光生物素化重组DNA探针对恶性疟病人的检测研究

本研究采用光生物素(PHOTOPROBE~(TM)BIOTIN)标记重组质粒pPF14作为探针,以斑点杂文试验检测恶性疟病人血样。共检测恶性疟病人35例,阳性29例;恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染者1例为阳性。总计检测36例,阳性30例,阳性符合率为83.3％;正常人血样33例,阴性30例,阴性符合率为91％。此外,阳性检出率与原虫密度之间基本呈正相关,检出最低的虫血症水平为0.005％。     

（Dig）—DNA探针检测恶性疟病人的研究

采用异羟基洋地黄毒苷配基(Digoxigenin,(Dig)-11-dUTP),以随机引物法标记含有恶性疟原虫(P.f.)DNA的重组质粒片段(酶切克隆pPF14),制成pPF14-F-Dig探针。用此探针,以斑点杂交试验检测提纯的P.f.DNA及海南地区疟疾病人。结果显示,pPF14-F-Dig探针至少可检出40pg的P.f.DNA和低至0.005％原虫血症。38例P.f.病人中,检出阳性33例。3例恶性疟原虫和间日疟原虫混合感染者中,2例阳性。4例间日疟病人中,阴性3例,可疑1例。21例正常人血皆为阴性。     

应用DNA探针直接检测结核分枝杆菌DNA

由于ＤＮＡ探针杂交反应特异性高 ,国内外研究者已采用ＤＮＡ探针杂交技术检测结核分枝杆菌。但该检测方法敏感性较低 ,通常采用与聚合酶链反应 (ＰＣＲ)扩增相结合的方法。但这样增加了实验的费用和交叉污染的机会。我们在对ＤＮＡ探针与ＰＣＲ结合检测临床标本进行系统研究的基础上 ,发现临床标本简化法处理 ,即ＤＮＡ探针化学发光检测 ,ＤＮＡ损失较少 ,还可提高检测的敏感性 ,现将结果报道如下。材料与方法一、菌种来源受试分枝杆菌标准株来自中国药品生物制品检定所。二、标本收集结核患者痰标本 2 31份 ,血液标本 85份 ,脑脊液、胸、…     

用DNA探针检测肺炎衣原体

目的建立一种敏感而特异的肺炎衣原体分子生物学检测方法。方法用ＰＣＲ扩增约４６０ｂｐ的肺炎衣原体种特异性基因片段并标记成探针,建立ＤＮＡ探针杂交检测肺炎衣原体的方法。结果：探针只与肺炎衣原体ＡＲ－３９、ＶＲ１３１０株ＤＮＡ呈阳性杂交斑点,与肺炎衣原体ＡＲ－３９株全ＤＮＡＰｓｔＩ酶切片段在２．５ｋｂ处有一阳性杂交带,与其它两种衣原体、Ｑ热立克次体、嗜肺军团菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、金黄色葡萄球菌ＤＮＡ斑点膜无阳性杂交信号。从１５２例有呼吸道疾患的住院病人鼻咽拭子和肺泡灌洗液中检出阳性１８例,阳性率１２％。结论本文建立的ＤＮＡ探针检测肺炎衣原体方法具有较高的敏感性和特异性,可用于批量临床标本的检测。     

DNA探针检测间日疟原虫的初步研究

由于间日疟原虫目前尚不能体外培养,抗原制备困难,使间日疟的流行病学调查及诊断受到限制。本文报道以间日疟原虫红内期基因组DNA库0.24kb DNA片段为探针,用~(32)P标记后进行点杂交试验检测间日疟原虫的初步结果。 材料与方法 含间日疟原虫红内期基因组DNA库亚克隆VPL101/5 0.24kb DNA片段的重组质粒pUC19由澳大利亚昆士兰医学研究所Kidson赠送。按文献方法进行感受态细胞JM 109的制备、重组质     

不同DNA探针检测疟原虫的灵敏度比较

本文通过分子杂交技术,以恶性疟原虫为靶DNA,对从恶性疟基因文库中筛出的含有高度重复顺序的pBF_4DNA探针和含单考贝基因的pBF_(13)DNA探针以及恶性疟原虫全基因组DNA探针进行了杂交比较,结果pBF_(13)DNA探针比全基因组DNA探针敏感度低10倍,比pBF_4DNA探针敏感度低100倍,全基因组DNA探针可检到的DNA含量为100pg。     

光生物素标记DNA探针检测疟原虫DNA的初步研究

使用放射性同位素标记的DNA探针检测靶DNA的敏感度高,故目前多采用[~32P]作为标记物.但因~32P的半衰期甚短,而且需要特殊条件处理放射性物质,在普通实验室内难以采用.本研究使用光生物素(PH-OTOPROBE~TM Biotin)标记DNA探针,以点杂交试验检测疟原虫DNA. 材料和方法:使用美国VECTOR Laboratories公司生产的光可激活生物素标记DNA,以制备生物素化DNA探针。获自恶性疟原虫(Honduras 1株)红内期cDNA库的重组质粒DNA(克隆7,用EcoR1将其切成     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性，敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作一个适用的流行病学调查工具。     

应用DNA探针检测蚊体内疟原虫的研究

本文用生物素标记的克隆ＤＮＡ探针，以斑点杂交法检测蚊体内恶性疟原虫。将一组蚊虫在还原性缓冲液中研磨后集体检测时，在２５只蚊中有１只感染蚊即可检出，亦可将单个蚊虫直接压在硝酸纤维素膜上进行检测。本技术的高特异性、敏感性以及试剂的稳定性等表明，它可作为一个适用的流行病学调查工具。     

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测恶性疟的抗体反应

作者等在萨尔瓦多对从厚血片中查见恶性疟原虫的827例患者的血样进行了ELISA检测。其中仅发现滋养体者403例,查见配子体但有或无滋养体的424例,同时有间日疟感染的63例(7,6%)。另以美国东南部的50名成年居民血样作为阴性对照。除用培养的恶性疟原虫西非Ⅰ株代替巴拿马Ⅱ株以     

用重复DNA克隆作为种特异性探针检测恶性疟原虫DNA

用恶性疟原虫重复顺序克隆进行杂交的方法可提高检测系统的重现性和敏感性。分离疟原虫DNA并用CsCl放线菌素D离心去除人DNA杂质。Tanzania株Ⅰ用Sau 3AI部分酶切并克隆到有Bam HI切点的噬菌体M13mp 18中,用标记的全部恶性疟原虫基因组DNA探针进行噬菌斑杂交选出带有重复顺序的克隆株。用标记的恶性疟基因组DNA探针与人     

应用Digoxigenin标记探针定量检测血清HBV DNA

本文报道采用非同位素Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记探针定量检测血清ＨＢＶ ＤＮＡ。显色膜经空气干燥，液体石蜡透明处理后，即可置酶联免疫检测仪上测定各斑点的光密度值，液长６３０ｎｍ。结果发现已各含量的ＨＢＶ ＤＮＡ在２－５００ｐｇ／样点范围内与其相应的ＯＤ值有着良好的线性关系。标本测得ＯＤ值后，便可知其含量，该法重复性试验试验结果良好，１１份ＨＢＶ ＤＮＡ阳性的血清经定量测定，其ＨＢＶ ＤＮＡ含量在２０     

人生长激素受体DNA探针建立及mRNA检测

用多聚酶链反应方法建立了人生长激素受体（ｈＧＨＲ）ＤＮＡ探针。探针片段长度为６７０ｂＰ，两端分别为ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切末端。克隆在ＰＴＺ１９Ｕ质粒上。用此探针检测成人外周静脉血和脐血淋巴细胞的ｈＧＨＲｍＲＮＡ的表达水平，表明成人ｈＧＨＲ基因转录水平显著高于新生儿。     

应用染色体DNA探针检测蓝氏贾第鞭毛虫

用放射标记的染色体DNA探针检测了蓝氏贾第鞭毛虫滋养体和包囊。该探针按锥虫DNA探针的方法制备。将待检样本(提取的贾第虫DNA,滋养体和包囊)直接点在尼龙滤膜上,再经碱变性处理及紫外线照射使之与滤膜共价结合。为提高杂交率,点样前,在室温下,可将包囊用1.7mol/L硫氰酸胍处理25min。置45℃预杂交2～4 h(预杂交液:50％甲酰胺,6×SSC,0.05mol/L磷酸钠缓冲液pH6.6,5×Denhardt's液,鲑精     

应用DNA探针检测蚊体内丝虫幼虫的研究

本文用人工合成的寡核苷酸探针，经斑点杂交法检测蚊体内马来丝虫幼虫。可测到丝虫和微丝蚴２ｎｇ的ＤＮＡ量，不与其它动物丝虫标本发生交叉反应。将单个蚊直接压于硝酸纤维素膜上进行检测，感染蚊中含有１条感染期幼虫就可出现阳性反应。将一组蚊虫在裂解液中研磨集体检测时，在２０只蚊虫中有１只感染蚊即可检出。显示该探针可用于马来丝虫地区的蚊媒监测。     

应用DNA探针检测蚊体内丝虫幼虫的研究

本文用人工合成的寡核苷酸探针，经斑点杂交法检测蚊体内马来丝虫幼虫。可测到丝虫和微丝蚴２ｎｇ的ＤＮＡ量，不与其它动物丝虫标本发生交叉反应。将单个蚊直接压于硝酸纤维素膜上进行检测，感染蚊中含有１条感染期幼虫不可出现了性反应。将一组蚊虫在裂液中研磨集体检测时，在２０只蚊虫中有１只感染蚊即可检出。显示该探针可用于马来丝虫地区的蚊媒监测。     

用合成的DNA探针检测人血中的间日疟原虫

以恶性疟的重复DNA顺序片断为探针检测恶性疟原虫已有文献报道,但尚无间日疟DNA探针的报告。最近Arnot等报告了间日疟原虫环子孢子蛋白(CSP)的编码为19个碱基对的9肽重复片段。本文报告在此基础上合成寡核苷酸序列作为间日疟DNA探针,检测病人血中间日疟原虫的效果。为了比较此探针的特异性和交叉反应性,还合     

聚合酶链反应用于现症间日疟和恶性疟病人的检测

本文选择种特异性引物MPV、PF检测采自云南混合流行区门诊病人的滤纸干滴血119例,并与传统镜检法比较。MPV引物根据P.v.线粒体细胞色素C氧化酶基因序列设计,扩增产物片断为374bp,PF引物根据p.f.中度重复序列PBK1-14基因序列设计,扩增产物片段为206bp。MPV引物系国内首次应用。血样本处理采用1％Tritonx-100裂解煮沸法,并作了改进。其研究结果显示:PCR法与镜检法符合率为86.6％。PCR法:P.v.阳性率为64.7％,P.f.阳性率为29.4％,混合感染率为7.6％,误诊为0,漏诊率为2.5％;镜检法:P.v.阳性率为58.8％,P.f.阳性率为2.7％,混合感染率为3.4％,误诊为2.5％,漏诊率为8.4％。本PCR诊断疟疾方法具有准确、敏感、快速、简易等特点,有潜在的现场应用价值。