流式细胞仪在膀胱癌多药耐受研究中的应用

目的：探讨流式细胞仪（ＦＣＭ）在膀胱癌多药耐受研究中的应用。方法：利用蛋白质印迹,免疫细胞化学和ＦＣＭ检测并比较膀胱癌多药耐受细胞ＥＪ／ＭＲＰ的多药耐受糖蛋白（Ｐ－ｐｇ）和多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）的表达;利用ＦＣＭ检测了ＥＪ／ＭＲＰ药物耐受的功能水平。结果：ＥＪ／ＭＲＰ高表达ＭＲＰ,无明显Ｐ－ｇｐ表达,ＦＣＭ的检测结果与蛋白质印迹,免疫细胞化学的结果一致,但检测更简便,功能检测显示柔红霉素（ＤＮ     

膀胱癌稳定表达多药耐受相关蛋白亚克隆的生物学特征

目的 观察稳定表达多药耐受相关蛋白（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ，ＭＲＰ）的膀胱癌细胞有关多药耐受（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）的生物学特征。方法 将全长ＭＲＰ ｃＤＮＡ磅胱癌ＥＪ细胞，并建立稳定表达ＭＲＰ的亚克隆ＥＪ／ＭＲＰ，在光镜和透射电镜下观察细胞形态和生长情况，用蛋白质免疫印迹和流式细胞仪（ＦＣＭ）方法检测多药耐受糖蛋白（Ｋ     

三种逆转剂对人膀胱癌多药耐受相关蛋白介导的多药耐受逆转的研究

目的：观察环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）、维拉帕米（Ｖｅｒ）、黄体酮（Ｐｒｏｇ）对膀胱癌多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）介导的多药面受（ＭＤＲ）的塑转作用。方法：分别采用ＭＴＴ方法和流式细胞仪检测观察ＣｓＡ、Ｖｅｒ和Ｐｒｏｇ塑转化疗药物ＶＣＲ对ＭＲＰ高表达的膀胱癌细胞的细胞毒性作用的塑转效果。以及地细胞内柔红霉素（ＤＮＲ）聚集、外排的影响。结果：ＣｓＡ和Ｖｅｒ作为多药耐受糖蛋白（Ｐｇｐ）的良好剂同样可以显著逆转ＶＣＲ对Ｍ％ＲＰ高表达的ＥＪ／ＭＲＰ细胞毒性作用,具有增加ＥＪ／ＭＲＰ细胞内ＤＮＲ的聚集百的作用。剂量越大作用越强;而Ｐｒｏｇ则无类似作用。结论：ＣｓＡ和Ｖｅｒ对人膀胱癌ＭＲＰ介导的ＭＤＲ具有良好的逆转作用。可通过增加细胞内的药物聚集和减少外排已进入细胞内的药物起作用。这种作用存在剂量依从关系。     

膀胱癌多药耐受相关蛋白和P53的表达及相关性分析

目的 :分析膀胱癌多药耐受相关蛋白 ( MRP)、突变型 P53( mt P53)的表达及两者的相关性。方法 :利用链霉亲和素生物素酶复合物法 ( SABC法 )检测了 93例膀胱癌和 1 0例正常膀胱粘膜的 MRP、mt P53表达 ,并分析了两者表达的相关性。结果 :膀胱癌与正常膀胱粘膜间的 MRP、mt P53表达差异分别有显著性意义 ( P <0 .0 5)和极显著性意义 ( P <0 .0 1 ) ;MRP和 mt P53表达具有较强的相关性 ( r=0 .682 ,P <0 .0 1 )。结论 :膀胱癌 MRP、mt P53的表达显著增强 ,两者表达具有密切的相关性。     

抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1的扩增和鉴定

目的 制备纯化的抗人膀胱癌单克隆抗体BDI-1。方法 给BALB／C小鼠腹腔注射BDI-1杂交瘤细胞，收集的腹水过Protein G-agaros亲和层析柱即得到人膀胱癌BDI-1单克隆抗体。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法、间接免疫荧光法、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法和点印迹法鉴定单克隆抗体。结果 腹水可以得到1．0～1．5g／L的高效价（10^6）的纯化抗体。结论 该方法可以扩增高效价的单克隆抗体。     

膀胱癌多药耐药性的检测及其意义

目的探讨膀胱癌的多药耐药性(MDR)以指导灌注化疗用药。方法采用免疫组化法检测44例膀胱癌病理标本,分析P-糖蛋白(P-gp)、谷胱甘肽S转移酶(GST-π)和拓扑异构酶(TOPO-Ⅱ)的表达情况。结果54．5％的病例P-gP高表达;65．9％的病例GST-π无表达和低表达;TOPO-Ⅱ,高表达29．5％,而低表达65．9％。结论检测膀胱癌MDR可指导灌注化疗用药。     

用抗人膀胱癌单克隆抗体Hb7A对膀胱癌组织中相关抗原的定位检测

用抗人膀胱癌单克隆抗体Hb7A对42例膀胱癌组织标本和人体正常组织应用免疫组织化学技术和免疫荧光技术进行了膀胱癌相关抗原的定位检测,结果42例膀胱癌组织中32例阳性(76.19%),正常人体组织均阴性。Hb7A抗体的相应抗原在膀胱癌组织细胞中的分布与癌细胞所处的增殖周期不同有关。应用免疫组化和免疫荧光技术检测膀胱癌相关抗原具有特异性强、敏感性高的特点,对膀胱癌的诊断及术后随访具有重要的临床意义。     

姜黄素逆转多药耐受糖蛋白介导的膀胱肿瘤多药耐药的实验研究

目的 :观察姜黄素对多药耐受糖蛋白 (P gp)介导的膀胱癌细胞多药耐药 (MDR)的逆转。 方法 :MTT法观察MDR的逆转 ,流式细胞仪检测细胞内罗丹明 12 3浓度 (R 12 3)。结果 :姜黄素加阿霉素组与阿霉素组对敏感株的细胞毒作用差异无显著性意义 (P >0 .0 5 ) ;耐药株对姜黄素加阿霉素组的敏感性是阿霉素组的 4倍 (P <0 .0 5 ) ,姜黄素明显抑制了细胞内R 12 3的外排 (P <0 .0 5 )。结论 :姜黄素可有效逆转P gp介导的MDR。     

抗P-糖蛋白单克隆抗体逆转人肾癌多药耐药的实验研究

目的：证实抗P—糖蛋白单克隆抗体(JSB-1)能逆转入肾癌的天然多药耐药(MDR)性。方法：对经过病理证实的36例肾透明细胞癌采用RT—PCR方法检测mdr—1表达水平，高表达的为耐药组，无或低表达的为敏感组，给予阿霉素与JSB—1处理，并采用MTT法评价细胞毒作用。结果：JSB—1对肿瘤细胞无明显的细胞毒作用；但具有逆转肾癌对阿霉素(ADR)的耐药，并且在耐药(糖蛋白过表达MDR)的肾癌细胞中，效果更明显(P＜0．01)。结论：JSB—1可作为肾癌化疗的辅助用药。     

体内基因转移建立多药耐药性人膀胱癌裸鼠荷瘤模型

目的 建立人膀胱癌多药耐药性裸鼠荷瘤模型。方法 应用逆转录病毒上清液裸鼠皮下移植瘤内及瘤周注射法转移ｍｄｒ１基因,腹腔注射化疗药物观察肿瘤模型的耐药性,免疫组化检测肿瘤细胞Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ＧＰ）的表达,ＲＴ－ＰＣＲ检测肿瘤内ｍｄｒ１ ｍＲＮＡ的表达量。结果 携带ｍｄｒ１基因的逆转录病毒上清液注射后肿瘤模型产生多药耐药性,经过滤和离心浓缩的病毒上清液６０％细胞表达Ｐ－ＧＰ,是病毒原液基因转移率的２倍     

抗人膀胱癌单克隆抗体Fab段与超抗原偶联蛋白的制备及T淋巴细胞刺激活性鉴定

目的 制备超抗原与抗人膀胱癌单克隆抗体Fab偶联蛋白并鉴定其活性.方法 以木瓜蛋白酶、BDI-1抗体比率1:100制备的Fab与SEA以5倍抗体过量用SPDP偶联;经surperdex-200柱纯化;SDS-PAGE确定纯度及相对分子质量;免疫组织化学法鉴定抗体活性;CCK-8、酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析偶联蛋白促PBMC增殖、分泌活性.结果 偶联蛋白、Fab、SEA洗脱出峰时间分别为16、27.5、30 min;SDS-PAGE电泳显示在250×103出现连续条带;免疫组织化学显示仅偶联蛋白组膀胱癌细胞膜呈阳性染色;CCK-8、ELISA法显示偶联蛋白促PBMC增殖指数PI介于1.1±0.1-2.3±0.1;PBMC上清白细胞介素(IL)-2、肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ浓度分别为(136.1±12.8)、(140.8±21.8)、(207.7±10.5)ng/L,与SEA组差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 成功制备BDI-1Fab-SEA偶联蛋白,偶联蛋白仍保持良好的T细胞刺激活性和抗体活性.     

单克隆抗体阿霉素偶联物导向治疗膀胱癌的临床研究

抗人膀胱癌单克隆抗体ＨＢＴＡ通过葡聚糖与阿霉素联交成化学免疫偶联物对７例膀胱癌病人进行免疫导向治疗。病人接受ＨＢＴＡ抗体蛋白量为１５ｍｇ～５０ｍｇ，平均４０ｍｇ。治疗后７例病人的肿瘤组织经免疫组化检测均呈阳性的抗体定位，血清膀胱肿瘤相关抗原显著降低（Ｐ＜０．０１），电镜观察到治疗后肿瘤细胞超微结构有坏死性改变。结果表明以鼠抗人膀胱癌单克隆抗体与化疗药物偶联制备的生物导弹能安全地用于临床，并能特异性地在靶部位发挥肿瘤细胞杀伤作用，为膀胱癌的治疗提供了一条新途径。     

转bak基因促膀胱癌多药耐药细胞凋亡的研究

目的　观察转入bak基因对膀胱癌多药耐药 (MDR)细胞的杀伤效果 ,探讨其可能的机制。　方法　用脂质体将bak基因导入MDR细胞 ,通过原位杂交法检测bakmRNA的表达 ,SABC免疫组化法分析bak和bcl 2的表达。采用细胞计数法检测细胞生长抑制率 ,流式细胞仪检测细胞周期的变化。荧光染色观察细胞形态。　结果　bak基因可成功转入MDR细胞 ,转染第 3天bakmR NA阳性率 64 % ,bak表达阳性率 60 % ,明显高于对照组 ;转染后细胞中bcl 2表达显著减少 ,P <0 .0 5。转染第 4天EJ/bak细胞抑制率 32 % ,显著高于对照组 ,P <0 .0 5。细胞周期分析可见凋亡峰 ,凋亡率 35 %。凋亡细胞在荧光显微镜下形成凋亡小体。　结论　转入bak基因可显著促进MDR细胞的凋亡 ,其作用机制与下调bcl 2基因的表达有关     

抗P—糖蛋白单克隆抗体JSB—1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MD…

为了证实抗Ｐ－糖蛋白单克隆抗体协同环孢素Ａ逆转入膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＰ的治疗方案对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系和ＢＩＵ－８７．ＡＤＭ耐药 株经柔红霉素与抗Ｐ－ｇｏ单克 抗 ＪＳＧＢ－１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ－１和单独或联合异搏定自理后，采用Ｍ ＴＴ法评价细胞毒作用荧光光光度计检测细胞民内ＤＮＲ的聚集量。结果ＪＳＢ－１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲＢＩＵ－８７／ＡＤ     

^131I—抗膀胱癌单克隆抗体对荷瘤裸鼠的放射免疫治疗研究

用＾１３１Ｉ标记的抗ＢＩＵ－８７ＭｃＡｂ对荷人膀胱癌裸鼠进行放射免疫治疗，结果显示对肿瘤对明显的抑制作用。高剂量组（１４８００ｋＢｑ组）疗效明显优于低剂量组（７４００ｋＢｑ组），其治疗后第４周对肿瘤的抑制率分别为９９％及７２％。未发现１４８００ｋＢｑ＾１３１Ｉ－抗ＢＩＵ－８７ＭｃＡｂ对小鼠产生毒性。     

抗膀胱癌J82及丝裂霉素C单链抗体基因的研究

目的 研制单链抗体,以减少鼠源抗体的异源性,为寻找合理的导向治疗方案提供工具。方法 将经抗原刺激的BALB／C小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞合制备杂交瘤,用多聚酶链反应（PCR）方法克隆其抗体可变区基因,并用重叠延伸拼接法（SOE）构建相应的单链可变区抗体片段（ScFv）基因。结果 获得杂交瘤细胞株D10及1C8,酶联免疫吸附法及免疫组织化学证实所分泌的抗体可分别与人膀胱癌细胞及丝裂霉素C特异性结合。获得两种抗体的可变区基因（320bp及340bp片段）及ScFv基因（750bp片段）。结论 应用PCR－SOE方法可快速便捷地获得目的抗体的ScFv基因,为进一步研制双特异性ScFv提供了实验基础。     

膀胱癌多药耐药的流式细胞术分析

本实验旨在研究流式细胞术(ｆｌｏｗｃｙｔｏｍｅｔｒｙ,ＦＣＭ)在膀胱癌细胞的多药耐药分析方面的作用,现报道如下。一、材料与方法1.试剂及仪器:ＤＭＥＭ、ＤＮＡ提取试剂盒ＤＮＡｚｏｌ、ＲＮＡ提取试剂盒Ｔｒｉｚｏｌ为Ｇｉｂｃｏ产品;秋水仙素、甲酰胺、ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ为Ｓｉｇｍａ产品;缺口平移系统(ｎｉｃｋｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ)为Ｐｒｏｍｅｇａ产品,尼龙膜为ＺｅｔａＰｒｏｂｅ产品;鲑鱼精ＤＮＡ购自晶美生物公司;ＭＤＲ1ＰＣＲ引物Ｐ1:5′ＣＣＣＡＴＣＡＴＴＧＣＡＡＴＡＧＣＡＧＣ3′,Ｐ2:5′ＣＴＴＣＡＡＡＣＴＴＣＴＧ…     

蛋白激酶C-α在调节人膀胱癌T24细胞多药耐药中的作用

目的探讨蛋白激酶C-α(PKCα)对人膀胱癌T24细胞多药耐药的调节作用。方法将载有PKCα基因的表达质粒GFP-PKCα导入人膀胱癌细胞系T24。应用噻唑蓝(MTT)比色法,检测T24/PKCα及亲本细胞对阿霉素的敏感性,以及在激活(10nmol/LPMA2h)和抑制(10nmol/LCalphostinC2h)PKCα的情况下,T24/PKCα细胞对阿霉素敏感性的变化。同时用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测多药耐药基因-1(MDR-1)、多药耐药相关蛋白(MRP)和肺耐药相关蛋白(LRP)基因的表达。结果转染了PKCα基因后,T24细胞对阿霉素的耐药性增强(耐药指数7.52,P<0.05)。PKCα的激活显著提高了T24细胞的耐药性(耐药指数153.78,P<0.01),而抑制PKCα活性则使耐药指数降至1.20(P>0.05)。T24/PKCα的MDR-1表达水平是亲本细胞的2.28倍(P<0.01)。激活PKCα可使MDR-1基因表达水平较亲本细胞升高12.80倍(P<0.01),抑制PKCα则MDR-1表达下降(P>0.05),而MRP和LRP基因表达水平并无明显变化(P>0.05)。结论PKCα可能通过上调MDR-1表达,在人膀胱癌的化疗耐药中起到了重要的作用。