一种简捷的质粒DNA提取及纯化方法

介绍一种快速获取高纯度质粒ＤＮＡ方法,在碱裂解法快速获取质粒ＤＮＡ粗制品的基础上,利用一种不溶解蛋白质而溶解ＤＮＡ的溶液ＴＥＳ纯化质粒ＤＮＡ,同时对本法所提取的质粒的ＤＮＡ的回收率、纯度及可能的用途进行验证。此法简易,所得样品纯度高,可以直接用于转化、酶切和基因克隆。     

介绍一种滤纸片快速回收DNA片段的方法

采用置于Ｅｐｐｅｎｄｏｒｆ管中的滤纸片，快速离心的方法回收ＤＮＡ片段。实验表明，该方法是一种简便、快速、可靠的回收ＤＮＡ片段的方法，回收率高。回收的ＤＮＡ片段可进一步用于基因工程中克隆连接、酶切和探针标记。     

一种改进的显微注射用DNA片段的纯化方法

目的显微注射用DNA的纯度是影响转基因动物制备成功与否的重要因素,本文建立一种可行的适用于普通实验室的纯化DNA方法,替代普遍使用的试剂盒纯化方法。方法分别使用酚-氯仿多次抽提法及常规的凝胶提取试剂盒纯化含有蚓激酶基因的DNA片段,通过显微注射技术将纯化的DNA片段导入小鼠受精卵的原核,制备转基因小鼠。根据转基因实验的结果对两种方法进行比较。结果使用两种方法纯化DNA均能获得转基因小鼠。在DNA纯度及注射卵的存活率上,两种方法无明显差别;在移植卵的出生率及转基因阳性率上,抽提法优于试剂盒法。结论本实验建立的抽提方法可以替代试剂盒方法纯化显微注射用DNA片段,在降低实验成本、简化实验条件及提高转基因阳性率方面具有优势。     

聚丙烯酰胺凝胶中分离纯化DNA片段方法的改进

聚丙烯酰胺凝胶中分离纯化ＤＮＡ片段方法的改进李树义金春元孙开来（基础医学院分子遗传学教研室，沈阳１１０００１）关键词分离；纯化；ＤＮＡ片段；聚丙烯酰胺凝胶在ＰＣＲ扩增目的基因片段时，经常出现引物二聚体，非特异扩增带以及扩增产物产量过低等问题。改变ＰＣ...     

介绍一种简便、快速的回收DNA片段的方法

我们采用国产 DF-17型电洗脱槽回收了限制性内切酶酶切的 DNA 片段,证明该方法是一种简便、快速、可靠的回收核酸片段的方法.回收的 DNA 片段可进一步用于 DNA 克隆、探针标记和 DNA 分析.     

用原子力显微镜表征DNA纯化效果的实验研究

目的:运用原子力显微镜(AFM)表征3种DNA纯化试剂盒对DNA的纯化效果。方法:PCR扩增K562/A02细胞mdr1基因DNA,分别以3种不同的DNA纯化试剂盒对PCR产物进行纯化后,按终浓度为10 ng.μl-1固定在用1 ng.μl-1L型多聚赖氨酸预先处理过的新剥离的云母片上,用AFM获取DNA扫描图像,分析评价3种DNA试剂盒对DNA的纯化效果。结果:用AFM成功表征3种纯化试剂盒纯化后DNA片段,获得了清晰的DNA图像。对3种DNA纯化试剂盒的纯化效果作出评价,建议其中的两种DNA纯化试剂盒的DNA纯化产物可用于AFM的DNA分析。结论:用AFM表征DNA时对DNA的纯度要求较高。通过对3种DNA纯化试剂盒纯化效果的比较,为AFM观测DNA样本的纯化方法提供了较好的方案。     

介绍一种简便、快速的回收DNA片段的方法

我们采用国产DF－17型电洗脱槽回收了限制性内酶酶切的DNA片段，证明该方法是一种简便、快速、可靠的回收核酸片段的方法。回收的DNA片段可进一步用于DNA克隆、探针标记和DNA分析。     

大肠杆菌表达耐热DNA聚合酶的纯化和鉴定

目的探讨工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶的纯化方法。②方法收集ＩＰＴＧ诱导带有耐热ＤＮＡ聚合酶（ＴＤ聚合酶）基因表达质粒的工程菌株ＤＨ－ＴＤ４，用溶菌酶裂解，６０℃处理后，上清液用硫酸铵沉淀，根据溶解度差异进行粗分级，然后进行离子交换层析细分级，并经聚合酶链式反应（ＰＣＲ扩增）鉴定其活性。③结果纯化的ＴＤ聚合酶具有良好的聚合活性。④结论溶解度差异与离子交换层析是工程菌表达的耐热ＤＮＡ聚合酶纯化的主要步骤。基因工程制备的ＤＮＡ聚合酶可用于ＰＣＲ检测     

HIF-1α反义寡核苷酸体外对人脑胶质瘤细胞U251的作用

目的:研究缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胶质瘤细胞增殖及凋亡的影响,探讨以H IF-1α为靶点进行反义寡核苷酸转染治疗胶质瘤的有效性。方法:设计合成针对H IF-1α的寡核苷酸片段.实验分6组:空白对照组、脂质体组、正义组和反义组(1.0μmol/l、2.5μmol/l和5.0μmol/l)。利用脂质体包裹瞬时转染人胶质瘤细胞系U251,MTT法检测细胞增殖;采用AO/EB染色及末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡的变化。结果:转染后各组细胞增殖抑制率分别为(1.30±0.05)%、(1.98±0.35)%、(2.47±0.48)%、(22.30±2.08)%、(33.60±4.19)%和(56.20±4.22)%。转染H IF-1α反义寡核苷酸组较各对照组相比细胞增生下降,凋亡增加(P<0.01)。结论:H IF-1α反义寡核苷酸转染人胶质瘤U251细胞系可以抑制细胞增生并诱导胶质瘤细胞凋亡,H IF-1α有望成为一个极具潜力的肿瘤治疗的靶点。     

电洗脱法纯化DNA片段

电洗脱法纯化ＤＮＡ片段汪渊，桂淑玉分子生物学研究方法作为一类十分有用的技术已在生物学科的各个领域得到广泛的应用。ＤＮＡ片段的纯化是获得目的ＤＮＡ的手段，是分子生物学的基本方法，是各种分子生物学研究方法的基础。目前，ＤＮＡ片段的纯化方法众多，如电洗脱法...     

玻璃筛柱从琼脂糖凝胶中分离DNA片段的快速方法

在含有各种不同大小的ＤＮＡ片段混合物中，利用琼酯糖凝胶电泳分离，并进一步回收不同大小片段的ＤＮＡ，是分子生物学基因工程技术中常用的方法之一。已经有许多相关技术问世，如ＤＥＡＥ纤维素纸插片电泳法、玻璃粉末洗脱ＤＮＡ法、低溶点琼酯糖凝胶挖块回收法及蔗糖梯...     

蚯蚓脱氧核糖核酸酶纯化及酶学性质

目的:从蚯蚓组织中纯化得到一种脱氧核糖核酸酶(取名为蚯蚓脱氧核糖核酸酶,简称EDNase)并研究其酶学性质.方法:采用丙酮沉淀、离子交换层析、高效液相层析、SDS-PAGE电泳,毛细管等点聚焦电泳和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱等方法.结果:经证实这种纯化方案的纯化倍数是137,酶得率为45.6%.EDNase的相对分子质量约为63 000.Mg2+,Mn2+和ca2+对酶活性有较强的抑制作用,而Na+则轻微的提高酶的活性.在pH 4.4～5.2的范围内EDNase酶活性稳定,其最适pH值为4.8.该酶的最适温度为37℃,在40℃范围内酶具有较高的稳定性.EDNase的等电点为6.20.在以小牛胸腺DNA为底物的条件下,酶的Km为1.52 g/L,Vmax为4.89 mg/(mL·min).该酶可有效降解超螺旋质粒DNA,线状λ-噬菌体DNA和细菌染色体DNA,对RNA未见任何降解作用.结论:这种酶具有独特的酶学性质,不同于以往所知的脱氧核糖核酸酶.     

HBV DNA PreC/C和BCP片段基因多态性及临床意义

目的 :分析乙肝患者 HBV DNA前 C/ C区和基本核心启动子区部分 DNA片断突变。方法 :PCR扩增HBV DNA nt1735～ 196 5片段 ,将产物进行 HBV DNA测序。结果 :在 6 8例乙肝患者中 ,突变阳性率 4 8.5 % ,点突变16 8个 ,频率前 10位的是 nt176 4、176 2、1799、176 6、1896、175 4、1899、176 8、1814及 1913,还检出鲜见报道的 192 3、192 2、190 7等点突变。慢性肝炎 5 4例和肝炎肝硬化 10例 HBV DNA nt1896、176 4、176 2点突变阳性数分别为 9、19、19和 3、19、19,两者差异有极显著性 (P<0 .0 1)。结论 :前 C/ C区与基本 C区启动子区基因突变可能与肝实质纤维化相关 ,HBV DNA突变发生率较高 ,且位点众多 ,基因测序对芯片探针设计有着十分重要的指导价值和临床意义     

TKM──血液DNA快速提取法

在临床ＰＣＲ检验中，血卟啉对酶促反应的影响不容忽视，因此在纯化ＤＮＡ的过程中，常需将红细胞清除，以消除血卟啉对实验结果的干扰。用ＴＫＭ法提取血液ＤＮＡ，方便、经济、快捷且效果良好。该ＤＮＡ可用于ＰＣＲ的分析，结果极为理想，完全可以替代其他血液ＤＮＡ的提取方法。     

精索静脉曲张的不育病人精子线粒体DNA片段缺失的调查

目的分析精索静脉曲张导致的不育病人的精子线粒体DNA（mitochondrial DNA,mtDNA）中一个长为4 977 bp的片段缺失的情况。方法收集60例精索静脉曲张的不育病人和90名健康男性的精液标本,并抽提精子的总DNA,用Gap-PCR技术检测DNA 4 977 bp片段的缺失情况。结果在81.66%的患有精索静脉曲张的不育病人和4.44%的健康人对照中存在DNA 4 977 bp片段的缺失。患有精索静脉曲张的不育病人中DNA缺失频率更高（OR=139.80,95%CI=40.08~487.30,P < 0.01）。结论精索静脉曲张可能会导致一些男性精子DNA缺失,并导致不育。且精子线粒体DNA 4 977 bp片段缺失与精索静脉曲张所致不育症存在一定的相关性。     

上颌窦鳞癌细胞核DNA含量的探讨

肿瘤细胞DNA含量改变及直方图所显示的肿瘤细胞群DNA干系分布,可作为对肿瘤的某些生物学进程及治疗方案选择和疗效观察的客观指标。作者应用全自动图象分析系统,首次对上颌窦鳞癌进行了回顾性DNA原位定量研究,以期探讨上颌窦鳞癌DNA分布特点与肿瘤分级的关系。 1 材料和方法 作者应用图象分析技术对40例(手术或活检证实的)上颌窦鳞癌的2000个癌细胞胞核DNA含量进行检测,并以同批癌旁间质300个小淋巴细胞DNA含量作为二倍体(2C)对照,绘制     

几种药用植物DNA提取与纯化方法的比较

目的：优化适于中医学院实验室条件下开展药用植物DNA提取与纯化的实验方法，方法：（1）标准操作，（2）优化简易操作，（3）wizad^TMclean-upsystem试剂盒方法。结果与讨论；优化简易操作省时，经济，易操作。     

合成DNA片段的分离及连接

研究设计了一段带终止信号的DNA序列,通过DNA合成仪分为四个片段合成。本文介绍经DNA合成仪合成DNA片段后的处理,纯化及连接过程.经测定DNA的连接效率在65％左右。