姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究姜黄素对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞增殖及纤维连接蛋白(FN)表达的影响.方法:以大鼠系膜细胞(MCs)为受试对象,将MCs分为7组:①正常对照组(5 mmol/L葡萄糖,NG组),②高糖组(30 mmol/L葡萄糖,HG组),③高糖 6.25 μmol/L姜黄素组,④高糖 12.5 μmol/L姜黄素组,⑤高糖 25μmol/L姜黄素组,⑥高糖 50 μmol/L姜黄素组,⑦高糖 100μmol/L姜黄素组.分别作用24 h后,用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖情况,用Western Blot法测定细胞内FN蛋白表达.结果:作用24 h后,高糖明显诱导MCs增殖并上调细胞内FN表达.不同浓度姜黄素均能抑制高糖诱导的细胞增生,并抑制FN蛋白表达增加.结论:姜黄素能抑制高糖诱导的MCs增殖,并下调FN蛋白表达,提示姜黄素可能通过阻抑FN表达减少细胞外基质积聚,从而发挥对糖尿病肾脏的保护作用.     

冬虫夏草对肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：观察冬虫夏草菌丝对体外培养的大鼠系膜细胞(MsC)增殖的影响。方法：应用血清药理学,使用氚标胸腺嘧啶([^3H]-TdR)掺入法检测大鼠肾小球MsC增殖。结果：含虫草菌丝血清可抑制MsC的增殖。结论：虫草菌丝可用于肾小球硬化的防治。     

肾康注射液对肾小球系膜细胞增殖及自分泌FN的效应

目的：探讨肾康注射液（SKI）阻抑肾小球硬化（GS），防治慢性肾功能衰竭（CR）的部分作用机制，为SKI临床应用提供依据。方法：采用血清药理学实验法，观察SKI对体外培养人肾小球系膜细胞（GMC）增殖及其自分泌纤维连接蛋白（FN）水平的影响，结果：SKI及其含药血清对GMC增殖，自分泌FN有明显抑制作用（P＜0．01，P＜0．05），呈剂量或SKI血药浓度与效应依赖性；但随刺激时间延长，其作用存在差异，即对增殖的抑制效应：SKI呈递增趋势，而SKI含药血清则呈递减趋势，对FN水平的抑制效应则相反。结论：SKI经机体代谢，药理效应的不一致性，提示SKI含药血清可能出现提高FN降低解酶活性的新物质，或存在降解FN的某种活性成分。     

转染人TGF-β1基因对大鼠系膜细胞基质表达的影响

目的通过对大鼠系膜细胞(MsC)转染人TGF-β1基因，观察该基因对MsC表达细胞外基质成分的影响。方法采用脂质体介导法转染人TGF-β1基因至大鼠MsC，Western blot法鉴定；细胞爬片ABC免疫酶标法观察纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原、Ⅰ型胶原、层黏蛋白(LM)的表达，并对结果定量分析。结果重组质粒pcDNA3．0-TGF-β1成功转染至大鼠MsC，Western blot及免疫组化检测均证实TGF-β1蛋白表达增强；与正常的MsC相比，TGF-β1转染的MsC表达FN、Ⅳ型胶原增强，其差异有显著性意义；而Ⅰ型胶原、LM表达改变不明显。结论TGF-β1可通过对大鼠MsC ECM成分表达的影响，而在肾小球硬化的发生发展过程起着重要作用。     

辛伐他汀对高糖培养肾小球系膜细胞增殖和细胞周期的影响及机制

目的：研究辛伐他汀（SIM ）对高糖培养肾小球系膜细胞（GMC）增殖和细胞周期的影响,并观察其炎症因子和细胞外基质的变化。方法将大鼠 GMCs 分为4组：低糖组[LG 组,葡萄糖（Glu）5．6 mmol／L ],高糖组（HG 组,Glu 30 mmol／L ）, HG ＋ SIM （10μg／L）组和 HG ＋ SIM （25μg／L）组。采用4-甲基偶氮四唑蓝（M TT ）法检测各组细胞的增殖能力,同时比较各组细胞的 G0／G1,G2＋ M 期和 S 期细胞比例。比较各组细胞上清液中的转化生长因子β1（TGF-β1）、纤维黏连蛋白（FN）和Ⅳ型胶原（COL4）水平。结果 HG 组不同时刻的吸光度（A）高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG 组,差异有统计学意义（P＜0．05）。 LG 组的 G0／G1期细胞比例为（35．67±3．38）％,S 期细胞比例为（41．24±5．64）％;HG 组的 G0／G1期细胞比例为（25．88±4．02）％,S 期细胞比例为（28．65±1．88）％;HG ＋ SIM （10μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（28．12±2．01）％,S 期细胞比例为（35．55±2．09）％;HG ＋ SIM （25μg／L）组的 G0／G1期细胞比例为（31．85±3．52）％,S 期细胞比例为（39．82±2．23）％,差异有统计学意义（P＜0．05）。 HG 组上清液 TGF-β1、FN 和 COL4水平高于 HG ＋ SIM （10μg／L）组、HG ＋ SIM （25μg／L）和 LG组,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 SIM 可以通过降低 TGF-β1水平来抑制 GMCs 的增殖并调整细胞周期,抑制 GMCs 肥大。     

茶多酚对大鼠系膜细胞摄取脂蛋白a的影响

目的 探讨茶多酚对大鼠系膜细胞摄取脂蛋白a（LPa）的作用.方法以LPa刺激体外培养的大鼠系膜细胞,同时用不同浓度茶多酚干预,测定系膜细胞内总胆固醇（TC）含量;油红-O染色光镜观察细胞形态.结果LPa刺激下的系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例均较无LPa刺激的对照系膜细胞增高.随培养液茶多酚浓度由40ng/L～40mg/L递增,LPa刺激的系膜细胞TC含量及油红-O染色阳性细胞比例递减,呈剂量依赖性关系.结论40ng/L～40mg/L茶多酚可呈剂量依赖性抑制大鼠系膜细胞摄取Lpa.     

体外藻酸双酯钠对大鼠肾小球系膜细胞增殖及凋亡的影响

目的　研究藻酸双酯钠 (PSS)对大鼠肾小球系膜细胞 (GMC)增殖及细胞凋亡的影响。方法　采用MTT法检测PSS、甲基强的松龙 (MP)、低分子肝素对GMC细胞增殖的影响 ;采用光镜、荧光镜、流式细胞仪检测GMC细胞凋亡。结果　PSS、MP、低分子肝素均对GMC生长有抑制作用 ;PSS诱导GMC细胞凋亡。结论　PSS在体外可以抑制GMC细胞增殖     

肾炎康复片对TGF-β_1诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质合成的影响

目的：观察肾炎康复片对转化生长因子-β1（transforming growth factor,TGF-β1）诱导下肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质成分表达的影响。方法：体外培养正常大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组,TGF-β1刺激组,TGF-β1加肾炎康复片低剂量组（100 mg·L^-1）、中剂量组（200 mg·L^-1）、高剂量组（500 mg·L^-1）。分别利用甲基噻唑基四唑法（metyl thiazolyl tetronzolium,MTT）观察肾炎康复片对TGF-β1诱导细胞活力的影响;双抗体夹心ABC-ELISA法检测细胞上清I型胶原（Col I）、纤维连接蛋白（FN）的含量。结果：TGF-β1可以显著增加大鼠肾脏系膜细胞活力,TGF-β1刺激组Col I、FN表达量较正常对照组明显升高（P〈0.05）;TGF-β1加肾炎康复片各剂量组的Col I、FN均低于TGF-β1刺激组（P〈0.05）。结论：肾炎康复片能抑制TGF-β1诱导的细胞活力及肾小球细胞外基质（ECM）的合成。提示抑制TGF-β1刺激GMC分泌细胞外基质是肾炎康复片治疗慢性肾小球疾病的重要机制之一。     

蟾蜍灵对大鼠肾小球系膜细胞增殖和细胞外基质分泌的影响

目的:探讨蟾蜍灵(bufalin)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肾小球系膜细胞(GMC)增殖及细胞外基质(ECM)分泌的影响.方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为对照组、LPS刺激组(LPS5mg/L)和蟾蜍灵干预组(LPS5mg/L和蟾蜍灵1×10-8mol/L),应用台盼蓝拒染法检测蟾蜍灵对GMC的细胞毒性作用,通过MTT、流式细胞技术检测GMC增殖变化,RT-PCR检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的mRNA的表达,ELISA法检测GMC培养上清中纤维连接蛋白(FN)及TGF-β1的表达.结果:MTT结果显示蟾蜍灵浓度在1×10-8mol/L及以上时呈剂量依赖性抑制GMC增殖(P<0.01).细胞周期分析显示蟾蜍灵组S期细胞比例较脂多糖组降低(P<0.01).蟾蜍灵干预组与脂多糖组相比TGF-β1的mRNA相对表达量减少(P<0.05),FN,TGF-β1蛋白分泌量减少(P<0.01).结论:蟾蜍灵对LPS作用后肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质分泌具有抑制作用.     

霉酚酸酯对高糖所致大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的：观察霉酚酸酯(mycophenolate mofetil MMF)对高糖环境大鼠肾小球系膜细胞(mesangial cells MCs)增殖及Ⅳ型胶原的影响。方法：以30?mmol/L葡萄糖刺激体外培养的大鼠MCs增殖,加入不同浓度的MMF,采用MTT比色法观察6、12、24、48?h系膜细胞的增殖情况;放射免疫法测定细胞上清液中Ⅳ型胶原的含量。结果：葡萄糖对系膜细胞的增殖效应呈浓度和时间依赖性,反应最佳浓度为30?mmol/L,最佳时点为24?h。MMF有抑制高糖所致MCs增殖、减少细胞外基质的作用,并呈剂量时间依赖性。结论：高糖在一定浓度和一定时段内有刺激大鼠系膜细胞增殖的效应,MMF对高糖所致MCs增殖具有抑制作用,且随MMF剂量增大,作用时间的延长,抑制作用增强。     

缓激肽促进大鼠肾系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达

目的:观察缓激肽(BK)对大鼠肾系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达的影响。方法:采用体外培养的大鼠肾系膜细胞,应用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖情况;应用Westernblotting观察肾系膜细胞纤维连接蛋白的表达。结果:缓激肽促进肾系膜细胞增殖,且具有剂量依赖性。缓激肽和转化生长因子-β1皆显著增加系膜细胞纤维连接蛋白表达,并具有协同效应。结论:缓激肽可能直接促进体外培养的系膜细胞增殖和纤维连接蛋白表达,从而加重对肾小球的损伤。     

丹参酮II_A对大鼠系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性的调控

目的观察丹参酮IIA对大鼠系膜细胞增殖及对人TGF-β1基因启动子活性的作用。方法应用MTT法观察丹参酮IIA对大鼠系膜细胞增殖的作用;将不同长度的人TGF-β1基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF 2.14,采用脂质体法转染至大鼠系膜细胞中,分别加入不同浓度的丹参酮IIA(1、5、10 mg/L)进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性。结果10 mg/L的丹参酮IIA对大鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01)。丹参酮IIA浓度为1、5 mg/L时对重组体phTGF 2.14的表达活性无影响,当增大丹参酮IIA浓度为10 mg/L时对重组体phTGF2.14的表达活性有抑制作用,与对照组比较有显著差异(P<0.01)。结论丹参酮IIA能够抑制系膜细胞增殖,当浓度为10 mg/L时对人TGF-β1基因启动子活性也具有抑制作用。     

辛伐他汀与阿托伐他汀对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞p27蛋白表达的影响

目的探讨辛伐他汀和阿托伐他汀对高糖培养的大鼠肾小球系膜细胞p27表达的影响。方法将体外培养大鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组(葡萄糖浓度5.6mmol/L)、高糖组(葡萄糖浓度30mmol/L)、高糖辛伐他汀组(葡萄糖浓度30mmol/L,辛伐他汀浓度10μmol/L)、高糖阿托伐他汀组(葡萄糖浓度30mmol/L,阿托伐他汀浓度10μmol/L)。每组设置6个复孔,于24、48、72、120h收集细胞,Western blotting法测定大鼠肾小球系膜细胞p27蛋白的表达,逆转录PCR测定p27mRNA的表达。结果高糖组p27蛋白浓度及mRNA水平均较正常对照组升高(P<0.05);高糖辛伐他汀组及高糖阿托伐他汀组p27蛋白浓度及mRNA水平均较高糖组降低(P<0.05)。结论他汀类药物通过调节肾小球系膜细胞p27的表达,可发挥非依赖降脂的肾脏保护作用。     

替比夫定对体外培养大鼠肾小球系膜细胞增殖的影响

目的探讨不同浓度替比夫定对大鼠肾小球系膜细胞(RMCs)增殖的影响。方法将RMCs分为空白对照组和10、20、40、60、100、150 mmol·L-1替比夫定组,分别作用24、48、72 h,通过细胞形态学和4-甲基偶氮唑蓝法检测替比夫定对RMCs增殖的影响。结果空白对照组细胞胞质透亮,折光性强,细胞呈梭形、不规则星形或多角形,细胞密集时可呈网状排列。10、40和150 mmol·L-1替比夫定组细胞形态随药物浓度增加及作用时间的延长出现皱缩,细胞核缩成点状,甚至出现胞质空泡。10、20、40、60、100和150 mmol·L-1替比夫定组作用RMCs 24、48、72 h后,RMCs增殖抑制率随药物浓度的增加和作用时间的延长而增高,且呈剂量和时间依赖性(P<0.01)。结论替比夫定对RMCs有显著的抑制作用,并且具有时间和剂量依赖性。     

水蛭及水蛭素对大鼠系膜细胞外纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原影响的比较研究

目的 探讨水蛭、水蛭素对大鼠肾小球系膜细胞(GMCs)外纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原含量的影响.方法 应用ELESA法测定培养细胞上清液纤维连接蛋白(FN)和Ⅳ型胶原(Col-Ⅳ)的含量.结果 水蛭和水蛭素均可降低FN和Col-Ⅳ的含量,但水蛭的作用弱于水蛭素(P<0.01).结论 水蛭素在抑制体外培养的大鼠GMCs产生FN和Col-Ⅳ的作用方面强于水蛭.     

肝细胞生长因子对大鼠系膜细胞炎症介质与基质表达的影响

目的：研究肝细胞生长因子(HGF)对大鼠肾小球系膜细胞合成、分泌炎症介质及细胞外基质的影响。方法：以不同浓度HGF与大鼠系膜细胞共孵育，观察不同时间培养细胞上清中白细胞介素6(IL-6)、转化生长因子β(TGF—β)、纤连蛋白(Fn)表达的变化。结果：HGF可时间依赖及浓度依赖的降低培养大鼠系膜细胞IL-6、TGF—β及Fn表达水平。结论：HGF可抑制大鼠系膜细胞炎症介质及细胞外基质表达，可作为一种新型的肾脏保护性因子，对肾脏疾病的治疗具有一定的意义。     

丹参酮ⅡA对大鼠系膜细胞增殖及TGF-β1启动子活性的调控

目的 观察丹参酮ⅡA对大鼠系膜细胞增殖及对人TGF-131基因启动子活性的作用.方法 应用MTT法观察丹参酮u.对大鼠系膜细胞增殖的作用;将不同长度的人TGF-131基因启动子片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因组成重组体phTGF 2.14,采用脂质体法转染至大鼠系膜细胞中,分别加入不同浓度的丹参酮ⅡA(1、5、10 mg/L)进行干预,用ELISA方法检测报告基因CAT的活性.结果 10ms/L的丹参酮ⅡA对大鼠肾小球系膜细胞增殖有明显的抑制作用,与对照组比较有明显差异(P<0.01).丹参酮Ⅱ浓度为1、5 mg/L时对重组体phTGF 2.14的表达活性无影响,当增大丹参酮ⅡA浓度为10 ms/L时对重组体phTGF 2.14的表达活性有抑制作用,与对照组比较有显著差异(P<0.01).结论 丹参酮ⅡA能够抑制系膜细胞增殖,当浓度为10 ms/L时对人TGFβ1基因启动子活性也具有抑制作用.     

海昆肾喜对肾小球系膜细胞增殖及表达PDGF-BB mRNA的影响

目的:探讨海昆肾喜对体外培养的肾小球系膜细胞增殖及表达血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)mRNA的影响。方法:制备大鼠含药血清,MTT比色法检测海昆肾喜对脂多糖诱导下肾小球系膜细胞(GMCS)增殖的影响,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测海昆肾喜对GMCS表达PDGF-BB mRNA的影响,设苯那普利为对照组。结果:MTT实验各时间点海昆肾喜组OD值均显著低于LPS组(P<0.05),RT-PCR实验海昆肾喜组PCR产物电泳条带较脂多糖组明显减弱(P<0.05),且均呈量效依赖关系,海昆肾喜大剂量组作用优于小剂量组。结论:海昆肾喜抑制脂多糖诱导的肾小球系膜细胞增殖并显著下调肾小球系膜细胞表达血小板源性生长因子-BB mRNA,可能是其防治肾小球硬化的作用机理之一。     

紫草素对人胎肾小球系膜细胞增殖、凋亡及细胞外基质的影响

目的：研究紫草素对人胎肾小球系膜细胞(MC)增殖、凋亡及细胞外基质的影响。方法：采用人胎肾细胞培养法、MTT法、流式细胞仪及免疫组化的方法。结果：紫草素0．05、0．10、0．50及1，00mmol／L浓度对培养24、48、72h人MC有明显抑制作用；紫草素明显抑制高糖诱发的人MC细胞凋亡；紫草素0．05、0．10、0．50μg/ml显著抑制系膜基质层粘连蛋白(LN)、纤维连接蛋白(FN)及胶原Ⅳ(CoⅣ)的生成。结论：紫草素具抑制人MC增殖、细胞外基质生成及细胞凋亡作用。