ELISA间接法检测抗精子抗体

随着生殖免疫学的进展,抗精子免疫所致的不育症引起了人们的重视。目前认为,血清及生殖道分泌物中的抗精子抗体     

检测IL-8的ELISA间接夹心法的建立

利用抗IL-8的单克隆抗体4C3(包被抗体)和免抗IL-8多克隆抗体(第二抗体)建立了检测IL-8的间接夹心法ELISA,当包被抗体浓度为0.5μg/ml、第二抗体浓度为2μg/ml时,其检测下限可达1ng/ml。初步应用此法在部分感染病人血清中检测到明显高于正常人水平的IL-8。     

间接原位RT—PCR方法检测组织中轮状病毒

我们应用间接原位ＲＴ ＰＣＲ方法检测了 1例因轮状病毒腹泻并发心力衰竭、呼吸衰竭而死亡的患儿存档 3年组织切片 ,标本经 10 %福尔马林固定、石蜡包埋切片。使用ＰＥＲＫＩＮ ＥＬＭＥＲＳｙｓｔｅｍ 10 0 0原位ＰＣＲ仪 ,并在实验方法上进行了一些改进 ,成功地从小肠、肾脏等组织中检测出轮状病毒颗粒 ,为轮状病毒的肠道外感染问题提供了直接的证据。1　材料与方法1 1　试剂和器材的准备　所用物品需经处理灭活ＲＮＡ酶 :切片所用刀片、试验所用镊子、吸头、盖玻片等均经 0 1%ＤＥＰＣ水浸泡 2 4ｈ以上 ;玻片、玻璃容器经清洁液洗、酸泡…     

间接ELISA法检测结果标准化软件的研制与应用

开发一套能够将间接ELISA法检测结果标准化的软件.以克服试验条件不同对结果的影响.标准化方法采用改良光密度值标准化变换(I - STOD法),标准化公式中参数的估计采用高斯牛顿迭代法,以MATLAB图形用户界面为软件的开发工具.选择一组来自江西血吸虫病疫区的血清检验软件的使用效果,使用间接ELISA方法检测血清的抗体水平.其中,标准血清在每块试验板上按倍比稀释成8个浓度,用来拟合标准曲线.结果表明,软件可根据检测OD值绘制每块实验板上的标准曲线,同时计算出不同血清样本相对于标准品的浓度,克服了包板等因素所带来的影响,实现了血清抗体水平的板间比较.该软件界面友好,使用方便,为I - STOD方法的推广使用提供了有力工具.     

ELISA一步法检测轮状病毒的初步临床应用

<正> 轮状病毒(Rotavirus,RV)是近年来非菌性腹泻的主要病原。根据其组抗原性不同,可把RV分为6个组(A、B、C、D、E、F)。其中A组RV常引起婴幼儿和多种幼龄动物急性胃肠炎。检测RV的主要方法有电镜或免疫电镜,SDS-PAGE、ELISA等。这些方法有的敏感性高,有的特异性好。但因受设备昂贵或操作繁琐的限制而难以在基层推广应用;还因这些方法耗时较多,难以满足临床要求。为此,我们参考有关文献,建立了     

ELISA间接法检测肾综合征出血热患者血清中特异性抗体

以亲和层析法提取的HFRS 病毒结构蛋白为特异性抗原,建立了检测HFRS 病人血清中特异性IgM 抗体的ELISA 间接法。首先用方阵法找到抗原的最适反应浓度为25μg/ml,血清最低滴度为1∶1000。特异性反应表明,包被的病毒结构蛋白只能与     

核酸电泳法、免疫电镜法及ELISA法对轮状病毒检测效果的比较

为了寻求诊断轮状病毒较为敏感、特异、简便、快速而重复性好的方法,我们用ELISA法、免疫电镜法(IEM)、及核酸电泳法(PAGE)同时检测了延吉市秋季发生的婴幼儿腹泻标本23份,今将三种方法作比较报告如下。     

斑蝥素间接竞争性ELISA检测方法的建立

目的通过获得的斑蝥抗血清,建立快速、简便、有效的斑蝥素间接竞争ELISA检测方法。方法以合成的斑蝥素完全抗原免疫家兔,获得高效价的抗血清,通过优化条件,建立斑蝥素间接竞争ELISA检测方法的标准曲线,并设定浓度梯度,测定检测灵敏度、检测稳定性和可靠性。结果建立的标准曲线方程为y=-13.421x+102.45,R2=0.988,检测范围为:0.1～24μg/ml。其最低检测下限为0.01μg/ml,批内和批间变异系数分别为4.27%和4.56%。结论本方法具有良好的灵敏性和可重复性,可为进一步开发斑蝥素检测试剂盒提供基础。     

McAb ELISA间接夹心法检测HFRS病人血凝抑制抗体的研究

本文介绍一种采用抗HFRSV血凝素McAb和粗制血凝素抗原的ELISA间接夹心法。该法检测了33份临床诊断为HFRS病人血清中的血凝抑制抗体,并平行地与血凝抑制试验(HIT)进行了比较。结果表明,本法特异性好,敏感性高,简便快速,判定结果客观,在临床诊断,流行病学监测中,有实用价值,并有可能取代HIT.     

多种蚊媒病毒x—TAG悬浮芯片复合检测方法的建立

建立多重检测东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒、委内瑞拉马脑炎病毒、基孔肯亚病毒、登革病毒、日本脑炎病毒、黄热病毒、西尼罗病毒、圣路易斯脑炎病毒、版纳病毒、布尼亚病毒、裂谷热病毒的悬浮芯片方法。将十二种蚊媒病毒分为3组,每组使用标记有不同anti—TAG的上游引物及标记有生物素的下游引物对分别构建多重PCR体系,PCR产物与偶联了x—TAG的编码磁性微球进行杂交,最后利用Bio—plex100分析系统对12种蚊媒病毒分别进行单一、多重液相芯片检测。将平均荧光强度的判定阈值定为背景对照的3倍,多批次实验均能对十二种单一病毒样本和混合病毒样本进行准确鉴定,未出现交叉反应,表明该方法特异性较好。敏感性测试结果显示本检测方法具有高灵敏度。通过利用偶联有TAG及生物素的引物对,成功建立了可同时检测12种蚊媒病毒的液相芯片检测技术平台。该平台对于病原体的检测具有较好的应用前景。     

寨卡病毒可视化RT-LAMP检测方法的建立与应用

本研究建立了一种简单、快速、准确的寨卡病毒可视化逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。在线设计3套LAMP引物,利用实时浊度仪筛选最佳引物,加入羟基萘酚蓝,评估可视化RT-LAMP检测方法的灵敏度和特异性。建立的可视化RT-LAMP方法可检测的最低浓度为101copies/μL,高于普通PCR和荧光定量PCR 1~2个数量级;同时,该方法不与其他虫媒病毒产生交叉反应。该方法可为虫媒监测和临床诊断提供实验依据。     

蜱媒Dabieshan病毒NP蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

为建立蜱媒Dabieshan病毒血清学抗体检测方法,本研究基于Dabieshan病毒NP蛋白序列,通过建立原核表达体系并优化反应条件,建立一种可用于检测血清NP抗体的间接ELISA方法.结果 显示,当重组NP蛋白包被浓度为0.23 μg/孔,血清稀释比例为1∶5×104,二抗稀释比例为1∶5000,底物显色时间为15 min时,抗原抗体反应强度最佳.以上述条件建立的间接ELISA方法,与同为白蛉病毒属的发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性.批内OD450值变异系数小于10％,重复性较好.结果 表明,本研究建立的间接ELISA方法具有较高的特异性和重复性,可进一步用于Dabieshan病毒携带区的人群及动物血清筛查,为了解该病毒的潜在致病性提供流行病学资料.     

酶联免疫吸附试验(ELISA)和动物法测定人血清破伤风抗体的比较

<正> 人血清中破伤风抗体的测定,在临床上和流行病学上都有十分重要的意义。在临床上是判断病人对破伤风是否具有免疫能力的重要依据;在流行病学上是监测人群破伤风免疫状态的重要方法。小白鼠中和试验是检测人血清破伤风抗体水平的经典方法,凡是抗体效价达到0.01~(IU)/ml以上者便具有足够的破伤风免疫力,动物法的结果准确可靠,为     

弓形虫IgM抗体检测方法的研究

本文以鼠抗人μ链单克隆抗体捕获被测人血清中ＩｇＭ抗体，再以辣根过氧化物酶标记的弓形虫抗原进行直接酶联免疫吸附试验，检测人血清中特异性抗弓形虫ＩｇＭ抗体，并以阻断试验证实该方法的特异性。与风疹病毒ＩｇＭ抗体阳性血清，巨细胞病毒ＩｇＭ抗体阳性血清和类风湿因子等无交叉反应。与进口试剂盒以酶联免疫吸附试验双夹心法（ＤＳ－ＥＬＩＳＡ－Ｔｏｘ－ＩｇＭ）进行比较检测了临床血清样品１０５３份，两者阳性符合率为９５．５６％，ＤＳ－ＥＬＩＳＡ阴性血清在Ｄ－ＥＬＩＳＡ法亦阴性，而且后者灵敏度略高。酶标记抗原和包被抗体的酶标板在４℃中保存６个月仍稳定。试剂盒操作简便，快速，适用于弓形虫病的早期诊断。     

A SENSITIVE ELISA FOR THE DETECTION OF BOVINE CRUDE HEPARIN IN PORCINE HEPARIN

Heparin is an effective anticoagulant drug which has been purified for decades from bovine or porcine tissues. However, with the emergence of BSE, heparin purification is today restricted to porcine intestinal mucosa. To control the origin of crude heparins, polyclonal antibodies were raised against bovine contaminants. These antibodies were used to develop one sandwich and two competitive indirect ELISAs. Optimal results were obtained with competitive indirect ELISA, using bovine crude heparin for the coating and anti-bovine crude heparin as a detector antibody. The detection limit of the assay was 1 ppm of bovine crude heparin in a porcine heparin. Taking into account the variability of the background obtained for 10 crude and 9 pure porcine heparins from known origin, the detection level was 5 ppm. Ovine and caprine crude heparins cross-reacted slightly (6–17 ppm).     

眼肌结合抗体的ELISA检测及应用

自猪和牛眼肌提取眼肌抗原，建立了检测人血清中眼肌结合抗体（ＥＭ－Ａｂ）的ＥＬＩＳＡ法。检测４０例甲亢患者阳性率为３０．０％，２３例ＳＬＥ患者阳性率为２６．９％，与正常对照组比较有显著差别（Ｐ〈０．０１）。ＥＭ－Ａｂ与甲状腺疾病的一些自身抗体无显著相关性，提示此是与眼病自身免疫反应有关的一种自身抗体。     

A SPECIFIC AND ULTRASENSITIVE CHEMILUMINESCENT SANDWICH ELISA TEST FOR THE DETECTION AND QUANTITATION OF PNEUMOLYSIN

A chemiluminescent sandwich ELISA test has been developed for the detection and quantitation of pneumolysin. The test is based on a mouse monoclonal as the capture antibody and on rabbit polyclonal IgGs as detection antibodies, in combination with an anti-rabbit IgG alkaline phosphatase conjugate. The estimated detection limit of the purified recombinant toxin in phosphate-buffered saline with 0.05% Triton X-100 is around 5 pg ml^?1, with averaged intra- and inter-assay variation coefficients of 7% and 13.5%, respectively.

The assay has been applied to the quantitation of pneumolysin in pneumococcal isolates, providing, for the first time, a direct measurement of the amount of the toxin produced by different strains; a variation has been found in their pneumolysin content. The test is highly specific as no other purified toxins or human pneumonia- or meningitis-associated bacteria yielded false-positive results. This specific and highly sensitive method could help in the diagnosis of human infections.     

检测循环免疫复合物的牛胶固素酶联免疫吸附试验在临床的应用

本文介绍了一种检测循环免疫复合物的牛胶固素酶联免疫吸附试验。方法简便、稳定,可供临床应用。使用该方法检测了285份免疫复合物病患者血清,阳性率为56.2％。