垂体生长激素腺瘤靶向性基因治疗系统的构建及实验研究

目的构建并评价垂体生长激素腺瘤靶向性基因治疗系统.方法构建GE7系统介导的生长激素启动子调控的基因治疗系统,通过垂体生长激素腺瘤GH3细胞及对照细胞的体外基因转染实验,观察此基因治疗系统对GH3细胞的转染能力和靶向性.结果成功构建基因治疗系统,基因转染后GH3细胞特异性表达报告基因,对照的HO8910PM和U-2OS细胞报告基因的表达不明显.结论应用GE7转染的生长激素启动子调控的基因治疗系统能靶向性地将目的基因转入垂体生长激素腺瘤细胞.     

垂体腺瘤双重靶向性基因治疗的实验研究

本研究选择GE7基因导入系统，与人生长激素启动子(human growth hormone promoter，hGHp)调控的单纯疱疹病毒-胸苷激酶(herpes simplex virus thymidine kinase，HSV-TK)基因组成基因治疗系统，实验观察对垂体腺瘤细胞的治疗作用。     

垂体腺瘤的受体靶向性基因治疗研究

目的构建并评价受体靶向性基因导入系统对垂体腺瘤的靶向性治疗作用.方法构建GE7系统介导的基因治疗系统,通过垂体腺瘤GH3细胞及对照细胞的体外基因转染实验,观察其对垂体腺瘤的转染能力和靶向性.结果成功构建GE7基因治疗系统;基因转染后,GH3细胞特异性表达报告基因,并被治疗基因特异性杀伤.结论GE7基因治疗系统能够达到靶向性治疗垂体腺瘤的目的.     

垂体生长激素腺瘤的治疗进展

垂体生长激素腺瘤是最常见的垂体肿瘤之一,近年来在治疗上有了很大进步。此文从手术、药物、放疗、基因治疗方面对目前垂体生长激素腺瘤的治疗进展进行了详细介绍。掌握这些新的治疗方法有助于提高垂体生长激素腺瘤的治疗水平。     

垂体生长激素腺瘤伽玛刀治疗的预后及相关因素分析

目的评估立体定向伽玛刀对垂体生长激素腺瘤的治疗效果,并分析预后的相关影响因素。方法回顾性分析垂体生长激素腺瘤应用伽玛刀治疗病例90例,统计分析治疗效果及其与服用生长抑素类药物、边缘剂量、术前生长激素（GH）水平、肿瘤体积大小之间的关系。结果所有病例平均随访51．5个月,生长激素水平恢复正常者46例,治愈率51．1％;生长激素〈5．0μg/L者78例,有效控制率86．7％;84例患者肿瘤缩小明显,有效控制率为93．3％;13例（14．4％）出现垂体功能低下。结论伽玛刀是一种治疗垂体生长激素腺瘤的有效方法;服用生长抑素类药物、术前GH水平、边缘剂量是预后的明显影响因素;肿瘤体积与疗效没有显著的相关性。     

慢病毒介导的shRNA沉默PTTG基因表达对人生长激素型垂体腺瘤细胞生长的影响

目的观察慢病毒介导shRNA沉默PTTG基因表达对人生长激素型垂体腺瘤细胞生长的影响。方法原代培养人生长激素型垂体腺瘤细胞,分为正常对照组、阴性对照组和实验组。实验组构建PTTG-shRNA的慢病毒表达载体并转染肿瘤细胞,阴性对照组转染空慢病毒载体,正常对照组细胞不转染。流式细胞仪分析细胞转染效率,RT-PCR和Western blot检测肿瘤细胞PTTG mRNA和蛋白的表达水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果与正常对照组和阴性对照组比较,实验组细胞转染PTTG-shRNA慢病毒载体后,PTTG mRNA和蛋白表达显著下降(均P<0.01),细胞生长显著变慢(均P<0.05),G0/G1期细胞比例显著增高(均P<0.05),凋亡率明显增加(均P<0.05)。结论慢病毒介导shRNA沉默PTTG基因表达可显著抑制人生长激素型垂体腺瘤细胞的生长,为进一步研究垂体腺瘤的发病机制和肿瘤的基因治疗提供实验基础。     

稳定表达荧光素酶裸鼠垂体腺瘤移植瘤模型的建立

目的 建立稳定表达荧光素酶的裸鼠垂体腺瘤移植瘤模型,并通过活体生物发光成像系统实时观察移植瘤的生长特点.方法 经G418药物选择性对转染细胞进行筛选,获得稳定表达荧光素酶的GH3-1uc和MMQ-1uc细胞系.将两株细胞系分别皮下接种于BALB/c裸鼠,建立BALB/c裸鼠移植瘤模型,利用活体生物发光成像系统观察肿瘤的成瘤和生长情况.结果 本组成功构建稳定表达荧光素酶的裸鼠GH3 - 1uc和MMQ-1uc移植瘤模型.体表直尺测量显示:移植瘤在接种MMQ-1uc和GH3-1uc细胞后10d内生长均较缓慢,15～30d肿瘤体积迅速增长,且MMQ-1uc移植瘤较GH3-1uc移植瘤生长快.活体生物发光成像系统荧光测量显示:接种GH3-1uc细胞移植瘤20 d时的荧光强度明显高于10d的荧光强度.活体生物发光成像系统荧光测量与取瘤直尺测量的肿瘤体积变化趋于一致,而体表直尺测量的肿瘤体积偏小.结论 稳定表达荧光素酶的裸鼠垂体腺瘤移植瘤模型的成功建立,不仅可用于活体生物发光成像系统实时观察肿瘤的成瘤及生长情况,而且为垂体腺瘤的研究及药物开发提供了方便、有效的平台.     

肿瘤的血管形成与侵袭性垂体腺瘤的研究进展

垂体腺瘤为良性肿瘤,但部分肿瘤仍存在侵袭性生长的趋势。垂体腺瘤的微血管密度(MvD)较正常垂体组织中低,但新生血管的形成与肿瘤的发生、侵袭性生长密切相关。垂体腺瘤转化基因(PTTG)的高表达,以及雌激素、泌乳素、生长激素、促血管生成因子(VEGF、bFGF)的刺激,促使肿瘤新生血管形成,并向周围侵袭性生长。在此研究基础上,提出了垂体腺瘤的基因治疗、抗血管生成治疗的理论依据及其目前的研究状况。     

梗死性垂体腺瘤卒中的临床分析

目的总结梗死性垂体腺瘤卒中的临床特点。方法回顾性分析9例缺血梗死性垂体腺瘤卒中的病例资料。8例有较典型的临床卒中症状。术前存在高生长激素血症6例,伴全垂体功能低下2例。CT或MRI增强扫描示肿瘤周边不均匀环形强化8例,鞍底下陷7例。术中见肿瘤血供差7例,明显干酪样或豆腐渣样组织5例,瘤内少量陈旧性出血2例。结果组织病理均见大片凝固性坏死,生长激素型腺瘤4例,生长激素+卵泡刺激素型腺瘤2例,催乳素型腺瘤1例,无功能型腺瘤2例。术后临床症状均不同程度改善,随访4个月以上,未见明显肿瘤残留或复发。结论梗死性垂体腺瘤卒中临床少见,常有较典型临床卒中症状,MRI表现具有特征性,生长激素型腺瘤具有好发倾向,经蝶入路手术治疗效果满意。     

FasL基因治疗移植于裸鼠的人脑胶质母细胞瘤的实验研究

目的 :探讨FasL基因在体内诱导胶质瘤细胞凋亡和抑制增殖的作用。方法 :在裸鼠皮下种植Fas表达阳性的人脑胶质母细胞瘤细胞系TJ90 5 ,成瘤后 ,利用脂质体介导FasL基因瘤内治疗 ,在 3 9d观察期间 ,用千分尺测量肿瘤生长 ,最终取出肿瘤 ,用原位杂交 ,免疫组化鉴定FasL基因和蛋白的表达 ,应用TUNEL法检测细胞凋亡 ,Ki 67免疫组化检测细胞增殖。结果 :FasL基因瘤内注射观察 3 9d后 ,治疗组瘤体积明显小于对照组 (P <0 0 1) ,肿瘤组织细胞内FasL基因表达增加 ,凋亡细胞数增多 ,细胞增殖率降低。结论 :FasL基因对Fas表达阳性胶质瘤有治疗作用。     

SEPT7基因抑制U251 MG裸鼠皮下荷瘤侵袭的体内实验研究

目的 探讨SEPT7 基因在体内抑制胶质瘤生长和侵袭的作用.方法 建立人脑胶质母细胞瘤U251细胞来源的裸鼠皮下胶质瘤模型,并给予SEPT7治疗,定期测量肿瘤体积变化,检测肿瘤组织中SEPT7以及侵袭相关蛋白MMP2、MMP9、MT1-MMP、TIMP1、TIMP2和整合素α_v β_3的表达.结果 SEPT7 显著抑制肿瘤生长.治疗组肿瘤体积明显小于对照组(P＜0.01).SEPT7 治疗组中,肿瘤组织细胞内SEPT7表达明显上调.MMP2,MMP9,MT1-MMP和整合素α_v β_3的表达下降,而TIMP1、TIMP2 的表达明显升高.结论 SEPT7基因对于胶质瘤的侵袭和生长具有抑制作用.     

HIF-1α和hTERT shRNA双基因抑制脑胶质瘤生长的实验研究

目的 研究靶向缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和人端粒酶逆转录酶(hTERT)的短发夹RNA(shRNA),对裸鼠皮下人脑胶质瘤中HIF-1α、hTERT基因表达的抑制作用,及其对肿瘤增殖和细胞凋亡的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤U251细胞;建立人脑胶质瘤裸鼠皮下接种模型;将HIF-1α shRNA、hTERT shRNA质粒转染入移植瘤中,观察肿瘤生长情况;HE染色法观察肿瘤组织的病理改变;Western blot检测HIF-1α、hTERT蛋白表达;Annexin V+PI双染流式细胞仪检测凋亡情况.结果 成功建立稳定的裸鼠U251皮下移植瘤模型;治疗5周后HIF-1α shRNA、hTERT shRNA组双基因干扰组肿瘤体积较单基因干扰组及对照组明显减小,抑瘤率为84.2%;病理结果显示双基因干扰组肿瘤生长受到抑制,微血管散在稀疏,大量肿瘤细胞坏死及凋亡;Western blot显示治疗组相应蛋白表达受抑制,双基因干扰组影响二者表达;流式细胞仪检测双基因干扰组肿瘤细胞凋亡率明显高于其他组(P＜0.01).结论 HIF-1α shRNA和hTERT shRNA均可在裸鼠移植瘤体内抑制相应蛋白表达及胶质瘤增殖生长,促进细胞凋亡,而双基因干扰作用更强.     

9L-rIL12-TK大鼠胶质瘤基因免疫疫苗的安全可控性体内实验研究

目的评估9L-rIL12-TK脑胶质瘤基因免疫活细胞疫苗在体内的安全可控性。方法将40只裸鼠随机分成3组,分别于右侧腋部皮下接种9L-rIL12-TK细胞（n=14）、9L-TK细胞（n=14）和9L细胞（n=12）,7d后将各组裸鼠分成两亚组,实验组（n=8,8,6）给予更昔洛韦（GCV）干预实验,对照组（均n=6）给予生理盐水注射,连续7d;观察裸鼠瘤体生长情况和生存时间,60d后取瘤结节及全身脏器行组织学检查（苏木精-伊红染色）。结果①给予GCV干预后7d,9L-rIL12-TK实验组及9L-TK实验组裸鼠瘤体平均体积较相应对照组及9L组显著性缩小（均P〈0.05）。60d时,8只9L-rIL12-TK实验组裸鼠瘤体均完全消退,且均无复发;8只9L-TK实验组裸鼠中,瘤体完全消退3只,瘤体缩小后再次增大5只;余亚组瘤体均呈增大趋势。②GCV干预后,9L-rIL12-TK实验组和9L-TK实验组与相应对照组比较,生存时间明显延长（P〈0.05）。③9L-rIL12-TK实验组和9L-TK实验组无瘤裸鼠接种部位无异型性肿瘤细胞,余裸鼠瘤体内均见异型性肿瘤细胞;所有裸鼠相关脏器病理学检查均未见肿瘤远处转移征象。结论9L-rIL12-TK大鼠胶质瘤细胞基因免疫疫苗在裸鼠体内可得到安全有效的控制,使制备免疫原性强且安全有效的胶质瘤基因免疫活细胞疫苗策略成为可能;其基因免疫治疗效应有待进一步研究。     

重组VEGF165-PE38融合基因对裸鼠移植性人胶质瘤血管生成的抑制作用

目的 研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)和铜绿假单胞菌外毒素A(PE)融合基因的真核表达载体对裸鼠移植性人脑恶性胶质瘤血管生成的影响,探索抗肿瘤血管生成的新方法.方法 采用裸鼠背部皮下注射U251细胞建立移植性恶性胶质瘤模型,9 d后按随机数字表法将裸鼠分为未治疗组、PBS组、空质粒组、重组质粒组,采用HE染色观察肿瘤组织的形态学变化.免疫组织化学SP法检测胶质纤维酸性蛋白(GFAF)、CD31、PE的表达.分析肿瘤组织的微血管密度(MVD). 结果 注射后第16天重组质粒组裸鼠移植瘤体积明显小于其他3组,差异有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠移植瘤MVD低于其他3组,差异均有统计学意义(P<0.05);重组质粒组裸鼠肿瘤组织PE呈阳性表达,而在空质粒组、PBS组及未治疗组均为阴性表达. 结论 VEGF165-PE38融合基因的表达产物对人脑恶性胶质瘤有明显的抑制作用,并能抑制肿瘤新生血管生成,可能为一种有效抗肿瘤血管治疗的新策略.     

反义miR-21抑制异种移植U87人脑胶质瘤生长的体内研究

目的 探讨敲低miR-21表达抑制裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤生长的疗效和机制.方法 原位注射miR-21反义寡聚核苷酸(AS-miR-21)治疗裸鼠皮下荷U87人脑胶质瘤.定时测量肿瘤大小评估原位注射AS-miR-21的治疗效果.使用RT-PCR和原位杂交方法 鉴定治疗后miR-21表达水平,采用HE染色和免疫组织化学染色(增殖细胞核抗原、细胞周期抑制因子-21、基质金属蛋白酶-9和隔蛋白-7)评价治疗后肿瘤生物学性状的变化,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡. 结果 肿瘤生长曲线显示AS-miR-21治疗组肿瘤生长速度及体积明显小于对照组与无义序列治疗组,差异有统计学意义(F=6.056,P=0.007);RT-PCR检测显示AS-miR-21治疗组miR-21表达下调为对照组的(0.031±0.008)%;原位杂交显示AS-miR-21治疗组miR-21表达水平较对照组与无义序列治疗组下调:组织病理学检测表明AS-miR-21治疗后肿瘤恶性度降低;TUNEL法检测可见AS-miR-21治疗组细胞凋亡数明显高于对照组与无义序列治疗组,差异有统计学意义(F=141.021,P=0.000). 结论 以miR-21作为靶点治疗异种移植U87人脑胶质瘤效果令人满意,miR-21可作为人脑胶质瘤基因治疗的侯选靶点.     

环氧化酶-2抑制剂对裸鼠胶质瘤移植瘤Ang基因表达的影响

目的 探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂尼米舒利(NIM)对裸鼠胶质瘤移植瘤血管生成素(Ang)基因表达的影响及意义.方法 人胶质瘤SHG44细胞接种于裸鼠皮下,建立裸鼠胶质瘤移植瘤模型,并按随机数字表法分为对照组(灌注等量生理盐水)和NIM治疗组[6 mg/(kg·d)],逆转录PCR技术检测移植瘤组织Ang-1、Ang-2mRNA表达,免疫组织化学染色测定肿瘤组织微血管密度(MVD),并绘制肿瘤生长曲线和计算肿瘤抑制率.结果 NIM可有效抑制移植瘤的生长,其抑瘤率为42.03%.NIM治疗组肿瘤组织Ang-2 mRNA表达水平(0.2032±0.0185)较对照组(0.6024±0.0289)明显降低,差异有统计学意义(P＜0.05);Ang-1 mRNA表达水平无明显改变,差异无统计学意义(P＞0.05);Ang-2/Ang-1 mRNA比值下降(0.5825±0.0621vs 1.5847±0.1948),差异有统计学意义(P＜0.05).NIM治疗组肿瘤组织MVD较对照组明显下降,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 COX-2抑制剂NIM可下调Ang-2基因表达,改变Ang-2/Ang-1 mRNA比值,抑制肿瘤生长.

Abstract：

Objective To investigate the effect of nimesulide (NIM), a selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor, on angiopoietins (Ang) gene expression of human glioma xenografts in nude mice and its significance. Methods Human SHG44 glioma cells were inoculated subcutaneously in 16 nude mice to establish xenograft models, and then these mouse models were randomly divided into NIM treatment group and control group. NIM (6 mg/kg) and saline were poured into the stomachs of the mice in each group, respectively, once daily for 35 d. The mRNA expressions of Ang-1 gene and Ang-2 gene in the xenografts were determined by RT-PCR. Microvessel density (MVD) in the xenografts was assessed by immunohistochemical technique. The tumor growth curve was drawn and the inhibition ratio of tumor growth was calculated. Results NIM could significantly inhibit the glioma xenografts growth with its inhibition rate reaching 42.03%. The mRNA expression of Ang-2 gene in NIM treatment group (0.2032±0.0185) was significantly lower than that in control group (0.6024±0.0289, P＜0.05), but that of Ang-1 gene showed no significant changes; therefore, the mRNA ratio of Ang-2/Ang-1 genes was decreased (0.5825±0.0621 vs. 1.5847±0.1948, P＜0.05). MVD in the xenografts of the NIM treatment group was significantly lower than that in the control group (P＜0.05). Conclusion NIM, by down-regulating the mRNA expression ofA ng-2 gene and changing the mRNA ratio of Ang-2/Ang-1 genes, can inhibit the tumor growth