糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖、分泌功能和细胞内[Ca2+]i的研究

目的：探讨糖尿病肾病肾小球系膜细胞增殖、分泌功能和细胞内[Ca^2 ]i改变及意义。方法：链脲佐菌素（STZ）复制糖尿病模型，取肾进行肾小球系膜细胞培养，^3H-TdR法测定细胞增殖，ELISA法测定纤维连接蛋白（FN）分泌量，用Fluro-3探针经共聚焦显微镜检测[Ca^2 ]i变化。结果：糖尿病大鼠肾小球系膜细胞，^3H-TdR投入率和FN分泌量较正常大鼠增加，基础[Ca^2 ]i两组无差异，但糖尿病肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i对血管紧张素Ⅱ反应明显减弱。结论：糖尿病肾小球系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚，其[Ca^2 ]i对AngⅡ反应减弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过。     

糖尿病肾病系膜细胞增殖功能、[Ca~(2 )]i和分泌纤维连接蛋白的研究

目的 :探讨糖尿病肾病系膜细胞功能改变及意义。方法 :采用STZ复制糖尿病模型 ,取肾进行系膜细胞培养 ,3 H -TdR法测定细胞增殖 ,用fluro - 3探针经共聚焦显微镜检测 [Ca2 ]i 变化 ,ELISA法测定纤维连接蛋白 (FN)分泌量。结果 :糖尿病大鼠系膜细胞3 H -TdR掺入率和FN分泌量较正常大鼠增加 ,基础 [Ca2 ]i 两组无差异 ,但糖尿病系膜细胞 [Ca2 ]i 对血管紧张素II反应明显减弱。结论 :糖尿病系膜细胞增殖和分泌FN增加参与了糖尿病肾病细胞外基质的积聚 ,其 [Ca2 ]i对AngII反应减弱可能参与了糖尿病肾病早期高滤过     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca2+]i和细胞增殖的影响

目的 研究肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。方法 以体外培养的系膜细胞为研究对象，激光共聚焦显微术结合Fura-3染色法，动态测定细胞[Ca2 ]i，MTT法测定细胞增殖。结果 血小板衍生生长因子(PDGF)-BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞[Ca^2 ]i的升高，并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF-BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时，对细胞游离钙却无影响。结论 肾小球系膜细胞[Ca2 ]i的升高和细胞增殖之间存在着正性关联，但[Ca2 ]i的升高并非细胞增殖的唯一途径。     

两种不同状态系膜细胞的培养及其功能研究

目的　比较糖尿病大鼠成模后的系膜细胞与高糖刺激下的系膜细胞在功能上的异同 ,并探讨用体外培养的成模后系膜细胞研究糖尿病肾病的可行性及优越性。方法　将 2 0只 Wistar大鼠随机分成糖尿病成模组和正常组 ,每组各 10只。糖尿病成模组先采用链脲佐菌素复制糖尿病模型 ,然后再进行系膜细胞体外培养 ;正常组大鼠的系膜细胞又分为高糖组和正常对照组两个亚组 ,高糖组采用高糖刺激系膜细胞 ,正常对照组为常规培养基培养。分别对三组细胞用 3 H - Td R摄入法测定细胞增殖 ,EL ISA法测定纤维连接蛋白 (FN)分泌 ,用共聚焦显微镜检测胞内〔Ca2 +〕 i及对血管紧张素 的反应。结果　糖尿病成模组系膜细胞 3 H - Td R掺入率高于正常对照组 ,高糖组系膜细胞 3 H- Td R掺入率低于正常对照组 (P<0 .0 5 ) ;糖尿病成模组及高糖组系膜细胞分泌 FN量均较正常对照组增加 (P分别 <0 .0 1和 <0 .0 5 ) ,且糖尿病成模组系膜细胞分泌 FN量虽高于高糖组 ,但无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;糖尿病成模组及高糖组系膜细胞胞内〔Ca2 +〕i对血管紧张素 的反应都减弱 ,且前者更为明显。结论　先建立糖尿病模型再培养的系膜细胞在功能和生物学性状方面更接近于糖尿病体内系膜细胞     

PDGF-BB对肾小球系膜细胞[Ca~(2 )]_i和细胞增殖的影响

目的研究肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i的变化与系膜细胞增殖之间的关系。　方法以体外培养的系膜细胞为研究对象 ,激光共聚焦显微术结合Fura- 3染色法 ,动态测定细胞 [Ca2 ]i,MTT法测定细胞增殖。　结果血小板衍生生长因子 (PDGF) -BB可浓度依赖性地引起肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i 的升高 ,并促进细胞增殖。钙通道阻滞剂和血管紧张素转换酶抑制剂均可同时抑制PDGF -BB引起的细胞钙浓度升高和细胞增殖。中药成分雷公藤多甙在显著抑制系膜细胞增殖的同时 ,对细胞游离钙却无影响。　结论肾小球系膜细胞 [Ca2 ]i 的升高和细胞增殖之间存在着正性关联 ,但 [Ca2 ]i 的升高并非细胞增殖的唯一途径     

高胰岛素对肾小球系膜细胞内[Ca2+]i和Fn影响的体外研究

目的：研究高胰岛素通过对肾小球系膜细胞(GMC)内游离钙（[Ca^2 ]i及其产物纤维连结蛋白(Fn)的影响，探讨其对GMC的增生及在糖尿病肾病(DN)发生发展中的作用。方法：以含10％灭活小牛血清的BPMI 1640培养、传代GMC及细胞鉴定。按培养液中胰岛素浓度不同，分为三组，各加入相应培养液，进行细胞内[Ca^2 ]i浓度测定及培养上清Fn测定。结果：胰岛素浓度上升可引起[Ca^2 ]i水平上升(P＜0．05)，同时对Fn的生成亦有促进作用(尸＜0.05)，但与其作用时间无关。结论：高胰岛素水平与GMC中[Ca^2 ]i浓度增高及培养上清液中Fn的浓度上升有密切关系，因而可能与GMC的增生和纤维化有关。     

细胞内Ca2+在HMG-CoA还原酶抑制剂抑制MCF-7细胞增殖中的作用

目的：探讨HMG－CoA还原酶抑制剂洛伐他汀（LOV）对人乳腺癌MCF－7细胞增殖功能和细胞内游离Ca^2 浓度（[Ca^2 ]i）变化的影响。方法：4、8、16μmol/L　LOV处理MCF－7细胞1－3d后，MTT比色法检测细胞增殖功能，流式细胞仪测定细胞周期相的分布及凋亡率，激光共聚焦显微技术观察细胞[Ca^2 ]i变化以及RT－PCR方法分析LOV对MCF－7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达的影响。结果：LOV对MCF－7细胞增殖有明显的抑制作用，并使细胞的生长阻滞于G0/G1期，该作用存在一定的剂量和时间关系，但其诱导MCF－7细胞凋亡的作用不明显；同时LOV可持续升高MCF－7细胞[Ca^2 ]i，但对MCF－7细胞质膜钙泵PMCA1 mRNA表达无明显影响。结论：LOV导致的[Ca^2 ]i持续升高可能与LOV影响MCF－7质膜PMCA1功能有关；[Ca^2 ]i的升高及相关信号通路的变化可能参与了LOV对MCF－7细胞增殖抑制作用的调控。     

吗啡对大鼠海马星形胶质细胞[Ca2+]i的影响

目的 研究吗啡对大鼠海马星形胶持细胞[Ca^2 ]i的影响，探索吗啡对星形胶质细胞的作用效应。方法 运用荧光探针Fluo-4，利用激光共聚焦显微镜研究培养纯化大鼠海马星形胶质细胞[Ca^2 ]i的变化。结果 经0.5,1,2,10μmol/L浓的吗啡短期处理3d后，细胞内[Ca^2 ]i浓度与正常细胞比较差异无显著性（P＞0．05）。吗啡急性作用于正常星形胶质细胞后，[Ca^2 ]i呈单峰样升高；而作用于吗啡处理后的细胞，作用浓度需高于处理浓度出现[Ca^2 ]i呈单峰样升高的现象，纳络酮可阻断上述效应，NMDA受体阻断剂MK－801则不能。结论 星形胶质细胞[Ca^2 ]i对吗啡的反应性变化可能参与吗啡耐受的形成。     

血管紧张素Ⅱ及其拮抗剂对鼠系膜细胞内游离钙的影响

目的探讨Losartan拮抗局部肾素-血管紧张系统（RAS）对预防高血压致肾脏靶器官损伤的意义。方法应用细胞培养和Fura－2方法，观察血管紧张素Ⅱ（AugⅡ）和血管紧张素Ⅱ1型受体（AT1受体）拮抗剂Losartan对自发性高血压大鼠（SHR）和正常血压大鼠（WKY）肾小球系膜细胞内游离钙（[Ca2 ]i）浓度的影响。结果AngⅡ使SHR系膜细胞[Ca2 ]i增高，对WKY无影响；AugⅡ对SHR系膜细胞[Ca2 ]i的作用可被Losartan抑制并呈剂量依赖关系。结论AngⅡ诱导的肾小球系膜细胞[Ca2 ]i增加是经AT1受体介异并被Losartan拮抗。Losartan可能有细胞水平的肾脏保护作用。     

细胞内游离钙在ACEI逆转SHR血管重构中的作用

目的：探讨细胞内游离钙在血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)逆转自发性高血压大鼠(SHR)血管重构中的作用。方法：采用SHR、正常血压大鼠(WKY)配对，服药前后对比及离体血管、淋巴细胞药物处理研究。结果：①SHR与WKY比较有以下血管重构现象：血管内膜有WBC粘附和侵袭，中层血管平滑肌细胞(VSMC)排列紊乱、纤维成分增多；血管内皮细胞及VSMC线粒体增多，体密度增加、肿胀，肌浆网扩张，比表面减少。②SHR外用淋巴细胞[Ca^2 ]i，主动脉平滑肌^45Ca静息内流，血浆血管紧张素Ⅱ浓度[ATⅡ]均较WKY显增加；③ACEI治疗后SHR血管重构现象得到逆转，血浆[ATⅡ]、淋巴细胞[Ca^2 ]i、主动脉平滑肌^45Ca静息内流均降低；④离体情况下ATⅡ能使SHR、WKY主动脉平滑肌^45Ca静息内流及淋巴细胞[Ca^2 ]i增加，ACEI使以上指标下降。结论：ACEI能有效逆转高血压血管重构现象，其作用可能同有效纠正血管平滑肌细胞内皮细胞钙超负荷及调节异常细胞内游离钙代谢有关。