h达高峰。激光共聚焦扫描显微镜观察结果显示,LPS10ng/ml与HUVEC作用24h后,ICAM－1在核膜的表达都明显增强。结论 内毒素可明显改变HUVEC的形态和功能,对增加血管通透性,促进白细胞粘附,在炎症瀑布反应的触发过程中可能起着重要的始动作用。     

木豆叶对去卵巢大鼠血管内皮细胞功能的影响

目的 观察木豆叶对卵巢切除大鼠血管内皮细胞功能的影响.方法 采用双侧卵巢摘除法诱导骨质疏松症模型,术后3 d开始防治性给药,于第9 w眼球采血,放射免疫法检测内皮素,硝酸还原酶法检测一氧化氮.结果 血浆ET水平升高,血清NO含量降低,与假手术组比较有统计学意义(P<0.01); 龙牡壮骨颗粒组、木豆叶高、中、低剂组都不同程度降低ET水平,增加NO含量,与模型组比较有统计学意义(P<0.01或P<0.05).结论 木豆叶通过调节ET、NO的含量提高去势大鼠血管内皮功能.     

异丙酚对内毒素血症鼠NO、SOD及MDA水平的影响

目的 研究异丙酚对内毒素血症大鼠体内一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的影响。方法 72只Waster雄性大鼠随机分为三组,对照组(C组),内毒素组(L组)和异丙酚 内毒素组(P组)。L组腹腔内注入内毒素10mg·kg-1;P组皮下缓慢注入异丙酚20mg·kg-1·h-1后再注入内毒素10mg·kg-1;C组:腹腔内注入等量生理盐水。L组和P组在注射后30、90、180、360min取静脉血并处死动物(每时间点8只),C组在相应时间点留取3ml静脉血后,于360min处死大鼠留取肺组织。测定各时间点血清和肺组织中MDA和NO浓度及外周红细胞SOD活性。结果 P组用异丙酚后显著性降低内毒素血症大鼠血清和肺组织中NO和MDA浓度,并增加SOD活性,与L组比较差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论 异丙酚可降低内毒素血症鼠NO水平,抑制MDA合成,增加SOD活性,具有一定的抗氧化作用,可改善内毒素血症鼠的功能状态。     

不同浓度尿酸对大鼠肾小球内皮细胞增殖、NO合成及ET-1分泌的影响

目的:通过体外细胞培养,观察不同浓度尿酸(UA)抑制肾小球内皮细胞(glomerular endothelial cells,GECs)增殖及对一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)分泌的影响。方法:取大鼠肾小球内皮细胞(GECs)进行实验,用MTT比色法观察不同浓度UA(0、2、4、8、16mg/dl)作用48 h对GECs增殖的影响。用ELISA方法评价不同浓度UA(0、2、4、8、16mg/dl)作用48 h对GECs培养液中NO、ET-1浓度的影响。结果:UA呈剂量依赖性抑制GECs增殖,浓度为8、16 mg/dl的UA组与对照组(0 mg/dl UA)比较差异均有统计学意义(P<0.05)。UA呈浓度依赖性抑制GECs合成NO,各组UA与对照组比较差异均有统计学差异(P<0.05);尿酸呈浓度依赖性刺激GECs分泌ET-1,其中8 mg/dl和16 mg/dl尿酸浓度组于对照组(0 mg/dl)比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:尿酸可抑制内皮细胞增殖,并引起NO合成减少及ET-1分泌增加,尤其高于生理浓度的尿酸刺激组(≥8 mg/dl)上述作用更加明显,可能是尿酸导致内皮细胞功能障碍的机制。     

黄芪多糖对人脐静脉内皮细胞的增殖及表达 VEGF 的影响

目的：研究黄芪多糖（astragaluspolysacharin,APS）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）周期及血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响。方法：用不同浓度黄芪多糖对 HUVEC 进行干预培养,流式细胞仪检测细胞周期以及细胞凋亡;荧光倒置显微镜检测细胞表达 VEGF 的免疫荧光。结果：MTT 法表明,APS 在一定的范围内（0.1~100 μg/mL）能以剂量依赖方式促进 HUVEC 细胞周期从 G0/G1 期向 G2/M 期和 S 期转变,流式细胞凋亡检测显示 APS 并未增加 HUVEC 凋亡率。细胞免疫荧光染色实验结果表明,APS 促进 VEGF 表达。结论：APS 在一定的浓度范围内（0.1~100 μg/mL）促进 HUVEC 细胞分裂增殖。APS 还能上调 HUVEC 细胞 VEGF 的表达水平,为进一步血管化提供有效的促血管化因子,为治疗缺血性疾病提供新思路。     

蜕皮甾酮对内毒素所致培养脐静脉内皮细胞凋亡和坏死的影响

目的 研究蜕皮甾酮(ecdysterone EDS)对内毒素(LPS)所导致的脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡和坏死的保护作用。方法 采用体外培养HUVECs为模型,LPS作为致伤因素,EDS作为保护因素,应用流式细胞仪和荧光显微镜观测培养HUVECs凋亡和坏死的变化。结果 正常培养的血管内皮细胞凋亡和坏死较少,LPS刺激后细胞凋亡和坏死同时增加,凋亡增加幅度大于坏死,EDS处理后凋亡和坏死同时减少。结论 提示EDS对LPS导致的HUVECs凋亡、坏死有一定的调节作用。     

长托宁对脂多糖引起的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用及其机制

目的 观察长托宁(PHC)对脂多精(LPS)引起的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用,并探讨其机制.方法 将体外培养HUVEC分为5组:空白对照组、LPS组、LPS/PHC( 10μg/L)组、LPS/PHC(25μ/L)组、LPS/PHC(50μg/L)组噻唑蓝(MTT)比色法测定内皮细胞的存活率:化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)浓度;硝酸还原酶法测定一氧化氮(N0)浓度;定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS) mRNA表达;Western blot法检测iNOS蛋白质含量;酶联免疫吸附试验( ELISA)测定核因子-KB (NF-KB)和信号转导和转录激活因子3(STAT3)活性 结果 与空白对照组比较,LPS组细胞存活率[(60.31±8.76)％比(100.00±0.00)％]明显下降、LDH含量[(326±52) μmol/L比(125±25) μmol/L]和NO浓度[(55.49±10.16) μmol/L比(12.13±11.02) μmol/L]明显增加(P＜0.01);而PHC可以逆转上述效应(P＜0.05).同时PHC可以降低LPS导致的内皮细胞iNOS转录和蛋白质表达水平,下调NF-KB和STAT3的表达(P＜0.05) 结论 长托宁可以减轻LPS对内皮细胞的损伤,其作用可能是通过抑制NF-KB和STAT3信号系统,减少NO生成实现的.     

右美托咪定对脂多糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的 评价右美托咪定对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的血管内皮细胞凋亡的影响.方法 参照随机数字表法将人脐静脉内皮细胞HUVEC-12随机分为4组(每组20孔):正常对照组(C组)、右美托咪定组(D组)、LPS组(L 组)、LPS+右美托咪定组(L+D组),培养24 h后:四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)和流式细胞术分别检测细胞活力和细胞凋亡率,黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法(thiobarbituric acid,TBA)测定各组细胞超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)的活性和丙二醛(malonaldehyde,MDA)的含量,Western blot法检测细胞多聚腺苷酸二磷酸-1(Poly-ADP Ribosy polymerase-1,PARP-1)蛋白裂解片段的表达.结果 L组和L+D组细胞活力分别是0.95±0.08和1.08±0.10(P＜0.05),与C组比较,分别降低36％和27％;L组和L+D组细胞凋亡率分别是(14.7±1.8)％和(8.8±1.1)％(P＜0.05),分别是C组的2.6倍和1.1倍;L组和L+D组细胞SOD活性分别是(99±6) U/mg和(182±9) U/mg(P＜0.05),与C组比较,分别降低53％和14％;L组和L+D组细胞MDA含量分别是(29.9±1.8) nmol/mg和(19.3±2.1) nmol/mg(P＜0.05),分别是C组的1.6倍和79％;L组和L+D组细胞内PARP-1片段(相对分子质量89×103)表达分别是1.152±0.095和0.564±0.045 (P＜0.05),分别是C组的4.8倍和1.8倍;D组上述指标的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪定可有效减少LPS诱导下脐静脉内皮细胞的凋亡,其机制可能与抑制氧化应激、下调PARP-1裂解片段的表达有关.     

2-脱氧-D-葡萄糖对人脐静脉内皮细胞的作用

目的观察2-脱氧-D-葡萄糖对人脐静脉内皮细胞增殖、迁移、管腔形成及细胞凋亡的影响,试图寻找治疗血管瘤的新药。方法用四甲基偶氮唑盐比色法、倒置显微镜下形态学观察、体外划痕实验的方法,观察2-脱氧-D-葡萄糖对人脐静脉内皮细增殖、迁移的作用;用成管法,检测2-DG对血管形成的影响;用流式细胞仪检测2-DG对血管内皮的凋亡影响、结果2-DG作用于人脐静脉内皮细胞后,对其增殖,迁移和成管能力有明显抑制作用,大大地增加细胞的凋亡率,且有显著剂量和时间依赖性．结论2-DG对HUVEC增殖、迁移和成管有显著的抑制作用,且能促使细胞凋亡。     

马兜铃酸对人脐静脉内皮细胞的作用

目的探讨马兜铃酸对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的作用。方法用马兜铃酸钠盐（AA-Na）干预体外培养原代HUVEC。用四唑盐比色法及乳酸脱氢酶释放法分别检测细胞增殖反应及细胞毒性作用。RT-PCR及酶联免疫吸附法分别检测转化生长因子β1 （TGF-β1）、纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）及血小板反应蛋白1（TSP-1）的mRNA表达及上清液含量。结果10、20、40及80 mg/L浓度的AA-Na能显著抑制HUVEC增殖及有明显细胞毒效应（P〈0.01）。与对照组相比,5 mg/L的AA-Na显著上调了HUVEC的TGF-β1、PAI-1及TSP-1 mRNA和蛋白表达（P〈0.05）。结论AA-Na可上调HUVEC的TGF-β1、PAI-1及TSP-1表达,此作用可能在慢性马兜铃酸肾病小动脉管壁病变的发病中起一定作用。     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞增殖和细胞周期的影响及叶酸的拮抗作用

目的：本实验通过研究不同浓度的同型半胱氨酸（homocysteine,HCY）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs）增殖和细胞周期的影响,分析可能的细胞损伤机制,探讨 HCY对细胞增殖影响的相关信号通路。同时对叶酸（folic acid,FA）对 HCY 的拮抗作用进行论证,为临床治疗提供理论依据。方法正常人脐静脉内皮细胞体外培养,随机分成6组：HCY低剂量组（1μmol/L）,HCY 中剂量组（10μmol/L）,HCY 高剂量组（100μmol/L）,实验组（10μmol/L HCY＋100μmol/L叶酸）,叶酸组（100μmol/L）及阴性对照组。以 CCK-8法绘制相关组细胞生长曲线;用碘化丙啶单染法检测各组相关的细胞周期;Western-blotting检查周期相关蛋白表达。结果①CCK-8法绘制生长曲线显示,10μm HCY 吸光度明显抑制 HUVECs 的生长,而加入100μM FA后能改善这种抑制作用。②细胞周期分析显示：HCY 作用24 h 后,G0-G1期细胞百分比有明显增加,而 FA 能改善这种作用,表明 HCY 可能通过影响细胞周期的 R 点,使细胞停留在 G0-G1期;高浓度 HCY明显抑制了 S期,但没有明显规律;G2-M期随 HCY 浓度梯度增加,细胞百分比减少,而 FA能改善这种抑制作用。说明 HCY可能也影响了细胞的 M期的分裂过程。③周期相关蛋白表达结果显示 HCY 显著抑制 CDK 4/6的表达量,使细胞阻滞在 G0-G1期。结论 HCY 可通过对细胞周期的抑制作用来抑制 HUVECs的增殖,而叶酸对这种抑制作用具有拮抗作用。HCY 能破坏细胞DNA,使细胞被阻滞在 G1期,同时进入 S、M期的细胞减少。     

丙泊酚对过氧化氢诱导入脐静脉内皮细胞超氧化物歧化酶1表达的影响

目的 探讨丙泊酚对过氧化氢(H2O2)诱导入脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase-1,SOD1)表达的影响.方法 将体外培养24孔板中的HUVEC分为3部分:第1部分(分4组,每组6例):①正...     

利多卡因抑制内皮细胞粘附因子表达进而抑制肝癌细胞粘附脐带静脉内皮细胞

【摘要】 目的 探讨利多卡因对血管内皮细胞粘附因子表达的影响。方法 采用不同浓度利多卡因预处理脐带静脉内皮细胞（HUVECs）30 min后,加入肿瘤坏死因子α（TNFα）进行刺激。通过实时荧光定量聚合酶链反应检测选择素E（CD62E）、血管细胞粘附分子-1（VCAM-1）和细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达量,蛋白免疫印迹分析NF-Kappa B（NF-κB）通路蛋白的改变,并通过细胞粘附实验评估利多卡因预处理对肝癌细胞（HepG2）粘附于HUVECs的影响。结果 利多卡因预处理可以明显抑制p65并抑制HepG2粘附于HUVECs。qRT-PCR结果表明利多卡因预处理可明显抑制TNF-α刺激后的CD62E、VCAM-1和ICAM-1表达水平的增高。结论 利多卡因可能通过抑制NF-κB通路进而抑制细胞粘附因子表达并抑制结肝癌细胞粘附于血管内皮细胞。     

Differential release of matrix metalloproteinase-9 and nitric oxide following infusion of endotoxin to human volunteers

BACKGROUND: Roughly 400.000 cases of sepsis occur every year in the United States only and this is associated with a very high mortality. Bacterial lipopolysaccharide (LPS) triggers systemic inflammatory reactions in sepsis. However, down-stream cellular cascade initiated by LPS is still being elucidated. Nitric oxide (NO) and matrix metalloproteinases-2 and -9 (MMP-2 and MMP-9) are known to be induced by LPS. We have investigated the release of NO, MMP-2 and MMP-9 following infusion of LPS to volunteers. METHODS: IPS (2 ng kg-1) was infused to 10 healthy volunteers. Before the experiments were started the subjects had an intravenous catheters placed. An electrocardiogram was also placed and monitored constantly. Body temperature was measured by ear thermometer every 10 min Venous blood was collected and cell-free plasma assayed for the presence of MMP-2 and MMP-9 using zymography and NO using HPLC assay for NO metabolites, nitrite and nitrate. RESULTS: The administration of LPS resulted in increased body temperature and tachycardia. Time-dependent release of MMP-9(30 fold increase from the baseline) peaking at 2 h following infusion of LPS was observed. LPS did not significantly modify the activity of MMP-2 (P > 0.05). Infusion of LPS did not significantly change the levels of nitrite and nitrate (from 60 +/- 11 to 67 +/- 10 micro m, P > 0.05). CONCLUSION: The release of MMP-9, but not MMP-2 or NO, is a sensitive index of endotoxaemia in humans. MMP-9 release may contribute to the pathogenesis of sepsis via its pro-inflammatory effects on the vasculature.