多重引物聚合酶链反应扩增丙型肝炎病毒基因及基 …

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的５’－非编码区（５’－ＮＣＲ）、Ｃ及ＮＳ４基因区的３对引物分别及同时扩增，检测８０例抗－ＨＣＶ阳性患者的血清ＨＣＶ ＲＮＡ，并进行了ＨＣＶ基因分型研究。各不同引物所介导的ＰＣＲ检出ＨＣＶ ＲＮＡ的结果为：５’－ＮＣＲ基因区６０％（４８／８０），Ｃ基因区３７％（３０／８０），ＮＳ４基因区３０％（２４／８０）。以上３对引物同时扩增仅４２％（３４／     

52 例病毒性肝炎患者肝组织中丙型肝炎病毒 RNA 和 HCAg-NS3 的测定

应用地高辛标记探针原位杂交法和单克隆抗ＨＣＶ－ＮＳ３－ＨＲＰ建立直接酶标免疫组化法分别测定５２例肝炎患者肝组织ＨＣＶＲＮＡ和ＨＣＡｇ－ＮＳ３。结果抗ＨＣＶ阳性组ＨＣＶＲＮＡ检出率５７．１％（１６／２８），ＨＣＡｇ－ＮＳ３检出率５３．６％（１５／２８）；抗ＨＣＶ阴性组其两项检出率均为１２．５％（３／２４）。肝组织中ＨＣＶＲＮＡ阳性物呈蓝紫色细小颗粒存在于肝细胞核或胞浆内，其在肝小叶中的分布可分为３型，即弥漫型、局灶型、散在型。肝组织中ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性物呈棕黄色细小颗粒分布于肝细胞核或胞浆内，以单个或数个阳性细胞散布于肝小叶中。２３例ＨＣＶＲＮＡ或／和ＨＣＡｇ－ＮＳ３阳性病例以肝炎后肝硬化（ＬＣ）病例占多数（１４／２３），其次为慢性重型肝炎（ＣＳＨ）和中度慢性肝炎（ＣＡＨ）。此两种检测方法具有较高符合率（９０．４％，４７／５２），表明病毒核酸及其表达产物均存在于肝细胞内，与ＨＣＶ感染密切相关。这为ＨＣＶ感染诊断提供了直接依据，有利于研究ＨＣＶ感染中病毒复制、慢性化进程、抗病毒治疗监测及重叠感染时病毒相互关系。     

丙型肝炎病毒3‘—非翻译区RNA结合蛋白的研究进展

丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）与其它的黄病毒属的成员一样,其基因组的３’－非翻译区（ＮＴＲ）是基因组复制的关键结构位点,ＨＣＶ的３‘－ＮＴＲ区的核苷酸序列相互折叠,形成特殊的二级结构,与ＨＣＶ ＮＳ５Ｂ以及ＨＣＶ感染靶细胞中的蛋白质因子,如异源性细胞核核糖蛋白或称为多聚嘧啶区结合蛋白（ＰＴＢ）等结合成为ＨＣＶ的复制酶复合体,决定着ＨＣＶ复制的过程。ＨＣＶ３’－结合蛋白的研究,有助于了解ＨＣＶ的复制过程,为     

五种丙型肝炎病毒(HCV)基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗-HCV

五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗－ＨＣＶ谭德明刘双虎胡国龄刘安国刘国珍应用五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原，包括ＨＣＶ核心蛋白（Ｃｏｒｅ），包膜蛋白１（Ｅ１）、包膜蛋白２（Ｅ２／ＮＳ１）、ＮＳ３和ＮＳ５抗原〔１，２...     

一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录-巢式聚合酶链反应方法

目的庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５’－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶链反应，并初步应用于１５３例标本。结果该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感染，扩增片段大小与设计相符。结论该方法简便特异，适用于临床检测     

初次及再次感染HCV后不同功能区抗体的研究

１４例初次ＨＣＶ感染者及１１例再次ＨＣＶ感染者系列血清系在无法检测ＨＣＶ时留存的２８９位手术受血者系列血清中筛选获得。系列血清包括受血前、受血后不同时期收集的血清。回顾性地研究其不同功能区抗体出现的动态变化，抗Ｃ与抗ＮＳ３抗体有早期诊断价值。抗ＮＳ３、抗Ｃ、抗ＮＳ５及抗ＮＳ４抗体在ＨＣＶ感染后系列血清中检出率分别为８４．７６％、７９．２７％、７２．５４％和６８．３９％。感染过程中各区抗体可以全部出现、部分出现或单独出现抗Ｃ、抗ＮＳ３及抗ＮＳ５抗体，未发现单独含抗Ｅ、抗ＮＳ１及抗ＮＳ４区抗体的血清。抗Ｅ、抗ＮＳ１及抗ＮＳ４抗体消失较早。研究表明：以ＨＣＶＣ区、ＮＳ３区及ＮＳ５区编码的优势抗原包被的ＥＬＩＳＡ抗体诊断试剂盒将提高ＨＣＶ的诊断。     

HCV感染后NS5区抗体的动态观察与检测意义

本文报道用ＨＣＶＮＳ５区两段抗原性较好的合成肽研制的ＥＬＩＳＡ试剂盒及ＵＢＩＨＣＶＮＳ５区抗体检测ＥＬＩＳＡ试剂盒观察１４例ＨＣＶ感染者ＮＳ５区抗体的动态变化，证实ＮＳ５区抗体如同ＮＳ４区抗体一样比Ｃ及ＮＳ３区抗体出现晚。ＮＳ５区抗体总体检出率近似于ＮＳ４区抗体；１．５５％的血清为单独ＮＳ５区抗体阳性；存在ＮＳ５区抗体与其他区抗体滴度有互补作用的标本等提示ＮＳ５区抗体仍有一定的诊断价值。采用ＵＢＩＮＳ５区抗体检测试剂盒发现，９５．６５％（２２／２３）ＵＢＩ试剂盒诊断为ＮＳ５区抗体阳性的标本中含ＨＣＶＲＮＡ，６／１４ＨＣｖ感染者用ＵＢＩ试剂盒检出的抗体出现在ＡＬＴ再次异常升高或剧烈升高（高于参考值的３倍以上）前后，４／１４的感染者抗体出现于ＡＬＴ首次升高前后（其余４／１４的感染者未检出抗ＮＳ５抗体），因此ＵＢＩ抗ＨＣＶＮＳ５抗体诊断试剂盒检测的抗体似与疾病的活动有关。     

鼠抗丙型肝炎病毒（HCV）NS3区单克隆抗体的研制及特性分析

用淋巴细胞杂交瘤技术，制备出５株抗ＨＣＶ－ＮＳ３区单克隆抗体（ＭｃＡｂ）分别命名为Ｃ７－１，３，６，８，９。单抗特性测定结果显示５株单抗均为ＨＣＶ－ＮＳ３区特异性，与ＨＣＶ其它区域的抗原及宿主菌成份均无交叉反应，此５株单抗识别ＮＳ３区上两个不完全相关的抗原位点，其中Ｃ７－１，３，６株识别同一抗原决定簇，Ｓ７－９的识别位点与此３株有一定的相关，Ｃ７－８则识别与此４株不完全相关的位点。ＨＣＶ－ＮＳ３抗     

肝细胞肝癌中丙型肝炎病毒C区、E区、NS3区、NS4区抗原的表达

本文报道研究丙型肝炎病毒抗原在肝细胞肝癌组织内的定位分布情况。以丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的Ｃ、Ｅ、ＮＳ３、ＮＳ４区四种单克隆抗体用免疫组化方法检测了１３９例肝细胞肝癌（ＨＣＣ）的肝脏标本，结果总的阳性率为１５．１％。２１例阳性标本中，Ｃ区单抗检测阳性占８０．９％（１７／２１），Ｅ区占３３．３％（７／２１），ＮＳ３、ＮＳ４区均占５７．１％（１２／２１），表明应用多区段单抗有助于提高ＨＣＶ抗原的检出率。阳性物质主要存在于胞浆中，呈细、粗颗粒及块状，３例出现膜及膜下型，１例核内有阳性反应。ＨＣＶ感染与ＨＣＣ的发生发展有一定的关系。     

一种同时检测丙型与庚型肝炎病毒的逆转录—巢式？…

目的 庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高，本研究旨在建立一种同时检测ＨＧＶ与ＨＣＶ感染的方法。方法 根据ＨＣＶ与ＨＧＶ的基因序列分别选取５‘－ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）的两套引物，在同一管内进行逆转录－巢式聚合酶锭反应，并初步应用于１５３例标本。结果 该方法能同时检出ＨＧＶ与ＨＣＶ感洒，扩增片段大小与设计相符。结论 该方法简便特异，适用     

人原发性肝内胆管细胞癌中HCVRNA及其NS3区抗原的分布及意义

人原发性肝内胆管细胞癌中ＨＣＶＲＮＡ及其ＮＳ３区抗原的分布及意义西安第四军医大学病理学教研室应用原位分子杂交及免疫组化方法，使用地高辛标记ＨＣＶ５＇非编码区探针及抗ＨＣＶＮＳ３区Ｃ３３ｃ单克隆抗体，对３５例人原发性肝内胆管细胞癌（ＰＩＣ）和癌旁肝组织...     

肝细胞肝癌和肝硬化组织中丙型肝炎病毒各区段抗 …

目的 研究丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）在肝细胞肝癌（ＨＣＣ）和肝硬化（ＬＣ）中所起的作用。结合乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）进行分析，并初步探讨了ＨＣＶ与ＨＢＶ感染是否有相互促进作用。方法 采用ＨＣＶ－Ｃ，Ｅ，ＮＳ３，ＮＳ４区单克隆抗体，ＨＢｓＡｇ多克隆抗体用免疫组化方法检测了５９例ＨＣＣ及３５例ＬＣ组织标本。结果 ＨＣＶ阳性反应主要分布在肝细胞及癌细胞的胞浆内，呈细颗粒状。ＨＣＣ中，ＨＣＶ感染率；北京（２９例     

丙型肝炎患者肾小球病变的观察

为了明确丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染与肾脏疾病的关系，采用免疫组化技术和抗－ＨＣＶＮＳ３和抗－ＨＣＶＮＳ５单克隆抗体，检测了２１例丙肝患尸解肾组织中的ＨＣＡｇ，结果１３例阳性（６１．９％），其中１１例为膜增殖性肾炎（ＭＰＧＮ），１例为系膜增殖性肾炎（ＭｓＰＧＮ），１例肾组织大致正常。８例ＨＣＡｇ检测阴性，其中膜性肾病（ＭＮ）１例，膜增殖性肾炎２例，毛细血管内增殖性肾炎１例，余４例肾组织未见明显异常。与乙型肝炎对照组（３３．０％）相比，丙肝患者肾脏病变更为多见，形态多样，以ＭＰＧＮ为主。同时对丙肝患者有肾脏病变者的临床资料进行了分析，病人可表现为高血压，蛋白尿，血尿及早期血清尿素氮（ＢＵＮ）增高，因此认为同乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染后相同，也存在着丙肝相关性肾炎     

丙型肝炎病毒基因组5‘非编码区酶切分型研究

对１０５例ＨＣＶＲＮＡ阳性标本用Ｓａｕ３ＡⅠ和ＨａｅⅢ两种酶对其５’ＮＣ区扩增产物进行酶切。结果呈现４种酶切类型。对不同酶切类型的扩增产物进行序列分析，结果显示，不同酶切类型的扩增产物都源于ＨＣＶ，核酸序列中的酶切点与酶切结果完全吻合。对文献中已经确定基因型的３３株ＨＣＶ作了比较，分析了酶切类型与基因型的关系。发现对ＨＣＶ５’ＮＣ区－２９７至－４１片段ＰＣＲ扩增产物用这两种酶分别酶切，可以把ＨＣＶ按Ｃｈａｎ氏分型（１９９２）分为１、２、３三组。本文１０５例标本，１组（包括Ⅰ、Ⅱ型）占８２．９％，２组（包括Ⅲ、Ⅳ型）占１５．２％，１、２组混合占１．９％，未发现３组。其中以１组（Ⅱ型）为最多，但不超过６９．５％。     

逆转录─巢式PCR在一管中同时检测丙型与庚型肝炎病毒

逆转录┐巢式ＰＣＲ在一管中同时检测丙型与庚型肝炎病毒谭文杰夏宁邵丛郁庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）与丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）同属黄病毒科，且传播途径相似，重叠感染率高。本室根据对ＨＧＶ与ＨＣＶ基因序列的分析，分别选取５′ＵＴＲ（ＨＣＶ）与ＮＳ３（ＨＧＶ）区的两...     

输血后丙型肝炎病毒非结构区抗体和丙氨酸转氨酶的动态分析

利用重组的丙型肝炎病毒非结构区（ＨＣＶＮＳ５）抗原建立了酶免疫试验（ＥＩＡ），对２５例输血后丙型肝炎进行了不同区抗体及丙氨酸转氨酶（ＡＬＴ）的动态研究，同时对１５６例慢性丙型肝炎患者血清进行ＨＣＶＲＮＡ和抗－ＮＳ５平行检测，两者符合率为６４．１％。抗－ＮＳ５抗体首次检出时间为３０～５７５天（１８２．９±１６８．５），晚于ＡＬＴ异常和其他区抗体的出现时间。在感染后１，３，６，１２和２４个月后抗－ＮＳ５的阳性率分别为２８％，４０％，５２％，６８％和７６％。抗－ＮＳ５的动态变化类型为四种：一过性阳性、间歇性阳性、持续性阳性和２年内持续阴性     

检测丙型肝炎患者NS5区抗体的临床意义探讨

目的检测慢性丙型肝炎患者和１４例ＨＣＶ原发感染后ＮＳ５抗体长达一年半的动态变化，探讨ＮＳ５抗体的临床意义。方法应用重组ＮＳ５抗原，建立ＥＩＡ方法进行检测。结果慢性丙型肝炎患者抗－ＮＳ５抗体阳性率为６０．４８％，ＨＣＶ感染后一月抗－ＮＳ５抗体阳性率为１６．３５％，三月为７５％。结论抗－ＮＳ５抗体无早期诊断价值。抗－ＮＳ５抗体持续阳性者，血清ＡＬＴ多明显升高，抗－ＮＳ５抗体与肝脏疾病活动性相关。丙型肝炎患者中存在抗－Ｃ、抗－ＮＳ３、抗－ＮＳ４抗体阴性，而抗－ＮＳ５抗体单独阳性，表明检测抗－ＮＳ５抗体具有独特的诊断价值     

散发性丙型肝炎患者病毒学和临床特点

调查了１６例散发性丙型肝炎（ＳＨＣ）患者丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染原因：３例为外科医生；３例的配偶为慢性输血后丙型肝炎（ＰＴＨＣ）患者；５例有拔牙、注射或接种史；５例感染途径不明。ＳＨＣ患者的病毒血症水平明显低于ＰＴＨＣ患者（血清稀释倍数前者为１０～１００倍；后者为１００～１００００倍，Ｐ＜０．０１）。仅１例ＳＨＣ患者抗－ＨＣＶ阳性。与ＰＴＨＣ患者相比，ＳＨＣ患者肝脏损害程度较轻，转氨酶水平较低，且多无自觉症状。     

用逆转录—套式聚合酶链反应检测我国不同临床型肝？…

目的 为了研究庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）在我国的感染状况。方法 概括已发表的ＨＧＶ的５‘端非编码区（５’－ＵＴＲ区）及螺旋酶区（ＮＳ３区）两段高度保守的基因序列分别设计两套引物，用逆转录－套式聚合酶链式反应检测ＨＧＶＲＮＡ。结果 从北京、秦皇岛、河南等地采集各种肝病患者及职业献血员血清３５４份，ＨＧＶＲＮＡ阳性９７份，阳性率为２２．３％。其中已确定的临床型肝炎／肝病患者２５４例，ＨＧＶＲＮＡ阳性者为５     

丙型肝炎病毒NS3蛋白单克隆杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

应用国产基因工程表达的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）ＮＳ３区抗原免疫小鼠，然后取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系ＳＰ２／０融合，筛选出４株稳定分泌抗ＨＣＶＮＳ３区蛋白单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的杂交瘤细胞株，分别命名为２Ｂ６，２Ｆ３，３Ｄ８，３Ｄ９，经初步研究表明这４株单抗与ＮＳ３抗原具有良好的反应性，与ＨＣＶ核心区多肽及乙型肝炎病毒表面抗原和ｅ抗原均无反应。抑制实验表明这４株抗体分别针对ＮＳ３抗原分子上的２个不同的抗原决定簇。