分泌抗脲酶单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步应用

脲酶是一种植物蛋白酶,可催化其底物中的脲素分解产氨,使底物溶液的pH值升高,溶液中的溴甲酚紫指示剂由黄色转变为紫色。脲酶的另一特点是活性不受叠氮钠抑制,由于人和动物的组织细胞无内源性脲酶存在,在检测细胞表面抗原时,不存在类似内源性过氧化物酶形成的非特异性染色。但脲酶标记抗体的过程繁杂,对酶的活性有影响,我们应用淋巴细胞杂交瘤技术,获得6株分泌抗脲酶单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞,将抗脲酶McAb应用于非标记脲酶酶免疫实验中,获得了满意结果。现将实验程序及结果报告如下。     

分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,其脾细胞与Sp 2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞株(HE_(20)IB_8、HE_(21)IIG_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2～6.4×10~6。因相捕捉HBeAg、HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂中的包被抗体配合人抗HBe-HRP与Abbott试剂结果非常一致。     

分泌抗MCG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

分泌抗ＭＣＧ单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立周昌奎蓝兰张云峰＊＊（福建省计划生育科学技术研究所，福州３５００１１＊福建省立医院生物治疗中心＊＊福建省福港生物工程研究中心）谢弘王放（中国科学院上海细胞生物学研究所，上海２０００３１）以苯甲酸－丙酮一步法，从...     

分泌抗加压素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

加压素(VP)是由下丘脑视上核和室旁核神经元合成,经下丘脑-垂体束转运至垂体后 叶分泌的九肽激素,除具有抗利尿和升压作用外,在中枢神经系统内亦有广泛的分布和具有重要的生理功能。Hou-Yu等(1982)最早将单克隆抗体(McAb)技术应用于VP的免疫细胞化学研究。基于深入研究VP在体内的作用的需要,本文初步报导作者在建立分泌抗VpMcAb杂交瘤细胞株方面的工作。     

分泌抗沙眼衣原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

沙眼衣原体除引起沙眼外,近年来认识到它还是性传染的泌尿生殖道感染的重要病原之一。为利用单克隆抗体技术作沙眼衣原体的快速诊断,我们制备并获得了一株分泌抗沙眼衣原体的杂交瘤细胞株。我国分离的沙眼衣原体TE_(55)株,在55     

分泌抗精氨酸加压素单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道利用杂交瘤技术制备了抗精氨酸加压素单克隆抗体,通过鉴定,证明所得抗体稳定性好,对精氨酸加压素有较强的特异性结合,对赖氨酸加压素和催产素基本无反应。用免疫双扩散技术还证明所得抗体属小鼠IgM类。     

分泌抗hCG全分子单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立和应用

本文报道应用杂交瘤技术,获得5株能持续分泌抗hCG单克隆抗体(MAb)的细胞株。这5株细胞经4～5次克隆化后,分别接种于BALB/c鼠腹腔。腹水MAb效价有的高达4×10~5,培养上清液MAb效价高达4×10~2,抗体能特异地被hCG中和吸收。我们发现每株细胞所分泌抗体的能力,性质及效价是有较大差异的。5株杂交瘤细胞中只有HB_9、HD_(12)株分泌的MAb能单一地与胶乳滴配作为妊娠诊断试剂。 用此MAb作胶乳凝集抑制试验,检测了262例疑为早孕尿液标本和173例临床尿液标本,并与市售“妊娠试剂”对照,结果优于对照试剂。特别是我们用杂交瘤细胞培养上清液即可直接用作妊娠诊断试剂,且敏感性和特异性均很好,这在国内尚未见报道。     

分泌抗HBeAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

应用血清纯化的HBeAg免疫BALB/c小鼠,取该鼠脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得两株分泌抗HBe的杂交瘤细胞系(HE_(20)1B_8,HE_(21)2C_(11))。接种同系小鼠腹腔诱生的腹水中用ELISA测定抗HBe效价达3.2×6.4×10~6。因相捕捉HBeAg,HBsAg和HBcAg特异性试验以及中和试验均证明是针对HBeAg的特异性抗体。临床应用作为ELISA检测HBeAg和抗HBe试剂包被抗体,配合人抗HBe-HRP,结果与Abbott试剂非常一致。     

两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定

目的 制备具有广谱种属反应性的PrP单克隆抗体(McAb)，用于可传播性海绵样脑病(TSE)的诊断及致病机制研究。方法 分别将对应于牛PrP29-48(BoP1)、PrP89-108(BoP2)的两种多肽与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫BALB／c小鼠，经细胞融合后获得分泌针对上述两种多肽的杂交瘤细胞株，用Western-blot方法检测这些细胞株分泌的McAb与牛(Bo)、人(Hu)和仓鼠(Ha)PrP蛋白的反应性。结果 通过细胞融合和2-3轮克隆化，用ELISA筛选出分泌抗BoPl和BoP2抗体的杂交瘤细胞株D11和D8。Western blot显示，获得的McAb均能分别与重组BoPrP(25-242)、重组HuPrP(23-231)和HaPrP(23-231)反应。结论 获得了可与牛、人和仓鼠PrP反应的两种McAb，可用于哺乳类PrP检测及TSE致病机制研究。     

分泌高效价抗-HBs单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

为了进行肝癌的病因学研究,我们研制了抗HBs单克隆抗体。用HBsAg免疫BALB/c小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤NS-1细胞在PEG作用下融合,经7次克隆化培养,获得三株能分泌抗-HBsMcAb的杂交瘤3G8、3H_9和2C_2。三个瘤株分泌的McAb在培养上清及腹水     

分泌抗蛇毒磷酸二酯酶单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

<正> 从本校蛇园饲养的浙江产蝮蛇中挤压毒腺采毒,经冰冻真空干燥,然后经离子交换,凝胶过滤收集磷酸二酯酶活性峰的中央部份,经浓缩,冰冻干燥成纯化的蝮蛇毒磷酸二酯酶,再经盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳检查抗原的纯度,结果表现出一条十分明显的蛋白区带,而未经提纯的抗原有11条区带,用     

分泌抗人角蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其抗体的初步鉴定

本研究以人角蛋白免疫的BALB/C小鼠脾细胞与NS_1骨髓瘤细胞经聚乙二醇融合、HAT选择性培养、ELISA筛选及反复克隆化,成功地获得了两株稳定分泌抗人角蛋白单克隆抗体(MCAb)的杂交瘤细胞株——AF_2和AF_6,其染色体众数分别为97和96,所产生抗体经免疫双扩散试验属小鼠IgG_1亚类。通过亲和素一生物素一过氧化物酶(ABC)免疫组     

分泌抗人C反应蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

<正> C反应蛋白(CRP)在正常人血清中含量甚微(1～3μg),而在许多感染性疾病、风湿热、风湿性关节炎、急性心肌梗塞、恶性肿瘤及严重外伤患者的血清中可升高数百、甚至上千倍。为了检测CRP阳性血清及对CRP进行多方面研究,我们建立了分泌抗CRP单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。     

抗AKP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文采用SP2/0骨髓瘤细胞与碱性磷酸酶(AKP)(美国Sigma公司,批号21F—0270)免疫的小鼠的脾细胞进行细胞融合,建立了分泌抗AKP的单克隆细胞系。 一、小鼠免疫:AKP0.1mg加福氏佐刺0.1ml,腹腔注射0.2ml/只;四周后同剂量腹腔追加一次;再过2周后单纯抗原0.1mg,0.1ml/只,尾静脉注射,三天后取脾细胞融合。     

分泌抗-LSP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立(摘要)

应用成人肝提取的肝脏特异性膜脂蛋白(LSP)免疫BALB/c小鼠,小鼠免疫脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞在PEG1000介导下融合,采用ABC-ELISA筛选抗-LSP阳性孔,细胞融合率为305/384(79.2％),抗体阳性孔数为8/305(2.62％),经过三次克隆化后筛选出5株杂交瘤细胞系(1A3、2E5、2D7、3G8、4F1).培养上清抗体效价在1∶100～1∶     

分泌抗人B型红细胞单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

我们用正常人B型红细胞为抗原,免疫BALB/c,取其脾脏与小鼠骨髓瘤Sp2/0进行杂交,建立了抗人B型红细胞单克隆抗体85/1-15细胞株,此株经3次克隆化培养和体外103d的传代培养和反复冻存复苏,至今数年,生长良好,继续分泌抗B型红细胞单克隆抗体。此株经特异性测定,只与人B型红细胞抗原反应,而与A至O型红细胞     

分泌抗人角蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

角蛋白（keratin）作为一组相对分子质量（M）为40000－70000不溶于水的细胞结构蛋白，在上皮细胞的发生、分化成熟过程中逐渐形成，是所有哺乳动物细胞骨架的中间丝之一，其组成因不同上皮而异。近年来，随着分子生物学技术的推广和应用，角蛋白的基础研究得到了不断深化；同时采用多种特异性抗角蛋白的mAb进行皮肤病的临床研究，也取得很大的进展。本实验选用从剥脱性皮炎型药疹患者皮屑中提取的角蛋白免疫动物，制备出3株抗人角蛋白的mAb，并对其进行了鉴定。l材料和方法1．l角蛋自的提取取剥脱性皮炎型药疹患者的皮屑，按常规方法提取…     

分泌抗产气荚膜杆菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和初步应用

本文报道应用杂交瘤技术获得两株能持续分泌抗产气荚膜杆菌的单克隆抗体(一株抗菌体,另一株抗芽胞)的杂交瘤细胞系。在自行设计的微量点样玻片上应免疫荧光法检测杂交病培养上清,发现与产气荚膜杆菌菌体或芽胞呈特异性反应而不与其他细菌起反应。杂交病上清抗体效价为1∶16,腹水效份为1∶1×10~4。Ig亚类鉴定均为IgG_2a。抗体能特异地被细菌吸收,并有一定的抑菌作用和动物保护作用。应用此抗体对22例战伤伤口进行检测,15例检出产气荚膜杆菌与厌氧培养无明显差异,而特异性高,检测时间大大缩短,因而有可能作为早期明确伤员有无产气荚膜杆菌感染的诊断试剂。     

分泌抗CRF单克隆抗体杂交瘤的建立及初步鉴定

采用淋巴细胞杂交瘤技术，获得了５株稳定分泌抗促肾上腺皮质激素释放因子（ＣＲＦ）的ＭｃＡｂ杂交瘤细胞株。５株单克隆抗体均为ＩｇＧ２，且均识别ＣＲＦ羧基端。ＥＬＩＳＡ交叉试验结果表明，该ＭｃＡｂ不与ＡＣＴＨ、ＦＳＨ、ＮＰＹ、ＬＨ反应。５株杂支瘤腹水效价在１０－４～１０－５，亲和常数在５×１０７ｍｏｌ／Ｌ－１～１×１０９ｍｏｌ／Ｌ－１。