多重定量PCR法同步检测HBV、HCV和HIV-1在血液筛查中的优化及应用

目的 初步探讨多重定量聚合酶链反应（PCR）同步检测乙型肝炎病毒（HBV） DNA,丙型肝炎病毒（HCV） RNA及人类免疫缺陷病毒（HIV）-1 RNA在血液筛查中的应用前景.方法 选择2012年8月至12月,于孝感市中心血站志愿献血的合格献血者血样中,经2次酶联免疫吸附法（ELISA）检测HBV表面抗原（HBsAg）、抗HCV及抗HIV-1,检测结果均呈阴性的4 800份血样为研究对象.采用全自动核酸混合提取仪对该4 800份血样进行核酸提取,然后利用多重定量PCR方法对血样中HBV、HCV及HIV-1进行同步扩增检测.采用中国药品和生物制品检定所提供的HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA标准参考品,检测多重定量PCR的灵敏度,并与单重定量PCR的灵敏度进行比较.在HBV、HCV及HIV-1 3者中任意1种病毒基因组浓度较高的条件下,对多重定量PCR检测另2种低浓度病毒基因组的能力进行评估.结果 增加多重定量PCR中c-MMLV逆转录酶和Hot Taq酶的用量,并适量加入单链结合蛋白（SSB）,可使其扩增效率提升至单重定量PCR扩增水平.本组4 800份血样中,经多重定量PCR检测出3份HBV DNA阳性样品,ELISA漏检率为0.062 5％,未发现HCV RNA和HIV-1 RNA阳性样品;多重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为115 IU/mL、376 IU /mL和232 IU /mL;单重定量PCR检测HBV DNA、HCV RNA和HIV-1 RNA在95％置信区间的灵敏度浓度分别为51 IU /mL、94 IU /mL和78 IU/mL.结论 本研究初步建立了对献血者血液同时进行HBV DNA、HCV RNA及HIV-1 RNA检测的多重定量PCR检测方法;该检测体系经过进一步优化后,有望应用于临床大规模血液病毒筛查.     

不同DNA聚合酶对HBV PCR产物保真度的影响

PCR已广泛用于HBV感染标志物病毒DNA的定量检测~([1]),对PCR产物进行测序可分析HBV基因点突变,如检测拉夫米定等药物治疗诱导的与耐药相关的HBV基因点突变~([2-3]),研究乙型肝炎慢性化与转归的分子机制~([4]),分析基因多位点突变与HBV感染导致的肝细胞癌转移与复发的疾病预后的关系~([5]).PCR在HBV基因多位点突变的检测与研究中起重要作用.     

3种不同方法检测乙型肝炎病毒的诊断性能比较

目的比较酶联免疫法(ELISA)、电化学发光法(ECLIA)及聚合酶链式反应法(PCR)检测乙型肝炎病毒(HBV)对临床诊断的对比分析。方法应用ELISA、ECLIA及PCR法同时检测200例HBV患者或HBV携带者血清标本的HBV病毒,比较不同方法 HBV病毒检出率差异。结果 ELISA对HBV病毒有5份漏检,而PCR、ECLIA没有。PCR、ECLIA和ELISA方法对HBV的检测结果与临床符合率分别为99.5%、100.0%及93.5%。HBV-DNA的检测结果与ECLIA法检测HBV病毒一致性较好。结论 ELISA分别与ECLIA及PCR检测HBV病毒的检出率有显著性差异,ELISA比较适合初筛,ECLIA相对准确性更好一些,而PCR检测HBV-DNA用于判断体内HBV病毒复制与否。     

1 031例乙肝病毒携带者HBV-DNA含量与血清标志物的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒携带者血清中HBV－DNA定量结果与乙肝血清标志物的关系。方法：采用定量聚合酶链反应（PCR）法检测1031例乙型肝炎病毒携带者血清中DNA含量，与HBV标志物作对比研究。结果：血清HBeAg阳性组HBV－DNA含量明显高于抗HBe或抗HBc阳性组。结论：定量PCR法检测HBV－DNA具有较强的特异性和灵敏度，为临床了解病毒复制情况，督促乙肝携带者治疗及制定治疗方案、疗效观察提供了确切依据。     

HBV感染者血清中HBV-DNA与HBeAg的相关性

目的：研究用PCR法检测HBV患者血清病毒数量（HBV—DNA）与用ELISA法检测HBeAg的相应关系。方法：对263份标本分别进行PCR—HBV—DNA和ELISA法测定，按照HBeAg分为两类模式：HBeAg（＋）和HBeAg（-），同步作PCR—DNA对照分析，并对9例HBV急性感染患者作治疗后随访测定。结果：在HBeAg（＋）和HBeAg（-），8．9％（11／124）和89．2％（124／139）的HBV-DNA〈10^4 copies／ml（P〈0．005），差异有显著性，在对9例急性HBV感染患者药物治疗后作继续随访HBV—DNA测定，其数量呈下降，而对11例HBeAg（＋）而HBV—DNA＜10^4 copies／ml患者的临床调查发现与其治疗和身体状况有关。结论：HBeAg与HBV—DNA病毒数量密切相关，尤其在急性感染期，而机体免疫力与治疗能抑制HBV病毒的复制。     

乙型肝炎病毒血清学标志物与乙肝DNA相关性探讨

目的探讨乙肝病毒DNA（HBV—DNA）病毒载量与各型乙型肝炎血清标志物之间的关系。方法运用酶联免疫吸附测定法、荧光定量聚合酶链反应（PCR）技术对350例各型乙型肝炎患者进行HBV—DNA含量及血清学标志物检测（两对半）。结果血清学检测乙肝表面抗原（HBsAg）＋乙肝病毒e抗原（HBeAg）＋乙肝病毒核心抗体（抗HBc）阳性（大三阳）患者HBV—DNA阳性率明显高于其他类型（阳性率95．7％），且其病毒载量显著高于其他组。HBsAg＋乙肝病毒e抗体（HBeAb）＋抗HBc阳性（小三阳）阳性检出率也较高（阳性率54．0％）其病毒载量高于其他组。结论HBV—DNA与HBeAg的存在明显正相关。在临床工作中，不仅要应用乙肝血清标志物来判断HBV是否在体内复制，更要结合PCR检测技术来测定HBV—DNA含量。     

艾滋病实验室诊断新进展

艾滋病的实验室诊断分抗体检测和病毒载量试验。抗体检测以酶联免疫吸附试验（ELISA）及免疫印迹试验（western blot)为主要方面，ELISA已发展到第三代第四代试剂，检测的准确性以及在缩短窗口期方面都达到了很高的水平，病毒载量的测定已逐渐发展出反转录PCR（RT-PCR），实时荧光定量PCR等一系列的方法。本文对这些方法的特点，优势和应用范围作了介绍。     

乙型肝炎病毒大蛋白检测的临床应用

目的通过检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋（HBV-LP）、HBVDNA、乙型肝炎病毒标志物（HBVM）以及乙型肝炎病毒前S1蛋白（PreS1），探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）检测对于判断乙型肝炎病毒（HBV）复制的意义方法采用实时荧光定量PCR法对156例HBV感染者血清中的HBV DNA进白行检测，并用ELISA法对HBV-LP、HBVM及PreS1进行检测。结果HBV-LP的检出率与HBV DNA的检出率无明显差异，HBV-LP的含量与HBV DNA拷贝数的对数值具有相关性（γ=0.926，P〈0.001），存HBV DNA阳性血清中HBV-LP阳性率（92.4％）明显高于HBeAg（53.8％）和PreS1（56.8％），差异有统计学意义（P〈0.05）、结论HBV-LP能反映乙型肝炎患者体内HBV复制情况，比PreS1和HBeAg更具有优势，可以作为判断HBV复制新的血清学指标。     

核酸测序法与荧光PCR法测定HBV基因分型比对试验分析

目的 对核酸测序方法和荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的灵敏度、特异度和分型准确性进行比对分析.方法 核酸测序方法作为金标准与荧光PCR法检测结果进行分析,计算乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的灵敏度、特异度和分型准确性.结果 200例样本中,金标准检测结果阳性78例;在这78例中,荧光PCR法检测结果阳性78例,荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）检测的灵敏度为100.00%;金标准检测结果阴性122例,荧光PCR法检测结果阴性121例,荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）检测的特异度为99.18%.荧光PCR法用于乙型肝炎病毒（HBV）分型检测的分型准确性为100%.荧光PCR法和金标准方法的分型检测结果,无统计学差异.结论 荧光PCR法具有高灵敏度、高特异度、防污染能力强、自动化程度高、速度快等优点,适合用于传染病监测和临床使用的乙型肝炎病毒（HBV）的分型快速检测.     

乙型肝炎病毒前S1抗原与HBV—DNA相关性探讨及临床意义

乙型肝炎病毒（HBV）血清免疫标志物检查是判断乙型肝炎患病程及传染性的重要标志之一。HBV-DNA是HBV复制的最直接指标；PCR检测已用于临床，前S1抗原是HBV感染与复制的又一指标，由于其仅存在于具有传染性的完整的乙肝病毒颗粒上，既可作为HBV感染的早期诊断，又可作为疗效评价的方法，有望作为乙型肝炎新的检测手段和新的具有传染性的标志物。作采用ELISA法检测乙肝两对半与Pre-S1，用定量PCR检测HBV-DNA，并探讨它们之间的相关性，现报告如下。     

乙型肝炎病毒大蛋白检测的临床应用

目的通过检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋（HBV-LP）、HBVDNA、乙型肝炎病毒标志物（HBVM）以及乙型肝炎病毒前S1蛋白（PreS1），探讨乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV-LP）检测对于判断乙型肝炎病毒（HBV）复制的意义方法采用实时荧光定量PCR法对156例HBV感染者血清中的HBV DNA进白行检测，并用ELISA法对HBV-LP、HBVM及PreS1进行检测。结果HBV-LP的检出率与HBV DNA的检出率无明显差异，HBV-LP的含量与HBV DNA拷贝数的对数值具有相关性（γ=0.926，P〈0.001），存HBV DNA阳性血清中HBV-LP阳性率（92.4％）明显高于HBeAg（53.8％）和PreS1（56.8％），差异有统计学意义（P〈0.05）、结论HBV-LP能反映乙型肝炎患者体内HBV复制情况，比PreS1和HBeAg更具有优势，可以作为判断HBV复制新的血清学指标。     

乙型肝炎病毒前S1抗原在临床上的应用

乙型肝炎病毒（HBV）是引起病毒性肝炎的最常见病原，其可以通过血液、母婴密切接触和性传播感染他人。目前，全球约有3．5亿慢性HBV携带者，我国乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）阳性率为9．75％，现该症患者约2000多万，每年死于乙型肝炎相关疾病者约27万多人（23／10万）。对HBV建立一种简便、灵敏、重复性好的检测试剂盒具有十分重要的意义。近年来，随着对HBV前S1（PreS1）抗原在HBV发病机制、感染、复制及检测等方面研究的深入，对临床诊断具有十分重要的意义。现将PreS1抗原在临床上的应用综述如下。     

HBVPreS1抗原和HBV DNA的监测及临床评价

目的 研究HBV前S1抗原检测的临床价值，即HBVPreS1抗原与具有病毒活动性复制意义的指标HBeAg和HBV-DNA之间的相关性其与肝功能指标ALT之间的关系。方法 HBV前S1抗原和血清标志物（HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb-IgG、HBcAb-IgM）采用ELISA法检测；肝功能（ALT）用酶学速率法检测；HBV DNA用荧光定量PCR法检测。结果 ①HBeAg阳性组其HBV PreS1抗原检出率高。②HBV PreS1抗原与具有病毒活动性复制意义的指标HBV-DNA有良好的一致性。③慢性活动性肝炎肝功能指标ALT〉40u／l组其HBV PreS1抗原检出率高。结论 HBV PreS1抗原和HBV DNA的检测结果可以较好地反映HBV的复制及慢性肝炎的活动情况。PreS1抗原可以作为HBeAg和HBV—DNA的补充，也可作为判断慢性乙型肝炎患者病情活动性的一项指标。对乙肝的诊断、疗效判断与观察具有较高的价值。     

门诊病人HBV前S1抗原及HBV-M和HBV-DNA与肝功能的关系

乙型肝炎是一种严重危害我国人民健康的传染性疾病之一。长期以来，临床通过HBV标志物和HBV—DNA及肝功能的检测，指导临床诊断及治疗。近年来随着对HBV前S1(pre—S1)抗原在乙型肝炎发病机制、HBV感染与复制等方面研究的深入，发现它对诊断具有越来越重要的临床意义。临床上也将检测乙肝病毒Pre—S1Ag用于对乙肝的诊断和疗效观察。HBV基因组有4个开放读码框，分别为S、C、P和X区，其中编码病毒外壳蛋白的S区，     

乙肝患者前S1抗原与HBV—M、HBV—DNA检测结果分析

[目的]探讨乙型肝炎前S1抗原与乙肝血清标志物（HBV—M）、HBV—DNA的关系。[方法]采用ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb、前S1抗原，采用PCR法检测HBV—DNA。[结果]前S1抗原与HBV—DNA阳性具有良好的相关性（t=38．70，P〈0．001）、与HBeAg阳性也具有相关性（t=7．165，P〈0．01）；前S1抗原与HBV—DNA检测结果无差异（X^2=0．44，P〉0．5）。[结论]无条件检测HBV—DNA而HBeAg阴性的血清检测前S1抗原能更好地反映病毒复制状态和传染性。     

乙型肝炎病毒大蛋白临床检测意义初探

目的通过检测乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒大蛋白（Hepatitis B virus large surface protein,LHBs）、HBVDNA、乙肝五项（HBV M）等指标．探讨LHBs用于临床检测乙型肝炎的意义。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测乙肝五项（HBVM）以及乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）,采用荧光定量PCR方法对标本HBV DNA进行检测。结果①LHBs吸光度（OD值）与HBV DNA呈正相关关系（γ=0．972）;②73例HBsAg、HBeAg均为阳性患者中HBV DNA与LHBs的检出没有显著性差异（χ^2=0．00,P〉0．05）。两者的检出一致率为97．26％[（71＋0）／73]。③80例HBsAg阳性、HBeAg阴性患者中HBV DNA与LHBs的检出没有显著性差异（χ^2=0．11,P〉0．05）。两者的检出一致率为82．19％[（42＋18）／73]。结论乙型肝炎病毒大蛋白（LHBs）与HBV DNA呈正相关性,临床上可以用于反映乙型肝炎病毒的复制情况,特别是HBeAg阴性的患者病毒复制情况,用于填补由于病毒变异引起的HBeAg检测的不足。     

乙型肝炎病毒前S1抗原检测的临床意义

目的探讨乙型肝炎（乙肝）病毒前S1抗原（Pre-S1 Ag）与乙型肝炎标志物（HBV-M）、HBV-DNA的关系。方法采用ELISA方法对251例血清进行HBeAg、Pre-S1 Ag检测，PCR法进行HBV-DNA定量检测。结果HBeAg阳性组Pre-S1 Ag、HBV—DNA明显高于HBeAg阴性组（P〈0．01）。以HBV-DNA为金标准，Pre-S1 Ag与HBV DNA两种方法无差异（P〉0．05），HBeAg与HBV-DNA二者差异有统计学意义（P〈0．01）。结论Pre—S1 Ag与HBV—DNA具有良好的符合率，可以作为HBV早期感染、复制和乙型肝炎患者诊断、治疗及预后评估的重要指标，是乙型肝炎两对半的重要补充。     

144例HBV感染者血清PCR-HBV-DNA与Pre-S_2相关性观察

HBV感染期间，血清HBV－DNA、HBeAg是代表HBV复制的指标．我们应用聚合酶链式反应（PCR）检测了144例乙型肝炎病人血清中HBV－DNA，同时用ELISA法测定了Pre－S：，旨在证实HBeAg、HBV－DNA、Pre－S：三个病毒复制指标的相关性，以了解HBV感染者病毒复制情况．1材料和方法1．1血清标本来源1994年1月～9月我院住院的144例乙型肝炎病人血清．其中52例HBeAg（＋）／抗MBe（－），44例HBeAg（－）／抗一HBe（＋）；48例HBeAg（－）／抗，ute（－）．1．2HBV—M检测ELISA法：试剂盒由上海市传染病医院提供．1．3Pre—…     

乙型肝炎病毒前S1抗原的检测在乙型肝炎诊断中的意义

前S1抗原（PreS1 Ag）的检测近年来作为一项新的乙型肝炎（下称乙肝）病毒（HBV）血清学检测指标，已普遍应用于乙肝的诊断和疗效观察，它的检测可以及时了解PreS1 Ag与HBV复制的关系。本院对410例携带不同乙肝病毒的患者进行了HBV PreS1 Ag、乙肝病毒表面抗原（HBsAg）、乙肝病毒e抗原（HBeAg）、抗核心抗原抗体（抗-HBc）、乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV-DNA）、     

乙肝病毒外膜大蛋白临床应用价值研究

目的检测乙肝患者血清中乙肝病毒外膜大蛋白（LHBs），并与乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBVDNA）和乙肝病毒前S1抗原（PreS1Ag）相比较，探讨LHBs的临床应用价值。方法采用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测140例乙肝患者血清中LHBs，乙肝病毒标志物（HBV—M）、HBV PreS1Ag，同时采用荧光定量聚合酶链式反应（PCR）方法对血清HBV DNA进行检测，并进行统计分析。结果在所研究的各种模式中，LHBs与HBV DNA的检出率差异均无统计学意义（P均〉0．05）并且LHBs的总阳性率（76．43％）高于PreSiAg阳性率（44．29％）和乙肝e抗原（HBeAg）的阳性率（29．29％），差异有统计学意义（P均〈0．05）。结论乙肝病毒外膜大蛋白在一定程度可以反映HBV感染者体内病毒复制情况。其作为HBV复制指标，灵敏度高于PreS1Ag和HBeAg，可作为判断HBV感染者体内乙肝病毒复制情况新的血清学指标，尤其是针对HBeAg阴性患者。