上调Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜间皮细胞转分化的影响

目的 探讨上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠模型腹膜间皮细胞转分化的影响，为进一步研究防止腹膜纤维化的措施提供依据。 方法 将24只体重180~200 g SD雄性大鼠随机分为4组:A组(6只):正常对照组；B组(6只):腹膜纤维化模型组，每日按100 ml/kg腹腔注射4.25%透析液，并于造模后第8、10、12、22、24、26天按0.6 mg/kg腹腔注射脂多糖(LPS)；C组(6只):空白载体组，在建立模型的第1、14天转染空白载体和pEF purop-Tet-on质粒；D组(6只):Smad7转染组，在建立模型第1、14天转染Smad7和pEF purop-Tet-on质粒。各组均在每日饮水中加入强力霉素(200 mg/L)诱导基因表达。所有动物于实验第28天杀检，取脏层腹膜组织行光镜及电镜检查。用RT-PCR、间接免疫荧光和Western印迹方法检测α-SMA、E-钙黏蛋白(cadherin)、Smad7、磷酸化(P)-Smad2/3 mRNA和蛋白表达。 结果 与正常对照组比较，腹膜纤维化模型组和空白载体组p-Smad2/3蛋白水平显著升高，α-SMA mRNA和蛋白表达上调，但E-cadherin mRNA和蛋白水平明显下调。电镜结果显示，腹膜纤维化模型组和空白载体组腹膜间皮细胞微绒毛脱落，基底膜断裂，并向间皮下组织迁徙，胞浆中有密体、密斑和肌丝出现。与上述2组比较，Smad7基因转染组Smad7蛋白表达明显增加，p-Smad2/3蛋白水平明显下调，α-SMA mRNA和蛋白水平也明显降低，而E-cadherin mRNA和蛋白水平无明显变化。电镜结果显示，Smad7基因转染组腹膜间皮细胞微绒毛明显增多，细胞连接和基底膜趋于完整。 结论 基因转染上调Smad7表达可通过部分抑制TGF-β受体调控信号通路(Smad2/3)，抑制腹膜间皮细胞向肌成纤维细胞的转分化。     

上调Smad7表达对腹膜纤维化大鼠腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子表达的影响

目的 研究基因转染上调Smad7表达对大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子表达的影响。方法 48只SD大鼠随机分为（1）正常对照组（n=12）；（2）模型组（n=12）：每日给予腹腔注射4．25％葡萄糖腹膜透析液（100ml／kg），同时于第8、10、12、22、24、26天腹腔注射脂多糖（LPS，0．6mg／kg）；（3）空白载体对照组（n=12）：仅转入不含Smad7的Tet-on／vector空白载体；（4）Smad7基因转染组（n=12）：在造模后第0、14天分别转染Smad7。第28天时杀检，分别应用免疫荧光染色及RT-PCR检测脏层腹膜泛白细胞标志性抗原（OX-1）、单核巨噬细胞抗原（ED-1）、白介素1（IL-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）蛋白和mRNA的表达水平。Smad7基因转染采用超声介导的微泡基因转染技术。结果 与模型组及空白载体转染组比较．Smad7转基因组脏层腹膜OX-1、ED-1阳性细胞以及IL-1、TNF-α表达水平有明显的减少，但均高于正常对照组。结论 高糖腹膜透析液联合LPS可刺激腹膜炎症细胞的浸润及腹膜间皮细胞IL-1、TNF-α表达上调。基因转染上调Smad7表达可明显抑制大鼠腹膜纤维化模型腹膜炎症细胞浸润及促炎症因子的表达上调。     

超声介导上调Smad7表达对腹膜炎大鼠腹膜炎症和功能的影响

目的 通过基因转染的方法上调Smad7在大鼠腹膜组织的表达，旨在探讨Smad7的高表达对大鼠腹膜炎模型的炎症反应和腹膜功能的影响。方法 Ⅱ级雄性SD大鼠18只随机分入正常组、对照组和模型组，后两组分别给予空载体和Smad7质粒转染，72 h后腹腔内注射大肠杆菌(E.Coli, ATCC 25922) 10⁹ CFU/kg体重诱导腹膜炎，在48 h后做腹膜功能试验并杀检大鼠。检测腹水及血白细胞计数、腹水细菌菌落计数。间接免疫荧光检测Smad7和CD45在腹膜组织的表达。Western印迹检测腹膜组织Smad7蛋白的表达。应用SPSS 11.0统计软件对腹膜功能与腹水白细胞数和细菌菌落数进行Pearson多元线性相关分析。 结果 与空载体组比较，Smad7转基因组大鼠腹膜组织Smad7的表达、腹水白细胞计数和腹膜组织浸润的白细胞数均显著增加，但腹水细菌菌落计数显著降低、腹膜功能显著恶化。相关分析显示腹膜功能的恶化与腹水白细胞计数相关而与腹水细菌菌落计数无相关。结论 Smad7在大鼠腹膜组织的高表达增强了腹膜局部的炎症反应，而过强的炎症反应导致腹膜功能进一步受损。     

RhoA-Rock信号通路在转化生长因子β1诱导大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的　探讨RhoA-Rock信号通路在转化生长因子β1（TGF-β1）诱导大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）转分化中的作用。 方法　体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24 h后,采用随机数字表法随机分为以下4组：正常对照组、TGF-β1（10 μg/L）刺激组、TGF-β1（10 μg/L）＋Y-27632（Rock特异性抑制剂,10 μmol/L）组（Y-27632预处理2 h）、Y-27632（10 μmol/L）组。用TGF-β1（10 μg/L）刺激RPMC不同时间,观察α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）,E钙黏素（E-cadherin）、Ⅰ型胶原（ColⅠ）的表达。RT-PCR法检测E-cadherin、α-SMA 和ColⅠmRNA表达。Western印迹法检测RhoA（包括总RhoA及活化的RhoA）、E-cadherin、α-SMA、ColⅠ和波形蛋白（vimentin）表达。活化的RhoA由膜蛋白提取试剂盒提取。 结果 （1）TGF-β1（10 μg/L）刺激RPMC能诱导RhoA活化,于10 min开始出现活性升高,为对照组的（2.57±0.52）倍（P < 0.05）;1 h达高峰,为对照组的（4.35±0.41）倍（P < 0.05）。（2）TGF-β1（10 μg/L）刺激RPMC能导致E-cadherin mRNA和蛋白表达下调,α-SMA、ColⅠmRNA和蛋白表达上调,呈时间依赖性。（3）Rock特异性抑制剂Y-27632能显著下调α-SMA、ColⅠmRNA的表达,较TGF-β1刺激组各降低了53.8%和55.7%（均P < 0.05）,并且能下调α-SMA、ColⅠ和vimentin蛋白的表达,较TGF-β1刺激组分别降低了42.6%、60.1%和58.1%（均P < 0.05）,但不能上调E-cadherin mRNA和蛋白的表达。 结论　TGF-β1可通过RhoA-Rock信号通路介导大鼠腹膜间皮细胞转分化,抑制该通路可作为防治腹膜纤维化的潜在靶点。     

Smad与肾纤维化

转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是介导肾小球硬化和肾间质纤维化关键的细胞因子，其作用包括趋化和活化炎性细胞，介导肾小管上皮细胞向间充质细胞转分化，以及刺激细胞外基质蛋白的合成及降低基质金属蛋白酶的活性和俄增加蛋白酶抑制剂的合成来促进细胞外基质的沉积。由于TGF-β在肾纤维化中的核心作用，TGF-β信号传导机制引起了人们极大的兴趣。     

姜黄素调控TGF-β1/Smad信号通路改善大鼠腹膜透析相关腹膜纤维化及机制研究

目的 探讨姜黄素对大鼠腹膜透析(peritoneal dialysis, PD)相关腹膜纤维化(peritoneal fibrosis, PF)的影响及可能作用机制。方法 随机选取10只雄性Wistar大鼠作为正常组(生理盐水),剩余大鼠随机分为模型组(生理盐水)及姜黄素低(15 mg·kg^-1·d^-1)、中(30 mg·kg^-1·d^-1)、高(60 mg·kg^-1·d^-1)剂量组,每组各10只,给药同时腹腔内注射4.25%葡萄糖PD溶液(100 mL/kg),连续30 d。4 h腹膜平衡试验评估腹膜功能;测量腹膜厚度;腹膜组织行HE和Masson染色观察腹膜病理变化;ELISA法检测腹膜组织肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)及白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)水平;蛋白质印迹法检测腹膜组织中转化生长因子-β1(transforming...     

高糖及洛沙坦对人腹膜间皮细胞Smad表达的影响

目的 探讨腹膜纤维化机制以及可能的防治措施。方法从网膜获取腹膜间皮细胞,分别用不同浓度葡萄糖或甘露醇的培养液或同时加入4.25％,葡萄糖和含洛沙坦(losartan)的培养液刺激,检测转化生长因子β1(TGF-β1)及Smad的表达。结果 (1)高糖上调人腹膜间皮细胞Smad 2和Smad 4基因表达;Smad 3表达无变化;(2)高渗对Smad家族和TGF-β1的表达没有影响;(3)洛沙坦抑制Smad 2基因的表达,但对蛋白质无抑制作用;(4)高糖刺激问皮细胞TGF-β1的表达,其表达量在加入洛沙坦后明显下降。结论高糖刺激了TGF-β1和Smad 2、Smad 4的表达,这可能是细胞外基质堆积、腹膜纤维化的机制之一。洛沙坦可通过下调TGF-β1,抑制Smad 2基因表达。     

内皮-间充质转分化在腹膜透析相关腹膜纤维化中的研究进展

腹膜透析是终末期肾脏病患者的肾脏替代治疗之一。腹膜透析相关腹膜纤维化是患者退出腹膜透析最重要的原因。既往研究认为腹膜纤维化的主要机制是上皮-间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)。近年来,研究发现内皮-间充质转分化(endothelial-mesenchymal transition, EndMT)可能是腹膜纤维化的机制之一,高糖、炎症、氧化应激等均可影响腹膜组织中EndMT的发生发展。因此,本文将综述EndMT在腹膜透析相关腹膜纤维化的研究进展。     

Smad 2,3,6,7蛋白在实验性肾间质纤维化模型中的定位和表达变化

目的 研究Smads蛋白在实验性肾纤维化模型中的定位和表达变化。方法 36只Wistar大鼠随机分为正常大鼠组，假手术组和单侧输尿管梗阻组3组，分别于术后3d,7d,14d,21d处死大鼠。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测TGF-β1mRNA表达水平，用免疫组织化学和Western杂交分别检测Smad2,Smad3,Smad6及Smad7蛋白的定位和表达。纤维化程度通过测定肾组织羟脯氨酸含量来判断。结果 与对照组相比，TGF-β1mRNA于第3天起表达即见进行性增高，并伴有肾组织羟脯氨酸含量的明显增高。Smad2,3蛋白主要在肾小管表达，肾小球偶见；Smad6，7蛋白主要在肾小球和肾小管上皮细胞内均有表达，输尿管梗阻后，Smad2,3蛋白表达逐渐增加，而Ｓmad6,7蛋白却逐渐减少。结论　ＴＧＦ－β1/Smad信号通路参与了肾间质纤维化进程，抗Smad蛋白表达下降可能是该模型TGF-β1致肾纤维化作用的主要原因。     

JNK对转化生长因子β1所致大鼠腹膜间皮细胞转分化的调控作用

目的 探讨c-Jun 氨基末端激酶(JNK)在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）转分化中的调控作用。 方法 采用腹腔注射胰蛋白酶法分离培养RPMC，取第2代腹腔间皮细胞用于实验研究。观察TGF-β1对α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)、E钙黏蛋白(E-cadherin)以及磷酸化(p)JNK表达的影响；应用JNK特异性抑制剂SP600125预处理细胞后，观察其对TGF-β1所致上述作用的影响。RT-PCR法检测α-SMA、ColⅠ及E-cadherin mRNA表达；Western印迹法检测α-SMA、ColⅠ、E-cadherin及p-JNK蛋白表达；间接免疫荧光检测α-SMA在细胞内的表达和分布。 结果 TGF-β1刺激RPMC能导致α-SMA、ColⅠ蛋白表达上调，E-cadherin蛋白表达下调，呈时间依赖性。TGF-β1刺激RPMC 5 min出现p-JNK表达上调，10 min达高峰(P < 0.01)。SP600125能够抑制JNK的磷酸化(P < 0.05)，也能抑制TGF-β1诱导的α-SMA、ColⅠmRNA和蛋白的高表达以及E-cadherin表达的下调 (均P < 0.05)。间接免疫荧光结果显示，TGF-β1刺激RPMC 48 h，胞内α-SMA表达明显增多，SP600125能有效抑制其高表达。 结论 JNK在TGF-β1诱导大鼠腹膜间皮细胞转分化中具有重要的调控作用，JNK特异性抑制剂的应用可能为临床防治腹膜纤维化提供新的途径。     

Effect of suramin on the epithelial-mesenchymal transition in peritoneal mesothelial cells induced by high concentration glucose

Objective To explore the effect of suramin on the epithelial-mesenchymal transition (EMT) and the excretion of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in peritoneal mesothelial cells (PMCs) induced by high concentrations of glucose solution (GS). Methods Cultured PMCs were divided into three groups: (1) normal control group; (2) GS-treated group: cells were treated with 1.5%, 2.5%, 4.25% GS for 12 h, 24 h, 48 h, respectively; (3) Suramin-treated group: PMCs cultured with 4.25% GS were exposed to different doses of suramin (25, 50, 100 μmol/L) for 48 h. Expression levels of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin were detected by Western blotting and the concentration of TGF-β1 in the culture supernatant was determined by ELISA. Results Compared with normal control group, GS-treated PMCs exhibited a time-dependent increase in the expression of α-SMA, and decrease in the expression of E-cadherin. GS also stimulated PMCs to secrete TGF-β1. In the presence of suramin, GS-induced α-SMA expression and TGF-β1 production were reduced, E-cadherin expression was increased. Conclusions Suramin can inhibit high glucose-induced EMT of PMCs by down-regulating the expression of TGF-β1. Suramin may be a novel therapeutic agent for the treatment of peritoneal fibrosis.     

肝细胞生长因子下调Smurf2拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化

目的 通过观察肝细胞生长因子( HGF)对正常大鼠肾上皮细胞(NRK-52E)转化生长因子β1( TGF-β1)诱导的Smad泛素化调节因子2(Smurf2)表达的影响,探讨HGF拮抗肾小管上皮细胞-间充质细胞转分化(EMT)的分子机制.方法 以NRK-52E细胞为研究对象,给予TGF-β1(5μg/L)处理0～24 h;或部分细胞经HGF(20 μg/L)预处理30 min后,再予TGF-β1(5μg/L)处理1h或48 h;另外部分细胞予以Smurf2质粒表达载体或Smurf2 siRNA 转染24 h后,再予HGF处理24 h.应用Western印迹及间接免疫荧光染色方法检测Smurf2、SnoN、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白(FN)的表达.结果 与对照组相比,TGF-β1处理后迅速上调NRK-52E细胞中Smurf2蛋白表达(P＜0.01);同时显著诱导FN和α-SMA蛋白表达,并下调E-cadherin表达.而予HGF预处理细胞后,可快速抑制TGF-β1诱导的Smurf2表达上调(P＜0.01);并逆转TGF-β1介导的SnoN(P＜0.01)、E-cadherin(P＜0.05)、α-SMA(P＜0.01)和FN(P＜0.01)表达变化.此外,在NRK-52E细胞中过表达Smurf2蛋白可部分抑制HGF诱导的SnoN蛋白上调;而抑制Smurf2表达则可进一步促进HGF诱导的SnoN蛋白表达.结论 在肾小管上皮细胞中,HGF可能通过下调Smurf2表达抑制SnoN蛋白发生泛素-蛋白酶体依赖性降解,进而拮抗TGF-β1介导EMT形成.     

PI3K/Akt signaling regulates epithelial-mesenchymal transition of peritoneal mesothelial cells in peritoneal dialysis

Objective To investigate the role of PI3K/Akt signaling in the regulation of epithelial-mesenchymal transition (EMT) of peritoneal mesothelial cells (PMCs) in peritoneal dialysis in vitro and in vivo. Methods The level of Phosphorylated serine/threonine kinase Akt and the expression of EMT associated gene and protein, including ZO-1, Vimentin and FN, were measured in mice EMT model. In vitro study, phosphorylation level and nuclear translocation of Akt, ZO - 1 and Vimentin expression induced by TGF - β1 in human peritoneal mesothelial cells (HPMCs) were also observed. Moreover, HPMCs were pre-treated by one of PI3K/Akt inhibitor, LY294002, or transfected with dominant-negative Akt plasmid to inhibit PI3K/Akt signaling, then analyzed its effect on Zo-1 and Vimentin expression induced by TGF-β1. Results Compared with the control, thickened parietal peritoneum and remarkable decrease in mRNA and protein of the epithelial marker ZO-1, and notable increased in the expression of mesenchymal markers Vimentin and FN were observed in PD mice (all P＜0.01). Moreover, the phosphorylation of Akt also significantly increased under above condition (P＜ 0.01). In vitro study, with the stimulation of TGF-β1, the expression of Zo-1 was down-regulated, while the expression of Vimentin increased (all P＜0.01). In addition, TGF-β1 remarkably increased pAkt in HPMCs (all P＜0.01) in dose-dependent. However, LY294002 and DN-Akt dramatically inhibited the vimentin expression in HPMCs induced by TGF-β1 after inhibition of pAkt. On the other hand, the expression of ZO - 1 also was restored (P＜0.01). Conclusion PI3K/Akt signaling is involved in EMT of peritoneal mesothelial cells in peritoneal dialysis, and may be a new target for the prevention and treatment of peritoneal fibrosis during PD.     

Notch通路在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的活化

目的 观察Notch通路在高浓度葡萄糖透析液所致大鼠腹膜纤维化模型中的变化并探讨其可能机制。 方法 给予SD雄性大鼠每日腹腔注射高浓度葡萄糖腹膜透析液，于实验后2周和4周杀检。取壁层腹膜组织行光镜检查；免疫印迹检测转化生长因子β1 （TGF-β1）、 E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和I型胶原蛋白（Col I）的表达；RT-PCR检测Notch通路的下游靶基因Hes-1的表达；免疫印迹和RT-PCR检测Notch配体Jagged-1和Notch通路的负性调节因子Numb的表达。 结果 HE染色显示模型组腹膜明显增厚，间皮细胞减少；Masson染色显示壁层腹膜中可见明显的胶原沉积。与健康对照组相比，模型组的TGF-β1、α-SMA 和 Col I的表达增加而E-cadherin的表达下降（均P < 0.01）。4周模型组与对照组相比Jagged-1表达明显增加（P < 0.05），同时Hes-1的表达亦明显增加（P < 0.01），而Notch通路的负性调节因子Numb的表达下降（P < 0.01）。 结论 在高浓度葡萄糖腹膜透析液所致的大鼠腹膜纤维化模型中有Notch通路的活化，而该通路的活化可能与Notch通路的负性调节因子Numb表达的下调有关。高表达Notch通路的负性调节因子，如Numb，可能是治疗腹膜透析患者腹膜纤维化的新途径。     

Par-3蛋白在转化生长因子?茁1介导的大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的 观察转化生长因子（TGF)β1诱导的正常大鼠近端肾小管上皮细胞（NRK52E）转分化（EMT）过程中细胞极性蛋白Par-3的表达及上调Par-3蛋白表达对TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程的影响。 方法 应用TGF-β1 (10 μg/L)刺激NRK52E细胞，采用RT-PCR、Western印迹和免疫荧光方法分别检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Par-3 mRNA和蛋白的表达；应用Lipofectmine 2000将pKH3-HA-Par-3质粒瞬时转染NEK52E细胞，采用Western印迹观察上调表达Par-3对上述指标的影响。 结果 TGF-β1刺激后，NRK52E细胞α-SMA蛋白和mRNA水平上调，E-cadherin蛋白和mRNA的表达下调；Par-3蛋白表达呈时间依赖模式下调，72 h TGF-β1刺激组与对照组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）。但Par-3 mRNA水平在各时间点差异均无统计学意义（P > 0.05）。脂质体转染外源性质粒pKH3-HA-Par-3上调表达Par-3可显著抑制TGF-β1诱导NRK52E细胞α-SMA蛋白的上调表达；逆转E-cadherin蛋白的下调表达。 结论 在TGF-β1诱导NRK52E细胞转分化进程中细胞极性Par-3蛋白表达下调，基因转染上调表达Par-3可部分减轻EMT的程度，提示Par-3蛋白在TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化和肾脏纤维化中可发挥保护性作用。     

Role and mechanism of microRNA-15b in the regulation of epithelial-mesenchymal transition of peritoneal mesothelial cells

Objective To explore the role and mechanism of microRNA-15b in the regulation of epithelial-mesenchymal transition (EMT) of human peritoneal mesothelial cells (HPMCs). Methods PCR assay was used to determine the expression of microRNA-15b in the HMrSV5 induced by 138 mmol/L high glucose for 24 h. MicroRNA-15b mimic or inhibitor was transfected into human peritoneal mesothelial cells (HMrSV5) to over-express or down-regulate microRNA-15b. The cells were then incubated with 138 mmol/L high glucose for 24 h, and the expressions of E-cadherin(E-Cad), Vimentin(VIM), Fibronectin(FN) and Smad7 were detected by real-time PCR and Western blotting respectively. Results microRNA-15b in the HMrSV5 cells was over-expressed and down-regulated. Increased level of microRNA-15b was obtained in HMrSV5 cells treated with high glucose. In vitro, high glucose led to the up-regulation of vimentin as well as fibronectin and the down-regulation of E-cadherin in HMrSV5 cells (all P＜0.05), which indicated EMT and fibrosis. Suppression of microRNA-15b by transfection with microRNA-15b inhibitor partially reversed the EMT and fibrosis changes (P＜0.05), while over-expression of microRNA-15b by transfection with microRNA-15b mimic obviously enhanced the EMT and fibrosis changes (P＜0.05). Conclusions MicroRNA-15b mediates high glucose induced EMT in human peritoneal mesothelial cells by the inhibition of Smad7 possibly. MicroRNA-15b maybe a new target for the prevention and treatment of peritoneal fibrosis during peritoneal dialysis (PD).     

Effects of silibinin on expression of integrin linked kinase,transforming growth factor β1 and α-smooth muscle actin in rat peritoneal mesothelial cells induced by high glucose

Objective To observe the effect of silibinin on the expression of integrin linked kinase (ILK), transforming growth factor β1 (TGF-β1) and α-smooth muscle actin (α-SMA) in rat peritoneal mesothelial cells (RPMCs) induced by high glucose. Methods RPMCs were isolated, cultured and passaged by trypsin, then identified. The second generation of cultured RPMCs were used in the experiment. RPMCs were divided into normal control group, high glucose(1.5%, 2.5%, 4.25%) for 24 hours, high glucose (2.5%) for 12, 24, 48, 72 hours, high glucose (2.5%) for 24 hours after silibinin (5, 10, 20 mg/L) preincubate for 2 hours. ILK and α-SMA mRNA were detected by real-time PCR. ILK protein was detected by Western blotting. TGF-β1 protein in supernatants was detected by ELISA. Results Compared with the control group, the expresssion of ILK, TGF-β1 and α-SAM was significantly increased in groups stimulated by high glucose (all P＜0.05). Silibinin could significantly decrease the expression of ILK, TGF-β1 and α-SMA induced by high glucose (all P＜0.05). Conclusions High glucose can up-regulate the expression of ILK, TGF-β1 and α-SMA. Silibinin can reverse these changes.     

腹膜透析液诱导结缔组织生长因子在大鼠腹膜间皮细胞表达

目的 研究应用不同腹膜透析液对大鼠腹膜间皮细胞(RPMCs)结缔组织生长因子(CTGF)合成的影响。方法 分离培养的RPMC分为6组，分别以不同腹膜透析液[1.5% Dextrose(低糖组)、2.5% Dextrose(中糖组)、4.25% Dextrose(高糖组)、7.5% Icodextrin(糊精组) ]进行刺激培养，而无血清DMEM为阴性对照(对照组)， TGF-β1(2.5 ng/ml)为阳性对照(阳性对照组)。刺激培养24 h后，RT-PCR法检测RPMCs的CTGF mRNA、胶原Ⅰ mRNA、α-SMA mRNA表达。Western印迹法检测RPMCs的CTGF、胶原Ⅰ、α-SMA蛋白表达以及培养上清中的CTGF蛋白表达。结果 各组均见CTGF mRNA表达，高糖组、阳性对照组CTGF mRNA 表达水平显著高于中糖组、低糖组及对照组(P < 0.05)；中糖组与糊精组CTGF mRNA 表达亦显著上调(P < 0.05)。各组细胞均检测到CTGF蛋白质表达，为相对分子质量38 000及 25 000的2种亚型，与RT-PCR结果一致。高糖组、阳性对照组CTGF 蛋白表达水平显著高于糊精组、中糖组、低糖组及对照组(P < 0.05)。RPMCs培养上清液中检测出CTGF 38 000亚型的表达，其表达强弱趋势与CTGF在细胞中表达一致。高糖组、阳性对照组胶原I mRNA、蛋白质的表达水平显著高于对照组(P < 0.05)，其余各组间无显著性差异。各组α-SMA mRNA、蛋白质表达未见显著性差异(P > 0.05)。结论 正常培养的RPMCs表达低水平的CTGF。腹膜透析液、尤其是高浓度葡萄糖透析液，能明显上调CTGF表达的水平，这可能是导致长期腹膜透析过程中腹膜结构改变的机制之一。糊精腹膜透析液生物相容性可能优于高浓度葡萄糖透析液。