缺血性老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化

背景神经生长因子( nerve growth factor, NGF)在神经元的生长、存活、分化、保护神经元的退行性改变及神经损伤的自我保护与修复中具有重要作用,目前 NGF保护神经元的分子病理学机制还有许多需要深入探讨的. 目的观察脑缺血老年大鼠部分脑区及小脑内源性神经生长因子的变化. 设计 完全随机对照实验研究. 地点与材料本研究的地点为广州军区广州总医院实验科.材料为 36只 SD大鼠 2～ 2.5年龄,雌雄不限. 干预用夹闭两侧颈总动脉法建立不完全性脑缺血动物模型,将 SD大鼠随机分成正常对照组( A组)、假手术组( B组)、缺血 30 min再灌注 6 h( C组)、 12 h( D组)、 2 4h( E组)、 4 8h( F组)、 7 d( G组)和 14 d( H组),用免疫组织化学 ABC染色法检测部分脑区神经元及小脑 NGF的表达.在透射电镜下观察各组神经元超微结构变化. 主要观察指标各组神经元 NGF表达定性及定量观察. 结果除 A、 B组外,各组顶叶皮质神经元均有 NGF表达,其中 E组和 G组中量表达,神经元数量分别为( 58.4± 9.18) mm2和( 56.2± 10.87) mm2;除 A组、 B组、 F组和 H组外各组海马均有少量表达,神经元数量 C组为( 28.8± 6.42) mm2、 D组( 30.4± 12.12) mm2、 E组( 24.2± 5.18) mm2、 G组( 15.6± 4.39) mm2;小脑均没有表达;再灌注超过 48 h组海马神经元和小脑蒲肯野细胞损伤较重,顶叶皮质神经元轻度水肿. 结论老年大鼠在受到缺血性脑损伤时,内源性 NGF在大脑皮质和海马有部分表达,小脑始终没有表达.内源性 NGF对脑组织具有一定的保护作用,早期注射外源性 NGF可能对脑组织损伤后修复具有重要意义.     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

肿瘤坏死因子-α在大鼠脑缺血再灌注中的表达及对神经细胞凋亡的影响

目的：观察大鼠脑缺血再灌注损伤后肿瘤坏死因子-α(tumor necmsis factor-alpha，TNF-α)表达及细胞凋亡情况，探讨TNF-α在脑缺血再灌注损伤中的作用。方法：采用大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型，分为3组：脑缺血再灌注组大鼠大脑中动脉阻塞2h，再灌注2，6，12，24，48，72，96h、假手术组及永久缺血组，分别测定TNF-α表达(用免疫组织化学法)及细胞凋亡数(原位凋亡检测试剂盒)。结果：脑缺血再灌注组TNF-α表达水平[6h：(15．0&;#177;3．21)个／mm^2，12h：(47．0&;#177;0．87)个／mm^2，24h：(49．0&;#177;10．3)个／mm^2，48h：(44．8&;#177;6．9)个／mm^2，96h:(37．9&;#177;6.4)个／mm^2、细胞凋亡数[2h：(33．3&;#177;0．8)个／mm^2，6h:(56．6&;#177;1．6)个／mm^2，12h:(72．3&;#177;4.2)个／mm^2．24h：(86．6&;#177;5．5)个／mm^2，48h：(96．8&;#177;0．9)个／mm^2]明显高于假手术组(P&;lt;0.01)及永久缺血组(P&;lt;0.05)；且TNF-α表达与细胞凋亡数关系密切(r=0．567．P&;lt;0，01)。结论：大鼠脑缺血再灌注损伤后TNF-α在神经元迟发性坏死中起着重要作用。     

预先电刺激小脑顶核对缺血心肌神经生长因子基因表达的影响

目的：观察预先电刺激小脑顶核对心肌梗死大鼠心脏神经生长因子mRNA表达的影响。方法：实验于2003—03／06在重庆医科大学附属第一医院心血管疾病研究所完成。选用Wistar大鼠98只。将其中90只随机分为3组，每组30只：①心肌梗死组。结扎左冠状动脉前降支。②电刺激小脑顶核组，预先电刺激小脑顶核1h再予以左冠状动脉前降支结扎。③毁损小脑顶核组，毁损小脑顶核5d后电刺激小脑顶核1h，再行左冠状动脉前降支结扎。又分左冠状动脉前降支结扎后1。7，21d3个时间点，各10只。另设假手术组(n=8)。各组于相应时间点处死大鼠后，取心肌梗死区和非梗死区组织标本，用反转录一聚合酶链反应技术检测标本神经生长因子mRNA表达。结果：去除死亡、心肌未梗死、小脑顶核电刺激或毁损失败的大鼠。最终54只大鼠资料完整。心肌梗死组、电刺激小脑顶核组、毁损小脑顶核组、假手术组分别为13。20，13，8只。①结扎左冠状动脉前降支后1，7，21d，梗死区神经生长因子mRNA表达量：心肌梗死组明显低于假手术组(q=10．047，13．869。7．044，P&;lt;0．01)；电刺激小脑顶核组明显高于心肌梗死组(0．42&;#177;0．07，0．46&;#177;0．07，0．51&;#177;0．08；0．26&;#177;0．08。0．19&;#177;0．06．0．36&;#177;0．07，q=5．358，9．888，4．822，P&;lt;0．01)；毁损小脑顶核组与心肌梗死组比较无明显差异(P&;gt;0．05)。②心肌非梗死区1，7，21d神经生长因子mRNA表达：心肌梗死组均明显低于假手术组和电刺激小脑顶核组(0．36&;#177;0．07，0．30&;#177;0．07，0．36&;#177;0．07；0，56&;#177;0．07。0．56&;#177;0．07．0．56&;#177;0．07；0．49&;#177;0．09，0．46&;#177;0．08，0．59&;#177;0．09，q：4．099～8．947，P&;lt;0．01)；毁损小脑顶核组神经生长因子mRNA的表达量与心肌梗死组比较无明显差异(P&;gt;0．05)。结论：大鼠心肌梗死后梗死区与非梗死区神经生长因子mRNA表达下调，电刺激小脑顶核可上调神经生长因子mRNA表达，起到神经保护作用。     

兔蛛网膜下腔出血后微循环障碍的动态变化

目的：定量研究兔蛛网膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage SAH)后海马CA1区微血管形态学的动态变化及相应的神经元病理改变，了解蛛网膜下腔出血后微循环障碍的特点。方法：采用枕大池两次注血法制作兔SAH模型，运用内源性过氧化物酶法显示兔SAH后3，5，7，10d海马CA1区微血管，用体视学方法对脑微血管进行定量分析，并观察了海马CA1区组织病理学变化。结果：SAH后3d海马CA1区微血管体积密度、长度密度、表面积密度分别为(401．69&;#177;58．49)mm／mm^2，(4．39&;#177;0．56)mm／mm^2，0．040&;#177;0．002，较正常组[(448．28&;#177;47．30)mm／mm^3，(5．41&;#177;0．38)mm／mm^2，0．047&;#177;0．015]均有明显下降，差异有显著性意义(P&;lt;0．05)。第7天最明显，且存在神经元的变性坏死；而血管直径在第7天才开始下降[(3．93&;#177;0．86)μm比(4．89&;#177;0．83)μm，P&;lt;0．05)]。结论：SAH后微循环障碍是继发性脑损伤的病理学基础，小血管的闭塞可能由于毛细血管灌注不良所致。     

海马小白蛋白阳性神经元对缺血反应的区域性特征

背景：短暂全脑缺血再灌流早期海马各区域小白蛋白(parvalbumin，PV)阳性神经元的变化程度以及变化时间是否存在敏感性差异?目的：研究缺血敏感脑区海马的PV阳性神经元的改变以及缺血性脑损伤的细胞分子机制。设计：随机对照的实验设计。地点和对象：实验在中山大学中山医学院人体解剖学教研室完成。40只成年健康雄性大鼠，由中山大学中山医学院实验动物中心提供。干预：建立4管阻塞缺血大鼠模型，随机分为正常对照组，缺血再灌流0，6，12，24h共5组，每组8只。全脑缺血20min后再分别灌流0～24h。PV免疫组织化学反应观察海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。主要观察指标：海马各区域PV阳性神经元表达水平及定量PV阳性神经元数目。结果：正常对照组大鼠海马各区域(CA1，CA2，CA3)的始层、锥体层、放射层和腔隙分子层，齿状回的颗粒层、分子层及多形层(门区)的切片观察均出现PV阳性反应。再灌流6～12h内见PV阳性神经元出现胞体肿胀、胞浆染色变淡等变化。放射层突起密度减少；PV阳性终末的颗粒密度稀疏，以锥体细胞胞体周围的变化为明显。PV阳性神经元数目：缺血再灌流0h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．66&;#177;3．06)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(4．33&;#177;1.53)个；再灌流6h时，海马CA2区从(20．67&;#177;1．16)个减少为(11．33&;#177;3．51)个，CA3区从(12．33&;#177;2．52)个减少为(5．00&;#177;1．73)个；再灌流24h时，海马CA1区从(0．33&;#177;1．53)个减少为(2．33&;#177;4．93)个，门区从(1．67&;#177;1．53)个减少为(3．33&;#177;4．51)个；上述缺血再灌流组PV阳性神经元数目减少与缺血前比较有统计学意义(t=4．4505～9．2258，P&;lt;0．05)。结论：海马PV阳性神经元对全脑缺血存在区域敏感性差异。     

迷走神经刺激对红藻酸致痫大鼠谷氨受酸体和行为学的影响

目的：观察迷走神经刺激(vagus nerve stimulation,VNS)对红藻酸致痫大鼠海马CA1区Ⅰ组代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptor，mGluR)的影响，为VNS抑痫机制研究提供理论依据。方法：SD大鼠64只数字表法随机分为对照组、红藻酸组、单纯VNS组和VNS治疗组4个组，每组16只，每组再分为测MGluR58只和测mGluR128只。观察大鼠的行为改变，并在各组动物存活2h后，断头取脑，在前囟至前囟后5mm区域内取脑组织用ABC法行mGluR免疫组织化学染色。光镜下以显微计数尺计数双侧海马CAl区1mm范围内阳性神经元的变化。结果：红藻酸组出现重型发作表现；VNS治疗组仅呈轻型发作表现；与对照组相比，红藻酸组CAl区mGluRla为(50&;#177;8)／mm^2，mGluR5为(125&;#177;9)／mm^2，较对照组(42&;#177;3)，(98&;#177;6)／mm^2。表达增加，差异有显著性意义(q=-4．37，-10．88，P&;lt;0．05，0．01)，VNS治疗组中mGluRla表达无明显变化，mGluR5表达显著降低，为(115&;#177;8)／mm^2。结论：VNS可有效控制癫痫发作，并降低痫后mGluR，特别是mGluR5的表达，提示抑制mGluR的表达可能是VNS发挥抗癫痫作用的重要机制之一。     

脑缺血预处理后Caspase-8蛋白的表达与神经元的保护作用

目的：探讨脑缺血预处理后凋亡相关基因Caspase-8蛋白表达与神经元保护作用的关系。方法：雄性Wistar大鼠70只，随机分为对照组（10只)、预处理组(10只)、缺血预处理组(25只)和缺血组(25只)。四血管阻断法复制全脑缺血模型，尼氏和TUNEL染色法观察脑皮质及海马CA1区神经元数和凋亡细胞数，免疫组化方法检测Caspase-8蛋白在缺血预处理后表达变化情况。结果：①缺血7d时，缺血预处理组皮质及海马CA1区神经元数无显著变化[(2.68&;#177;8．5)个／视野]，缺血组神经元数则显著减少[（135.0&;#177;5.6）个／视野]。②缺血预处理组Caspase-8蛋白缺血12h表达升高[(125.6&;#177;9.0)个／视野]，24h达高峰[(167.0&;#177;8.1)个／视野]：缺血组(caspase-8蛋白缺血6h表达升高[(154．2&;#177;18.4)个／视野]，12h达高峰[（222.8&;#177;17.1)个／视野]：各对应时点缺血组Caspase-8蛋白阳性表达细胞较缺血预处理组明显增多。③缺血预处理组和缺血组均在缺血12h皮质及海马CA1区凋亡细胞数开始增多[(15．5&;#177;2．1)，（39.8&;#177;3．9)个／视野]，缺血48h凋亡细胞数达高峰[(68.3&;#177;13.6），(328.4&;#177;24．0)个／视野]，但缺血组凋亡细胞数较缺血预处理组显著增多。结论：全脑缺血可能通过诱导Caspase-8蛋白的表达增多，启动细胞凋亡，导致缺血后神经元凋亡的发生，缺血预处理延缓并降低缺血后Caspase-8蛋白表达并减少细胞凋亡的发生可能是其神经元保护作用机制之一。     

大鼠坐骨神经损伤后脊髓运动神经元捷状神经营养因子的表达及针刺干预后的变化

目的：观察了坐骨神经损伤后脊髓运动神经元睫状神经营养因子(ciliary newrotrophic factors，CNTF)表达水平及针刺、神经生长因子(nerve growth factor，NGF)干预后的相关变化，旨在探讨针刺促进周围神经损伤修复的机制。方法：选用160只Wister大鼠，分电针组、药物组(NGF)、手针及模型、假手术组5组。钳夹坐骨神经制造周围神经损伤模型，采用免疫组织化学染色同光、电镜相结合方法，利用图像分析系统检测不同干预手段、对不同时间点脊髓CNTF阳性运动神经元的计数和吸光度水平。结果：坐骨神经损伤后腰段脊髓CNTF阳性运动神经元数量和吸光度水平7d[模型组CNTF阳性神经元数为(61．42&;#177;0．42)％]开始下降，14d [50．94&;#177;2．96)％]明显下降，21d[42．72&;#177;4．51)％]达最低水平，28d[49．37&;#177;2．70]开始恢复，伤侧比对侧更为明显(P&;lt;0．05)；针刺及NGF治疗，能降低神经元死亡数量、减少其吸光度下降程度(P&;lt;0．05)，并能减轻神经元肿胀变性的形态学变化。结论：针刺及NGF能促进脊髓运动神经元存活、加快内源性CNTF水平的恢复；能减轻神经元的变性坏死程度，减少神经元的死亡。     

大鼠局灶性脑缺血耐受中即早基因c-jun表达的变化

目的：研究即早基因c-jun在大鼠短暂局灶性脑缺血预处理诱导脑梗死保护中的表达。方法：采用开颅方法阻断大鼠大脑中动脉(MCAO)，通过脑梗死体积分析及病理形态学变化，观察脑缺血预处理的保护作用。采用原位杂交和免疫组化方法观察即早基因c-jun在脑缺血耐受中的表达。结果：预处理未引起脑组织神经元的病理性损伤，未经预处理的缺血组2,6和24h的脑梗死体积为(59．23&;#177;10．50)，(72．35&;#177;12.30)，(135．26&;#177;13.21)mm^3，经预处理的脑缺血组2，6和24h脑组织梗死体积显著减小分别为(38．35&;#177;11．2)，(51．25&;#177;13．46)，(83．25&;#177;14．60)mm^3，缺血预处理诱导了再次缺血后胶质细胞c-jun mRNA及蛋白的早期表达。结论：短暂局灶性脑缺血预处理能够诱导对脑梗死的保护作用；即早基因表达的改变可能与脑缺血预处理诱导脑缺血耐受有关。     

醒脑静对脑缺血大鼠神经保护作用与氨基酸受体表达的关系

目的：探讨醒脑静对局灶性脑缺血大鼠海马N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体的影响。方法：采用线栓法制备大鼠左侧大脑中动脉阻断(MCAO)模型，分别观察醒脑静对MCAO大鼠神经功能缺损评分、脑梗死体积和海马NMDA受体的含量的影响。结果：缺血3和6h，醒脑静组神经功能缺损评分明显低于MCAO组(P&;lt;0．01)；且模型组梗死体积24h(197．60&;#177;34．03)mm^-3明显大于6h(140．60&;#177;14．81)mm^3，差别有统计学意义(P&;lt;0．05)；但治疗组梗死体积6h是(114．60&;#177;23．62)mm^3，24h是(125．60&;#177;20．51)mm^3．后者明显小于模型组(P&;lt;0．01)；缺血1，6，24h，模型组NMDA受体表达分别为(8．40&;#177;1．23)，(12．08&;#177;1．80)，(17．94&;#177;1．62)nmol／g，呈逐渐上调趋势(P&;lt;0．05)，24h时治疗组NMDA受体表达为(5．22&;#177;1．43)nmol／g，明显低于模型组(P&;lt;0．01)。结论：醒脑静对局灶性脑缺血大鼠具有明确的神经保护作用，其机制可能与拮抗兴奋性氨基酸受体表达上调有关。     

异丙酚对全脑缺血再灌注损伤大鼠的脑保护作用及其机制

背景：静脉麻醉药异丙酚可能通过抗凋亡作用保护脑缺血神经元，但是，异丙酚抗凋亡作用的研究还很少，机制尚不明确。目的：观察异丙酚对大鼠全脑缺血再灌注损伤神经元凋亡率、坏死率和凋亡相关基因蛋白表达的影响，探讨异丙酚的脑保护作用及其机制。设计：随机对照的实验研究。地点和对象：在首都医科大学附属北京神经外科研究所进行研究。成年雄性Wistar大鼠19只，随机分为缺血组(n=7)、异丙酚组(n=7)和假手术对照组(n=5)。干预：制备大鼠全脑缺血再灌注模型。异丙酚组再灌注开始后立即静脉输注异丙酚1．5mL／h，持续30min。于再灌注24h取脑，用流式细胞仪检测凋亡率，坏死率，bcl．2，Bax和p53蛋白在大鼠海马神经元中的表达情况。主要观察指标：凋亡率，坏死率，bcl-2，Bax和p53蛋白在大鼠海马神经元中的表达情况。结果：异丙酚组海马神经元的凋亡率和坏死率【(7．01&;#177;0．79)％和(12．80&;#177;0．92)％】较缺血组【(10．89&;#177;0．80)％和(16．67&;#177;1．04)％】明显降低(P&;lt;0．01)。异丙酚组Bax和p53蛋白表达【(49．93&;#177;5．41)％和(10．34&;#177;1．65)％】较缺血组【(57．05&;#177;1．91)％和(13．84&;#177;0．97)％】明显降低(P分别&;lt;0．05和0．01)，而异丙酚组bcl-2蛋白表达(9．45&;#177;1．16)％较缺血组(9．69&;#177;0．94)％未见显著性差异(P&;gt;0．05)。结论：异丙酚能够降低大鼠全脑缺血再灌注神经元的凋亡率和坏死率，起到脑保护作用，其机制可能与降低促凋亡基因Bax和p53蛋白的表达有关。     

电针对大鼠坐骨神经损伤后神经生长因子表达的影响

目的：探讨电针对大鼠坐骨神经损伤后脊髓前角细胞神经生长因子(nerve growth factor，NGF)的影响。方法：取Wistar大鼠60只，4只为正常组，56只行左侧坐骨神经切断外膜缝合。电针组每天穴位电针20min，模型组不作任何处理。分别于术后7，14，21和28d用原位杂交和免疫组化技术和测定脊髓前角NGF阳性神经元计数、阳性神经元平均积分光密度。结果：电针组损伤侧脊髓前角内NGF阳性神经元数量在各时间点明显高于模型组(P＜0．05)，28d时电针组伤侧脊髓前角内NGF阳性神经元数量为(48．12&;#177;1．11)个，模型组为(35．90&;#177;2．09)个。同时模型组神经元内NGF阳性神经元平均积分光密度在各时间点明显低于电针组(P＜0．05)。结论：电针可提高损伤神经神经元内源性NGF水平，促进神经功能恢复。     

神经生长因子对大鼠视神经损伤的保护作用

背景：神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对神经元的存活、神经纤维的生长和分化以及再生起重要作用，是维持中枢神经和周围神经功能的重要活性因子，对许多疾病如神经系统变性疾病、老年性痴呆、脊髓损伤、脑卒中致瘫痪等均有潜在的治疗价值。目的：测定经二硫化碳所致视神经损害的大鼠在治疗前后视觉诱发电位的变化，来证实神经生长因子对受损视神经的治疗效果。设计：完全随机设计，对照实验研究。地点和材料：研究地点为解放军上海第二军医大学基础部。材料为Wistar健康成年大鼠，体质量240-340g，雌雄各半，由第二军医大学实验动物中心提供。方法与主要观察指标：将大鼠随机分成4组：NGF5000U／kg组、NGF1000U／kg组、NGF200U／kg组和空白对照组。将清醒已埋好电极的大鼠进行固定，测定其视觉诱发电位及模式翻转诱发电位。结果：大鼠视神经损伤模型经神经生长因子治疗20d后，模式反转诱发电位潜伏期[NGF5000U／kg组N1为(42．9&;#177;5．3)s，P1为(59．9&;#177;5．6)s，N2(93．8&;#177;5．9)s]和闪光诱发电位的潜伏期[NGF5000U／kg组P1为(31．2&;#177;2．6)s．N1为(37．9&;#177;4．0)s，P2为(54．7&;#177;4．9)s，N2为(85．1&;#177;5．2)s]与对照组相比均有明显的缩短。结论：神经生长因子能明显改善视神经传导功能，并有量一效关系，提示神经生长因子对视神经损伤有一定的治疗作用。     

艾灸大椎穴对慢性应激大鼠神经营养因子的影响

目的：试图发现艾灸大椎穴对慢性应激状态下大鼠海马神经元及脑源性神经营养因子(brain-erived neurotrohic factor，BDNF)的影响。方法：SD雄性大鼠18只，按随机数字表法分为正常组、模型组、艾灸组。应用孤养和长期不可预见性的中等强度刺激造成慢性应激失调模型，观察各组大鼠海马神经元的变化。采用苏木精-伊红(HE)染色、尼氏体染色的方法光镜下观察海马神经元形态的改变，用免疫组织化学的方法对海马BDNF阳性神经元进行染色，并用图像分析仪定量分析。结果：慢性应激可致大鼠海马神经元明显受损，BDNF阳性神经元数量亦显著减少，形态以空泡为主。与模型组比较，艾灸穴对此有明显改善作用。艾灸组海马BDNF阳性神经元的平均光密度CA2，CA3，CA3区面积百分比：(16．98&;#177;1．34)％，(32．77&;#177;2．38)％，(2．48&;#177;0．25)％；模型组相应指标分别为(12．21&;#177;1．58)％，(19．89&;#177;3．82)％，(1．04&;#177;0.38)％(F=6．25。P&;lt;0.05；F=12．27，11．45，P&;lt;0.01)。结论：艾灸大椎穴对慢性应激大鼠BDNF有良性调节作用，并对海马神经元有保护作用。     

低氧状态下海马神经元细胞信号转录因子和活化子3，5的基因表达状况

目的：探讨STAT3，5基因在缺氧性海马神经元细胞损伤中的可能作用。方法：分离新生Wistar大鼠双侧海马进行体外培养，采用Tripure试剂提取海马神经元细胞的总：RNA，自行设计大鼠STAT3，STAT5和阳性对照HPRT的PCR引物序列，通过半定量的逆转录多聚酶链反应(RT—PCR)技术检测常氧组、低氧2，6，12h组海马神经元细胞的STAT3和STAT5基因的表达水平；采用PCR产物纯化试剂盒纯化PCR产物，而后用四色荧光法直接测序。结果：图像分析结果显示低氧培养2h组海马神经元细胞中STAT3，5mRNA表达水平升高，目的片段与HPRT的光密度比值分别为0.57&;#177;0.1l和0.64&;#177;0.09，在低氧6h组(0.85&;#177;0.14和0.86&;#177;0.11)达最高，与正常组(0.34&;#177;0.12和0.40&;#177;0.08)比较差别均有显著性意义(T=24.59～-7.37，P&;lt;0.01)。低氧12h组的表达量低于6h组，但高于正常组(P&;lt;0.01)。测序显示，PCR扩增的产物STAT3，STAT5与大鼠Genbank中的序列完全一致。结论：低氧增强海马神经元细胞中STAT3，5基因的表达，在低氧所致的脑损伤中可能发挥重要作用。     

α-黑素细胞刺激素对大鼠局灶脑缺血再灌注后炎症反应的影响

背景：研究表明，神经免疫调节肽α-黑素细胞刺激素(α-melanophorestimulating hormone，α-MSH)可通过抑制促炎因子释放、改善淋巴细胞活力等途径发挥其抗炎、抗菌、退热和免疫调节作用，在防治全身炎性反应综合征中可能有良好的应用前景。目的：研究α-MSH对缺血-再灌注后脑组织炎性细胞浸润及黏附分子(intercellular adhesion moleeule，ICAM-1)表达的影响。设计：随机双盲对照实验。单位：解放军第三军医大学西南医院急救部。材料：健康雄性Wistar大鼠60只，由第三军医大学实验动物中心提供。实验分3组，即假手术组、缺血组和α-MSH治疗组，每组根据缺血2h后再灌注6，12，24，48，72h5个时相点分为5组，每组各时相点4只。干预：制备大脑中动脉闭塞模型，在每个时间点取2只动物用免疫组织化学方法检测ICAM-1的表达情况。各时间点取2只动物用于检测髓过氧化物酶(myeloperoxidase，MPO)活性。在透射电镜下观察脑组织细胞超微结构。主要观察指标：ICAM．1阳性表达，MPO活性，细胞超微结构。结果：缺血再灌注后高倍镜下(&;#215;200)每平方毫米大鼠脑组织切片的ICAM-1阳性细胞数在假手术组中稳定于(1．02&;#177;0．14)～(1．15&;#177;0．16)个／mm^2；缺血组6h后ICAM-1开始上升，于12h达高峰，由(2．82&;#177;0．07)个／mm^2增至(7．08&;#177;0．09)个／mm^2，24-72h其表达水平仍明显高于假手术组；α-MSH治疗组ICAM-1表达明显下调，由(4．51&;#177;0．11)个／mm^2降至(2．97&;#177;0．09)个／mm^2。脑组织MPO活性在假手术组中稳定于(3．17&;#177;0．27)～(3．67&;#177;0．23)nkat；缺血组于12h开始升高，24h达高峰，由(5．83&;#177;0．15)nkat增至(9．00&;#177;0．25)nkat，到72h活性持续升高；α-MSH治疗组MPO活性较缺血组明显下降，24h活性为(6．63&;#177;0．27)nkat。超微结构观察显示假手术组神经元结构完整；缺血组再灌注神经细胞膜和胶质细胞膜、核膜出现破坏，线粒体肿胀，12h超微结构改变达高峰；治疗组早期同缺血组，12h后并未随时间进一步加重。结论：α-MSH能减轻缺血-再灌注后脑组织炎性细胞浸润及ICAM-1表达，对脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

脑尔康对老年痴呆小鼠脑内胆碱酯酶活性及神经元的影响

目的：探讨复方中药脑尔康对小鼠学习记忆障碍的保护作用及其对胆碱酯酶活性的影响及保护神经元的抗痴呆作用机制。方法：健康昆明种雄性小鼠60只，按随机数字表法分为6组，除空白组外，连续造模50d后，每组随机取3只，用苏木精-伊红(HE)染色法，观察小鼠海马CA1区细胞数量及形态，其余动物迅速断头取脑，冰台分离海马及皮质，检测各自的胆碱酯酶活性。结果：模型组胆碱酯酶活性明显增高[脑皮质、海马：模型组(3．0&;#177;0．1)．(2．7&;#177;0．1)mol／s；空白组(2．2&;#177;0．1)，(2．2&;#177;0.1)mol／s](q=16．7，48．2，P&;lt;0．01)，用药各组与模型组比较，除小剂量组外胆碱酯酶活性均明显低于模型组(q=7．9-37．9，P&;lt;0．01)；模型组[(47&;#177;4)个／200μm]海马CA1区神经元数量明显少于空白组[(101&;#177;11)个／200μm](q=5．39，P&;lt;0．01)，可见神经元脱失，并有胶质细胞增生。用药各组与模型组比较，仅有中药大、中剂量组神经元数量显著多于模型组[q=3．4，P&;lt;0．05或q=4．3，P&;lt;0．01)。结论：脑尔康能明显降低老年痴呆模型小鼠皮层及海马胆碱酯酶活性，并有保护海马CAl1区神经元的作用。     

麦全冬定对被动吸烟大鼠脑组织诱导型一氧化氮合酶活性的影响

目的：研究麦全冬定对被动吸烟大鼠脑组织诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase.iNOS)表达的影响。探讨麦全冬定在吸烟导致的脑缺血损伤中的保护作用机制。方法：采用免疫组织化学ABC方法检测脑组织iNOS活性。结果：①正常对照组：大鼠大脑皮质、海马、纹状体均有少量iNOS表达(7．89&;#177;0．40)，(10．16&;#177;2．99)，(7．04&;#177;0．52)个／视野；②吸烟组：各脑区iNOS表达明显升高(37．16&;#177;2.82)，(43．07&;#177;1．24)，（39．50&;#177;3．33)个／视野(t=22．22，13．95，11．92，P&;lt;0．01)。②麦全冬定组与吸烟组比各脑区iNOS表达显著降低(20．90&;#177;4．02)，(28．95&;#177;1．61)，(15．33&;#177;2．36)个／视野(t=3．22，2．82．11．31．P&;lt;0．05)。结论：吸烟通过脑组织中iNOS表达增强生成过多的一氧化氮、造成脑神经细胞毒性损伤，麦全冬定对iNOS表达有下调作用，从而减少脑神经细胞毒性损伤。     

高压氧对脑缺血再灌注海马CA1区神经元凋亡的作用

目的 研讨高压氧(HBO)对脑缺血再灌注损伤的疗效及其机制，为临床HBO治疗疾病提供理论依据。方法 实验动物用沙土鼠20只，雌雄不限。采用随机数字法将实验动物分为正常对照组、缺血组、0．15MPa HBO治疗组、0．25MPa HBO治疗组、0．25MPa压力空气(hyper-baric air．HBA)对照组5组(n=4)。应用TUNEL检测技术，对沙土鼠前脑缺血20min后再灌注3d模型，用高压氧(hyperbaric oxygen，HBO)治疗连续3d，观察HBO作用下海马CAt区神经元凋亡变化。结果 沙土鼠脑缺血再灌注3d后海马cA1区大量神经元凋亡[(163&;#177;15)／mm^2]，HBO治疗组凋亡细胞数[O．15MPa HBO治疗组为(99&;#177;12)／mm^2，0．25MPa HBO治疗组为(73&;#177;11)／mm^2]明显减少(P&;lt;0．01)，0．25MPa空气对照组凋亡细胞数为(15l&;#177;13)／mm^2，以0．25MPa HBO治疗组为佳。结论 HBO治疗对海马神经元损伤有保护作用，减少神经元凋亡，为高压氧治疗缺血性损伤的疗效机制之一。