长期微波辐照对大鼠脾脏淋巴细胞的影响

目的 观察不同强度微波长期辐照对大鼠脾脏淋巴细胞的影响,探讨长期微波辐照对脾脏淋巴细胞的损伤效应及其机制.方法 雄性清洁级Wistar大鼠90只,按平均微波辐照功率密度随机均分为0(对照)、2.5、5、10mW/cm2四组(n=25),连续辐照1个月(6min/d,5d/周).于辐照结束后1、30、60、180d取材,观察大鼠体重、脾脏指数及脾脏T、B淋巴细胞亚群的变化.结果 辐照后7～180d各辐照组大鼠体重明显低于对照组.辐照后1d,2.5和5mW/cm2组脾脏系数均显著升高(P<0.05),辐照后30d 5mW/cm2组脾脏系数显著降低(P<0.05),至辐照后60d和180d各辐照组脾脏系数基本恢复到对照组水平.辐照后1、30、60d,各组大鼠脾脏T细胞亚群均无明显改变;辐照后180d,各辐照组大鼠脾脏T细胞亚群明显降低,其中2.5mW/cm2组CD3+T细胞明显减少,SmW/cm2组CD3+、CD4+、CD8+T细胞明显减少,10mW/cm2组CD4+和CD8+T细胞明显减少、CD4+/CD8+比值明显降低(P<0.05或P<0.01).CD45RA+B细胞未见明显改变.结论 大鼠经长期低剂量微波辐照后早期脾脏淋巴细胞亚群改变不明显,晚期(辐照后180d)脾脏T淋巴细胞各亚群均显著降低,表现为明显的免疫抑制.     

藤黄霖对微波诱发大鼠脾脏淋巴细胞损伤的影响

目的观察藤黄霖对微波诱发的大鼠脾脏T、B淋巴细胞亚群损伤的影响,并探讨其对微波辐射致大鼠免疫功能损伤的防护作用及相关机制。方法清洁级雄性SD大鼠80只,随机分为正常对照组(CON组)、辐照组(RAD组)、安多霖组(ADL组)和藤黄霖组(THL组),每组20只。照射前灌胃给药,1次/d,连续给药7d。随后RAD组、ADL组和THL组大鼠经功率密度为30m W/cm2的微波全身辐照15min,CON组行假照射。辐照后7、14d检测大鼠脾脏CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群和CD45RA+B细胞亚群的变化。结果微波辐照后7d,RAD组大鼠脾脏系数明显低于CON组及THL组(P<0.05),脾脏CD4+T细胞比例明显低于CON组(P<0.05),CD8+T细胞比例明显高于CON组(P<0.05),而THL组脾脏CD3+T细胞、CD4+T细胞比例均明显高于RAD组和ADL组(P<0.05)。辐照后14d,RAD组脾脏CD8+T细胞和THL组脾脏CD3+T、CD4+T细胞比例明显高于CON组(P<0.05)。辐照后7d,R AD组脾脏CD4+/CD8+比值低于CON组(P<0.05),辐照后14d恢复到CON组水平;辐照后7d,THL组脾脏CD4+/CD8+比值明显高于RAD组(P<0.05),辐照后14d,THL组脾脏CD4+/CD8+比值明显低于ADL组,而与CON组及RAD组比较未见明显差异。辐照后7d,RAD组脾脏CD45RA+B细胞比例明显低于CON组及ADL组(P<0.05),而辐照后14d各组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论微波辐照早期大鼠脾脏T、B淋巴细胞显著减少,由于CD4+T淋巴细胞比例迅速降低,导致CD4+/CD8+比值下降而引发机体免疫失衡。中药复方藤黄霖能够提高微波辐照大鼠脾脏T、B淋巴细胞比例并改善CD4+/CD8+比值失衡状态。     

受者同系骨髓间充质干细胞对心脏移植大鼠的免疫调节作用

目的 观察静脉注射受者同系骨髓间充质干细胞(MSC)对大鼠心脏移植免疫反应的影响.方法 以20只成年雄性Lewis大鼠作为心脏供体,20只成年雄性Wistar大鼠作为受体,将其随机分为2组,每组10只,行颈部心脏移植:对照组(A组)手术后24h,经尾静脉注射3ml 0.9％氯化钠注射液;MSC处理组(B组)手术后24h,经尾静脉注射2×106个MSC(悬浮于3ml 0.9％氯化钠注射液中).术后1周,每组随机取受体大鼠4只,检测静脉血及移植物CD4+、CD8+、CD4+CD25high、CD4+CD25highfoxp3+T细胞占总淋巴细胞的比例,计算CD4+/CD8+比值.其余6只大鼠用于继续观察移植物存活时间.结果 A组大鼠移植心脏存活7.2±1.3d,B组大鼠移植心脏存活14.8±2.9d,两组间差异有统计学意义(P＜0.01).B组静脉血中CD4+/CD8+值、CD4+CD25highT细胞占总淋巴细胞的比例、CD4+CD25highFoxp3+T细胞占总淋巴细胞的比例(分别为1.18±0.07、2.51％±0.56％、2.05％±0.62％)均明显高于A组(分别为0.49±0.05、0.96％±0.19％、0.82％±0.09％),差异有统计学意义(P＜0.01).移植心脏中CD4+/CD8+值在两组间无统计学差异(P＞0.05);B组移植心脏中CD4+CD25highT细胞及CD4+CD25highFoxp3+T细胞占总淋巴细胞的比例(分别为2.74％±0.28％、2.54％±0.31％)均明显高于A组(分别为0.61％±0.06％、0.53％±0.06％),差异有统计学意义(P＜0.01).结论 静脉注射受者同系骨髓MSC可诱导大鼠心脏移植免疫耐受,延长移植心脏的存活时间.     

调节性树突细胞对皮肤移植小鼠IL-10+调节性B细胞的影响

目的 探讨吞噬了供者凋亡淋巴细胞的未成熟树突细胞(imDC)对皮肤移植受体小鼠外周血IL-10+CD19+调节性B细胞(Breg)比例及移植物存活时间的影响.方法 以C57BL/6小鼠作为受者,BALB/c小鼠为供者,建立小鼠皮肤移植模型.分离C57BL/6小鼠骨髓细胞,经小鼠重组白细胞介素4(IL-4)和粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)共同诱导,制备并培养imDC.分离BALB/c小鼠脾淋巴细胞(SP),经光化学照射方法(PUVA)处理,得到供者小鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP).在体外将PUVA-SP与C57BL/6小鼠骨髓来源的imDC共同培养,得到PUVA-SP DCs.根据受体小鼠术前接受的静脉输注成分将其随机分为4组(n=14):PUVA-SP DC组、imDC组、成熟树突细胞(maDC)组和PBS对照组.于手术前7d分别从尾静脉注入1×106个(0.2ml)PUVA-SP DC、imDC、maDC或0.2ml PBS.于移植术后观察受体小鼠的移植物存活时间、外周血IL-10+CD19+ Breg比例及IL-10的表达情况.结果 移植术后,受体小鼠外周血IL-10+CD 19+Breg细胞占CD19+B细胞的比例在PUVA-SP DC组为7.48％,明显高于imDC组(4.12％)、maDC组(3.01％)和PBS对照组(2.37％).PUVA-SP DC组小鼠血清中IL-10表达水平为58.2±0.9ng/ml,与maDC组(20.1±1.6ng/ml)、imDC组(26.2±1.3ng/ml)及PBS对照组(19.0±0.6ng/ml)比较显著升高(P＜0.01).PUVA-SP DC组移植物存活时间为62.3±2.6d,显著长于maDC组(20.7±1.9d)、imDC组(12.1±1.0d)和PBS对照组(11.0±1.3d,P＜0.01).结论 移植术前输注PUVA-SP DCs可显著延长移植物存活时间,增加受者体内IL-10的表达水平,诱导产生较多分泌IL-10的调节性B细胞.     

吞噬PUVA处理的同种异基因细胞的树突细胞对抗原特异性CD4+CD25+Foxp3+调节T细胞的体外诱导作用

目的探讨吞噬体外光化学法(PUVA)处理的同种异基因淋巴细胞的树突细胞(DC)对抗原特异性CD4+ CD25 +Foxp3+调节性T细胞的体外诱导作用。方法分离LEW大鼠骨髓细胞,经大鼠重组IL-4和GM-CSF共同诱导培养制备骨髓来源的LEW大鼠DC。分离DA大鼠脾淋巴细胞(SP),制备经PUVA处理的DA大鼠脾淋巴细胞(PUVA-SP)并用流式细胞仪检测其凋亡率。在体外将DA大鼠的PUVA-SP或SP与LEW大鼠骨髓来源的DC共同培养,得到PUVA-SPDC和SPDC,以Luminex液相芯片法检测PUVA-SPDC和SPDC培养上清中IL-10、IL-12的含量。以CFSE标记PUVA-SP,流式细胞仪检测LEW大鼠DC对DA大鼠PUVA-SP的摄取情况。将LEW大鼠CD4+25-T细胞与PUVA-SPDC或SPDC混合培养5d,流式细胞仪检测诱导形成的CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞,同时分离培养体系中的CD4+ CD25+ T细胞,通过混合淋巴细胞反应(MLR)检测PUVA-SPDC诱生的CD4+ CD25+ T细胞对LEW大鼠CD4+ CD25- T细胞(效应性T细胞)体外增殖的抑制作用...     

敲除BRCC3加重异基因造血干细胞移植受体小鼠急性移植物抗宿主病

目的研究BRCC3的缺失对急性移植物抗宿主病(aGVHD)的影响, 并初步探讨其机制。方法 12只C57BL/6J小鼠作为受体, 分为野生型(WT组)和BRCC3-/-型(KO组), 每组6只。采用两次4.5 Gy60Co全身照射(TBI), 两次照射间隔30 min, 6 h后通过尾静脉输注BABL/c小鼠1×107骨髓细胞和8×106脾脏细胞建立aGVHD小鼠模型。在aGVHD小鼠模型中特异性敲除BRCC3, 通过组织病理学检测靶器官损伤;酶联免疫吸附试验(ELISA)和细胞因子微球检测技术(CBA)检测小鼠血清中细胞因子的水平;移植后第9天分离脾脏、肝脏和小肠淋巴细胞, 运用流式细胞术检测靶器官中T细胞的浸润和活化。结果受体小鼠BRCC3的缺失可导致aGVHD小鼠生存期明显缩短(P<0.05);靶器官肝脏损伤明显加重;脾脏中CD8+ T细胞和CD8+CD25+ T细胞的比例明显升高(t=6.53、5.52, P<0.05);肝脏中CD8+ T细胞和CD8+CD25+ T细胞的比例明显升高(t=3.74、3.19, P<0.05)以及小肠中CD8+ T细胞、CD8...     

Nrp1~+T细胞对淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响

目的 探讨表达神经纤毛蛋白质1(Nrp1)的T细胞(Nrp~+ T细胞)对体内外反应性淋巴细胞增殖的调节作用以及对同种异体移植物的影响.方法采用流式细胞术分选近交系C57BL/6j小鼠脾脏中的Nrp1~+ T细胞作为调节细胞,在刀豆蛋白A(Co-hA)的刺激下与标记了羧基荧光素乙酰乙酸(CFSE)的C57BL/6j小鼠脾脏单个核细胞等比例共培养5d,对比观察反应细胞的增殖情况.采用流式细胞术分选C57BL/6j小鼠脾脏的Nrp1~+T细胞、CD4~+ CD25~+ Treg细胞和CD4~+ CD25~- T细胞各1×10~6个,分别经尾静脉注入到以Balb/C小鼠作为供者,以C57BL/6j小鼠作为受者行皮肤移植的小鼠体内,另外建立供、受体均为C57BL/6j小鼠的同品系对照组(注入等体积的RPMI 1640培养基).对比观察各组移植皮肤的存活情况.结果 加入Nrp1~+ T细胞的实验组增殖指数为50.92%±2.30%,明显低于未加入调节性T细胞的对照组(90.31%±1.83%,P=0.0169).实验组移植皮肤存活时间注入Nrp1~+ T细胞者为20.66±1.1ld,注入Nrp1~- T细胞者为13.20±0.76d,注入CD4~+ CD25~+ Treg者为17.67±1.0d,均明显高于对照组(9.70±1.23d,P<0.01).结论 Nrp1作为一种新型的T细胞表面分子,在淋巴细胞增殖体系中起着重要作用;与注入CD4~+ CD25~+ Treg相比,注入Nrp1~+ T细胞可明显延长小鼠移植皮肤的存活时间.     

补充低聚果糖对递增负荷训练大鼠免疫指标的影响

目的:探讨补充低聚果糖对递增负荷训练大鼠免疫指标的影响。方法:3月龄SD大鼠72只随机分为3组:对照组、运动组和运动+补剂组,每组24只。对照组不运动。运动组及运动+补剂组进行持续6周、每周6天、每天30分钟的跑台训练,每周跑速分别是10、20、25、30、35、40 m/min。运动+补剂组每天训练前以1 g/kg.bw剂量灌胃低聚果糖。分别于实验前和训练第2、4、6周周末取材,检测大鼠体重、脾重/脾脏指数、脾脏淋巴细胞活性检测和脾脏CD4+、CD8+变化。结果:①运动组大鼠体重和脾脏指数在2、4、6周显著低于对照组,6周时脾重显著低于对照组。脾脏淋巴细胞活性在2、4、6周均显著低于对照组。6周时CD4+显著低于对照组,CD8+在2、4、6周均显著高于对照组,CD4+/CD8+在2、4、6周均显著低于对照组。②运动+补剂组大鼠体重在2、4、6周时显著高于运动组,脾重在4、6周显著高于运动组,4周时脾脏指数显著高于运动组,6周时显著低于运动组;脾淋巴细胞活性在4、6周均显著高于运动组;CD4+在2、4周显著高于运动组,CD8+在2、4、6周均显著低于运动组显著CD4+/CD8+在4、6周均显著高于运动组。结论:补充低聚果糖可以改善甚至逆转6周递增负荷训练引起的大鼠体重增长过缓、脾重下降、脾脏淋巴细胞活性降低、CD8+值偏高、CD4+/CD8+降低等现象,表明其对免疫抑制有显著调节作用。     

固相酶联免疫斑点技术检测递增负荷过度训练大鼠细胞免疫机能变化研究

目的:建立大鼠脾脏淋巴细胞中Th1/Th2型淋巴细胞亚群表达的固相酶联免疫斑点(ELISPOT)技术检测方案,进一步比较Th1/Th2淋巴细胞和CD4+/CD8+在大鼠递增负荷过度训练过程中的改变,为筛选最佳免疫学评价指标提供参考。方法:雌性SD大鼠进行9周递增负荷跑台训练,分别在训练的第1周、第3周、第9周训练结束后的36小时,以及恢复1周后处死大鼠。采用不同种类刺激剂、不同刺激剂浓度刺激不同数量大鼠脾脏淋巴细胞,建立最佳ELISPOT检测方案。检测大鼠血红蛋白、睾酮、皮质酮,评估疲劳模型的建立,并对Th1/Th2型淋巴细胞亚群以及传统免疫学指标CD4+/CD8+进行动态观察。结果:建立最佳ELISPOT技术检测方案:PMA和Ionomycin联合刺激。刺激物浓度:检测γ干扰素(IFN-γ)时PMA浓度为2.5ng/ml,检测白细胞介素4(IL-4)时PMA浓度为10ng/ml;检测IFN-γ时Ionomycin浓度为0.05μg/ml,检测IL-4时Ionomycin浓度为0.2μg/ml。细胞浓度:3×104cells/孔(IFN-γ),60×104cells/孔(IL-4)。运动后36小时,运动组血红蛋白、睾酮、皮质酮均较对照组显著下降;经1周恢复后,和对照组相比无显著性差异。递增负荷运动第1周跑台训练后,运动组Th1型细胞因子IFN-γ与对照组相比显著升高;第3周跑台训练后,运动组和对照组相比显著下降;恢复1周后,运动组IFN-γ与对照组相比显著下降。递增负荷训练结束后的恢复期,运动组Th2型细胞因子IL-4较对照组升高了1.44倍(P<0.01)。CD4+/CD8+在整个训练期及恢复期均无显著性变化。结论:递增负荷过度训练过程中,与CD4+/CD8+相比,采用ELISPOT技术检测SD大鼠Th1/Th2淋巴细胞亚群的改变具有较高的灵敏性。     

内毒素作用下淋巴细胞中CD4＋CD25＋调节性T细胞变化及连翘对其的影响

目的探讨不同时间点内毒素（LPS）对CD4＋CD25＋调节性T细胞（CD4＋CD25＋regulatory T cell,Treg）的影响及连翘（forsythia suspensa,FS）干预后CD4＋CD25＋调节性T细胞的变化。方法体外培养Wistar大鼠脾脏淋巴细胞,分为对照组、LPS（10ng/ml）组、LPS（10ng/ml）＋多黏菌素B组（10ng/ml）、LPS（10ng/ml）＋连翘（12．5、25、50mg／ml）组,分别于3、6、12h收集标本．流式细胞术检测CD4＋CD25＋调节性T细胞在淋巴细胞中的百分比,荧光定量RT—PCR法检测Foxp3mRNA表达,酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测TNF—a、IL-10分泌水平。结果脾脏淋巴细胞中CD4＋CD25＋Treg的百分比和Foxp3mRNA的表达在12h较3、6h明显升高（P〈0．01）;TNF—a、IL-10的分泌随时间点的延长均显著升高（P〈0．01）;随连翘剂量增加,TNF-a、IL-10分泌水平,Foxp3mRNA表达和CD4＋CD25＋Treg百分比均明显降低（P〈0．05）。结论内毒素参与并诱导了CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的变化,其随内毒素作用时间延长呈上升趋势。连翘能显著降低CD4＋CD25＋Treg在淋巴细胞中的百分比。     

Glutamine supplementation in vitro and in vivo,in exercise and in immunodepression

In situations of stress, such as clinical trauma, starvation or prolonged, strenuous exercise, the concentration of glutamine in the blood is decreased, often substantially. In endurance athletes this decrease occurs concomitantly with relatively transient immunodepression. Glutamine is used as a fuel by some cells of the immune system. Provision of glutamine or a glutamine precursor, such as branched chain amino acids, has been seen to have a beneficial effect on gut function, on morbidity and mortality, and on some aspects of immune cell function in clinical studies. It has also been seen to decrease the self-reported incidence of illness in endurance athletes. So far, there is no firm evidence as to precisely which aspect of the immune system is affected by glutamine feeding during the transient immunodepression that occurs after prolonged, strenuous exercise. However, there is increasing evidence that neutrophils may be implicated. Other aspects of glutamine and glutamine supplementation are also addressed.     

Temporal changes in the oxidation state in in vitro blood

The rates at which the paramagnetic compounds deoxyhemoglobin (Hb) and methemoglobin (MHb) form in vivo within an area of hemorrhage are unknown. The present experiment establishes the baseline concentrations and rates of change in paramagnetic hemoglobin concentrations, as well as the pH in normal heparinized and clotted human blood maintained in vitro at 37 degrees C under anaerobic conditions over 30 hours. There was a moderate increase in Hb concentration in normal heparinized blood (average increase was 15.5%, rate = 0.50%/hour) and a slight increase in MHb concentration in the heparinized blood and clots (average increase was 1.4%, rate = 0.044%/hour). A second experiment was done to verify the activity of the RBC systems responsible for maintaining the hemoglobin molecule in the reduced state. Conversion of MHb to Hb in these samples proceeded at a rate of 5.6%/hour. In a third experiment, blood from 11 normal subjects maintained at 4 degrees C 25 degrees C was analyzed for MHb concentration over the course of 28 days. The level of MHb formation remained in the range of normal for at least 11 days in all subjects. The authors conclude that at basal conditions created in vitro, the blood levels of both Hb and MHb remain at relatively low levels. Therefore, if the accumulation of Hb and/or MHb occurs in acute in vivo hematomas it must be driven by intrinsic tissue factors.     

Carcinoma in situ in cryptorchid testes in post-pubertal patients]

The pathohistologic analysis of testis sections of 37 postpuberty patients with different types of cryptorchism is performed. The tissue samples were taken during orchiopehy, fixed in Bouin's solution and treated by the standard histologic techniques. The morphologic criteria are presented for identification of the presence of the so called carcinoma in situ cells found in two cases. Besides, in 13 patients rare, mainly single, atypical germinative cells were found in a smaller number of the seminiferous tubules. It has been concluded that the presence of carcinoma in situ cells in undescended testes of some patients and considering the simple way of sampling, lack of complications and high reliability of the diagnostic procedure, it is absolutely justified to take routine biopsy of testes during orchiopexy in each postpuberty and perhaps prepuberty patient.     

我国医用辐射防护研究概况

医学放射学技术的迅速发展及介入放射学在临床广泛应用，使更多的人受到电离辐射的照射，同时也促进了医疗照射防护工作的发展。文中重点综述了我国医用辐射防护工作者近年来在Ｘ射线ＣＴ的医疗照射防护、对介入放射学工作者的剂量监测以及应用医疗照射防护体系，降低医疗照射剂量等方面所作出的成绩和研究进展     

新时期军医学院人才培养的思考

在新的历史条件下 ,军医学院迎接未来高技术局部战争的挑战 ,适应部队武器装备的不断更新以及医学科技、社会发展对人才素质提出的新要求 ,必须在更为广阔的时空背景下找准人才培养的着眼点 ,科学确立人才培养方向 ,提高人才培养质量。现就人才培养思考如下 :1　改变教育观念 ,     

成批煤气爆燃烧伤的救治体会

报道治疗因煤气泄漏爆炸烧伤病员7例，经应用MEBT技术积极救治，其中6例于伤后17天痊愈出院，另一例特重伤员也于伤后30天康复出院。作者认为：应严格按照MEBT／MEBO要求进行规范治疗，正确处理生命体征、休克、感染、脏器功能和创面的辨证关系。同时，不能忽视外科营养在过程中的重要作用，它是创面修复的物质保证。