汉防己甲素诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡的机制研究

目的:研究汉防己甲素(Tet)诱导人肝癌SMMC7721细胞凋亡的机制。方法:以4、6、8、10 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后,MTT法测定细胞活力并计算抑制率。6 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;线粒体膜电位(JC-1)染色工作液染色,荧光显微镜下观察细胞JC-1情况;酶标仪测定半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)活性;Western blot法测定胞浆细胞色素C(Cyto-C)、Caspase-3原酶(Pro-caspase-3)蛋白表达。试验均设空白对照(常规培养基或培养0 h)。结果:4、6、8、10 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后对细胞生长有明显抑制作用,且呈时间、剂量依赖关系。与空白对照比较,6 mg/L Tet培养细胞24、48、72 h后细胞凋亡率升高,细胞JC-1降低,且呈时间依赖关系;6 mg/L Tet培养细胞24、48 h后Caspase-3活性增强;6 mg/L Tet培养细胞24 h后Cyto-C蛋白表达增强,Pro-caspase-3蛋白表达减弱,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 :Tet可诱导SMMC7721细胞凋亡,其机制可能与线粒体凋亡途径的激活有关。     

汉防己甲素滴眼液在兔眼内的药动学

目的:研究汉防己甲素滴眼液(TET)在兔角膜和房水中的药动学。方法:将TET滴入大耳白兔双眼后,分别于不同时间处死家兔,取其房水和角膜组织用高效液相色谱法(HPLC)测定。采用计算机拟合求得药动学参数。结果:TET在角膜组织及房水中均为一室模型,其中角膜组织中于滴药后0.125h时含量最高为(234.9±21.3)μg.g-1,房水中1.5h时的含量最高为(90.3±8.0)μg.L-1。角膜组织中药物质量浓度半衰期为2.2h,房水中为1.0h。结论:汉防己甲素滴眼后能渗透到角膜组织及房水中,为临床应用提供了依据。     

中药防己中汉防己甲素的高效液相色谱法定量分析

本文采用高效液相色谱法测定中药防己中汉防己甲素的含量，此法准确，灵敏，重现性好，可作为该生药质量检测方法之一。     

汉防己甲素的临床应用进展

汉防己甲素具有消炎、镇痛、降压、抗矽肺、降低血糖和抗自由基损伤等多种药理作用,且在心血管、抗肝纤维化和抗肿瘤等方面具有良好的应用前景.本文综述汉防己甲素在免疫系统、心血管系统和消化系统等多种疾病治疗中的临床应用.     

汉防己甲素的安全性

麻醉家兔急性实验表明,iv 汉防己甲素(Tet)10mg/kg 能显著降低血压并减慢其心率,ECG 有短暂的变化,家兔无中毒死亡,而iv 汉防己甲素15mg/kg 后,血压立即急剧下降,心率明显减慢,ECG 出现异常变化,5—10min 内,家兔出现惊厥,心脏停搏、呼吸停止而死亡(死亡率88.9%)。结果表明一次静脉注射汉防已甲素对麻醉家兔降压的有效量(10mg/kg)与中毒致死量(15mg/kg)之间的范围较窄(有效量约为中毒致死量的66%),提示本品静脉注射给药的安全性值得再评价。小鼠静脉注射汉防已甲素的LD_(50)为37.5±3.6mg/kg。     

汉防己甲素的临床应用概述

本文简单对汉防己甲素近年来良好的临床应用前景方面作一综述.     

汉防己甲素的遗传毒性评价

中药汉防己甲素(Tetrandrine,Tet)是从防己科植物根内提出的一种生物碱,属于双苄基异喹啉类化合物,药理作用广泛,在心血管、抗炎、抗风湿、抗纤维化和抗癌等方面具有良好的应用前景,我国的70年代后期,开始用于矽肺的治疗[1-2],但是对Tet的遗传毒性研究尚不全面,国内外报道较少,相关文献资料提出     

汉防己甲素纯化工艺的优化

目的:优化汉防己甲素的纯化工艺,选取最优纯化方法,制备高纯度的汉防己甲素。方法:采用大孔吸附树脂和硅胶柱层析分离,再使用陶瓷膜超滤脱色,最后重结晶的方法,以汉防己甲素的收率和纯度为指标,对汉防己甲素的纯化工艺进行优化。结果:汉防己甲素的最佳纯化工艺如下：粉防己药材乙醇回流提取的粗粉,经XR982C型大孔吸附树脂吸附,90%乙醇洗脱,然后硅胶层析,二氯甲烷：乙酸乙酯：三乙胺(90∶20∶0.1)体系洗脱,再经过孔径5 nm的氧化铝无机陶瓷膜超滤,最后使用乙醇过饱和溶液重结晶,得到高纯度的汉防己甲素,含量大于99.5%,达到注射用原料要求,可用于注射剂的制备。结论:本纯化工艺稳定、可行,设备要求简单,摒弃大量有毒溶媒的使用,具备很大的工业化生产潜力。     

汉防己甲素的致突变性及其致癌性的预测

汉防己甲素是从植物中提取的生物碱tetrandrine(简称汉甲素),英文化学名为dimethylberbaman,CAS为518-34-3,作为药物广泛用于治疗高血压、咽峡炎、肿瘤、阿米巴痢疾,七十年代后期在我国始用于治疗矽肺。因此对该化合物的致突变性和致癌性的研究显得十分重要。本文根据有关汉甲素致突变性研究资料,利用“致癌性预测和选择试验组合的方法”(CPBS     

汉防己甲素治疗尘肺病的临床疗效观察

目的：探讨汉防己甲素治疗尘肺病的临床疗效。方法：收集我院2012年11月～2013年11月收治的100例尘肺病患者资料进行回顾性分析,采用随机法分为治疗组和对照组各50例。治疗组患者给予行呼吸功能训练和服用汉防己甲素治疗,对照组患者给予服用矽肺宁治疗,对比两组治疗前后咳嗽、胸痛、气紧症状改善情况的临床症状积分下降比例及疗效。结果：治疗组患者临床症状积分下降比例为70.49％,对照组患者临床症状积分下降比例为50.81％,两组比较差异显著（P＜0.05）;治疗后两组疗效对比,治疗组（94.0％）明显优于对照组（74.0％）（P＜0.05）,差异具有统计学意义。结论：采用汉防己甲素治疗尘肺病,可以有效缓解患者的临床症状,增强呼吸功能,降低肺部感染发生率,控制尘肺病的发展。     

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的：板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐经细胞株BEL－7404／ADM耐药逆转作用主机制研究。方法：MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用;免疫组化法检测细胞P－糖蛋白（P－gp)和多药耐药相关蛋白（MRP）的表达;采用高效液相色谱法（HPLC）测定细胞内ADM的浓度。结果：耐药肝癌细胞株BEL－7404／ADM对多种化疗药物产生多药耐药性,耐药细胞P－gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞（P＜0．01）;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL－7404／ADM对ADM的耐药性;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论：肝癌细胞株BEL－7404／ADM对多种化疗药物具有多药耐药性,其多药耐药性与P－gp和MRP过量表达有关;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL－7404／ADM对ADM的耐药性,其逆转作用可能与降低P－gp药物外排功能、增加细胞内药物浓度有关。     

黄芩苷逆转人肝癌细胞耐药株Bel-7402/ADM多药耐药性的相关机制研究

目的 考察黄芩苷对人肝癌耐药细胞Bel-7402/ADM 多药耐药性的逆转机制.方法 MTT法考察Baicalin对人肝癌多药耐药细胞的逆转作用.结果 Baicalin逆转Bel-7402/ADM多药耐药性的机制可能与抑制MDR1部分基因产物P-gp、MRP、GSH/GST的表达和诱导细胞凋亡有关.结论 Baicalin可能通过抑制MDR1部分基因产物P-gp、MRP、GSH/GST的表达和诱导细胞凋亡逆转Bel-7402/ADM的多药耐药性.     

阿霉素纳米粒对白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用

目的:研究阿霉素纳米粒对人白血病多药耐药细胞株K562/ADR耐药性的逆转作用.方法:采用MTT法测定药物的体外杀伤作用,应用流式细胞术测定细胞内药物浓度.结果:阿霉素纳米粒和阿霉素对K562细胞细胞毒作用相似,K562/ADR对阿霉素纳米粒较阿霉素敏感2.63倍,细胞内阿霉素浓度显著增加可能是关键因素.结论:阿霉素纳米粒通过增加耐药细胞内阿霉素浓度有效逆转多药耐药.     

吉西他滨对人胰腺癌细胞系BxPC-3的放射增敏作用

目的 探讨吉西他滨对人胰腺癌细胞系BxPC-3的细胞毒性、放射增敏作用.方法 用MTT法测定吉西他滨对BxPC-3细胞生长的作用,集落形成法观察其对BxPC-3细胞的放射增敏作用,流式细胞术分析吉西他滨作用后细胞周期及凋亡变化,免疫细胞化学染色观察Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 占西他滨对BxPC-3细胞具有浓度依赖性抑制作用(IC50-106 μg/ml),选择浓度为IC10(0.04μg/ml),可增加X射线对BxPC-3的杀伤作用,放射增敏比SER为1.15.药物浓度为0.04μg/ml时S期细胞比例增高.吉西他滨作用24 h后,细胞Bax表达增加,而Bcl-2表达下降.结论 吉西他滨对人胰腺癌BxPC-3细胞系有细胞毒性作用和一定的放射增敏作用;其机制可能与吉西他滨引起S期阻滞和调节凋亡相关基因的表达有关.     

洛美利嗪对人白血病细胞K562/ADM多药耐药的逆转作用

目的：研究洛美利嗪(lomerizine，Lom)对人白血病细胞K562／ADM多药耐药逆转作用及机制。方法：使用MTT法检测Lom对K562／ADM多药耐药细胞柔红霉素(DNR)细胞毒性的影响，使用荧光分光光度计和流式细胞术分析Lom对K562／ADM多药耐药细胞胞内P—糖蛋白(P—glycoprotein，P—gp)底物—罗丹明123(rhodamine 123，Rh123)的累积情况。结果：Lom能明显提高DNR对K562／ADM多药耐药细胞的细胞毒作用，并可使胞内Rh123的浓度增加。K562敏感细胞株则不受影响。结论：Lom能显地抑制：K562／ADM多药耐药细胞上P—gp的活性，提高P—gp底物的胞内浓度，并增强其他抗癌药的细胞毒作用。     

Anicequol抑制HepG2细胞自噬的抗肿瘤作用研究

目的 探讨从海洋真菌Penicillium dipodomyicola分离的anicequol抑制肝肿瘤细胞株HepG2增殖与自噬的关系。方法 HepG2分别用 0、2.5、5或10μmol·L?1 的anicequol处理,CCK-8法检测对HepG2的增殖作用,透射电镜观察对自噬囊泡的影响,Western blot检测对LC3II/I表达的影响,mRFP-GFP-LC3腺病毒转染观察对自噬流的影响,吖啶橙(AO)染色检测对溶酶体膜通透性的影响,。结果 Anicequol显著抑制HepG2细胞增殖,透射电镜观察到典型的自噬囊泡,mRFP-GFP-LC3腺病毒转染显示绿色荧光蛋白和红色荧光蛋白同步呈现荧光点状聚集,表明anicequol阻断HepG2的自噬流(P < 0.05)。AO染色表明anicequol引起HepG2溶酶体膜通透性增加,溶酶体膜的完整性被破坏(P < 0.05)。结论 Anicequol可通过调控肿瘤细胞自噬过程,阻断自噬流抑制HepG2细胞增殖。     

Hiwi基因在肝癌组织中的表达

目的 研究Hiwi基因mRNA及Hiwi蛋白在肝癌组织中的表达.方法 92例肝癌及癌旁组织标本,应用RT-PCR、Western blot及免疫组化方法分别检测肝癌和癌旁组织中Hiwi基因mRNA及蛋白的表达.结果 肝癌组织Hiwi基因mRNA和Hiwi蛋白表达量显著高于癌旁组织(P＜0.05).Hiwi蛋白主要在肿瘤和癌旁组织细胞胞浆中呈阳性表达.肝癌组织中Hiwi阳性表达率为65.2%(60/92),显著高于癌旁组织的27.2%(25/92)(P＜0.05).结论 Hiwi基因mRNA及蛋白在肝癌组织中均呈高表达,可能在肝癌的发生、发展过程中起重要作用.     

多西他赛体外抗肝癌作用及对细胞内氧化还原状态的影响

目的：研究多西他赛（docetaxel）体外抗肝癌作用及其与氧化还原状态的关系。方法：用不同浓度的多西他赛处理肝癌细胞株（SMMC-7721细胞），用集落形成试验检测多西他赛对SMMC-7721细胞生长抑制作用，通过流式细胞术测定多西他赛对SMMC-7721细胞株细胞周期及凋亡的影响。用DCF／DA作为活性氧（reactive oxygen species，ROS）捕获剂检测用药后细胞内ROS产生。用试剂盒测定细胞谷胱甘肽（glutathione。GSH）水平。结果：多西他赛能抑制SMMC-7721细胞增殖，并呈浓度依赖性；诱导SMMC-7721细胞凋亡和G2／M期阻滞；导致SMMC-7721细胞内ROS产生增多和GSH降低。结论：多西他赛能通过诱导细胞凋亡和G2／M期阻滞而抑制SMMC-7721细胞增殖，用药后细胞内ROS产生增多和GSH降低可能在多西他赛体外抑制SMMC-7721细胞增殖和促进细胞凋亡中起重要作用。     

拉米夫定联合肝动脉化疗对乙肝后肝癌病人的临床治疗观察

目的：观察21例经肝动脉化疗联合拉米夫定治疗的乙型肝炎病毒（HBV）相关性肝癌病人肝功能变化。方法：对经肝动脉化疗的HBV相关性肝癌病人,根据是否口服拉米夫定分为两组,治疗组：12例经肝动脉化疗和口服拉米夫定治疗,对照组：9例仅经肝动脉化疗,未口服拉米夫定治疗。结果：治疗组HBV—DNA水平明显降低,拉米夫定没有引发YMDD及核心启动子区突变。虽然治疗组ALT、TSB、PT前后没有改变,但是对照组的ALT、TSB却出现升高、肼延长。结论：拉米夫定治疗可降低HBV—DNA水平,并能防治乙型肝炎病毒阳性的肝癌病人在化疗过程中肝损害的加重。