低氧诱导鼻咽癌细胞表达血管内皮生长因子

背景与目的:低氧是大多数实体瘤(包括鼻咽癌)肿瘤微环境中的一个普遍存在的现象。研究表明,低氧能诱导血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowthfactor,VEGF)在神经胶质瘤(C6)等细胞中的表达。本实验研究低氧对VEGF在体外培养的鼻咽癌细胞株(CNE-2Z)表达的影响,并探讨其与肿瘤转移的关系。方法:建立CNE-2Z细胞体外低氧细胞培养模型。在低氧处理24h后,分别以RT-PCR和Westernblot方法检测VEGF基因在mRNA和蛋白质水平的表达变化。结果:RT-PCR证实CNE-2Z细胞表达VEGF189,VEGF165,VEGF145和VEGF121等4种VEGFmRNA同工型。此四种mRNA同工型在低氧处理24h后均表达增加,分别是常氧对照组的(2.67±0.30)、(2.05±0.03)、(2.73±0.15)和(1.65±0.01)倍。Westernblot显示,低氧实验组VEGF蛋白表达是常氧对照组的(2.20±0.07)倍。结论:CNE-2Z细胞表达VEGF基因。体外低氧处理能使CNE-2Z细胞中VEGF表达增加。     

不同转移潜能人肝癌细胞系的基因表达分析

目的：比较不同转移潜能人肝癌细胞系的基因表达谱,寻找与癌转移相关的基因表达改变。方法：采用基因芯片技术,比较遗传背景相同但转移力有明显差异的两个细胞系MHCC97－L和HCCLM3,分析其基因表达谱的差异。结果：在1626个候选基因中,筛选出25个差异表达基因。HCCLM3与MHCC97－L相比,表达上调的基因有8个,包括细胞增生基因E25、信号传导基因NKK6和免疫相关基因SP40,40等;下调的有17个,包括细胞周期调控基因Rb2、信号传导基因PKCβ2和错配修复基因hMSH2等。结论：肝癌转移是多基因作用的综合结果,筛选的基因对预测转移和抗转移干预措施可能有指导意义。     

不同转移潜能骨肉瘤细胞差异表达基因的筛查

目的: 研究不同转移潜能骨肉瘤细胞差异表达的基因,筛选骨肉瘤转移相关的基因。方法: 分别提取低转移骨肉瘤细胞株M6和高转移骨肉瘤细胞株M8细胞总RNA,采用cDNA基因芯片筛查M6和M8细胞差异表达的基因,杂交信号用Generation Ⅲ array扫描,结果用Imagequant 5.0软件分析。选择基因芯片筛选到的典型差异表达基因用实时定量PCR进行验证。结果: M6和M8骨肉瘤细胞株差异表达的基因共有330个,其中与低转移组（M6）相比,在高转移组（M8）中显著性上调表达的基因有178个,下调表达的基因有152个。其中发生非常显著性上调表达的基因43个,发生非常显著性下调表达的基因49个。差异基因主要包括与细胞增殖相关的基因,提示与M8细胞增殖受抑相关;其次是与基因表达调控及信号转导相关的基因,提示这些基因和肿瘤转移有关联性。结论: 基因芯片方法对于筛选骨肉瘤转移相关基因有独特的优势,MG63细胞M8亚株中筛查到显著性上调的基因43个,显著性下调的基因49个,与骨肉瘤的转移有关。     

高低转移人卵巢癌细胞系基因表达谱差异

目的 用基因芯片技术研究高低转移人卵巢癌细胞系（HO－8910PM和HO－8910）基因表达谱差异,筛选与转移相关的基因。方法 分别抽提高低转移人卵巢癌细胞和对照正常卵巢上皮的总RNA并纯化mRNA;分别将等量的mRNA逆转录合成以图像,用软件对扫描图像进行数字化处理和分析。结果 HO－8910细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有355个基因;HO－8910PM细胞与正常卵巢上皮比较差异3倍以上共有323个基因。HO－8910PM与母系HO－8910比较差异2倍以上共有163个基因,差异3倍以上共有21个基因。结论 两株人卵巢癌细胞与正常卵巢上皮细胞基因表达谱存在差异,提示这些基因与卵巢癌的发生和发展有关;HO－8910PM与HO－8910比较存在差异的基因可能与高转移特性相关。     

人鼻咽与鼻咽癌cDNA阵谱中DNA修复相关基因表达差异的初步研究

目的 用cDNA阵卤咽癌组织及正常组织的基因表达谱,研究鼻咽癌组织内修复相关基因的表达差异。方法 Atlas human cancer cDNA expression array 7742-1杂交后,用Atlas Image 1.01a分析滤膜杂交结果,RT－PCR反应验证滤膜杂交结果。结果 在588个肿瘤相关基因中,共有134个基因表达上调,88个基因表达下调。在有DNA损伤应答、修复、重组相关基因的C区中,表达上调的基因有21个,与修复相关的有6个;表达下调的有44个,与修复相关的则有12个。结论 DNA修复相关基因的改变可能在鼻咽癌病理生理过程中起一定作用。     

不同转移能力肺癌细胞株差异非编码RNA的鉴定

目的:探讨不同转移能力的肺癌细胞株中miRNA表达差异,并分析miRNA在肺癌转移过程中的功能及意义.方法:利用非编码小RNA芯片技术,检测高转移肺癌细胞株(PGBE1)与低转移肺癌细胞株(PGLH7)间miRNA的表达差异,并通过qPCR鉴定.结果:非编码小RNA芯片分析显示,在不同转移能力肺癌细胞中得到4条差异表达的miRNA,分别为hsa-mir-34b、hsa-mir-23a、hsa-mir-23b和hsa-mir-199a-5p.实时定量PCR对差异的miRNA进行鉴定,4条差异的miRNA在低转移细胞株(PGLH7)中的丰度均高于其在高转移细胞株(PGBE1)中的丰度,P<0.05,与芯片结果吻合.结论:4条miRNA可能与肺癌转移相关,对miRNA功能探讨将有助于研究肺癌转移的分子机制.     

新克隆的硝基还原酶基因NOR1的表达及其产物的纯化

背景与目的：NOR1是与鼻咽癌密切相关的抑瘤／易感基因候选者之一,本实验旨在构建NOR1基因原核表达载体,在大肠杆菌中表达并纯化NOR1基因所编码的蛋白。方法：抽提人鼻咽正常组织中总RNA,利用RT－PCR扩增NOR1基因全长,经BamH I、Xho I双酶切后插入同样经BamH I、Xho I双酶切后的pGEX-4T-2质粒,构建表达载体pGEX-4T-2/NOR1重组表达质粒;转化大肠杆菌Jm105,用异丙基－β-D硫代半乳糖苷（isopropyl-thiogalactoside,IPTG）诱导pGEX-4T-2/NOR1/Jm105表达GST融合蛋白后,采用Western blot验证,并用GST琼脂糖亲和层析柱对目的蛋白进行纯化。结果：酶切鉴定和测序验证成功地构建了NOR1基因原核表达载体,经十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）分析在大肠杆菌Jm105中成功诱导表达了一分子质量约为74kDa的融合蛋白;该融合蛋白存在于细菌裂解液的上清和沉淀中,Western blot证实表达获得了成功;并利用亲和层析法获得了纯化蛋白。结论：成功获得了高效表达NOR1基因的原核表达产物,通过对该融合蛋白的纯化为它的多抗制备奠定了基础。     

RT-PCR技术在胃肠癌外周血微转移检测中的应用

胃肠肿瘤是常见的恶性肿瘤,而且大部分较早地通过血道和淋巴管发生微转移,术后复发率较高。因而早期诊断和及时发现镦周血微转移现象对于临床治疗和判断预后有着重要意义。本文综述近年来利用分子生物学技术尤其是具有较高敏感性和特异性的逆转录聚合链反应（ＲＴ－ＰＣＲ,ｒｅｖｅｒｓｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ－ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ）技术,检测肿瘤组织相关分子,如ＣＫ１９,ＣＫ２０,     

人白血病不同致瘤潜能细胞系的基因表达差异分析

目的 探索人白血病细胞系在裸鼠体内致瘤的分子生物学机制。方法 应用DNA芯片技术,检测K562和K562-n细胞的基因表达差异。结果 K562和K562-n细胞表达差异显著的基因有139条,其中在K562-n细胞中表达上调的有42条,表达下调的有97条。在这139条基因中,有85条已在GeneBank中登录,54条为新序列。这些基因可以划分为5个主要的功能群：(1)肿瘤相关基因,包括原癌基因和肿瘤抑制基因;(2)与转录调节、细胞周期、凋亡相关的基因;(3)与细胞骨架和细胞动力学相关的基因;(4)与物质代谢和转运相关的基因;(5)与免疫功能相关的基因。另外还有一些功能混杂的基因和功能未知基因的表达变化。结论 K562和K562-n细胞存在多方面基因的表达差异,人白血病细胞系K562-n在裸鼠体内的高致瘤性与其特异的基因表达谱有关。     

肺巨细胞癌高低转移株差异表达基因的鉴定

目的 从两株同源但转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株中分离并鉴定差异表达基因。方法 应用抑制消减杂交(SSH)技术,对来源相间、转移能力不同的人肺巨细胞癌细胞株PLA-801C和PLA-801D进行了两次实验。第1次SSH实验以PLA-801C株为实验方,第2次实验以PLA-801D株为实验方。将获得差异表达的片段点在氨基化的玻片上做成基因芯片,利用荧光标记的探针与芯片杂交,选取差异表达克隆,并利用RNA狭缝杂交或Northern杂交对若干片段进行验证。结果 在低转移肺巨细胞癌细胞株中,高表达的序列有16条;在高转移肺巨细胞癌细胞株中,高表达的序列有79条。测序后经过同源性分析,大部分序列均与已知序列高度间源,主要编码以下几类蛋白：(1)细胞因子及其受体相关蛋白;(2)激酶及其相关蛋白;(3)其他蛋白,包括酶类、热休克蛋白、受体蛋白、细胞骨架蛋白、线粒体蛋白和癌基因编码产物等;(4)一些未知功能的蛋白或是从核酸序列推出来的假想蛋白。结论 HSP70、AXL受体酪氨酸激酶和14-3-3ξ等多种已知基因表达情况的改变,可能影响肺癌的转移过程,此外还发现了一些可能的肿瘤转移相关新基因。     

46例首诊伴远处转移鼻咽癌的预后分析

目的 回顾性分析初诊时即伴有远处转移的鼻咽癌患者的治疗结果 并探讨其预后.方法 3年余共收治46例初诊伴有远处转移的鼻咽癌患者,其中43例为单器官转移,3例为多器官转移.肝转移19例,骨转移11例,肺转移7例,腋窝淋巴结和纵隔淋巴结各6例,脑转移1例.所有患者均接受了鼻咽部及颈部40～85 Gy放疗.41例接受了1～5周期PF方案化疗,23例接受了远处转移灶姑息性放疗.结果 随访率为100%.1、2、3、5年生存率分别为66%、47%、30%、19%,中位生存时间为20个月.转移灶是否放疗及KPS评分是影响生存的预后因素.转移灶放疗与末放疗的中位生存时间分别为39个月和13个月(X2=8.63,P=0.012),KPS评分≥80和<80的中位生存时间分别为26个月和12个月(X2=3.95,P=0.035).结论 首诊远处转移的鼻咽癌患者得到积极治疗后仍有长期生存可能,KPS评分高者预后好,在全身化疗、原发灶放疗及支持治疗的同时转移病灶局部治疗可能延长生存时间.     

转移性鼻咽癌的诊断和治疗

早期诊断、早期治疗以及选择正确的治疗模式是转移性鼻咽癌治疗的关键.目前,在鼻咽癌远处转移的诊断中,正电子发射计算机断层显像(PET)-CT是最优的检查方法.在治疗方面,以铂类为基础的化疗是首选的标准治疗方式,分子靶向治疗则有可能进一步提高疗效.如果患者转移灶局限,在使用化疗使病情得到控制后,针对转移灶进行局部姑息性治疗,有可能改善预后.     

68例首诊伴单纯骨转移鼻咽癌患者预后分析

目的 探讨首诊伴单纯骨转移鼻咽癌患者的预后影响因素。方法 选取1997—2015年汕头大学医学院附属肿瘤医院收治的68例首诊伴单纯骨转移鼻咽癌患者,49接受放化疗。Kanplan-Meier法计算OS率,Logrank法单因素预后分析,Cox模型多因素预后分析。结果 中位随访时间为95.3个月,1、2、3、5年OS率分别为53%、38%、21%、15%,中位OS期13.4个月。单因素分析结果显示脊柱转移、骨转移数目、疗前LDH水平、原发病灶放疗技术、放疗剂量、原发病灶近期疗效均是影响OS期因素(P=0.02、0.01、0.00、0.02、0.02、0.01),多因素分析显示骨转移数目≤3个、原发病灶放疗剂量>65 Gy、IMRT技术是影响OS期的因素(P=0.03、0.02、0.04)。结论 对于骨转移数目≤3个的首诊伴单纯骨转移鼻咽癌患者,应予以积极治疗,包括采用IMRT技术、原发病灶放疗剂量>65 Gy,以争取原发病灶的近期疗效达到CR,临床意义重大。     

用高密度cDNA微阵列技术检测鼻咽癌差异表达基因

背景与目的：鼻咽癌的发生与发展涉及多个步骤,多个因素的参与,对此目前尚缺乏了解,本研究试图通过大规模检测鼻咽癌的基因差异表达来揭示鼻咽癌的差异表达基因谱,以发现与鼻咽癌发生,发展相关的新的候选基因。方法：用由18000个基因构建的高密度cDNA微阵列对21例鼻咽癌分3个样本池分别检测并与鼻咽非癌组织作对比分析。随机选2个基因用半定量RT－PCR验证检测结果。结果：3个样本池鼻咽癌差异表达基因分别为186个,95个和36个,总数达317个,表达上调的277个,表达下调的40个,差异表达基因中2个样本池以上有共同差异表达的基因有23个,表达上调的16个,表达下调的7个,其中3个样本池表达均有差异者6个,5个上调,1个下调,5个上调的基因中2个是已知基因,3个是未知基因,1个下调的是未知基因。结论：本研究揭示了鼻咽癌的基因表达谱,为了解鼻咽癌发生,发展的分子机理提供了大量信息,为寻找鼻咽癌相关基因提供了重要线索。     

细胞角蛋白基因13在鼻咽癌中的作用研究

目的 研究细胞角蛋白基因１３（ｃｙｔｏｋｅｒａｔｉｎ １３,ＣＫ１３）在人鼻咽癌组织中的表达,并对其甲基化程度进行了检测。方法 应用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术检测３２例鼻咽癌活检组织和８例慢性鼻咽炎组织中ＣＫ１３的表达情况。同时运用甲基敏感的限制性内切酶ＨｐａⅡ和ＭｓｐⅠ,结合Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交,对鼻咽癌细胞 ＨＮＥ１及正常人上皮ＣＫ１３基因的甲基化状态进行检测。     

鼻咽癌远处转移及预后的相关因素

远处转移是鼻咽癌（NPC）治疗失败的主要原因.患者临床相关因素如年龄、性别、肿瘤分期等可影响鼻咽癌远处转移及预后.NPC远处转移的分子标志物包括EB病毒DNA、p53、表皮生长因子受体和血管内皮生长因子,其有望成为NPC预后的生物学指标.另外,病理分型和治疗手段也是NPC预后的影响因素.