献血者HCV核酸实时荧光定量PCR（FQ—PCR0检测方法的建立

目的 建立献血者HCV核酸荧光定量检测方法。方法 按卫生部规定对机采献血者进行初复检合格后，再用荧光定量PCR进行核酸检测，对结果进行分析。结果 经过酶免试验剂检测合格的准备献血者245人再用荧光定量PCR检测核酸，发现一例阳性，结论 PCR核酸检测检测有较高的灵敏度，而且实时荧光定量PCR检测有诸多优越性。     

核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用价值分析

目的对核酸检测在日本血吸虫病诊断中的应用价值进行分析探讨。方法随机抽取在2009年1月至2012年4月间我院收治的23例经ELISA以及IHA检测法均呈阳性日本血吸虫患者病例,并抽取同期健康体检者20例,对这两组患者的血清采用PCR法和LAMP法对DNA进行检测,并对检测结果进行对比分析。结果经比较发现,两种不同方法的检测结果差异显著,表现为LAMP法的阳性率高于PCR法,且(P<0.05)。结论对日本血吸虫患者展开核酸检测,对于诊断而言具有重要意义,且不同的检测方法其检测的阳性率存在较大差异,值得临床给予关注与重视。     

献血者HCV核酸实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法的建立

目的　建立献血者HCV核酸荧光定量检测方法。方法　按卫生部规定对机采献血者进行初复检合格后 ,再用荧光定量PCR进行核酸检测 ,对结果进行分析。结果　经过酶免试验剂检测合格的准备献血者 2 45人再用荧光定量PCR检测核酸 ,发现一例阳性。结论　PCR核酸检测检测有较高的灵敏度 ,而且实时荧光定量PCR检测有诸多优越性     

FQ-PCR检测人肠道乳酸杆菌的研究

目的应用荧光定量PCR技术对健康人粪便内乳酸杆菌进行定量分析,建立乳酸杆菌的荧光定量PCR检测方法。方法依据乳酸杆菌16S rDNA序列设计属特异性引物,应用荧光定量PCR技术检测乳酸杆菌的16SrDNA,对粪便中的乳酸杆菌进行定量检测和分析,并和用传统方法所获得的结果进行比较。结果结果显示荧光定量PCR检测乳酸杆菌和传统方法检测乳酸杆菌之间无显著性差异(9.3±1.5 vs 8.9±1.3 copy.,P>0.05)。结论荧光定量PCR技术比传统方法特异性高、敏感性强,更省时和省力。     

疟疾的实时荧光PCR快速检测方法探讨

目的探讨疟疾的实时荧光PCR快速检测方法。方法选择本市国际旅行卫生保健中心提供的疟疾镜检阳性血样20份,另选择健康者(疟疾镜检阴性)血样20份作为待测血样。本研究设计了疟疾病原体实时荧光PCR快速检测的引物和探针,总结了快速检测方法,疟疾镜检阳性/阴性血样均各分为4次检测完毕,统计各份血样检测结果和每次检测时间,计算平均用时和疟疾镜检与实时荧光PCR检测符合率。结果疟疾镜检阳性血样20份,检测4次,平均用时(19.15±1.34)min,疟疾镜检阴性血样平均用时为(19.52±1.49)min,40份血样荧光PCR检测平均用时(19.34±1.65)min。在荧光PCR检测与疟疾镜检符合率方面,阳性血样(100%)和阴性血样(90.00%)比较,无显著差异P>0.05,认为无统计学意义。40份待测血样荧光PCR检测和疟疾镜检符合率为95.00%(38/40)。结论本研究疟疾病原体实时荧光PCR快速检测准确性高,阳性检出高,检测时间段,用于疟疾快速检验可行性较强,不易发生漏检情况。     

淋球菌检测三种方法比较

传统检测淋病奈瑟菌以培养法和涂片法为主，本用PCR法（聚合酶链反应）对136例临床标本进行检测，瓶 培养法及涂片法比较。结果PCR法检测淋球阳性率45.6%(62/136)，培养法为33.1%(45/136)，涂片法为27.1%(38/136)。为了及时诊治和预防监控淋病，PCR法可作为首选的检测手段。     

乳腺肿瘤克隆陆检测方法的比较

根据肿瘤的单克隆性，医院曾采用巢式PCR扩增DNA，用于研究乳腺癌癌前病变的早期诊断”医院将克隆性检测中所用聚合酶链反应的两种方法）普通PCR（G2PCR）和巢式PCR（N2PCR）的检测结果做一比较，以期找到更为简便实用的方法。     

标本混合检测与逐份样品采用PCR双色荧光检测试剂检测结果比较

目的研究标本混合检测方案检测方法和逐份样品检测方法的检出率结果有无差异。方法采集5000份健康体检人员的肛拭子标本,分别使用混合检测方案检测方法和逐份样品检测方法,采用PCR双色荧光检测试剂检测肠道传染病菌,比较两种检测方法的检出率结果,同时分析两种方法的灵敏度和特异性。结果标本混合检测方案检测方法检出肠道传染病菌14份,阳性率0.24%,灵敏度为100%,特异性为99.98%,逐份标本检测方法检出肠道传染病菌16份,阳性率0.32%,灵敏度为100%,特异性为99.96%,两种检测方法的阳性检出率经配对χ^2检验,结果无显著性差异。结论提示在大批量标本检测中,可用标本混合检测方案检测方法替代逐份标本检测方法进行PCR检测。     

手足口病患者的血液学检测结果分析

目的分析手足口病患者的血液学检测结果。方法对PCR核酸检测阳性39例、PCR核酸检测阴性,普通感冒28例、健康对照28例用SySmex xs-18ooi全自动血球分析仪检测进行细胞计数分类。结果患手足口病的幼儿WBC所有的数目和一般性感冒,与身体的健康状况相比,二者之间的差异没有任何研究意义。结论由以上可以得出,在研究患儿手足口病时,可把患儿手足口病血常规中淋巴细胞、单核细胞等参数当作一个血液学参照的指标。     

聚合酶链反应实验室污染原因分析及排除方法

聚合酶链反应（PCR）技术可将极微量的靶DNA特异地扩增上百万倍,从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力,能检测单分子DNA或每10万个细胞中仅含有1个靶DNA分子的样品。因优势明显,PCR技术很快在人类疾病研究和诊断中得到广泛应用,但也由于这一方法具有极大的扩增能力、高度的特异性和检测的灵敏性,使得极微量的污染即可导致假阳性结果,     

不同荧光定量PCR对于HBVcccDNA水平的检测差异对比

目的：研究对比不同荧光定量聚合酶链反应PCR对于乙型肝炎病毒HBVcccDNA水平的检测差异。方法选择20例从2007—2008年在广州市第八人民医院接受住院治疗的乙肝患者作为研究对象。提取其血清及肝组织进行实验分析,另取2份不含HBV感染的患者血清和肝组织作阴性对照组。将其中经或未经脱氧核糖核酸酶DNase处理的样本分别使用HBVc-ccDNA跨单缺口PCR和跨双缺口PCR检测。分析TaqMan探针跨单缺口PCR测定HBVcccDNA的结果,对比跨单、双缺口PCR测定结果以及不同荧光定量PCR的测定结果。分析血清和肝组织中HBVDNA与HBVcccDNA病毒载量的关系。结果血清及肝组织经过DNase消化后的有关拷贝数显著低于未消化者。血清和肝组织跨双缺口PCR测定结果较跨单缺口PCR测定结果均显著降低。血清中的HBVDNA及cccDNA实验结果均显著低于在肝组织中的测定结果,差异均有统计学意义（均P＜0．05）。阴性对照组经四种荧光定量PCR检测后均呈阴性。20例E抗原呈阳性的乙肝病人,其机体病毒载量总体趋势为血清HBVDNA的载量较肝组织更低,差异显著。结论 DNase 可有效减少 HBVcccDNA 在检测过程中的假阳性情况,经DNase处理后的跨双缺口PCR检测特异性最高。同时,血清中基本不含cccDNA。     

应用荧光定量PCR检测食品中沙门菌

目的应用荧光定量PCR技术检测食品中沙门菌,为病原监测和快速诊断提供实验依据。方法选择沙门菌invA基因设计引物,应用SYBRGreen I染料建立荧光定量PCR法。分别对61株沙门菌、14株非沙门菌以及食品模拟标本、市售禽蛋制品进行检测,观察方法的特异性、敏感性和可行性。结果建立的荧光定量PCR法检测所有沙门菌均出现了特异的熔解曲线,扩增产物的熔点值79.6℃左右;目标菌DNA的扩增产物循环数（Ct值）为20,空白对照及非沙门菌的Ct值大于30,非沙门菌均未出现特异的熔解曲线。每反应最低检测的沙门菌数是31 CFU;对食品中人工污染的沙门菌的检测,最低检测量是1 CFU,检测时间为7～8 h,与培养法比较,阳性符合率100%;对市售的369份禽蛋制品进行检测,阳性结果 19份,而细菌培养法检测阳性结果为12份。结论基于SYBRGreen I染料建立的荧光定量PCR检测沙门菌是敏感、特异、省时、省力的方法,适用于沙门菌快速检测。     

阿胶加工工艺过程中DNA降解规律研究

目的：本文以阿胶传统工艺加工过程样品为研究对象,探讨关键加工阶段阿胶样品中驴基因组DNA核基因和线粒体基因的降解变化规律。方法提取阿胶工艺过程中的驴基因组DNA,分别利用超微量分光光度计、琼脂糖凝胶电泳、普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复（ SSR）微卫星毛细管电泳（ CE）检测方法对提取的DNA质量进行评价。结果研究结果显示,在原料驴皮、化皮、双效、浓缩和加辅料阶段,琼脂糖凝胶电泳均能检测到清晰的条带,普通PCR可扩增到200~1600 bp左右的片段,而在凝胶阶段DNA降解最为严重,只能利用琼脂糖凝胶电泳检测到100~800 bp的目的片段,利用荧光定量PCR检测技术线粒体基因在阿胶加工各个阶段均可检测出,核基因凝胶阶段未检出;通过PCR-SSR-CE检测在凝胶阶段核基因未检出特征峰,更进一步证明了凝胶阶段DNA核基因降解严重。结论对阿胶工艺加工过程DNA变化规律发现,随着阿胶加工的深入进行,各个阶段DNA发生不同程度的降解,其中凝胶成品阶段降解最为严重,本研究对比普通PCR、荧光定量PCR和简单序列重复微卫星毛细管电泳检测方法,发现荧光定量PCR检测方法最快速、灵敏和可靠,通过比较发现以线粒体基因为靶基因在阿胶的各个加工阶段均能满足DNA溯源的要求。     

基于PCR的麦冬鉴别方法研究

目的：建立中药材麦冬的PCR检测方法。方法：对麦冬及其混伪品的ITS序列进行比对分析,在ITS 1区设计了麦冬的特异性引物,并通过对PCR反应条件的优化,建立麦冬的PCR鉴别方法。结果：建立了麦冬真伪鉴别的PCR检测方法,并利用该方法对收集的样品进行检测,实现了麦冬与混伪品的准确鉴别。结论：该方法操作简单、特异性强、重复性好,检测结果客观易判读。     

PCR检测结核菌的临床应用

聚合酶链反应(PCR)是近年来建立的临床医学检验新技术。我们应用PCR方法对98例检测结核菌结果进行临床分析。     

实时荧光定量PCR法检测中药制剂中沙门菌

目的 采用实时荧光定量PCR技术,建立一种中药制剂中沙门菌的快速检测方法。方法 将中药制剂加入适量的胰酪大豆胨液体培养基中进行增菌后,取增菌液以热裂解法提取总DNA,采用实时荧光定量PCR法特异性检测沙门菌。结果 建立了中药制剂中沙门菌的实时荧光定量PCR检测法,检测可在24 h内完成,灵敏度达每10 g（10 mL）供试品1 cfu,特异性为100%,采用该方法检测18批次样品结果与药典方法一致。结论 采用实时荧光定量PCR法可明显缩短中药制剂中沙门菌检测周期,具有良好的灵敏度和特异性,可作为药典检测方法的有效补充。     

炭疽杆菌双重实时荧光PCR检测方法的建立

目的 建立同时检测炭疽杆菌capA基因、PA基因的双重实时定量荧光PCR方法,用于应对突发传染病疫情和流行病学调查、突发公共卫生事件应急处置的早期检测及防范生物恐怖威胁.方法 设计和合成分别针对炭疽杆菌capA基因、PA基因的引物对和荧光双标记探针,构建质粒标准品,通过优化探针、引物浓度、反应体系试剂组分等参数,建立可同时检测capA基因、PA基因的双重实时荧光PCR方法,测试方法的灵敏度和特异性,并在实战检测中应用.结果 双重实时荧光定量PCR的炭疽杆菌capA基因、PA基因检测的灵敏度分别可达到每反应5和50拷贝,并具有良好的特异性,在实战应用中亦经过考验.结论 双重实时荧光定量PCR技术具有可以同时筛查、经济、快速、特异性强等优点,在炭疽杆菌检测方面有良好应用价值.     

双色实时荧光PCR方法结合标本混合检测方案快速筛查肠道传染病菌

目的：采用双色实时荧光PCR方法结合标本混合检测方案快速筛查检测公共场所从业人员肠道传染病菌,并与经典的培养法比较,探讨该方法的可行性。方法：随机采集5000份从业人员的肛拭子标本,分别采用双色实时荧光PCR方法结合标本混合检测方案和＂金标准＂培养法同时检测肠道沙门和志贺菌,比较两种方法检测结果之间的差异。结果：双色实时荧光PCR方法结合标本混合检测方案的灵敏度为100%,特异性为99.64%,同培养法相比,具有省时、省力、操作安全、成本接近等优点,两种检测方法的阳性率无显著性差异。结论：提示双色实时荧光PCR方法结合标本混合检测方案可做为从业人员肠道传染病菌快速筛查的技术方法。     

TaqMan MGB探针法实时荧光定量PCR快速检测支原体的研究

目的:建立特异、敏感、快速检测支原体的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法。方法:针对支原体16S rRNA基因的保守区设计特异性引物和探针,建立支原体TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方检测方法,验证方法的特异性、敏感性和稳定性。对2008～2010年期间在北京采集的680份小型猪、小鼠、大鼠样本中的支原体进行检测,同时进行分离培养和常规PCR检测。结果:建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法对支原体的检测具有高度的特异性,对空肠弯曲菌、支气管鲍特杆菌、肺炎克雷伯杆菌、侵肺巴斯德氏菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、乙型溶血性链球菌均无交叉反应,检测的灵敏度达9.2拷贝。标准曲线显示各浓度范围内具有良好的线性关系,相关系数为0.999,斜率为-3.328,TaqManMGB探针实时荧光定量PCR效率为100%。对680份动物样本进行检测,结果TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR和常规PCR均能检出77份支原体阳性样本,但分离培养未能检出支原体阳性样本。结果显示,建立的TaqMan MGB探针实时荧光定量PCR方法比细菌分离培养方法更敏感,能够直接从动物样本中检出支...     

培养法与PCR法用于临床检测肺炎支原体的差异及药敏分析

目的 对比荧光定量PCR法与培养法临床检测肺炎支原体的差异,并进行相关药敏分析.方法 对我院198份临床呼吸道样本进行快速培养法与荧光定量PCR法的平行检测,对比两组检测结果,分析肺炎支原体对抗生素的耐药性.结果 培养法阳性检出率为22.73％,荧光定量PCR法阳性检出率为23.74％,两者差异不明显(P>0.05);抗生素耐药中以依托红霉素耐药性最高,耐药率高达37.78％.结论 培养法与PCR法临床检测肺炎支原体的检测结果相差不大,且培养法装备成本要显著低于PCR法,适合临床推广使用.