肾移植供受者DNA水平人类白细胞抗原—DR配型的研究

探讨利用聚合酶链反应方法，进行人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ基因分型，并应用于肾移植临床的可行性，以准确选择理想配型的供受者，提高移植物长期存活率。方法作者应用分子生物学术技术根据，ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成了３０个特异引物，快速盐析法提取模板ＤＮＡ，用分子生物学技术根据ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成３０个特异引物，盐析法提取模板ＤＮＡ，借助ＰＣＲ技术建立ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对１７１例紧移植供     

不同的液体方法对痰液DNA提取的影响

为探讨不同固定液化方法对痰液中ＤＮＡ提取的影响，应用３种不同的痰液液化固定方法：即Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法，ＤＴＴ法；Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ法联合应用。对经３种方法处理的痰液分别提取ＤＮＡ，应用分光光度仪测量其波长为２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处光密度值（ＯＤ值），以ＯＤ２６０／ＤＤ２８０作为衡量ＤＮＡ纯度的指标。结果表明用Ｓａｃｌｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ活联合应用方法了液化的痰液中ＤＮＡ提取效果最     

不同液化方法对痰液DNA的影响(摘要)

为探讨不同固定液化方法对痰液中ＤＮＡ提取的影响，我们应用三种痰液固定液化方法即：Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法；ＤＴＴ法；Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ法联合应用。对三种方法处理的痰液分别提取ＤＮＡ，应用分光光度仪测量其波长为２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处光密度值（ＯＤ值），以ＯＤ２６０／ＯＤ２８０作为衡量ＤＮＡ纯度的指标。结果表明用Ｓａｃｃｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ法联合应用的方法固定和液化的痰液中ＤＮＡ提取效果最佳。这为痰液作为呼吸系统痰病分子诊断样本提供依据。不同液化方法对痰液DNA的影响(摘要)@吴小军@李清…     

不同的液化方法对痰液DNA提取的影响

为探讨不同固定液化方法对痰液中ＤＮＡ提取的影响,应用３种不同的痰液液化固定方法即：Ｓａｃｃｏｍａｎ ｎｏ法;ＤＴＴ法;Ｓａｃｏｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ法联合应用。对经３种方法处理的痰液分别提取ＤＮＡ,应用分光光度仪测量其波长为２６０ｎｍ和２８０ｎｍ处光密度值（ＯＤ值）,以ＯＤ２６０／ＤＤ２８０作为衡量ＤＮＡ纯度的指标。结果表明用Ｓａｃｌｏ ｍａｎｎｏ法和ＤＴＴ活联合应用方法固定和液化的痰液中ＤＮＡ提取效果最佳,这为痰液作为呼吸系统疾病分子诊断样本提供依据。     

鼠脾中DNA的提取及含量测定

从生物组织中提取ＤＮＡ，一般都是选用肝组织，但本文选用小鼠的脾脏，通过粉碎组织、裂解细胞膜与核膜，使核蛋白释放。然后用酚抽提，再经７．５ｍｏｌ／ｍ＾３乙酸钠－异丙醇混合液沉淀，得到白色絮状ＤＮＡ，通过Ｏ．Ｄ２６０ｎｍ／Ｏ．Ｄ２８０ｎｍ的比值以及琼脂糖凝胶电泳证实ＤＮＡ是纯的。紫外分光光度可测定ＤＮＡ含量。     

一种简便的哺乳动物细胞中基因组DNA提取方法

基因组ＤＮＡ提取实验是分子生物学教学中一个最基本的实验。为了能让学生,特别是研究生在短暂的课堂上掌握ＤＮＡ提取的全过程,并力求获得高质量的ＤＮＡ,我们摸索了一个适合课堂教学、简便快速的提取哺乳动物ＤＮＡ的方法。该方法是利用在ＥＤＴＡ及ＳＤＳ一类去污剂...     

3种保存血样方法对猪总DNA制备的影响

探索不同保存血样方法对猪全血中总ＤＮＡ制备的影响。方法采取全血４℃保存,沉淀白细胞加消化液室温保存和全血加ＳＤＳ－ＥＤＴＡＮａ２缓冲液室保存等３种方法保存血样,用常规方法制备总ＤＮＡ并对其效果进行评价。     

肾移植供受者DNA水平人类白细胞抗原－DR配型的研究

探讨利用聚合酶链反应方法（ＰＣＲ－ＳＳＰ），进行人类白细胞抗原（ＨＬＡ）－ＤＲ基因分型，并应用于肾移植临床的可行性，以准确选择理想配型的供受者，提高移植物长期存活率。方法作者应用分子生物学技术根据ＨＬＡ－ＤＲ核苷酸序列设计合成３０个特异引物，快速盐析法提取模板ＤＮＡ，借助ＰＣＲ技术建立ＰＣＲ－ＳＳＰ方法，对１７１例肾移植供受者和１４份标准ＤＮＡ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因水平分型。扩增条件为９４℃、３０秒、６０℃、５０秒，７２℃、４０秒，共３４个循环。分型结果采用标准ＤＮＡ，限制性内切酶分析和特异性探针杂交等予以确证。结果所有１７１份样本和１４份标准ＤＮＡ采用ＰＣＲ－ＳＳＰ进行ＨＬＡ－ＤＲ基因分型均获成功。特异性扩增产物与引物设计预期大小相同，无假阳性和假阴性，总耗时５小时。分型结果经标准ＤＮＡ、内切酶分析和探针杂交等证实符合，特异性和重复性为１００％。结论ＰＣＲ－ＳＳＰ用于ＨＬＡ－ＤＲ基因分型是一种快速而精确的方法，适合于器官移植，尤其是尸肾移植供受者配型选择的临床应用。     

两种提取血细胞DNA方法的比较

目的：为了配合高原人类基因研究，我们建立了两种提取脱氧核糖酸（ＤＮＡ）的方法；方法：一是由全血分离白细胞后提取ＤＮＡ，另一种是低渗法直接提ＤＮＡ；结果与结论：两种方法其紫外吸收光谱曲线、琼脂糖凝胶电泳检查表明，ＤＮＡ的提取均无降解和破坏，并无任何ＲＮＡ污染；Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交实验表明，这两种方法提取的ＤＮＡ可用于分子遗传学和分子生物学的研究。     

应用PCR技术进行常染色体显性遗传多囊肾病家系的基因诊断

目的：用ＰＣＲ方法对中国的常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤ）家系进行基因诊断。方法：提取基因组ＤＮＡ，用ＰＣＲ方法扩增与ＰＫＤ１位点连锁的高度多态性的微小卫星体ＤＮＡ（ＳＭ７，ＡＣ２．５，ＳＭ６，ＫＧ８）为遗传标记，进行家系分析。对２２个ＡＤＰＫＤ家系的１５６个成员（包括６８个患者）找出染色体上与疾病连锁的单体型，进行了连锁分析。结果：２１个被测家系提供了基因诊断信息；另一个家系显示重组或不连锁。结论：能够采用ＰＣＲ方法对中国的ＡＤＰＫＤ家系进行基因诊断。     

快速高效提取白色念珠菌DNA

目的建立两种简便的白色念珠菌ＤＮＡ提取方法，即纯ＤＮＡ提取法和快速ＤＮＡ提取法。方法以原生质体提取法为基础进行改良，两种方法均用Ｌｙｔｉｃａｓｅ破壁。结果与结论纯ＮＤＡ提取法提取ＤＮＡ耗时６～７ｈ，产量较高，每１０~（１０）个菌细胞可提取４μｇＤＮＡ，且纯度高，ＯＤ_（２６０）ＯＤ_（２８０）＞１．７，对核酸限制性内切酶敏感，适用于各种分子生物学方面的研究。快速ＤＮＡ提取法全过程仅需３～４ｈ，每１０~（１０）个菌细胞提取１μｇＤＮＡ，ＯＤ_（２６０）：ＯＤ_（２８０）＝１．４，不能进行核酸限制性内切酶酶切，但可用于作ＰＣＲ扩增。     

CR3的Ⅰ结构域的克隆和在CHO细胞中的表达及配体结合特性的研究

研究白细胞整体合素ＣＲ３α亚基的Ⅰ结构域在配体结合中的作用。方法克隆ＣＤ１１ｂ的Ⅰ结构域，用重叠ＰＣＲ的方法将其与信号肽ＤＮＡ连接，克隆到表达载体ＰＥＥ６ＨＣＭＶ．ＧＳ，转化ＣＨＯ－Ｋ１细胞。表达的Ⅰ－结构域经ＳＰ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ和ｍｏｎｏ－Ｓ柱纯化后，与Ｃ３ｂｉ进行配体结构实验。结果用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测得重组的Ⅰ结构域分子量为２９ＫＤ。重组的Ⅰ结构域可以与Ｃ３ｂｉ结合，Ｓｃａｔｃｈａｒｄ分析     

人脑源性神经营养因子cDNA克隆及在酵母中的表达

目的：克隆和表达人脑源性神经营养因子（ｈＢＤＮＦ）。方法和结果：从原代培养人雪旺细胞中提取总ＲＮＡ，用ＲＴ－ＰＣＲ法获取了编码带前导肽的和成熟的ｈＢＤＮＦ２个ｃＤＮＡ片段，经ＤＮＡ测序表明其顺序与文献报道一致。将这２个ｃＤＮＡ片段分别插入到大肠－酵母穿梭质粒ｐＶＴ１０２Ｕ／α上。用酵母整体细胞法将重组质粒转化酵母宿主细胞，经筛选后，获得分泌性表达。表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳鉴定，大小都在１５０     

兔血浆α_2－巨球蛋白的分离纯化

本研究从家兔血浆中分离纯化了α＿２－巨球蛋白。首先用利凡诺法从血浆中提取出α＿２巨球蛋白粗制品，然后上ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ＿（４００）凝胶柱过滤后，用琼脂糖凝胶电泳即可得到电泳纯的。α＿２巨球蛋白。结合胰蛋白酶活力测定结果表明，α＿２－巨球蛋白活性峰与ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ＿（４００）凝胶过滤的第一洗脱峰完全重合；ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示出一条单一条带；家兔α＿２－巨球蛋白的亚基分子量经测定为１７８．９４ＫＤ，与人的α＿２－巨球蛋白亚基分子量１８０ＫＤ基本相同。说明用这种方法提取纯化α＿２－巨球蛋白是一种切实可行的方法。     

一种SOD定量测定方法的建立

目的：建立ＳＯＤ定量测定方法。方法：从牛血中提取纯化ＳＯＤ，用纯化ＳＯＤ免疫家兔制备高效价的抗体。用１２５Ⅰ标记ＳＯＤ，建立测定ＳＯＤ的放射免疫分析法。结果：纯化得到电泳纯的ＳＯＤ，免疫后抗血清效价为１∶３２。结论：建立了可直接测定ＳＯＤ含量的ＲＩＡ法，为ＳＯＤ的测定及深入研究提供了新方法     

一种SOD定量测定方法的校正

目的；研究ＳＯＤ定量测定方法。方法：从牛血中提取纯化ＳＯＤ，用纯化ＳＯＤ免疫家兔制备高效价的抗体，用＾１２５Ｉ标记ＳＯＤ，建立测定ＳＯＤ的放射免疫分析法。结果：纯化得到电泳纯的ＳＯＤ，免疫后抗血清效价为１：３２。结论：建立了可直接测定ＳＯＤ含量的ＲＩＡ法，为ＳＯＤ的测定及深入研究提供了新方法。     

Kearns—Sayre综合征与线粒体DNA缺失的关系

目的：研究ＫＳＳ与线粒体ＤＮＡ缺失之间的关系。方法：提取患者骨骼肌标本中的总体ＤＮＡ，用ＰｖｕⅡ酶解的进行琼脂糖电泳分离，Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转移后用经放射性标记的线粒体ＤＮＡ（ｍｔＤＮＡ）作探针进行杂交和放射自显影。     

一种快速提取DNA的方法

一种快速提取ＤＮＡ的方法临床生化教研室郝顺祖随着分子生物学研究的迅猛发展，提取ＤＮＡ已成为一项常规实验。用经典方法提取ＤＮＡ［１］，即用蛋白酶Ｋ消化，酚：氯仿抽提，耗时较多，提取液需多次转移，易引起污染和ＤＭＡ丢失。采用快速法抽提［２］，利用硅藻与核...     

Rett综合征患儿一例多种组织的线粒体DNA突变分析

目的：探讨线粒体ＤＮＡ在Ｒｅｔｔ综合征发病中的作用。方法：利用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交、聚合酶链式反应（ＰＣＲ）－单链构象多态性（ＳＳＣＰ）分析及ＤＮＡ直接测序等方法，对一例Ｒｅｔｔ综合征患儿的外周血白细胞、死后的脑、骨骼肌组织及其母亲外周血白细胞的线粒体ＤＮＡ的部分片段进行分析。结果：患儿３种组织及其母亲外周血白细胞的线粒体ＤＮＡ上编码１６Ｓ ｒＲＮＡ的２６５０￣３０００区域的ＤＮＡ存在突变，进一步     

PRC技术鉴定毛发,陈旧血痕的性别

本文作者用ＰＣＲ技术对３例保存３年半的血痕及新鲜毛发标本进行性别鉴定，其方法是从陈旧血痕及新鲜毛发标本中提取ＤＮＡ，用蛋白酶Ｋ进行消化，然后用两组引起Ｙ１．１与Ｙ１．２和Ａｕｌ９．１、Ａｕｌ９．２及国产ＦＤ耐热ＤＮＡ聚合酶进行聚合酶链反应扩增ＤＮＡ，电泳分析Ｙ及Ａｕｌ重复序列，从而判断血痕及毛发性别。