环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Fas表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Fas表达的影响。方法加不同浓度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖,50μmol·L~(-1)塞来昔布作用于A549细胞48 h,RT-PCR方法检测各组细胞的Fas基因表达水平,Western blot方法检测各组细胞的Fas蛋白表达。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性;各组细胞培养48h后,相比于对照组,塞来昔布组Fas mR NA和蛋白在A549细胞的表达水平显著升高(P0.01)。结论 T塞来昔布抑制A549细胞增殖可能与上调Fas的表达相关。     

环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨环氧合酶-2抑制剂对非小细胞肺癌A549细胞Bcl-2和Bax表达的影响。方法加不同浓-1度塞来昔布与A549肺癌细胞共培养,MTT法检测细胞增殖,50μmol·L塞来昔布作用于A549细胞48 h,实时定量PCR方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax基因表达水平,Western blot方法检测各组细胞的Bcl-2和Bax蛋白表达。结果塞来昔布在体外对细胞株A549的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性;各组细胞培养48h后,相比于对照组,塞来昔布组细胞Bcl-2 m RNA和蛋白表达显著下调,Bax m RNA和蛋白表达显著上调,Bcl-2/Bax比值显著降低(<0.01)。结论塞来昔布可能通过调节Bcl-2和Bax的表达抑制A549细胞增殖。     

塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞株CD44v6表达水平的影响

目的 研究塞来昔布(COX-2选择性抑制剂)对鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力的影响及可能机制.方法 噻唑蓝(MTT)法检测塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖活性的影响.不同浓度塞来昔布作用鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h后,通过重组人工基膜实验检测细胞侵袭力的改变;RT-PCR检测鼻咽癌细胞CD44v6 mRNA的表达情况;用Western blot和免疫细胞化学检测鼻咽癌细胞CD44v6蛋白表达变化.结果 MTT法结果显示,塞来昔布对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖有明显抑制作用,呈剂量依赖性关系(P<0.01).塞来昔布作用细胞24 h后,肿瘤细胞的侵袭力明显下降(P<0.05).RT-PCR结果显示,塞来昔布可以明显抑制CD44v6 mRNA的表达水平(P<0.01).Western blot和免疫组化结果显示,随着药物浓度的增加,CD44v6蛋白表达水平逐渐减少(P<0.01).结论 塞来昔布可能通过下调CD44v6表达而降低鼻咽癌CNE-2Z细胞侵袭能力.     

塞来昔布减低HL-60和HL-60A细胞活力、诱导凋亡及抑制自噬

目的:探讨塞来昔布对急性髓细胞白血病(AML)HL-60细胞和HL-60A细胞的活力、凋亡及自噬的影响。方法:用不同浓度的(0、20、40、60、80和100μmol/L)塞来昔布作用于HL-60细胞和HL-60A细胞,24h、48h和72h后用MTT法检测细胞活力。用流式细胞术检测塞来昔布作用HL-60细胞和HL-60A细胞24 h后的凋亡率。用Western blot法检测凋亡相关蛋白cleaved caspase-3、cleaved PARP,自噬相关蛋白LC3、P62,以及mTOR信号途径相关蛋白。结果:塞来昔布作用于HL-60细胞24h、48h和72h的IC_(50)分别为49.4μmol/L、32.0μmol/L和25.1μmol/L,对于HL-60A细胞,相应的IC_(50)分别是69.1μmol/L、42.5μmol/L和29.6μmol/L。塞来昔布作用24h后,流式细胞术检测显示HL-60细胞中Annexin-V~+PI~-、Annexin-V~+PI~+及Annexin-V~-PI~+细胞的比例增多;HL-60A细胞中Annexin-V~+PI~-及Annexin-V~+PI~+细胞的比例增多。Western blot实验结果显示塞来昔布作用后,cleaved caspase-3和cleaved PARP的蛋白水平增高,提示该凋亡作用是通过caspase途径的。自噬相关蛋白LC3Ⅱ及P62的表达均增加,mTOR、p-mTOR以及下游的4-EBP、p-4-EBP的蛋白水平没有变化,说明塞来昔布能够抑制AML细胞自噬,该作用与mTOR途径无关。结论:塞来昔布对HL-60细胞和HL-60A细胞活力的抑制作用呈浓度以及时间依赖性,该作用与塞来昔布诱导细胞凋亡及坏死有关。塞来昔布能够通过非mTOR依赖途径抑制AML细胞自噬,有望联合应用于AML的治疗,有助于增强某些引起保护性自噬的化疗药物的细胞毒作用。     

Survivin在塞来昔布诱导非小细胞肺癌细胞株凋亡中的作用

目的观察survivin在塞来昔布诱导非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株凋亡中的作用。方法用MTT法检测细胞株的增殖,用流式细胞学、透射电镜检测细胞株的凋亡,用RT-PCR、W estern b lot检测survivin的mRNA及蛋白表达。结果①塞来昔布对NSCLC有明显的剂量依赖性和时间依赖性抑制作用,塞来昔布对鳞癌细胞株NC I-H520的抑制率明显高于对腺癌细胞株A549的抑制率;②塞来昔布诱导NSCLC凋亡,凋亡随剂量的增加而增加;③塞来昔布作用后survivin的mRNA及蛋白表达减少。结论塞来昔布可能是通过降低survivin的mRNA及蛋白表达水平,诱导NSCLC细胞凋亡。     

白介素1β上调肺腺癌细胞系A549 VEGF的表达

目的 探讨IL-1β调节肺腺癌细胞A549血管内皮生长因子(VEGF)表达的机制.方法 用不同浓度的IL-1β作用于A549细胞不同时间,再用不同浓度的塞来昔布干预IL-1β诱导的A549细胞,用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定VEGF mRNA表达,用ELISA法测定培养上清液中VEGF蛋白质表达.结果 IL-1β干预A549细胞后VEGF mRNA和蛋白质表达均较对照组显著增加,呈剂量依赖性(P＜0.05),24 h时达高峰.不同浓度的塞来昔布显著缓解上述变化(P＜0.05).结论 缓解Il-1β诱导的A549细胞VEGF表达,其调节机制可能发生在转录水平.     

下调TCF3抑制非小细胞肺癌细胞的增殖和迁移能力

目的:探索下调T细胞因子3(TCF3)抑制非小细胞肺癌细胞增殖和迁移的分子机制。方法:运用Lipofectamine 2000转染法将siTCF3和阴性对照siRNA(NCsiRNA)转染非小细胞肺癌A549和H1299细胞;运用real-time PCR和Western blot分别测定TCF3的mRNA和蛋白水平;运用萤光素酶报告基因实验测定TCF3的转录活性;MTT、克隆形成实验、Transwell实验和Annexin V-FITC/PI染色联合流式细胞术分别测定细胞的活力、克隆形成能力、转移能力及细胞凋亡率;Western blot检测Wnt、c-Myc、基质金属蛋白酶(MMP)-9、MMP-13、金属蛋白酶组织抑制物(TIMP)-1的蛋白表达水平。结果:与NCsiRNA转染组的细胞比较,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞中TCF3的mRNA和蛋白水平(P0.01)。TCF3转录活性和c-Myc蛋白表达水平明显低于NCsiRNA细胞(P0.05)。MTT实验结果显示,培养24 h、48 h、72 h和96 h的A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞活力均显著低于NCsiRNA细胞(P0.05)。与NCsiRNA细胞相比,siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的克隆形成能力(P0.01)。Transwell实验结果显示A549-siTCF3和H1299-siTCF3细胞迁移数显著低于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA组细胞(P0.05)。流式细胞术分析结果显示A549-siTCF3细胞和H1299-siTCF3细胞的凋亡率显著高于A549-NCsiRNA和H1299-NCsiRNA细胞(P0.01)。Western blot实验结果显示,下调TCF3表达能抑制Wnt蛋白的表达,MMP-9和MMP-13的蛋白表达明显降低,TIMP-1的蛋白表达增高。结论:siTCF3显著抑制A549细胞和H1299细胞的增殖和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其分子机制可能通过下调Wnt通路活性以及调控MMP家族关键成员的表达而实现。     

miR-206及Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌中的表达及意义

目的探讨mi R-206及Bcl-2蛋白在非小细胞肺癌(NSCLC)的表达,以及抑制或过表达mi R-206对Bcl-2蛋白表达的影响。方法实时定量PCR方法检测NSCLC组织mi R-206的表达水平,Western blot方法检测NSCLC组织Bcl-2蛋白表达;将mi R-206 inhibitors及mi R-206 mimics转染至A549细胞,通过CCK-8法测定A549细胞增殖能力的变化,Western blot方法检测转染后Bcl-2蛋白表达变化。结果 mi R-206在非小细胞肺癌组织中的表达量较癌旁组织明显降低(0.01),Bcl-2蛋白在癌组织中较癌旁组织表达明显增高(0.05);转染mi R-206 inhibitor的细胞增殖能力与对照组相比显著升高,细胞内Bcl-2蛋白水平亦明显升高(0.05),转染mi R-206 mimics的细胞增殖能力与对照组相比显著降低,细胞内Bcl-2蛋白水平亦明显降低(0.05)。结论mi R-206在NSCLC组织中低表达,mi R-206抑制能够促进A549细胞增殖和Bcl-2蛋白表达。     

戊地昔布通过上调ROS诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡

目的探讨活性氧(reactive oxygen species,ROS)在选择性环氧化酶(cyclooxygenase,COX)-2抑制剂戊地昔布诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡中的作用。方法噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;流式细胞术和Hoechst33258检测细胞凋亡;激光共聚焦显微镜观察细胞ROS和线粒体膜电位;Western blot检测蛋白表达。结果 1)戊地昔布可诱导细胞凋亡(P0.01),抑制细胞增殖(P0.05或P0.01)。2)给予戊地昔布后,caspase-3表达先升高,然后降解为cleaved caspase-3,Bcl-2的表达降低,Bax的表达增高,caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO和caspase抑制剂ZVAD-FMK可拮抗戊地昔布的抗肿瘤作用(P0.05或P0.01)。3)戊地昔布可降低线粒体膜电位,明显提高细胞内的ROS水平。抗氧化剂N-乙酰基半胱氨酸(N-Acetyl-L-cystein,NAC)可拮抗戊地昔布的抗肿瘤作用(P0.01)。结论戊地昔布可通过升高细胞内ROS诱导MCF-7细胞凋亡。     

塞来昔布促进Jurkat细胞对表柔比星的化疗敏感性

目的研究塞来昔布对T细胞淋巴瘤Jurkat细胞株化疗敏感性的影响,并探讨其作用机制。方法 MTT法检测表柔比星联合塞来昔布对Jurkat细胞增殖活性的影响,并计算IC_(50)值;流式细胞术检测表柔比星联合塞来昔布对Jurkat细胞凋亡水平的影响;Western blot检测塞来昔布对Jurkat细胞株表达P-gp、MRP1、LRP及TopoⅡ蛋白水平的影响;构建Jurkat细胞株裸鼠移植瘤模型,分为模型对照组、单独塞来昔布组、单独表柔比星组及塞来昔布表柔比星组,治疗后引颈处死裸鼠,剥离瘤组织,检测其质量、体积、瘤组织细胞凋亡率,同时检测瘤组织表达MDR1、MRP1、LRP及TopoⅡ的水平。结果表柔比星联合塞来昔布对T细胞淋巴瘤细胞株Jurkat增殖活性具有明显抑制作用,同时表柔比星的IC_(50)值明显减低(P0.05),Jurkat细胞的凋亡水平也较对照组明显增加(P0.01);与塞来昔布共培养的Jurkat细胞表达TopoⅡ蛋白的水平明显增加,而表达MDR1、MRP1、LRP蛋白的水平均明显下降(P0.05);联合塞来昔布可明显增强表柔比星对Jurkat瘤组织的抑制作用,并可明显下调瘤组织MDR1、MRP1、LRP的表达水平,上调TopoⅡ的表达水平。结论塞来昔布可通过调控耐药相关基因的表达而增强Jurkat细胞化疗敏感性,因此提示该药在T细胞淋巴瘤的临床治疗中具有广泛前景。     

Clear cell basal cell carcinoma

We describe a case of clear cell basal cell carcinoma of the superficial type, presenting as a crusted eruption on the abdomen. Histological examination showed a solid proliferation of clear cells attached to the under-surface of an atrophied epidermis. In addition, distinct pagetoid infiltration was seen within the overlying epidermis. A focal connection between the clear cell portion and a deeper lying nodular basal cell carcinoma was demonstrated, elucidating the true nature of the lesion. Immunohistochemical studies and electronmicroscopy confirmed the epithelial derivation of the tumour. The clear cell appearance was due to multiple cytoplasmic electronlucent vacuoles which were not surrounded by membranes.     

具有透明细胞乳头状肾细胞癌形态特征的透明细胞性肾细胞癌的临床病理特征

目的探讨具有透明细胞乳头状肾细胞癌形态特征的透明细胞性肾细胞癌(clear cell papillary renal cell carcinoma-like clear cell renal carcinoma, CCPRCC-like CCRCC)的临床和病理特征, 旨在提高对该类肿瘤的认识。方法回顾性分析浙江大学医学院附属第一医院诊断的3例CCPRCC-like CCRCC的临床资料、组织学形态及免疫表型, 随访患者预后并复习相关文献。结果男性2例, 女性1例, 平均年龄43岁。肿块最大径9 cm。镜下观察3例病例均包含透明细胞乳头状肾细胞癌样(CCPRCC-like)及透明细胞性肾细胞癌样(CCRCC-like)两种区域, 前者在整个瘤体所占比例为20%～90%。CCPRCC-like区域含有囊、乳头、腺管状结构。细胞核远离基底膜, 细胞核WHO/国际泌尿病理协会(ISUP)分级1级。在CCPRCC-like区域, 细胞角蛋白(CK)7表达范围10%～80%, 中等及以上强度表达。CD10表达均为100%, 主要为顶端胞膜表达。在CCRCC-like区域, 1例CK7阴性, 其余...     

Absolute dependence of T cell receptorhi cell generation and relative dependence of T cell receptorint cell generation on the thymus

Recent evidence indicates that conventional T cells are generated by the mainstream of T cell differentiation in the thymus and acquire a high density of T cell receptor expression (i.e. TCR^hi). In contrast, primordial T cells (or NK1.1⁺ T cells) are generated by the extrathymic pathways or an alternative intrathymic pathway and express an intermediate density of TCR (i.e. TCR^int). To obtain further evidence, it was examined how thymus grafting influenced the distribution of T cell populations in athymic nude mice. When BALB/c nu/nu mice were engrafted with thymocyte-depleted BALB/c+/+ fetal thymi, two changes emerged after grafting: nude mice generated TCR^hi cells de novo in the periphery as well as in the grafted thymi, and the absolute number of interleukin-2 receptor β chain⁺ TCR^int cells increased prominently in number in the periphery. Among thymic hormones tested, the administration of thymosin α induced a slight expansion of CD3^int cells in nude mice. To examine a possible interaction of TCR^int cells with TCR^hi cells in the periphery, B6 nu/nu mice (Ly5.2⁺) were injected with TCR^hi cells purified from the spleen of B6 Ly5.1 congenic mice. In this case, TCR^int (Ly5.2⁺) cells expanded well in all tested organs of nude mice. These results suggest that the generation of TCR^hi cells is absolutely dependent on the thymus and that TCR^int cells expand under the influence of the thymus (humoral) and due to interaction with thymus-derived conventional T cells.     

梭形细胞间变性大细胞淋巴瘤

1.病例简介:患者男,40岁.2个月前自觉右腹股沟区疼痛,行走时加剧,于2009年6月在外院行B超检查发现腹股沟区多枚淋巴结肿大,直径约4.0～5.0 cm,胰周、腹主动脉及髂血管旁多发低回声实性结节,最大直径为4.5 cm;行CT检查,提示腹膜后、肝门部多发肿大淋巴结.血常规检查:白细胞、中性粒细胞升高,淋巴细胞减少.2009年7月23日手术切除右腹股沟淋巴结.原单位病理诊断:考虑为指状突树突状细胞肿瘤.因多家医院诊断结果存在分歧,遂来我院会诊,详细询问病史,患者既往无其他脏器肿瘤病史.     

树突状细胞对调节性T细胞的调控作用

树突状细胞(DCs)是目前已知的体内功能最强大的专职性抗原提呈细胞,具有启动免疫应答和诱导免疫耐受的双重特性.近年来树突状细胞对调节性T细胞的调控作用是免疫学领域的一个研究热点.Foxp3+ Tregs是一群同时具有免疫低反应性和免疫抑制性功能两大特征的T淋巴细胞,它在维持机体内环境稳定、预防自身免疫性疾病、抑制移植排斥反应等病理生理过程中发挥着重要作用.越来越多的研究结果证实DCs和Tregs二者在维持外周免疫耐受中存在着紧密联系,DCs可以诱导抗原特异性Tregs的生成并增加后者的抑制活性,其中参与该调节机制的分子主要包括相关细胞因子、Toll样受体、共刺激分子及维甲酸等.对DCs在接触共生和致病微生物时诱导和调控Tregs细胞有了一些新发现.     

Galectins: versatile modulators of cell adhesion, cell proliferation, and cell death

 Lectins, or carbohydrate binding proteins, recognize specific oligosaccharide structures on glycoproteins and glycolipids. Several families of animal lectins have been identified; for some of these lectins, functions such as leukocyte adhesion and microbial opsonization have been described. The galectins are a family of lectins found in species ranging from sponges and nematodes to humans. Members of the galectin family have been proposed to mediate cell adhesion, to regulate cell growth, and to trigger or inhibit apoptosis. The expression pattern of different galectins changes during development, and this pattern is also altered at sites of inflammation and in breast, colon, prostate, and thyroid carcinomas. In addition, the level of expression of some galectins by tumor cells has been shown to be correlated with metastatic potential. The mechanisms by which galectins exert these diverse effects remain largely unknown. Some glycoprotein counterreceptors recognized by certain galectins have been identified; this is an important first step in understanding the cell-type specific effects of different galectins. This review discusses the way in which the modulation of galectin activity may affect strategies for treatment of a variety of human diseases, including autoimmunity and cancer. Received: 4 April 1997 / Accepted: 24 September 1997