荧光实时定量PCR检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体基因mRNA表达

目的建立荧光实时定量PCR法检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2肾上腺素能受体(AR)基因mRNA表达。方法随机选择ASAⅠ~Ⅱ级老年患者30例,分离外周静脉血淋巴细胞,采用荧光实时定量PCR法检测β1和β2-AR基因mRNA表达,并与半定量PCR检测结果进行比较。结果30例患者外周血淋巴细胞荧光实时定量PCR均检出β1和β2-AR mRNA表达,不同性别组同一基因表达量无显著差异(P>0.05);荧光实时定量PCR检测β2-AR mRNA表达量显著高于β1-AR mRNA(P<0.001),而半定量PCR随着循环次数增加,β1和β2-AR mRNA表达差异减小。结论所建立的荧光实时定量PCR成功检测老年人外周血淋巴细胞β1和β2-AR基因mRNA表达,有较高的灵敏性及特异性;半定量PCR扩增平台期影响试验结果判断。     

实时荧光定量PCR检测莫氏立克次体

目的 采用TaqMan-MGB探针建立检测莫氏立克次体的实时荧光定量PCR.方法 依据莫氏立克次体外膜蛋白B基因(ompB)设计引物和探针,以克隆的ompB作模板建立实时荧光定量PCR方法.结果 建立的定量标准曲线的循环阈值(Ct)与模板拷贝数呈良好的线性关系(r=0.995);该方法能检出＜10拷贝的莫氏立克次体DNA,敏感性为普通PCR的1 000倍.用该方法检测莫氏立克次体DNA,结果为阳性,但是检测其他相关细菌DNA的结果均为阴性.用该方法检测莫氏立克次体感染豚鼠血标本,50%样本检测为阳性,而普通PCR检测结果均为阴性.结论 该实时荧光定量PCR具有很高的特异性和敏感性,适合于快速检测样本中微量莫氏立克次体DNA,可用于临床实验室快速确诊地方性斑疹伤寒.     

宫颈癌患者行荧光定量PCR技术检测外周血MMP-9mRNA的价值探究

目的探讨分析宫颈癌患者采用荧光定量PCR技术检测外周血MMP-9mRNA的临床价值。方法选取2017年4月-2019年4月收治的宫颈癌患者30例及妇科良性肿瘤患者30例作为研究对象,通过实时荧光定量PCR技术检测患者外周血MMP-9mRNA表达情况,分析MMP-9mRNA表达与临床病理相关性。结果研究组外周血MMP-9mRNA阳性检出率80.00%(24/30);对照组外周血MMP-9mRNA阳性检出率46.67%(14/30);研究组外周血MMP-9mRNA阳性检出率相比对照组明显更高(P<0.05);患者年龄、病理类型、肿瘤分期、病理分化、淋巴结转移是影响MMP-9mRNA表达的因素(P<0.05);淋巴结转移、肿瘤分期是导致MMP-9mRNA表达阳性表达的危险因素。结论针对宫颈癌患者行荧光定量PCR技术检测外周血MMP-9mRNA有助于对患者肿瘤微转移情况进行及时监测与干预,以减少患者肿瘤远处转移的发生率并改善患者预后。     

实时荧光定量PCR测定HBV-DNA的方法和临床意义

HBV—DNA定量是目前诊断乙型肝炎、判断病毒复制和评价患者肝脏病变、预后及药物疗效的重要指标之一，但在指导诊疗时仍需结合血清标记物、肝损害指标乃至HBV基因分型。HBV—DNA定量的方法有PCR核酸探针杂交法、R．ELISA、竞争定量PCR、实时荧光定量PCR，本文综述定量检测HBV—DNA意义及PCR检测方法。     

脂血和溶血对HBV DNA实时荧光定量PCR检测的影响

目的 探讨溶血和脂血两种因素对HBV DNA实时荧光定量PCR方法 的影响.方法 (1) 收集临床HBV DNA标本,按HBV DNA浓度分为Ⅰ水平、Ⅱ水平;收集HBV DNA阴性的重度乳糜状脂血标本和正常人标本.将以上标本按不同比例混合,制作成极高TG浓度不同HBV DNA水平:AⅠ、AⅡ组;高TG浓度不同HBV DNA水平:BⅠ、BⅡ组;正常TG浓度不同HBV DNA水平:CⅠ、CⅡ组.实时荧光定量PCR扩增.(2)收集临床HBV DNA标本,每人采集3份血标本,其中2份标本进行-20 ℃冷冻不同时间,制成重度溶血DⅠ、DⅡ组;中度溶血EⅠ、EⅡ组;无溶血对照组FⅠ、FⅡ组.实时荧光定量PCR扩增.(3)利用方差分析各检测结果 之间是否有统计学差异.结果 不同浓度脂血和溶血,对两种水平HBV DNA荧光定量PCR检测结果 均无统计学差异.结论 溶血和脂血对实时荧光定量PCR检测HBV DNA结果 无影响.     

生理状态下外周血白细胞穿孔素基因表达的荧光定量PCR检测

目的:建立穿孔素(perforin,PFR)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下处周血PFR mRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性PFR mRNA表达进行定量分析,相关系数r=1。     

脂血对实时荧光定量PCR实验结果影响的研究

荧光定量PCR是聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）中的一种,因其方法学的高灵敏度、高特异性、简便、快速等特点,目前在临床上有了广泛的应用,并且在病原微生物领域中显示出了巨大的应用价值和广阔的发展前景。     

ABI Quantistudio Dx实时定量PCR仪HBV-DNA检测的性能验证

 目的 验证ABI Quantistudio Dx实时荧光定量 PCR 仪 HBV-DNA 检测系统的性能。方法 参考 GB/T 22576-2008和CNAS-CL36相关文件,ABI Quantistudio Dx实时荧光定量 PCR 仪检测患者标本、质控品及卫生部临检中心室间参考物质。从以下几个方面进行性能验证:精密度、正确度、线性范围、检出限等。结果 ABI Quantistudio Dx 实时荧光定量 PCR仪 HBV-DNA 检测系统的批内精密度(批内 CV)分别为 2.09%(低浓度)、1.3%(高浓度);批间精密度(批间 CV)分别为3.92%(低浓度)、2.88%(高浓度);准确度评估以参加能力验证/室间质评的项目来判断,项目 PT 成绩为 100%,通过;系统最低检出限为50 U/ml;线性范围验证结果显示,线性回归方程为Y=1.0001X,R²=0.9976。线性范围为 1.00×10²~1.00×10⁸ U/ml。结论 ABI Quantistudio Dx 实时荧光定量 PCR 系统检测 HBV-DNA性能良好,满足临床检测需要。     

实时荧光定量PCR检测高压氧对实验兔血管内皮素-1及内皮型一氧化氮合酶mRNA表达的影响

目的 检测高压氧(hyperbaric oxygen,HBO)对实验兔颈内动脉和基底动脉内皮素-1(ET-1)及内皮型一氧化氮合酶(eNOS) mRNA表达的影响,探讨HBO暴露致脑血管前循环收缩、后循环扩张的可能机制.方法 健康成年新西兰白兔24只,按数字表法随机分为实验组(n=12)和对照组(n=12).实验组每日持续暴露于0.22 MPa HBO下60 min,连续3d;对照组正常饲养,不予任何处理.实时荧光定量PCR法(FQ-RT-PCR)检测ET-1、eNOS mRNA在2组颈内动脉和基底动脉的表达水平.结果 ET-1、eNOS mRNA在实验兔颈内动脉和基底动脉均有微量表达.与对照组相比,HBO可使实验组颈内动脉ET-1 mRNA表达明显增高[(1.679 ±0.097) vs (1.000±0.017)],eNOS mRNA表达明显下降[(0.571 ±0.039) vs (1.000 ±0.023)];基底动脉ET-1 mRNA表达明显下降[(0.565 ±0.069) vs(1.000±0.034)],eNOS mRNA表达明显增高[(1.667 ±0.134) vs(1.000±0.014)],差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 HBO可通过调节ET-1、eNOS mRNA在颈内动脉和基底动脉的相对表达量而发挥收缩前循环、扩张后循环的作用.     

实时荧光定量PCR检测痰中结核分枝杆菌临床评价

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测临床痰标本中结核分枝杆菌诊断肺结核的意义。方法收集我院2011年9月-2013年8月期间收治的126例确诊为肺结核的患者和80例非结核性呼吸道疾病患者的痰液标本,分别采用漂浮集菌涂片镜检、BACT／ALERT3D快速培养法和FQ-PCR法检测痰中结核杆菌,分析检出结果。结果126例确诊为肺结核患者的痰标本中对结核分枝菌杆的检验以FQ-PCR检出率最高达到53．2％,高于快速培养法的46．8％（P〈0．05）和痰漂浮集菌涂片镜检法的32．5％（P〈0．01）。FQ-PCR与痰培养法总体一致性为95．1％,K=0．88。对痰涂片阳性标本,两者敏感性差异无统计学意义（P〉0．05）;对痰涂片阴性标本,FQ-PCR敏感性明显高于快速培养法（P〈0．01）。结论FQ-PCR具有快速、敏感、特异、可定量和自动化的优点,值得应用于痰中结核杆菌的检测及肺结核的诊断。     

新兵基础训练应力性骨折61例

目的探讨由军事训练导致的应力性骨折的发病因素、早期诊断及预防措施。方法对61例新兵基础训练应力性骨折进行病因调查及分析,并下部队了解训练计划及方法。结果下肢(59例)发病高峰期在训练的第2、3周,上肢(2)例。41例经休息理疗治愈,8例完全骨折无移位者经石膏固定治愈。3例骨折并移位经骨牵引治愈,9例骨折并移位者经手术内固定治愈。结论发病因素为个体内在因素及缺乏科学训练方法。开训的2~4周是预防的重点时期,早期诊断与合理练兵是预防的关键。     

高血压病患者外周血淋巴细胞凋亡的检测及其价值

目的　探讨高血压病患者外周血淋巴细胞凋亡的检测方法及其临床价值。方法　采用TUNEL原位细胞凋亡检测技术对 3 0例高血压病患者及 3 0例正常健康对照人群外周血淋巴细胞进行检测。结果　两组中外周血淋巴细胞均有凋亡发生 ,但高血压病组外周血淋巴细胞凋亡例数明显高于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,且淋巴细胞凋亡阳性率也高 (P <0 0 5 )。结论　高血压病患者外周血淋巴细胞凋亡可能与高血压病的发生、发展及进程有关。     

生理状态下外周血白细胞IL-2基因表达的荧光定量PCR检测

目的:建立白细胞介素2(IL-2)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术.方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员中IL-2 mRNA的表达.主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IL-2 mRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99.     

外周动脉采血在新生儿护理中的应用分析

目的：研究和探讨新生儿外周动脉采血护理的临床应用价值,较少损伤提高采血成功率。方法以2012年10月～2013年10月收治的122例新生儿为研究对象对其进行随机分组,研究组和对照组各61例,对照组采用股静脉穿刺采血,研究组采用外周动脉采血,对两组一次采血成功率和不良反应等情况进行比较分析。结果采用外周动脉采血的研究组一次采血成功率为96.72％,高于对照组的72.13％。研究组发生标本溶血1例,发生标本凝血1例;对照组发生标本溶血5例,标本凝血5例,血肿3例,两组一次采血成功率和不良反应发生率差异均具有统计学意义（ P＜0.05）。结论新生儿采用外周动脉采血安全可靠,患儿痛苦小,一次采血成功率高,不良反应发生率低,可进行临床推广。     

生理状态下外周血白细胞γ-干扰素基因表达的荧光定量PCR检测

目的:建立γ-干扰素(IFN-γ)基因表达的绝对定量实时PCR检测技术。方法:应用实时定量PCR方法检测25名健康运动员生理状态下外周血白细胞IFN-γmRNA的表达。主要结果和结论:应用实时定量PCR方法能够对健康受试者外周血白细胞自发性IFN-γmRNA表达进行定量分析,相关系数r>0.99。     

Caspase在原发性胆汁性肝硬化患者外周血单个核细胞的表达及其临床意义

目的检测caspase8和caspase3在原发性胆汁性肝硬化(PBC,primary biliary cirrhosis)患者外周血单个核细胞中的表达,探讨其与PBC疾病进展的相关性。方法采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法,检测30例PBC和30例正常对照者的外周血单个核细胞(PBMCs)中caspase8和caspase3的基因和蛋白表达。结果PBC患者PBMCs中的caspase8和caspase3的mRNA和蛋白的表达明显低于健康对照组(P<0.05)。结论PBC患者caspase8,3的表达与疾病的发生发展存在一定的相关性,可以为PBC的诊断和预防提供新线索。     

葡萄胎发病新基因F1O在原发性肝癌中的表达分析

目的 通过检测原发性肝细胞癌中F10基因的表达,探讨该基因对肝细胞癌发生和发展的可能作用.方法 采用地高辛标记F10探针,原位杂交检测人肝细胞癌组织及癌旁组织F10基因的表达水平;通过实时荧光定量PCR方法,在PE ABI 7000型荧光定量PCR仪上检测肝细胞癌患者手术切除的癌组织及癌旁组织F10基因拷贝数.结果 原位杂交结果表明肝癌组织F10基因阳性表达,癌旁组织F10基因不表达;荧光定量PCR显示8例肝细胞癌标本中有6例肿瘤组织中F10基因表达明显高于癌旁组织,其中2例高出4倍以上.结论 原发性肝癌组织中存在F10基因的高表达,相应的癌旁组织中未见其表达,提示F10基因在肝细胞癌的发生、发展中起一定的作用.     

经CD34+纯化的自体外周血干细胞移植治疗小儿难治性自身免疫性疾病的初步观察

目的 探讨经CD34 纯化的自体外周血干细胞移植治疗小儿难治性自身免疫性疾病的疗效.方法 3例难治性自身免疫性疾病患儿接受自体外周血CD34 细胞移植.首先采用环磷酰胺 非格司亭方案动员外周血干细胞,通过CliniMACS细胞分选仪分选CD34 细胞后冻存.然后选用卡莫司汀 依托泊苷 阿糖胞苷 美法仑 抗淋巴细胞球蛋白,或环磷酰胺 美法仑 抗淋巴细胞球蛋白两种方案预处理;当天回输CD34 细胞;观察造血重建、免疫恢复,以及症状、体征变化情况.结果 动员获得了足够单个核细胞,纯化后CD34 细胞纯度高.粒细胞植入时间分别为 9 d、 13 d、 11 d,血小板植入时间分别为 14 d、 18 d和 13 d.3例原发病缓解.随访16～18个月,皮肌炎皮损消失,四肢肌力恢复正常,类风湿关节炎28个关节疾病活动评分由7.3分降至2.4分,狼疮活动指数评分由16分降至4分.结论 自体外周血CD34 细胞移植是常规治疗无效的小儿难治性自身免疫性疾病的可选择治疗措施之一.     

烧伤感染对血清中补体C3 和IL-10 水平的影响

目的　分析烧伤感染对血清中补体C3 和IL-10 水平的影响, 旨在根据其变化水平及时给予合适的免疫调节治疗, 预防感染的发生。方法　分别采集患者烧伤后第3、7、14 天的创面分泌物和外周血, 对分泌物做细菌培养, 用酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) 检测血清中的补体C3 和IL-10水平, 病情严重疑有脓毒血症者及时进行血培养。结果　烧伤后创面感染率不断上升, 脓毒血症发生率达16.4%, 对补体C3 水平的影响无统计学意义(P >0.05), 但烧伤后第14 天脓毒血症患者血清中IL-10 水平是创面感染患者的2 倍, 相比有统计学意义(P <0.05)。结论　补体C3 水平升高有利于提高机体抵抗力, 但不能反映机体的感染情况; IL-10 水平过度升高对感染加重有一定的预警作用, 在临床判断过程中辅助监测血清中IL-10水平有助于发现感染加重的趋势, 以便及时给予免疫调节治疗。