应用MTT法观察人皮肤培养细胞的形态学特征

目的：在创面愈合细胞生物学研究时,应用ＭＴＴ比色法细胞活性和生长增殖;探讨及时观察细胞生长状态下的形态变化的可行性。方法：人角朊细胞（ＫＨ）和人真皮成纤维细胞（ＨＤＦ）不同生长密度时加入ＭＴＴ溶液后,观察不同时间点细胞的形态,测定细胞内形成镜下可见蓝色甲及胞外形成针状结晶的时间;比较镜下观察时间长短对ＭＴＴ比色法最终值的影响。结果：在不同生长密度条件下,加入ＭＴＴ溶液后,ＨＫＴ ＨＤＦ于３７℃孵育     

噻唑蓝比色法与~3H─TdR释放法检测人LAK细胞活性的比较

噻唑蓝比色法与３Ｈ┐ＴｄＲ释放法检测人ＬＡＫ细胞活性的比较秦北宁沈丽英（第四军医大学西京医院呼吸内科西安７１００３３）关键词噻唑蓝比色法３Ｈ－ＴｄＲ释放法ＬＡＫ细胞活性中图号Ｒ４４６．０１噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法是一种检测细胞生长和存活情况的新方法，其...     

干扰素生物活性两种测定方法的比较研究

目的：摸索改进的结晶紫染色法与噻唑蓝（MTT）比色法中哪一种方法能够提高干扰素的生物学活性测定（细胞病变抑制法）结果的准确性。方法：比较在干扰素的生物学活性测定后期,采用先结晶紫染色乙醇脱色然后比色的方法（方法一）和采用加入MTT后裂解比色的方法（方法二）,经过多次比较证明哪一种方法测定结果的准确性更高。结果：采用方法二测得的多次结果之间产生的偏差较小,单次结果的可信度较高,单次测定结果的相关系数r值较大。结论：采用MTT比色法比改进的结晶紫染色法更适合应用于干扰素的生物学活性测定,可提高结果的准确性。     

MTT法和LDH法检测T—AK细胞活性的研究

采用ＭＴＴ比色分析法和ＬＤＨ释放法检测了ＣＤ３单克隆抗体和白细胞介素－２共同激活的Ｔ－ＡＫ细胞的杀伤活生，并对检测方法进行了改良。     

改良的MTT比色法测定NK细胞杀伤活性

目的：为提高ＭＴＴ比色法检测自然杀伤（ＮＫ）细胞活性的稳定性。方法：用改良的ＭＴＴ比色法对ＮＫ细胞的杀伤活性进行了测定,同时与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法相比较。结果：改良的ＭＴＴ法在保留了简单、敏感,可重复及安全等特性的同时,其稳定性大大提高。相关性研究表明,改良的ＭＴＴ法与３Ｈ－ＴｄＲ掺入法具有高度的相关性（γ＞０９４）。结论：改良的ＭＴＴ比色法在免疫学、肿瘤学及临床研究方面极具实用价值,便于推广应用     

维生素E,普罗布考对溶血卵磷脂引起的脑微血管细胞损伤和增殖的…

目的：研究维生素Ｅ（ＶＥ）、普罗布考（ＰＲＢ）对溶血卵磷脂（ＬＰＣ）引起的脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）损伤的保护作用和脑微血管平滑肌细胞（ＢＣＭＳＭＣ）增殖的抑制作用。方法：以乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放及结晶紫染色法分别测定ＢＣＭＥＣ损伤和ＢＣＭＳＭＣ的增殖。结果：ＶＥ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３６．８±１．０）％～（１６．２±２．９）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（３７．６±７．０）％～（６１．３±０．６）％。ＰＲＢ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３４．２±３．３）％～（１９．１±２．４）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（４０．９±２．４）％～（４７．０±３．７）％。结论：ＶＥ和ＰＲＢ对ＬＰＣ引起的ＢＣＭＥＣ损伤有保护作用，对ＢＣＭＳＭＣ增殖有抑制作用。     

黄芪对小鼠免疫功能的影响

目的：观察黄芪对小鼠免疫功能的影响。方法：通过灌胃给药，建立免疫抑制模型，测定黄芪对三种细胞因子的影响。ＮＫ细胞活性用ＬＤＨ－释放法、ＴＮＦ－α用双抗体夹心法、ＩＬ－２用ＭＴＴ比色分析法测定。结果：黄芪可明显提高ＮＫ细胞活性、ＴＮＦ－α和ＩＬ－２水平。结论：黄芪对免疫功能有正向调节作用。     

茶多酚对原代培养的大鼠皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长的影响

目的　探讨茶多酚对原代培养的皮肤角朊细胞和成纤维细胞生长作用的影响。方法　利用原代培养的两种主要的皮肤细胞———角朊细胞和成纤维细胞,采用丙酮酸比色法、ＴＢＡ比色法和ＤＴＮＢ（双硫代对硝基苯甲酸）法测定细胞培养的上清液胞浆酶（ＬＤＨ）释放情况、脂质过氧化产物（ＭＤＡ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨＰｘ）,并测定培养细胞的生长情况,对茶多酚在皮肤中可能起到的作用进行评价。结果　在加入茶多酚后不同时间,发现茶多酚具有保护细胞膜的功能,即减少ＬＤＨ的释放、减少ＭＤＡ产生、增加ＧＳＨＰｘ含量、促进细胞生长。结论　体外实验表明茶多酚具有促进皮肤细胞生长、抗脂质过氧化的功效,其最低有效作用浓度为０．０５％～０．１％。     

胸水腺苷脱氨酶、溶菌酶、乳酸脱氢酶检测的临床意义

目的：探讨胸腔积液患者胸液中的腺苷脱氨酶（ＡＤＡ）、溶菌酶（ＬＺＭ）、乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）活性检测的临床意义及在胸水性质鉴别中的价值。方法：ＡＤＡ、ＬＺＭ、ＬＤＨ 的检测分别采用Ｇｉｕｓｔｉ比色法、微菌腺脂法、酶偶联法。结果：结核性胸液中ＡＤＡ、ＬＺＭ、ＬＤＨ 均明显高于界值；癌性胸液中ＡＤＡ、ＬＺＭ 低于界值而ＬＤＨ 高于界值。结论：ＡＤＡ、ＬＺＭ 活性的检测对鉴别良恶性胸液是两项重要指标     

测定TGF—β1生物活性^3H—TdR细胞生长抑制法和MTT法比较研究

目的：探讨检测转化生长因子－β１（ＴＧＦ－１）灵敏可靠的方法。方法；用水貂肺上皮细胞（ＣＣＬ－６４）作为抑制细胞，分别采用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法和ＭＴＴ法。对照ＴＧＦ－β１标准含量，计算出细胞生长抑制剂，比较两法灵敏性和稳定性。结果：ＣＣＬ－６４细胞生长抑制与ＴＧＦ－β１是负相关；回归系数假设检验两种检验方法有显著差异；＾３Ｈ－ＴｄＲ法误差率比ＭＴＴ法小。结论：＾３Ｈ－ＴｄＲ法测定ＴＧＦ－β１活性较     

人参总皂甙对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤的保护作用

目的：观察人参总皂甙（GS）对乳酸盐腹膜透析液（L－PDS）在体外所致的人类腹膜间皮细胞（HPMC）活力和增殖抑制的影响。方法：采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型;用乳酸脱氢酶（LDH）的释放和四甲基偶氮唑盐比色法（MTT法）评估细胞的活性及增殖能力。结果：2．5％和4．25％葡萄糖L－PDS组与对照组相比HPMC的LDH释放增多,且两浓度差异无显著性;随L－PDS暴露时间的延长,HPMC的存活率逐渐降低;GS可以减少LDH的释放,提高细胞存活率（P＜0．01）,并能促进HPMC的增殖（P＜0．05）。结论：GS对L－PDS体外所致HPMC活力和细胞增殖的抑制具有一定的保护作用。     

缺氧预适应诱导人脐静脉内皮细胞释放的微囊泡对正常H9c2细胞的作用

目的:分离提取缺氧预适应（HPC）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）分泌的微囊泡(MVs),探讨HPC-EMVs对正常H9c2心肌细胞的作用和其Caspase 3、Bcl-2和Bax表达的影响。方法:采用HPC方法诱导HUVECs释放MVs,将其和正常培养的大鼠H9c2心肌细胞孵育,通过MTT法检测细胞存活率和比色法测定细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)活性; 通过Hoechst 33258染色观察细胞核的形态变化;比色法测定培养液中Caspase 3活性以及Western blot法检测H9c2细胞中Bcl-2和Bax的表达。结果:HPC模型构建过程中,与缺氧/复氧(H/R)组相比,HPC组细胞存活率显著升高（P<0.01）,即成功构建HUVECs 的HPC模型;HPC-EMVs处理H9c2细胞结果发现,与对照组H9c2细胞相比,HPC-EMVs 30、60 μg/mL组细胞存活率显著降低（P<0.001）,且LDH活性和Caspase 3活性显著升高（P<0.01或P<0.001）,凋亡细胞量增加, Bcl-2/Bax比值显著降低（P<0.001） 。结论:成功采用HPC的方法诱导HUVECs释放MVs,HPC-EMVs通过影响正常H9c2细胞Caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白的表达发挥促凋亡作用。     

人参总皂甙对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤的保护作用

目的 :观察人参总皂甙 (GS)对乳酸盐腹膜透析液 (L -PDS)在体外所致的人类腹膜间皮细胞 (HPMC)活力和增殖抑制的影响。方法 :采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型 ;用乳酸脱氢酶 (LDH)的释放和四甲基偶氮唑盐比色法 (MTT法 )评估细胞的活性及增殖能力。结果 :2 .5 %和 4.2 5 %葡萄糖L-PDS组与对照组相比HPMC的LDH释放增多 ,且两浓度差异无显著性 ;随L -PDS暴露时间的延长 ,HPMC的存活率逐渐降低 ;GS可以减少LDH的释放 ,提高细胞存活率 (P <0 .0 1) ,并能促进HPMC的增殖 (P <0 .0 5 )。结论 :GS对L-PDS体外所致HPMC活力和细胞增殖的抑制具有一定的保护作用。     

纤维蛋白原降解产物对大鼠主动脉血管细胞的作用及蛋白激酶C抑制剂的影响

目的：研究蛋白激酶C（PKC）抑制剂对纤维蛋白原降解产物（FFDP）引起的大鼠主动脉血管内皮细胞（RAEC）损伤的保护作用和平滑肌细胞（RASMC）增殖的抑制作用。方法：RAEC损伤以乳酸脱氢酶释放测定,RASMC增殖以结晶紫染色法测定。结果：FFDP能促进RAEC释放乳酸脱氢酶,诱导RASMC增殖;PKC抑制剂槲皮素、Ro 31-8220剂量依赖性地抑制FFDP对RAEC的损伤,并抑制FFDP诱导的RASMC增殖。结论：PKC抑制剂对FFDP引起的RAEC有保护作用,对RASMC增殖有抑制作用。     

莪术油通过诱导细胞凋亡抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖

目的探讨莪术油对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖的抑制作用。方法水蒸汽蒸馏法提取莪术油。不同浓度的莪术油处理MDA-MB-231细胞,MTT检测干预后细胞生长抑制率,LDH试剂盒检测LDH释放,Hoechst33342荧光染色测定细胞凋亡,Western Blotting测定抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax的表达。结果莪术油可剂量依赖性的抑制MDA-MB-231细胞的增殖;增加细胞内LDH在细胞培养基的释放。Hoechst 33342染色显示莪术油诱导细胞凋亡,Western Blotting显示莪术油处理降低Bcl-2蛋白表达,增加Bax蛋白表达。结论莪术油通过调节Bcl-2、Bax蛋白的表达诱导细胞株凋亡抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞株的增殖。     

蘑菇多糖对小鼠腹腔巨噬细胞作用的体外研究

目的 观察蘑菇多糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫调节作用及对体外培养的肿瘤细胞作用的影响。方法 采用比色法测定经蘑菇多糖处理的巨噬细胞内LDH的活性。MTT法观察蘑菇多糖与巨噬细胞的共同培养上清对HL-60细胞及K562细胞的抑制率。结果 （1）蘑菇多糖明显激活小鼠腹腔巨噬细胞的共同培养上清对HL-60细胞及K562细胞的抑制率。结果 （1）蘑菇多糖明显激活小鼠腹腔巨噬细胞，显著提高巨噬细胞的LDH活性；（2）蘑菇多糖作用下的巨噬细胞上清液可显著抑制HL-60细胞及K562细胞的增殖。结论 蘑菇多糖的抗肿瘤作用可能是通过激活小鼠腹腔巨噬细胞的活性实现的。     

MTT分析法、空斑减数法及CPE观察法评估药物体外抗病毒效果的比较与分析

目的:比较MTT分析法、空斑减数试验及细胞病变效应(CPE)观察3种方法在评估药物体外抗病毒效果分析中的优劣,为选择适宜的药物体外抗病毒效果的检测方法提供实验依据。方法:分别采用 CPE法、MTT分析法和空斑减数试验法评价大黄素于体外抗疱疹病毒 1 型、疱疹病毒 2 型和柯萨奇病毒增殖的效果,比较 3 种检测方法的结果,并分析该方法的实用性与利弊。结果:在抗疱疹病毒增殖的检测中,MTT法与空斑减数法所测结果具有显著性差异,空斑减数法比MTT法更准确,但对抗柯萨奇病毒增殖的检测,MTT法与空斑减数法无明显差异。结论:MTT法与 CPE法结合,可广泛用于对抗病毒药物的筛选,但对于疱疹病毒类非杀细胞病毒,使用空斑减数法较好。     

携带Lipocalin 2的溶瘤腺病毒抑制胰腺癌生长的实验研究

 目的 构建携带人Lipocalin 2基因且删除E1B55基因的溶瘤腺病毒,研究其体外对胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法 利用RT-PCR技术获得Lipocalin 2基因并克隆至pCA13质粒, 构建pCA13-lipocalin 2。用Bgl II从pCA13-lipocalin 2酶切出包含CMV启动子及Lipocalin 2的表达框, 将该表达框亚克隆入质粒pZD55, 获得pZD55-lipocalin 2。将pZD55-lipocalin 2与pBHGE3共转染293细胞,重组产生携带Lipocalin 2的溶瘤腺病毒ZD55-lipocalin 2。经PCR和Western blot鉴定正确后,体外采用结晶紫染色和MTT法,观察其对胰腺癌细胞生长的抑制作用。结果 ZD55-lipocalin 2能在PANC-1细胞中增殖复制并表达Lipocalin 2蛋白,结晶紫染色和MTT法观察到该溶瘤腺病毒能明显抑制PANC-1细胞生长。结论 成功构建了携带人Lipocalin 2的溶瘤腺病毒,其能明显抑制胰腺癌细胞生长,为胰腺癌治疗提供新策略。