脂肪间充质干细胞与胰岛联合移植对术后免疫状态及移植效果的影响

目的研究同系脂肪间充质干细胞(AMSC)与同种异体胰岛联合移植对胰岛移植术后免疫状态及移植效果的影响。 方法选择Lewis大鼠建立链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠模型作为胰岛移植受体,AMSC＋胰岛移植组经左肾包膜下联合移植Lewis大鼠AMSC及Wistar大鼠胰岛,单纯胰岛移植组经左肾包膜下单独移植Wistar大鼠胰岛,单纯AMSC移植组经左肾包膜下单独移植Lewis大鼠AMSC,阳性对照组为未进行移植的Lewis糖尿病大鼠,阴性对照组为正常Lewis大鼠。ELISA法检测血清细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10浓度,流式细胞技术检测外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例,HE染色观察移植胰岛淋巴细胞浸润情况,观察血糖、胰岛素水平及胰岛移植物存活时间。采用单因素方差分析比较5组大鼠外周血淋巴细胞亚群比例和血清细胞因子水平,采用LSD法进行组间两两比较;血糖及血清胰岛素变化采用重复测量资料方差分析;采用独立样本t检验比较AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物淋巴细胞计数。采用Kaplan-Meier法绘制AMSC＋胰岛移植组与单纯胰岛移植组胰岛移植物生存曲线,并采用log-rank检验进行比较。P<0.05为差异有统计学意义。 结果AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均生存时间为(26.8±3.0) d,长于单纯胰岛移植组的(19.0±1.3) d,两组大鼠胰岛移植物生存曲线差异有统计学意义(χ²＝4.494,P<0.05)。胰岛移植后各时间点,AMSC＋胰岛移植组大鼠移植后血糖和胰岛素水平均优于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植前,5组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋ T细胞比例以及细胞因子IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10差异均无统计学意义(F＝0.425、0.476、0.256、0.418、0.281和0.313,P均>0.05)。胰岛移植后第7、14、28天,AMSC＋胰岛移植组大鼠外周血CD4^＋、CD8^＋T细胞比例均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),血清IFN-γ和IL-2浓度均低于单纯胰岛移植组(P均<0.05),IL-4和IL-10浓度均高于单纯胰岛移植组(P均<0.05)。胰岛移植第7天,AMSC＋胰岛移植组胰岛移植物平均淋巴细胞计数为(142±21)个/mm²,低于单纯胰岛移植组的(311±36)个/mm²(t＝8.245,P<0.05)。 结论与胰岛联合移植的AMSC能够提高胰岛移植的效果,可调节糖尿病大鼠体内IFN-γ、IL-2、IL-4和IL-10表达及抑制同种异体胰岛刺激的T细胞增殖,减轻胰岛移植物的免疫损伤。     

新生猪Sertoli细胞与大鼠胰岛细胞联合移植延长大鼠移植胰岛的存活时间

目的 探讨新生猪Sertoli细胞(NPSCs)与大鼠胰岛细胞联合移植对延长大鼠同种异体胰岛移植物存活时间的作用及其主要的机制.方法 将糖尿病Wistar大鼠随机分为3组.(1)单纯移植组(n=6):单纯移植1500个胰岛当量(IEQ)的SD大鼠胰岛细胞至糖尿病大鼠的左肾包膜下;(2)分侧移植组(n=4):将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下,同时将1×10~7个NPSCs移植到糖尿病大鼠的右肾包膜下;(3)混合移植组(n=6):将1500个IEQ的SD大鼠胰岛细胞和1×10~7个NPSCs混合移植到糖尿病大鼠的左肾包膜下.移植后每天监测各组的血糖水平,以了解移植物的存活时间;移植后发生排斥反应时获取移植物标本,行HE和免疫组织化学染色,观察移植物中CD3~+T淋巴细胞浸润情况及细胞凋亡调控基因(Bcl-2)和血红素氧合酶1(HO-1)基因的表达水平.结果 单纯移植组、分侧移植组和混合移植组胰岛移植物存活时间分别为(5.7±1.0)d、(5.3±0.5)d和(16.3±1.4)d,混合移植组存活时间较其他两组显著延长(P<0.05).单纯移植组移植区可见大量淋巴细胞浸润,主要为CD3+T淋巴细胞;混合移植组移植区Bcl-2基因呈高表达;各组移植区HO-1基因均有表达,差异不明显.结论 NPSCs与大鼠胰岛细胞联合移植可以延长大鼠同种异体胰岛移植物的存活时间,其机制可能与NPSCs抑制移植物淋巴细胞浸润、促进Bcl-2基因高表达的局部免疫调节作用有关.     

小鼠自体肝脏星状细胞联合同种异体胰岛细胞移植延长移植物存活时间的研究

目的 研究小鼠自体肝脏星状细胞联合同种异体胰岛细胞移植的新方法对胰岛移植物存活时间的作用.方法 选择雄性BALB/c小鼠为胰岛移植模型的供者,雄性C57BL/6糖尿病小鼠为受者.随机将受者分为A、B两组.A组:仅采用供者的胰岛细胞移植;B组:采用受者的肝脏星状细胞(HSCs)与供者胰岛细胞混合后共同移植.术后定期测定受者尾静脉血的血糖含量.结果 B组受者胰岛移植物的存活时间明显延长,血糖含量维持正常的中位时间为66 d(30～180 d),而A组血糖含量维持正常的中位时间为11 d(9～15 d),两组比较,差异有统计学意义(P＜0.001).结论 受者肝脏星状细胞能延长共同移植的同种异体胰岛移植物存活时间.     

子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植治疗糖尿病

目的 探讨利用子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植保护移植胰岛,提高糖尿病移植疗效的可行性.方法 分离纯化孕16 d SD大鼠子鼠:胰腺干细胞培养传代,行Nestin免疫组织化学及流式细胞术鉴定;分离纯化SD大鼠胰岛,分联合移植组(10只)、单独移植组(10只)及正常对照组(10只),分别将2×105个子鼠:胰腺干细胞与800个胰岛和单纯800个胰岛移植至糖尿病大鼠模型左肾包膜下,定期监测各组大鼠血糖情况及留取血浆ELISA测胰岛素含量,观察胰岛存活时间.结果 子鼠:胰腺干细胞培养传代3代后细胞涂片免疫组织化学示存在Nestin阳性细胞,流式细胞术测定nestin阳性细胞含量占74.1%.联合移植组大鼠均于术后第3天起血糖开始下降,血浆胰岛素水平逐渐升高,术后5 d内血糖可降至正常[(5.4±0.6)mmol/L],血浆胰岛素达到正常水平[(509.8±16.6)ng/L],胰岛存活时间(18.2±2.4)d;单独移植组大鼠血糖可于术后1周内降至正常[(6.1±0.9)mmol/L],胰岛存活时间(14.4±2.1)d;两组胰岛存活时间差别有统计学意义(P《0.05).结论 子鼠胰腺干细胞与胰岛联合移植可保护胰岛功能,延长胰岛体内存活时间,提高移植疗效.     

肝星状细胞对同种异体胰岛移植物的保护作用

目的 研究小鼠肝星状细胞对同种异体胰岛移植物的保护作用.方法 将糖尿病小鼠随机分为三组,分别为糖尿病组、单纯胰岛移植组及与肝星状细胞共同移植组.单纯移植组于肾被膜下移植入同种异体胰岛300个;共同移植组移植入肝星状细胞(3×105个)与同种异体胰岛(300个)混合物.分别于移植术后监测受体小鼠血糖值及正常血糖维持时间;血糖正常一周后移植组及糖尿病组小鼠分别采血检测血清中TGF-β,TNF-α,IL-1β,IFN-γ的含量,同时取出移植物进行免疫组织化学检测.结果 术后共同移植组受体正常血糖维持时间为(23.75±8.96)d,单纯胰岛移植组受体正常血糖维持时间为(11.9±6.92)d,差异有统计学意义(P<0.05);三组受体血清中TNF-α、IL-1β、IFN-γ含量差异无统计学意义(P>0.05),共同移植组受体血清中TGF-β含量为(2292.31±5.87)pg/ml,单纯移植组为(1246.55±38.91)pg/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);病理学结果显示共同移植组胰岛素表达量大,并且在移植物周围有生物包膜形成.结论 在同种异体移植模型中,肝星状细胞可能通过高分泌TGF-β、局部形成包囊等方式保护胰岛移植物并延长其存活时间.     

与大鼠胰岛细胞联合移植的骨髓间充质干细胞的免疫调节作用

目的 研究同种异体或自体的大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)与胰岛肝内联合移植对胰岛移植物的免疫调节作用及其机制.方法 以链佐星制备Lewis大鼠的糖尿病模型,作为胰岛移植受者,分为3组:单纯移植组大鼠经门静脉单独移植SD大鼠胰岛6000 IEQ/kg;同系MSC组大鼠经门静脉共同移植1×109/L的Lewis大鼠MSC 1 ml与SD大鼠胰岛6000 IEQ/kg;同种MSC组大鼠经门静脉共同移植1×109/L的SD大鼠MSC 1 ml与SD大鼠胰岛6000 IEQ/kg.检测受鼠的血糖变化,术后1、3 d大鼠外周血γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-4和IL-10的含量.结果 3组大鼠术后第1天血糖均下降到13.9 mmol/L以下.同系MSC组移植物存活时间为(11.38±4.03)d,同种MSC组为(5.50±2.07)d,单纯移植组为(2.88±1.25)d(P＜0.01).术后1、3 d,单纯移植组IFN-γ和IL-2的含量显著高于同系MSC组和同种MSC组(P＜0.01),同种MSC组IFN-γ和IL-2的含量高于同系MSC组(P＜0.05);单纯移植组IL-10的含量低于同系MSC组和同种MSC组(P＜0.01),同系MSC组IL-10的含量与司种MSC组相比较,差异无统计学意义(P＞0.05);各组IL-4含量的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 MSC与同种胰岛共移植可以延长胰岛移植物存活时间,应用同系MSC的效果优于同种异体MSC.共移植的MSC主要通过减少TH1类细胞因子(IFN-y和IL-2)的表达使受者TH1/TH2平衡向TH2方向偏移.

Abstract：

Objective To compare the immune regulation of syngenic and allogenic mesenchymal stem cells (MSCs) in the transplantation combined with islets. Methods After induction of diabetes in 30 Lewis rats with streptozotocin (STZ), the recipient Lewis rats received islets from SD rats combined with syngenic (group B) or allogenic (group C) MSCs injection via the portal vein. The group of islets transplanted alone served as control (group A). The survival time of grafts in all groups was assessed by the level of blood glucose. ELISA was used to detect the levels of interferon-γ (IFN-γ), interleukin 2 (IL-2), IL-4 and IL-10 in the peripheral blood on the 1st and 3rd day after transplantation. Results The blood glucose levels in all three groups were decreased in a normal range (13. 9 mmol/L) and the survival time of grafts in group B (11.38 ± 4. 03 days) was significantly longer than in group C (5. 50± 2. 07 days) as well as group A (2. 88 ± 1.25 days). On the 1 st and 3rd day after transplantation, the levels of TH 1 cytokines IFN-γ and IL-2 in group A were significantly higher than in groups C and B (P＜0.05). Meanwhile the levels of TH 2 cytokine IL-10were increased in group B, but there was no significant difference between groups A and C (P＞0.05). The levels of IL-4 had no significant difference among these three groups (P ＞ 0.05).Conclusion Islet transplantation combined with MSCs could prolong the survival time of grafts.Syngenic MSCs, superior to allogenic ones, were more effective in changing the balance of TH1/TH2to TH2. Decreased expression of TH1 cytokine (IFN-γ, IL-2), which was closely related to the induction of immune tolerance, was beneficial to the long-term survival of grafts.     

非糖皮质激素的免疫抑制方案对同种异体移植胰岛的保护作用

目的　评价非糖皮质激素的免疫抑制方案对防止大鼠同种异体胰岛移植排斥反应的效果。方法　大鼠同种异体胰岛移植后 ,分别应用他克莫司 (FK5 0 6 ) 霉酚酸酯 (MMF)和FK5 0 6 MMF 泼尼松 (Pred)行免疫抑制治疗两周 ,并设对照组 ,动态观察受者血糖、胰岛素及C肽变化 ,并作移植部位的形态学检测。结果　FK5 0 6 MMF组和FK5 0 6 MMF Pred组与对照组相比 ,移植胰岛存活时间明显延长 ,移植后 2个月在受者肝汇管区可见较多形态完整的胰岛细胞。FK5 0 6 MMF组维持术后正常血糖、胰岛素及C肽的时间超过 6 0d ,而FK5 0 6 MMF Pred组与前者比较 ,分泌C肽较少 (P <0 .0 5 ) ,血糖维持在较高水平 (P <0 .0 1) ,胰岛素水平两组差异无显著性。FK5 0 6 MMF Pred组停药两周以后的血糖水平较用药期间、停药两周内有明显降低 (P <0 .0 5 ) ,胰岛素和C肽分泌有所增多 ,但差异无显著性。结论　应用FK5 0 6 MMF和FK5 0 6 MMF Pred均有很强的免疫抑制效应 ,但糖皮质激素对胰岛细胞有毒性作用。小剂量FK5 0 6与MMF联用对移植胰岛细胞有较强的保护作用。     

微重力培养提高冻存大鼠胰岛移植的效果

目的观察大鼠胰岛冻存后经三维微重力细胞旋转培养系统(RCCS)培养后移植给受者能否明显提高胰岛移植的效果。方法将分离纯化的大鼠胰岛分为3组。实验1组:即将胰岛在RCCS中培养3d后,悬浮于4℃低温保存液(HTS)中,放置30min,然后进行冻存步骤;冻存1个月后进行复苏,继续在RCCS中培养30d;实验2组:新鲜大鼠胰岛在RCCS中培养30d;对照组:大鼠胰岛在冻存前后均在普通培养基中培养,培养步骤和时间同实验1组。上述3组胰岛复苏后再按各组应用的培养体系培养7d,然后分别以2000IEQ冻存或新鲜胰岛移植入糖尿病大鼠体内,并观察10周。结果每个胰腺纯化后最多收获胰岛1058.47IEQ,最少411.88IEQ,平均(826.95±93.42)IEQ。实验1组、实验2组的胰岛收获率、细胞内胰岛素和DNA含量以及胰岛素刺激指数均高于对照组(P<0.05);实验2组和实验1组的2000IEQ新鲜胰岛或冻存胰岛在移植后1周内可100%纠正糖尿病。结论大鼠胰岛冻存前后经微重力培养后移植可以明显提高1型糖尿病大鼠的治疗效果。     

抗体诱导的移植免疫耐受依赖于B细胞来源的TGF-β的调节

目的 研究抗CD45RB抗体或联合抗Tim-1抗体诱导的移植免疫耐受中转化生长因子(TGF)-β的调节作用。方法  建立小鼠同种异体心脏移植以及胰岛移植模型,前者用抗CD45RB抗体和(或)抗TGF-β抗体治疗,后者用抗CD45RB抗体联合抗Tim-1抗体治疗并加用或不用抗TGF-β抗体,观察移植物长期存活时间。分离胰岛移植物长期耐受的受体B细胞,过继输注至胰岛细胞移植模型小鼠体内,经抗TGF-β抗体治疗后观察移植胰岛的存活情况。在体外将经双抗体治疗14 d的移植有胰岛细胞的受体B细胞与脂多糖(LPS)混合刺激培养过夜,采用流式细胞仪检测CD19⁺LAP⁺细胞的比例。结果  抗CD45RB抗体治疗后有6/9的同种异体小鼠心脏长期存活,但若加用抗TGF-β抗体治疗则所有移植心脏均被排斥。在小鼠胰岛细胞移植模型中,抗CD45RB抗体联合抗Tim-1抗体治疗后有90%移植物长期耐受,但加用抗TGF-β抗体后则无1例移植物长期存活。B细胞输注治疗后,8/9的胰岛移植物不被排斥,而加用抗TGF-β抗体后则移植物很快被排斥。B细胞体外刺激培养,流式细胞术检测显示CD19⁺LAP⁺细胞在B细胞中的比例显著增高(P < 0.0001)。结论  抗CD45RB抗体或联合抗Tim-1抗体诱导的移植免疫耐受需要TGF-β,其可能受调节性B细胞的调节。     

成人胰岛大容量分离技术的改进及胰岛功能检测

目的 通过对人胰岛分离技术的改进以获得大量高活力胰岛并检测其功能,为利用同种异体胰岛移植治疗1型和部分2型糖尿病提供理论依据和技术基础。方法 采用改良的自动分离技术连续分离28例人胰岛,然后用连续性密度样度离心法纯化胰岛。胰岛收获量以国际标准的胰岛当量(islet equivalent,IEQ)表示。胰岛功能的测定分别为体外测定胰岛的胰岛素／DNA比率;静止葡萄糖刺激试验(SGS)及将胰岛移植至糖尿病裸小鼠的体内胰岛功能鉴定并随后进行腹腔糖耐量试验,连续测定移植鼠血糖水平及其体内C肽浓度。结果 28例成人胰腺分离的胰岛收获量为5000～1030000IEQ／胰腺,平均为291635IEQ／胰腺,前13例平均每个胰腺收获49123IEQ,平均每克组织收获846IEQ。平均纯度为87％,随着技术的改进后15例的分离结果则分别为：平均每个胰腺501813IEQ,平均每克组织7003IEQ,平均纯度89％。体外胰岛素刺激试验结果表明分离纯化后的人胰岛有正常功能,将12次分离得到的胰岛分别移植至34只糖尿病裸鼠肾包膜下,其中29只糖尿病裸鼠于12h内血糖恢复正常且糖耐量试验接近正常鼠,血中C肽水平亦接近正常鼠。结论 采用改进的人胰岛分离方法,可以获得大量高活力的具有正常功能的胰岛,为同种异体胰岛移植用于临床奠定了必要的实验基础。     

输注胰岛抗原特异性Treg细胞延长同系NOD小鼠移植胰岛的存活时间

目的 探讨输注胰岛抗原特异性调节性T淋巴细胞(Treg细胞)对非肥胖糖尿病(NOD)小鼠同系胰岛移植物存活时间的影响.方法·以未成熟树突状细胞(imDC)联合谷氨酸脱羧酶-65在体外诱导童贞T淋巴细胞分化成胰岛抗原特异性Treg细胞.以已发生糖尿病的NOD小鼠为受者,将分离得到的尚未进展为糖尿病的NOD小鼠的胰岛(500胰岛当量)移植至受者的肾包膜下,对照组不行移植,只观察血糖变化;单纯胰岛移植组只进行胰岛移植,不输注胰岛抗原特异性Treg细胞;实验组于术前1d静脉输注1×106个胰岛抗原特异性Treg细胞,然后进行胰岛移植.术后检测受者的血糖,以判断移植胰岛的存活时间,观察胰岛移植物的病理学变化.结果 对照组血糖持续高于11.1 mmol/L;单纯胰岛移植组小鼠的血糖于术后1～2 d降至正常,到7～17d时开始陆续升高,并维持在术前水平,移植物存活时间为(12.2±2.6)d;实验组小鼠的血糖于术后1～2 d降至正常,至第27天开始有小鼠血糖升高超过11.1 mmol/L,第43天时,所有小鼠的血糖均超过11.1mmol/L,移植物的存活时间为(35.2±4.3)d,明显长于单纯胰岛移植组(P＜0.01).单纯胰岛移植组的移植胰岛有明显的淋巴细胞浸润,并伴有胰岛细胞严重破坏,胰岛素染色未见完整的胰岛存在,仅有极少量残存的分泌胰岛素的胰岛细胞;实验组第15天时移植胰岛形态完整,仅有少量淋巴细胞浸润,分泌胰岛素的胰岛大量存在.结论 体外诱导产生的胰岛抗原特异性Treg细胞可以延缓自身免疫系统对移植胰岛的破坏,明显延长NOD小鼠移植胰岛的存活时间.     

大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素及白细胞介素10的表达及意义

目的 探讨大鼠肝移植排斥反应时γ干扰素(IFN-γ)及白细胞介素10(IL-10)的表达及意义.方法 采用改良的Kamada"二袖套法"制备大鼠原位肝移植模型,同系移植组供、受者均为SD大鼠;同种异体移植组的供者为Wistar大鼠,受者为SD大鼠;另设假手术组.术后7 d处死动物,观察移植肝脏的组织学变化,检测血清IFN-γ和IL-10的含量,以及移植肝脏内IFN-γ和IL-10 mRNA的表达.结果 同种异体移植组移植肝脏有较多坏死肝细胞,汇管区及中央静脉周围可见以淋巴细胞为主的炎症细胞浸润,胆管上皮细胞可见胞浆空泡变性、核固缩或碎裂,整个肝小叶结构紊乱.同系移植组肝脏组织结构仅有轻度缺血再灌注损伤表现,汇管区有较少炎症细胞浸润,胆管上皮细胞结构和肝小叶结构基本正常.同种异体移植组血清IFN-γ为(386.7±14.4)Pg/ml,明显高于同系移植组的(159.8±16.5)pg/ml(P<0.05);同种异体移植组血清IL-10为(126.3±13.1)pg/ml,明显低于同系移植组的(288.3±17.1)pg/ml(P<0.05).同种异体移植组移植肝组织内IF-γ mRNA表达水平明显高于同系移植组(P<0.05),而IL-10 rnRNA表达水平明显低于同系移植组(P<0.05).结论 大鼠肝移植排斥反应时IFN-γ表达明显升高,IL-10表达明显降低;T_H1/T_H2型细胞因子的动态平衡可能在大鼠肝移植排斥反应中起着重要作用.     

二次移植成功治疗急性白血病单倍体造血干细胞移植植入失败

目的  探讨急性白血病患者首次单倍体造血干细胞移植后植入失败的二次移植治疗策略。 方法  2例急性白血病患者首次单倍体造血干细胞移植的2例供者均伴有地中海贫血,分别采集CD34⁺细胞2.57×10⁶/kg和1.99×10⁶/kg,首次单倍体造血干细胞移植植入失败。二次移植更换为非地中海贫血供者,分别采集CD34⁺细胞4.28×10⁶/kg和5.75×10⁶/kg,采用减低剂量氟达拉滨（Flu）+白消安（Bu）+抗胸腺细胞球蛋白（ATG）预处理方案行二次移植。 结果  2例患者二次移植中性粒细胞和血小板植入时间分别为+12 d和+10 d、+10 d和+10 d。截止至末次随访时间（分别为二次移植+1 062 d、+265 d）,2例患者原发病均完全缓解,无明显移植并发症。 结论  减低剂量预处理的二次移植能够成功治疗急性白血病单倍体造血干细胞移植植入失败。     

同种异体胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植治疗糖尿病

目的 观察同种异体大鼠胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植在糖尿病治疗中的作用.方法 分离胰腺组织获得胰岛及胰腺导管上皮细胞,将具有干细胞潜能的胰腺导管上皮细胞在体外培养27d.将新鲜分离的胰岛(200±50)个及诱导分化2周的胰腺干细胞来源的胰岛样结构(2×106)个序贯移植到糖尿病大鼠的肾被膜下观察大鼠的血糖及生存情况.结果 将胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植到同一糖尿病大鼠3周后血糖仍在5 mmol/L水平,对照组血糖无明显下降.结论 胰腺干细胞可诱导分化为分泌胰岛素的胰岛样结构,胰岛及胰腺干细胞来源的胰岛样结构序贯移植对大鼠糖尿病有治疗作用.     

胰岛的可替代资源--干细胞

2000年加拿大的Edmonton组在同种胰岛移植中取得了可喜的成绩,重新点燃了人们对胰岛移植治疗糖尿病的希望。他们应用移植更多的胰岛(10000IEQ/kg)和不含糖皮质激素的新型免疫抑制剂的方法,使100%(7例)的患者获得了停用胰岛素并维持良好血糖超过1年的效果[1]。然而,供者胰腺的短     

小鼠骨髓间充质干细胞减轻胰岛移植物排斥反应的作用

目的 探讨同种异基因小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)与胰岛联合移植对胰岛移植物的免疫调节作用.方法 将18只糖尿病模型小鼠随机分成3组:(1)糖尿病组,不进行任何移植;(2)胰岛移植组,在无菌操作下将10μl纯化后的200个胰岛移植于受者的左肾包膜下;(3)胰岛+MSC移植组,除与胰岛移植组进行相同的移植外,还在胰岛移植前3、2、0d经受者尾静脉分别注射1×106个MSC.移植后,连续监测非空腹血糖至第30 d;第14和28 d对移植部位的左肾进行组织病理学观察;采集外周血进行免疫荧光染色,流式细胞术分析TH1/TH2、Tc1/Tc2细胞的比值、初始和记忆T淋巴细胞的变化、以及骨髓来源的树突状细胞(DC)成熟度和功能的变化.结果 与胰岛移植组比较,胰岛+MSC移植组血糖明显降低,移植部位炎症细胞浸润明显减轻,移植物的存活时间延长;TH1和Tc1细胞明显下降,TH2和Tc2细胞升高,TH1/TH2和Tc1/Tc2细胞比值显著下降;初始T淋巴细胞和记忆T淋巴细胞下调;DC成熟度降低,分泌白细胞介素12(IL-12)的能力下降.结论 MSC与胰岛联合移植可通过对T淋巴细胞和树突状细胞的免疫调节作用,减轻胰岛移植物的排斥反应,从而延长移植胰岛的存活时间.     

供者未成熟树突状细胞联合西罗莫司诱导大鼠皮肤移植物免疫耐受研究

目的：观察大鼠骨髓来源的未成熟树突状细胞（i mDCs）联合西罗莫司（SRL）在诱导大鼠同种异体皮肤移植免疫耐受中的协同作用。方法：以雄性Lewis大鼠为供者、Brown-Norway大鼠为受者,建立大鼠同种异体皮肤移植模型。对照（control）组术前不给予任何干预;未成熟树突状细胞（imDCs）组于术前7天经尾静脉注射供者骨髓来源的未成熟树突状细胞;西罗莫司（SRL）组于术后连续7天经胃管灌注西罗莫司;联合（imDCs＋SRL）组于术前7天经尾静脉注射供者骨髓来源的未成熟树突状细胞,并于术后连续7天经胃管灌注西罗莫司。结果：对照组、未成熟树突状细胞（imDC）组、西罗莫司（SRL）组、联合（imDCs＋SRL）组大鼠同种异体皮肤移植物术后存活时间分别为（8.25±1.75）（、10.25±1.91）（、10.64±2.50）（、21.38±2.97）天。方差分析提示组间差异有统计学意义（P〈0.05）;S-N-K检验提示除单独应用未成熟DC组与单独应用SRL组外,各组间的差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论：供者骨髓来源未成熟树突状细胞可诱导大鼠同种异体皮肤移植免疫耐受;联合使用西罗莫司可延长移植皮片成活时间。     

酶联免疫斑点技术在心脏移植术后早期诊断急性排斥反应中的作用

目的 探讨酶联免疫斑点技术(ELISPOT)在心脏移植术后早期诊断急性排斥反应中的作用及在供者评估方面的应用价值.方法 采用小鼠腹部心脏移植模型,将实验小鼠分为3组,每组25对.(1)移植排斥组:供者为C57BL/6小鼠,受者为BALB/c小鼠,移植后无特殊处理;(2)实验处理组:供者为C57BL/6小鼠,受者为BALB/c小鼠,受者在移植术前1天经尾静脉输注特异性供者脾细胞,术前1 d及术后1周按每克体重应用环孢素A 5 μg;(3)同系移植组:供、受者均为BALB/c小鼠,移植术后无特殊处理.术后观察移植心存活时间及病理改变;应用ELISPOT技术检测受者脾细胞悬液中供者γ干扰素(IFN-γ)活性分泌细胞频数.结果 移植排斥组和实验处理组移植心平均存活时间分别为(7.8±0.77)d和(14.80±1.01)d,同系移植组存活时间均超过28 d,各组之间的差异有统计学意义(P＜0.05).移植排斥组与实验处理组和同系移植组相比较,移植心的心肌细胞变性坏死严重,并有大量炎性细胞浸润.移植术后第4天,移植排斥组、实验处理组和同系移植组受者脾细胞悬液中供者特异性IFN-γ活性分泌细胞频数分别为(288±16)个/2×105、(32±10)个/2×105和(6±2)个/2x105;第7天为(416±19)个/2×105、(44±8)个/2×105和(7±2)个/2×105;其与相应的移植心存活时间存在明显负相关,而与术后第7天病理分级存在明显正相关.结论 应用ELISPOT技术检测受者术后早期供者特异性IFN-γ活性分泌细胞频数可作为急性排斥反应的一个早期诊断指标.此技术具有较高的灵敏性与特异性,可用于术前供者配型.     

IL-23、IL-23 mRNA在皮肤移植受鼠外周血及移植物中的表达

目的 探讨皮肤移植小鼠外周血及移植物中白细胞介素23(IL-23)和IL-23 mRNA的表达情况.方法 制作小鼠皮肤移植的动物模型:同系组供、受者均为Balb/c小鼠;同种组以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者;脾细胞组以C57BL/6小鼠为供者,Balb/c小鼠为受者,受鼠移植前1 d经尾静脉输注供者脾细胞1×107个/只.移植术后1、3、5和7 d留取受者血液和皮肤移植物样本,检测血清IL-23的浓度以及移植皮肤中IL-23 mRNA的表达,并于光镜下持续观察移植皮肤的病理学变化.结果 移植后第3和5天,同系组受鼠外周血IL-23浓度分别为(263.49±18.72)和(286.55±18.95)pg/ml,同种组分别为(295.66±16.36)和(332.58±17.37)pg/ml,脾细胞组分别为(303.66±16.99)和(323.96±18.99)pg/ml.移植后第3和5天,同系组受鼠外周血IL-23浓度低于同种组和脾细胞组(P＜0.01);同种组和脾细胞组间的差异无统计学意义(P＞0.05).皮肤移植后第3、5和7天,同系组受鼠移植皮肤IL-23 mRNA的相对表达量分别为0.57±0.10、0.63±0.10和0.66±0.11,同种组分别为0.78±0.09、0.81±0.09和0.69±0.14,脾细胞组分别为0.62±0.10、0.68±0.12和0.55±0.09.移植后第3和5天,同系组和脾细胞组受鼠移植皮肤IL-23 mRNA的相对表达量低于同种组(P＜0.01).移植后第7天,同种组与脾细胞组受鼠移植皮肤IL-23 mRNA的相对表达量的差异有统计学意义(P＜0.01).结论 皮肤移植后早期发生急性排斥反应时,受鼠高表达IL-23和IL-23 mRNA.IL-23可作为预测排斥反应发生的观察指标.     

肾移植受者T细胞亚群绝对计数动态监测对感染的预警作用

目的探讨长期监测T细胞亚群绝对计数水平对肾移植受者术后感染的预警作用。 方法回顾性分析2017年1月至2021年5月在上海交通大学医学院附属瑞金医院26例行肾移植术后新发感染受者临床资料(感染组,感染发生在移植后1～240个月)。选择129例同期肾移植术后无感染、健康受者作为对照组。感染组连续或定期测量外周血T细胞亚群CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋绝对计数,并与对照组检测数据进行比较。根据移植后采样时间将感染组和对照组各分为6个亚组,分析感染亚组与其相应对照亚组之间T细胞亚群绝对计数的差异。正态分布计量资料采用两独立样本t检验和单因素方差分析比较,非正态分布计量资料采用Mann-Whitney U检验比较,计数资料采用χ²检验比较。使用受试者工作特征(ROC)曲线分析T细胞亚群绝对计数在肾移植术后预警感染性疾病的最优值。P<0.05为差异有统计学意义。 结果感染组和对照组受者CD4^＋/CD8^＋比值分别为(1.2±0.5)、(1.3±0.6),差异无统计学意义(t＝0.610,P>0.05)。感染组受者CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋ T细胞绝对计数[(367±212)、(189±117)和(161±92)个/μL]均低于对照组[(1 374±663)、(695±334)和(626±377)个/μL],差异均有统计学意义(t＝14.036、13.541和12.311,P均<0.05)。CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋ T细胞绝对计数在6个感染亚组受者中差异均无统计学意义(P均>0.05)。对照亚组1受者CD3^＋、CD4^＋和CD8^＋ T细胞绝对计数均低于对照亚组5,差异均有统计学意义(P均<0.05)。CD4^＋、CD8^＋和CD3^＋绝对计数预测肾移植术后感染性疾病最优截断值分别为712、362和255个/μL,敏感度分别为94.6%、92.2%和96.1%,特异度分别为92.3%、96.2%和88.5%。 结论肾移植受者低T细胞亚群绝对计数水平具有预示及预警感染风险的作用。