特异性寡核苷酸探针检测Graves病患者HLA—DR基因

特异性寡核苷酸探针检测Ｇｒａｖｅｓ病患者ＨＬＡ－ＤＲ基因罗国春刘述文陈香梅我们采用ＰＣＲ／ＳＳＯ技术检测４１例Ｇｒａｖｅｓ病患者ＨＬＡ－ＤＲ基因，并与２５５例正常人比较，以分析ＨＬＡ－ＤＲ与Ｇｒａｖｅｓ病的关系。一、对象和方法１．对象：Ｇｒａｖｅｓ病...     

癌症诊断芯片的癌-睾丸基因的寡核苷酸探针的设计

目的 设计用于专门进行肿瘤内睾丸特定基因--癌-睾丸(cancer-testis, CT)基因转录分析的微阵列的探针系列,以阐明CT基因在肿瘤发生过程中的作用并检测它们在肿瘤细胞或肿瘤样本中的表达.方法 通过二个探针设计工具,IDT和MEDIANTE的结合使用,设计出CT基因的寡核苷酸探针.同时,应用"Oligonucleotide Properties Calculator寡核苷酸性质计算软件"和"OligoAnalyzer 3.0"检测探针的解链温度(Tm)、GC含量和可能形成的次级结构等特性.结果 为CT基因家族的44个成员成功设计了113个50 mers 左右的寡核苷酸探针.其Tm值分布在63.2 ℃～67.5 ℃之间, GC百分含量为35.3%～51.5%. 结论 结合IDT和MEDIANTE两个探针设计软件,能有效的进行CT基因寡核苷酸探针的设计.     

特异性寡核苷酸探针反向杂交在mtDNA点突变检测中的应用研究

目的：建立一种快捷、有效的mtDNA点突变检测体系。方法：线粒体病患者15例，根据临床表现分为3组，线粒体脑肌病伴高乳酸血症、卒中样发作（MELAS）组7例，单纯型线粒体肌病组4例，慢性进行性眼外肌麻痹（CPEO）组4例。用苯酚／氯仿法提取外周全血DNA，采用PCR／ASO反向杂交技术。用PCR扩增mtDNA的突变“热区”——tRNA^Leu（UUR）基因，在下游引物的5’端标记上地高辛，与点在尼龙膜上的5对寡核苷酸（AS0）探针：A3243／A3243G（野生型／突变型）、T3271／T3271C、G3460／G3460A、T3291／T3291C、C3256／C3256T进行反向杂交，根据杂交显色信号，确定有无突变。同时利用PCR／RFLP方法加以验证。结果：MELAS组中有A3243G点突变3例，但没有其他4个位点的突变。单纯型线粒体肌病组和CPEO组均未发现以上5个位点的突变。PCR/ASO反向杂交法与PCR／RFLP法结果一致。结论：PCR/ASO反向杂交技术，适用于已知mtDNA点突变的检测，具有敏感、节时、节省费用的特点。尤其适用于大批量标本的筛选。     

生物素标记寡核苷酸探针改良原位杂交法检测石蜡包埋组织中…

采用生物素标记的寡核苷酸探针，应用改良的原位杂交方法，检测了鼻咽癌及淋疤结转移癌标本石蜡包埋组织中的ＥＢ病毒ｍＲＮＡ。结果显示，ＥＢ病毒阳性反应清晰，无非特异性背景。结果表明，本实验中所应用的探针及改良的原位杂交方法可以迅速准确地检测组织内ＥＢ病毒ｍＲＮＡ的存在。     

地高辛配基标记DNA探针检测HLAⅡ类基因技术的建立

本文报道了采用序列特异性寡核苷酸探针杂交(SSOPH)检测HLAⅡ类基因(DRB、DQB)多态性的方法。实验包括少量全血提取模板DNA、PCR基因扩增基因多态性区域片断、尼龙膜点样、特异性寡核苷酸探针合成及地高辛配基(DIG-11-ddUTP)标记、探针杂交;条件洗涤、化学发光显影等一系列步骤。该实验方法具有用血量少、结果精确稳定、操作简便安全、不污染环境等优点。作者对模板DNA的提取、杂交缓冲液制备、标记探针的使用剂量以及条件洗涤等多个环节作了改良,使实验方法和结果进一步优化。     

荧光标记寡核苷酸探针检测变形链球菌

【目的】建立应用荧光标记寡核苷酸探针BC73快速检测变形链球菌的方法。【方法】应用流式细胞仪检测荧光标记寡核苷酸探针EUB338和BC73与模式菌株和牙菌斑样品荧光原位杂交后的荧光强度和荧光计数。【结果】荧光标记寡核苷酸探针BC73与变形链球菌S．mutans，10449杂交的荧光强度7倍于S．mitis 15914和E.coli K12。变形链球菌占牙菌斑中细菌总数的1．7％。【结论】荧光标记寡核苷酸探针BC73能特异性检测牙菌斑中的变形链球菌数。     

多寡核苷酸探针同步标记在Northern blot多基因分析中的应用

目的：建立一种多探针同时标记同步杂交检测多基因的简化的Northern blot方法.方法：通过T4多聚核苷酸激酶5＇末端放射性磷酸化标记法对Northern blot中多寡核苷酸探针同时标记,实现对同一张转移印迹膜上的多基因同步杂交显影检测.结果：与常规mRNA逐一检测的效果进行比较,同步简化法的各目的基因同时得到较好的检测.结论：同步简化法简化了实验过程,缩减了实验时间,节省了实验试剂,并使各基因表达丰度之间的比较具有更高的准确性,提高了Northern blot的检测效率和成功率.     

用DIG标记的寡核苷酸基因探针杂交技术进行人轮状病毒VP7G血清型鉴定

目的：建立用地高辛（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ，ＤＩＧ）标记的寡核苷酸基因探针鉴定Ａ群轮状病毒ＶＰ７Ｇ血清型的分子杂交技术，并应用该技术研究河南Ａ群轮状病毒的Ｇ血清型分布。方法：根据轮状病毒编码糖蛋白ＶＰ７的基因核苷酸序列，选择该基因高保守区序列中与ＶＰ７Ｇ血清型高度相关的核苷酸片段，人工合成，并用ＤＩＧ标记。在优选的杂交条件下进行杂交：结果：①Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３和Ｇ４四种Ｇ血清型特异性寡核苷酸探针只与同血清型的轮状病毒参考毒株杂交，无交叉杂交现象。灵敏度和特异性达到放射性同位素３２Ｐ标记的水平。②１８８份经ＰＡＧＥ确定的轮状病毒阳性标本中，７９份（４２．０％）、３５份（１８．６％）、１５份（７．９％）分别与Ｇ１、Ｇ２或Ｇ３型探针杂交；未检出Ｇ４型；５６份（２９．８％）未能分型；３份分型特殊。结论：该Ｇ血清型分型技术具有高度特异性和灵敏度     

用DIG标记的寡核苷酸基因探针杂交技术进行人轮状病毒VP7 G血清？…

目的：建立用地高辛标记的寡核苷酸基因探针鉴定Ａ群轮状病毒ＶＰ７Ｇ血清型的分子杂交技术，并应用该技术研究河南Ａ群轮状病毒的Ｇ血清型分布。方法：根据轮状病毒编码糖蛋白ＶＰ７的基因核苷酸序列，选择该基因高保守区序列中与ＶＰ７Ｇ血清型高度相关的核芏酸片段，人工合成，并用ＤＩＧ标记。在优选的杂交条件下进行杂交；结果：（１）Ｇ１，Ｇ２，Ｇ３和Ｇ４四种Ｇ血清型特异性寡核苷酸探针只与同血清型的轮状病毒参考毒株杂交     

采用量子点标记的寡核苷酸探针检测ApoEε4等位基因

目的 探讨新型纳米荧光材料量子点标记的寡核苷酸探针在确定基因型中的应用价值.方法 采用以CdSe 为核心的量子点与 ApoEε4基因的等位基因特异性寡核苷酸反应合成探针.对 ApoEε4-PT7-PL 质粒和正常人标本进行 Southern blot检测,并与地高辛标记方法作相应比较.结果 量子点与地高辛标记显影结果完全一致.结论 量子点在 Southern blot 检测成像中表现出优良特性,可望替代传统标记物.     

用发夹寡核苷酸探针检测新生大鼠脑缺氧缺血时细胞凋亡的变化

目的：观察用生物素标记的发夹寡核苷酸探针（HPP）检测未成熟大鼠脑缺氧缺血后DNA双链断裂（DSB）的短暂空间改变,并与TdT介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）的DNA DSB比较。方法：使7d龄幼鼠缺氧缺血,用HPP位点标记显示DNA DSB短暂空间形式,用微管相关蛋白（MAP－2）双标记评价HPP标记和脑损伤的关系,用双标记的TUNEL评价HPP标记局限在同侧半球MAP－2染色阴性区域;阳性细胞与再灌注时间有关,在缺氧缺血后24h,阳性细胞数上升达到高峰,但在松果体细胞核变化更早,而海马CA3区域细胞变化延迟。HPP和TUNEL双标记显示在再灌注早期HPP标记多于TUNEL标记。结论：HPP标记显示出缺氧缺血后不同时间点凋亡细胞的典型变化,是检测凋亡改变的灵敏标记。     

基因探针技术与平板免疫溶血试验检测ETEC—LT的比较

本文报告从腹泻患者检出237株大肠艾希氏菌,用PIHT法与LT—DNA探针技术进行ETEC—LT检测比较。结果LT—DNA探针技术检出率(13.5％)明显高于PIHT法(4.7%),未发现PIHT法检出阳性而LT—DNA探针阴性者。认为LT—DNA探针特异性强,敏感度高,标本又可直接点膜检测,不需作系统培养鉴定,适用流行病学调查大批量的标本检测等优点。     

16S-23S rDNA间隔区序列寡核苷酸探针对结核患者痰标本的检测

目的：应用结核分枝杆菌特异的寡核苷酸探针杂交检测结核患者痰标本中的结核分枝杆菌，以评价其在临床应用中的价值。方法 对生物素标记５‘－端的一个２０ｂｐ的寡核苷酸探针的敏感性、特异性的研究，并应用该探针对９０例结核患者和３０例非结核患者痰标本进行了检测。结果 寡核苷酸探针分别检测基因组ＤＮＡ、３５０ｂｐ ＰＣＲ扩增产物、２５０ｂｐ ＰＣＲ扩增产物的敏感性分别为５５ｎｇ，０．５ｎｇ，０．１ｎｇ。探针检测     

生物素标记寡核苷酸探针改良原位杂交法检测石蜡包埋组织中EB病毒mRNA

采用生物素标记的寡核苷酸探针，应用改良的原位杂交方法，检测了鼻咽癌及淋疤结转移癌标本石蜡包埋组织中的ＥＢ病毒ｍＲＮＡ。结果显示，ＥＢ病毒阳性反应清晰，无非特异性背景。结果表明，本实验中所应用的探针及改良的原位杂交方法可以迅速准确地检测组织内ＥＢ病毒ｍＲＮＡ的存在。