南蛇藤提取物对人肝癌细胞增殖、迁移及血管内皮生长因子-C表达的影响

目的 探讨南蛇藤提取物抑制人肝癌转移的分子机制.方法 人肝癌HCCLM6细胞生长于培养液中进行传代,取对数生长期细胞进行实验.南蛇藤提取物组共分为10、20、40、80、160 mg/L 5个浓度,阳性对照组给予5-氟尿嘧啶(5-Fu)注射液180 mg/L,阴性对照组不做处理.分别观察南蛇藤提取物对HCCLM6细胞增殖和迁移能力的影响,并检测南蛇藤提取物对HCCLM6细胞及其培养上清中血管内皮生长因子-C(VEGF-C)蛋白表达的影响.结果 南蛇藤提取物组作用24、48h时160 μg/ml对细胞增殖的抑制率最高(P＜0.01).南蛇藤提取物组和阳性对照组穿膜细胞数较阴性对照组明显减少(P＜0.01);南蛇藤提取物组10、20、40、80μg/ml浓度穿膜细胞数多于阳性对照组,并呈浓度依赖性(P＜0.05或P＜0.01).南蛇藤提取物组各浓度和阳性对照组VEGF-C蛋白水平均低于阴性对照组(P＜0.05或P＜0.01). 结论 南蛇藤提取物能抑制HCCLM6细胞的增殖、迁移及下调VEGF-C蛋白的表达水平,这可能是其抑制肝癌转移的部分机制.     

刺五加皂苷对人肝癌细胞株血管内皮生长因子表达的抑制作用

目的研究刺五加皂苷(ASS)对血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响。方法以人肝癌细胞株(HepG2)为研究对象,分别用ELISA及RT-PCR检测ASS对HepG2细胞VEGF蛋白及mRNA水平表达的影响。结果ASS250,500μg/mL作用于HepG2细胞株,VEGF蛋白及mRNA表达量下降(P<0.05或P<0.01)。结论一定剂量的ASS能抑制HepG2细胞株的VEGF mRNA表达及蛋白的表达,提示ASS可能是通过抑制VEGF介导的肿瘤血管新生,进而抑制肿瘤的生长与转移。     

蝎毒多肽提取物抑制H22肝癌血管生成的作用机制研究

目的探讨蝎毒多肽提取物抗肿瘤血管生成的机制。方法建立H22肝癌皮下荷瘤模型,随机分为荷瘤对照组（对照组）,蝎毒多肽提取物（polypeptide extract from scorpion venom,PESV）高、低剂量组,5－氟尿嘧啶（5-fluorouracil,5-Fu）组,每组10只。连续干预14天。绘制肿瘤体积生长曲线并计算抑瘤率;HE染色观察各组肿瘤组织病理变化;采用SP法检测各组肿瘤组织微血管密度（microvessel density,MVD）。采用免疫组织化学法及Western blot法检测各组磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K）、磷酸化蛋白激酶B （phosphoprotein kinase B,P-Akt）、缺氧诱导因子-1α（hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α）、血管内皮生长因子-A（vascular endothelial growth factor-A,VEGF-A）蛋白表达。结果5-Fu组,PESV高、低剂量组抑瘤率分别为64.8%、43.7%和32.4%。与对照组比较,三个给药组PI3K、P-Akt、HIF-1α、VEGF-A蛋白表达明显下调（P〈0.05,P〈0.01）,PESV高、低剂量组MVD均降低（P〈0.05）。结论PESV可抑制H22肝癌血管生成,其机制可能与抑制肿瘤微环境中PI3K、P-Akt、HIF-1α、VEGF-A的表达有关。     

珍珠梅提取物TTF1抑制肝癌细胞增殖作用的研究

目的 探讨珍珠梅提取物TTF1抑制肝癌细胞增殖作用的机制.方法 利用MTT细胞毒性实验检测TTF1对人肝癌细胞HepG2和正常人永生化肝细胞Chang-liver增殖的影响,并采用EdU实验进行验证;通过Western Blotting实验在蛋白水平检测TTF1作用下,人肝癌细胞HepG2中常见的增殖指标-野生型p53以及Bcl-2变化情况.结果 MTT与EdU实验证实TTF1可以明显抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,但对正常肝细胞Chang-liver毒性较小,野生型p53可随TTF1作用剂量增加而表达增高,而Bcl-2则随之降低.结论 TTF1可能通过上调野生型p53蛋白表达,抑制Bcl-2蛋白的表达而抑制肝癌细胞增殖,对正常细胞毒性较小,可能开发为新型毒副作用较小的肝癌药物.     

虎杖提取物抗人肝癌细胞株HepG-2作用的实验研究

目的:观察虎杖提取物体外抗HepG-2细胞的作用.方法:用高效液相色谱法测定虎杖不同给药时间段大鼠血清中大黄素含量,通过3H-TdR掺入法药敏试验观察虎杖提取物及含药血清体外抗HepG-2肿瘤细胞的作用.结果:虎杖提取物及虎杖含药血清对HepG-2细胞均有很好的抑制作用,其抑制率随着药物浓度增加而相应增高.虎杖提取物灌胃1小时后血液中浓度可达高峰.结论:虎杖提取物体外具有较强的抗肿瘤作用.     

肝癥口服液含药血清抑制肝癌细胞SMMC-7721血管内皮生长因子表达的研究

目的:观察服用肝癌口服液的原发性肝癌病人和正常志愿者含药血清对肝癌细胞SMMC-7721 VEGF mRNA表达的影响.方法:采用血清药理学方法,以正常志愿者和肝癌患者用药前后血清培养人肝癌细胞SMMC-7721细胞,应用RT-PCR技术观察含药血清对肝癌细胞VEGFmRNA表达的影响.结果:正常人服用肝癌口服液前后血清对SMMC-7721细胞的VEGF mRNA表达无影响,VEGF/β-actin灰度值差异无显著性;SMMC-7721细胞在肝癌病人服药后血清中生长,VEGFmRNA的表达显著降低,统计学差异具有显著性.结论:肝癌病人肝癌口服液的含药血清可明显降低肝癌细胞VEGF mRNA的表达,而对健康人群无影响.     

女贞子提取物总三萜酸降血糖作用的实验研究

目的:观察女贞子三萜酸对实验性糖尿病大鼠的治疗作用。方法:建立大鼠糖尿病模型观察该药对空腹血糖、血清胰岛素、胆固醇、甘油三酯、糖化血清蛋白的影响,以及对正常大鼠糖耐量、血糖的影响。结果:女贞子三萜酸能明显降低血糖(P<0.01)和甘油三酯(P<0.01),改善糖耐量;对血清胰岛素、糖化血清蛋白、胆固醇等影响不明显。结论:女贞子三萜酸降血糖作用较强,对血酯具有一定的调节作用。     

葛根提取物诱导人肝癌细胞分化的研究

目的 :探讨葛根提取物对Bel-740 2人肝癌细胞的作用。方法 :实验组Bel-740 2人肝癌细胞用葛根提取物处理 ,对照组用培养液处理 ,观察并对照两组AFP ,γ -GT ,ALD ,TAT ,OCT ,ALP的分泌量。结果 :治疗组AFP分泌量、γ -GT和ALD活力明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,而OCT ,TAT和ALP的活力则明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,差异均具有显著性。结论 :葛根提取物能有效诱导Bel-740 2人肝癌细胞的分化。     

银杏叶提取物对大鼠主动脉粥样斑块血管内皮生长因子的影响

目的:探讨银杏叶提取物对大鼠动脉粥样斑块中血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:将48只SD大鼠随机分为四组:正常对照组大鼠12只;另建立动脉粥样硬化大鼠模型36只,分为三组,每组12只:分为银杏叶提取物组、辛伐他汀组、未干预组。干预4周后分别取胸主动脉组织,进行VEGF免疫组织化学检查,再将所取主动脉组织进行VEGF的RT-PCR及Western-blot蛋白印迹分析。结果:正常对照组无VEGF表达,银杏叶提取物组、辛伐他汀组VEGF表达明显低于未干预组。银杏叶提取物组和辛伐他汀组VEGF相对吸光度值显著低于未干预组(P0.05)。结论:银杏叶提取物可降低大鼠动脉粥样硬化斑块组织中VEGF表达,从而起到保护血管内皮、稳定粥样斑块的作用。     

银杏叶提取物对肝纤维化大鼠肝脏低氧诱导因子1α及血管内皮生长因子表达的影响

目的:观察银杏叶提取物(GbE)对肝纤维大鼠肝组织低氧诱导因子1α(HIF-1α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,探讨GbE抗肝纤维的作用机制。方法:采用40%的CCl4皮下注射(3mL.kg-1.d-1,2次/周,首剂加倍),连续6周诱导大鼠肝纤维化模型,同时分别以高、中、低剂量(200、100、50mg.kg-1.d-1)GbE灌胃干预6周,常规HE和Masson染色观察大鼠肝组织炎症和纤维化程度,RT-PCR及免疫组化法检测肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白表达。结果:模型组大鼠肝组织炎症和纤维化程度计分较正常组明显增高(P0.01),肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白的表达较正常组明显增强(P0.05,P0.01),HIF-1α蛋白表达水平与肝纤维化程度、VEGF mRNA表达水平呈明显的正相关;应用高、中、低剂量GbE干预后,大鼠肝组织炎症和纤维化程度显著减轻(P0.05,P0.01),肝组织HIF-1α和VEGF基因的mRNA及蛋白表达明显下降(P0.05)。结论:GbE下调肝纤维化大鼠肝组织HIF-1α及其下游分子VEGF的转录和表达可能是其抗肝纤维化作用的机制之一。     

女贞子连续超声逆流提取工艺优选

目的： 优选女贞子的连续超声逆流提取工艺。 方法： 以齐墩果酸和熊果酸总量为指标,通过正交试验考察超声频率、乙醇体积分数、料液比和温度对提取工艺的影响。采用HPLC测定齐墩果酸和熊果酸含量,流速0.33 mL·min^-1,流动相乙腈-甲醇-0.5%冰醋酸溶液（19：67：14）。 结果： 最佳提取工艺为加15倍量80%乙醇于30 kHz提取;齐墩果酸和熊果酸平均总质量分数5.66%,RSD 1.64%。 结论： 优选的连续超声逆流提取工艺操作简单、科学合理,适合于女贞子工业化大生产。     

女贞子药材中甘露醇的含量测定

目的:建立女贞子中甘露醇的含量测定方法。方法:采用比色法测定。结果:用本法测定甘露醇在(12.5~75.0)μg范围内线性关系良好,相关系数r为0.9994;其平均回收率为97.06%,RSD为0.662%。结论:采用该法对女贞子中甘露醇含量进行测定精密度和重复性良好,更具有普遍性及简便性。     

大孔吸附树脂纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸的研究

目的研究大孔吸附树脂纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸的动态吸附与解吸工艺,为工业化生产提供参考。方法采用高效液相色谱法测定齐墩果酸和熊果酸的量;运用静态吸附与解吸试验对树脂型号进行筛选,结合单因素试验优选女贞子齐墩果酸和熊果酸的纯化操作条件。结果HPD-100树脂对齐墩果酸和熊果酸的吸附与解吸性能较好;吸附的优化条件为树脂床径高比1:6,料液质量浓度0.20g(生药)/mL,体积流量2BV/h和吸附容量2.4mL/g(树脂);最佳解吸条件为乙醇体积分数80%,体积流量2BV/h和溶剂用量4BV;产品中齐墩果酸、熊果酸的质量分数分别为25.21%、15.65%,转移率分别达98.64%、98.58%。结论HPD-100可有效地富集、纯化女贞子中齐墩果酸和熊果酸。     

女贞子不同炮制品及不同树龄中齐墩果酸和熊果酸含量研究

目的:考察不同炮制方法及不同树龄女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量变化。方法:采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相[甲醇-乙腈(50∶50)]-0.1%H3PO4溶液(85∶15),用TEA调pH至6.5,检测波长205 nm,柱温25℃,流速1 mL.min-1。结果:不同炮制品中齐墩果酸含量顺序:蒸品>烫品>酒蒸品>生品;不同炮制品中熊果酸含量变化不大;不同树龄女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量顺序均为:十年生>五年生>二年生。结论:女贞子中齐墩果酸和熊果酸含量与炮制方法及树龄密切相关。     

女贞子炮制工艺的研究

目的优选女贞子的炮制工艺。方法采用高效液相色谱法测定齐墩果酸和熊果酸的含量,以齐墩果酸和熊果酸的含量为指标,通过正交试验优选酒蒸女贞子的炮制工艺条件。结果齐墩果酸线性范围为0.01978～0.1978mg/mL,r=0.9998,回收率为99.53%,RSD=2.08%;熊果酸线性范围为0.01026～0.1026mg/mL,r=0.9998,回收率为99.88%,RSD=1.76%。正交试验结果提示女贞子的最佳炮制工艺方案为浸泡8h,蒸制8h,用酒量2g(药材量为5g)。结论以高效液相色谱法测定齐墩果酸与熊果酸的含量,方法准确、快速,可作为女贞子的含量测定方法。浸泡时间,蒸制时间,加酒量对含量指标的影响均不显著。     

女贞子多糖免疫调节作用研究

目的：探讨祖国补益中药女贞子的有效物质基础和免调节机理。方法：采用四甲基偶氮唑盐（ ＭＴＴ） 比色分析法,对其多糖成分进行了小鼠体内外免疫活性观察。结果：女贞子多糖对正常小鼠和肾上腺皮质激素造型的阴虚小鼠的脾Ｔ 淋巴细胞增殖有显著促进作用。结论：女贞子多糖对正常小鼠及阴虚小鼠有免疫调节作用。     

淫羊藿-女贞子抗维甲酸致大鼠骨质疏松症的作用机制探讨

目的:研究淫羊藿女贞子水煎剂及其有效成分提取物防治维甲酸(RA)致大鼠骨质疏松症(OP)的作用机制。方法:SPF级雄性Wistar大鼠36只,随机分为6组,即正常组、模型组、淫羊藿-女贞子水煎剂组、淫羊藿-女贞子提取物低、中、高剂量组,RA(70 mg·kg-1)ig造模,造模的同时给药,给药组分别给予淫羊藿-女贞子水煎剂(9.5 g·kg-1)及药对有效成分提取物低、中、高3个剂量(50,100,200 mg·kg-1)ig治疗2周,免疫组化法检测骨组织中凋亡相关因子B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),p53的蛋白表达;实时RT-q PCR法检测骨组织中转化生长因子-β1(TGF-β1),果蝇MAD类似基因2(Smad2),Smad3,Smad7 mRNA的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠骨组织Bcl-2蛋白表达明显降低,而p53蛋白表达显著升高,骨组织TGF-β1及Smad2,Smad3 mRNA相对表达量均明显下降,Smad7 mRNA相对表达量明显升高,均具有统计学差异(P0.05,P0.01);与模型组比较,各给药组可不同程度上调Bcl-2以及TGF-β1,Smad2,Smad3的表达水平,下调p53,Smad7的表达水平,均具有明显统计学差异(P0.05,P0.01)。结论:淫羊藿-女贞子抗OP的作用机制可能与其维持凋亡与抗凋亡间的平衡,抑制骨组织细胞凋亡以及调控TGF-β/Smads通路信号转导有关。     

女贞子及其炮制品中的微量元素分析

通过对女贞子及其炮制品中的微量元素测定表明,女贞子中含有11种微量元素,其中4种为人体宏量元素,5种为人体必需微量元素。实验还表明炮制对女贞子中的微量元素有明显影响。     

Ethanol extract of Fructus Ligustri Lucidi promotes osteogenesis of mesenchymal stem cells

Fructus Ligustri Lucidi (FLL) has been used in traditional Chinese medicine for over 1000 years. The ethanol extract of FLL (EFLL) has been shown to be a potential candidate in the prevention and treatment of osteoporosis. The present study aimed to determine whether EFLL carries out the effect by promoting osteogenesis in mesenchymal stem cells (MSCs). The osteogenic differentiation of MSCs was evaluated by their alkaline phosphatase (ALP) activities and mineralization. Expression of genes was detected by RT‐PCR. We found that EFLL significantly stimulated the ALP activities and shortened the time needed for the mineralization of MSCs during osteogenic differentiation. The expression of several osteoblast differentiation regulators was also upregulated by EFLL during this process. Our study demonstrated that the EFLL is capable of enhancing osteogenic differentiation of MSCs. It might be useful for treating diseases with inadequate bone formation, including osteoporosis. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

酒制对女贞子饮片主要化学成分含量的影响

目的:分析酒制对女贞子饮片中主要化学成分含量的影响,为完善女贞子及酒女贞子饮片的质量标准提供实验依据。方法:采用HPLC,流动相乙腈-水梯度洗脱,流速1.0 m L·min~(-1),检测波长224 nm,柱温35℃,对女贞子及酒女贞子饮片中主要化学成分进行定量分析。结果:与相同企业或同一企业同一批次女贞子饮片比较,酒女贞子饮片中特女贞苷和橄榄苦苷的含量均明显降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量有不同程度的升高;其中红景天苷、酪醇及羟基酪醇的质量分数分别升高了200%,5%,40%以上。结论:酒制后女贞子饮片化学成分含量的变化主要是由于特女贞苷在高温及水蒸气的作用下会水解生成红景天苷,红景天苷进一步水解生成酪醇;橄榄苦苷在高温下不稳定,同样发生水解,生成羟基酪醇;从而导致特女贞苷和橄榄苦苷的含量显著降低,红景天苷、酪醇和羟基酪醇的含量增高。