瘦素对小鼠着床前胚胎发育影响的体外研究

目的　探讨瘦素在体外对小鼠着床前胚胎发育的影响。方法　 1收集小鼠 2 -细胞胚胎 ,在不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎发育情况 ,并进行胚胎移植 ,观察着床率 ;2收集小鼠 2 -细胞胚胎在空白 CZB培养液中体外培养至桑葚胚期 ,再分别置入不同剂量瘦素的 CZB培养液中进行体外培养 ,观察胚胎进一步发育情况。结果　瘦素能提高 2 -细胞胚胎体外发育的质量、发育率和胚胎着床率。当瘦素剂量为 10 ng/ ml时平均胚胎形态学评分 (AES)为 16 .0 8± 0 .37,剂量为 5 0 ng/ ml时 AES为 17.5 7± 0 .4 2 ,两者间差别有统计学意义(P<0 .0 5 )。但剂量进一步增加 ,促进作用不再递增。瘦素对桑葚胚体外进一步发育无显著影响。结论　瘦素参与了小鼠着床前胚胎的发育 ,能提高胚胎发育质量、发育率 ,有利于胚胎的进一步着床。     

体外受精治疗周期中四细胞前胚胎的核状态预测着床能力

目的：评估单胚移植（SET）中常规筛查第2天四细胞前胚胎核状态预测着床能力的价值。设计：回顾性分析。机构：私人体外受精（IVF）中心。患者：2002年1月至2004年11月间第2天或第3天胚胎移植前的新鲜受精卵1985例，其中1295例（65．2％）为SET。根据着床率、可见单核卵裂球（MNBs）数目、断裂程度及卵裂球均匀程度回顾性分析所有SET周期（n=861）第2天移植前的四细胞前胚胎。干预：光镜下评估第2天胚胎移植前的前胚胎状况。主要观察指标：着床率。结果：MNBs数目与着床率相关，但与卵裂球均匀程度及胚胎断裂率无关。具有4个MNBs的四细胞前胚胎其着床率显著高于具有0～3个MNBs的四细胞前胚胎（42％vs22％）。logistic回归分析提示卵裂球的成核现象是与着床率相关的唯一形态学参数。结论：评估四细胞前胚胎的核状态是预测着床能力的重要因素。具有4个MNBs的四细胞前胚胎其着床率显著高于无4个MNBs的四细胞前胚胎。     

细胞粘附分子与不孕症

细胞粘附分子(Cell adhesion molecule，CAMs)是一类介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质(extra cellular matrix，ECM)间粘附作用的膜表面糖蛋白，参与细胞的增殖、分化、粘附、迁移等过程，从而在免疫、炎症反应、创伤修复、肿瘤生长、浸润、转移、受精、胚胎着床及生长发育等许多生理、病理过程中发挥重要作用。     

Trophinin在人卵母细胞及着床前胚胎细胞上的表达与意义

目的 研究trophinin在人卵母细胞、着床前胚胎细胞上的表达与意义.方法 采用间接免疫荧光技术、应用激光扫描共聚焦显微镜对9个卵母细胞、16个分裂胚胎及12个囊胚进行了荧光检测.结果 trophinin蛋白在人卵母细胞、分裂胚胎以及囊胚上均有表达,且表达逐渐显著增强(P＜0.05).结论 人囊胚可能通过trophinin与表达有相同粘附分子的着床窗期子宫内膜发生同种粘附,从而在人胚胎着床过程中起重要作用.     

一种简便有效的小鼠子宫内膜细胞原代培养方法

由于小鼠子宫内膜细胞尚未成功建系。所以其原代培养为建立理想的小鼠胚胎着床体外模型奠定基础。本实验采用子宫内膜上皮细胞和基质细胞共同培养,通过改进方法,克服污染．提高了子宫内膜细胞的成活率。     

瘦素及其受体系统在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达

目的:探讨瘦素(leptin)及其受体(Ob-Rb)在小鼠胚泡着床过程中子宫内膜的表达规律,以明确其在胚泡着床过程中的可能作用.方法:采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR),检测小鼠胚泡着床过程中子宫内膜leptin及其受体(Ob-Rb)的表达.结果:leptin在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异不明显(P＞0.05);Ob-Rb在胚泡着床过程中在小鼠子宫内膜也都有表达,各时期的表达水平差异(P＜0.01),且在孕期第4天表达水平最高,在5到7天仍然维持在一定水平.结论:瘦素及其受体(Ob-Rb)可能在胚泡着床过程中发挥作用,同时也可能参与着床后胚胎的生长发育.     

体外受精-胚胎移植中胚胎形态与发育潜能的关系

①目的探讨不同形态胚胎的发育潜能。②方法对222对夫妇242个周期的胚胎着床率进行了分析。③结果4～5细胞胚胎着床率为10．34％，6～7胚胎着床率为15．84％，8细胞胚胎着床率为34．95％，≥9细胞胚胎着床率为11．11％。8细胞胚胎着床率高于其他细胞组。无碎片胚胎着床率为33．89％，碎片〈20％胚胎着床率为17．81％，碎片〈50％胚胎着床率为11．11％。无碎片胚胎着床率高于其他组。④结论胚胎中卵裂球数目及胚胎内碎片对着床率有明显的影响。胚胎形态可作为评估胚胎发育潜能的参数。     

人绒毛外细胞滋养层细胞与蜕膜基质细胞共培养模型的建立

目的模拟体内环境,建立可保持绒毛外细胞滋养层细胞(EVCT)与蜕膜基质细胞(DSC)生物学特性的共培养细胞模型,应用于研究滋养细胞的侵袭行为。方法利用胰酶消化和BSA、Percoll梯度沉降,收集纯化人早孕绒毛组织的EVCT和DSC,分别放入Transwell的上下小室,观察该模型下细胞形态变化及侵袭特性,免疫组化、免疫荧光染色检测细胞的纯度。结果免疫组化显示EVCT的细胞角蛋白7阳性表达的细胞数占95%以上,阳性表达转化生长因子β2的细胞数占95%以上,DSC泌乳素阳性表达的细胞数也超过95%,证实共培养系统中EVCT和DSC纯度均在95%以上,且生物学特性得以维持。上室中的EVCT保持了其侵袭能力,在Matrigel包被的滤膜上EVCT的侵袭指数为3.22±0.04。结论适当的培养方法可获得高纯度的EVCT和DSC,并使其维持特有的生物学活性,成功地建立了共培养系统模型,便于研究滋养细胞侵袭和胚胎着床的机制。     

妇产科概论：解剖、生理和组胚学

060327两种玻璃化液冻存小鼠桑椹胚的研究，060328TRAIL在小鼠胚胎着床过程中子宫内膜的表达，060329重组着床丝氨酸蛋白酶-2在昆虫细胞中的表达，060330孕二烯酮对大鼠卵巢颗粒细胞分泌甾体激素及芳香化酶的作用，060331自然周期冷冻胚胎解冻移植临床分析。[编者按]     

胚胎着床及其分子调控研究进展

胚胎着床是哺乳动物特有的生殖生理现象,涉及到胚胎和母体卵巢、子宫之间复杂的相互作用和分子信号联系。各种动物在胚胎着床的方式及分子调控机制上各有不同,目前已发现包括由胚胎和子宫内膜分泌合成的多种生殖激素、生长因子、细胞黏附分子和细胞外基质等物质参与了胚胎着床的分子调控过程。本文综述近年来在人类及相关动物胚胎着床的研究进展,并重点阐述在胚胎着床中存在于胚胎滋养层表面与母体子宫内膜上皮表面作用的相关信号联系及分子调控机制,以期对提高妊娠率、防止胎儿早期流产以及开发简便高效的临床避孕措施的研究提供理论依据和借鉴。     

高血糖对卵母细胞和早期胚胎细胞凋亡的影响

妊娠糖尿病妇女流产、畸胎等并发症与高糖环境下卵母细胞、早期胚胎细胞凋亡密切相关。高血糖能通过死亡受体途径诱发卵母细胞凋亡,细胞间缝隙连接蛋白Connexin-43表达减少与颗粒细胞凋亡密切相关;高血糖还能通过线粒体途径诱导早期胚胎细胞凋亡,Bax、Bcl-2、p53等基因的调控在其中扮演重要角色。葡萄糖转运子表达减少是着床前胚胎细胞凋亡的始发因素,而氧化应激则与着床后早期胚胎细胞凋亡机制相关联。     

瘦素在着床前小鼠胚胎中的表达及其对胚胎发育的影响

目的 探讨瘦素(leptin)在围着床期小鼠胚胎中的表达规律和分布情况以及leptin抗体对小鼠胚胎体外发育的影响.方法 雌性NIH小鼠超排后与雄鼠交配,分别在妊~4 d上午从输卵管或子宫角冲取相应时期的胚胎,用于以下实验:①分别提取总RNA,检测胚胎中leptin mRNA表达情况.②采用免疫荧光技术,观察leptin蛋白在囊胚的表达和分布情况.③将8-细胞小鼠胚胎培养于含不同浓度leptin抗体的培养液中,观察囊胚形成及脱透明带的情况.结果 leptin mRNA仅在囊胚期特异性表达,其余各时期胚胎未见表达;leptin蛋白在囊胚的滋养层细胞和内细胞团的细胞质和细胞膜呈阳性表达,而在细胞核无表达.一定浓度的leptin抗体可明显降低囊胚的形成率(1∶400, P<0.05) 和脱带率(1∶1 600, P<0.05),且随着抗体浓度的增加,这种抑制作用更明显.结论 leptin能促进着床前胚胎发育,同时也可能参与了胚胎着床过程.     

Leptin mRNA在早孕绒毛滋养细胞中的表达

目的测定早孕绒毛滋养细胞中leptin mRNA表达,探讨leptin在胎盘形成过程中的可能作用.方法取妊娠6～8周绒毛80份,分离、培养细胞滋养细胞并经光电镜、免疫细胞化学鉴定;提取细胞总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定滋养细胞leptin mRNA表达.结果①经光电镜、免疫细胞化学染色鉴定,细胞角蛋白-7(CK-7)染色强阳性,β-hCG染色个别细胞弱阳性,vimentin染色阴性,表明分离培养的细胞为滋养细胞.②滋养细胞表达leptin mRNA在235 bp处有区带.结论培养的早孕绒毛滋养细胞表达leptin mRNA,leptin可能在胚胎着床、滋养细胞浸润过程中起调控作用.     

补肾调经方在种植窗期经STAT3信号通路改善超促排卵小鼠胚胎着床的作用及机制

目的观察补肾调经方对控制性超促排卵(COH)小鼠种植窗期子宫内膜信号转导和转录活化因子3(STAT3)信号通路的影响,探讨其改善胚胎着床的作用及机制。方法昆明小鼠60只,随机分为模型组、补肾调经方组和正常组,每组20只。妊娠第4天每组处死10只小鼠,放射免疫法检测血清雌二醇(E_2)、孕酮(P)水平,Western blot法检测子宫内膜白血病抑制因子(LIF)、磷酸化信号转导和转录活化因子3(P-STAT3)蛋白的含量,免疫组化法检测子宫内膜瘦素及瘦素受体(OB-R)的表达。妊娠第8天处死各组剩余小鼠,观察平均胚胎着床数。结果与正常组比较,模型组小鼠血清E_2降低(P0.05),P升高(P0.01);子宫内膜LIF、P-STAT3的含量下降(P0.01),内膜上皮细胞瘦素及OB-R蛋白的表达降低(P0.01);平均胚胎着床数减少(P0.01)。与模型组比较,补肾调经方组小鼠血清P降低(P0.05);子宫内膜LIF、P-STAT3蛋白的含量升高(P0.01),内膜上皮细胞瘦素表达增加(P0.05);平均胚胎着床数增多(P0.01)。结论补肾调经方可改善COH小鼠胚胎着床,其机制可能与调控种植窗期子宫内膜STAT3信号通路相关蛋白有关。     

正常妊娠

流式细胞仪分离人早孕绒毛滋养细胞亚型及鉴定；妊娠期uNK细胞与pNK细胞的生物学特性研究；妊娠中的子宫收缩调控；超排卵对小鼠胚胎着床潜能的影响;[第一段]     

Galectin-3和Bcl-2与胚胎停育研究进展

Galectin-3是半乳糖凝集素家族中的一员,能通过其糖识别域与细胞内糖蛋白、细胞表面分子和细胞外基质蛋白相互作用,参与胚胎着床、胚胎发生和胎盘形成等过程,与妊娠成功建立和维持密切相关。凋亡抑制蛋白Bcl-2与Galectin-3有明显的序列相似性,可能存在共同细胞凋亡通路,在人早孕过程中参与了绒毛滋养层细胞的增殖和分化、子宫内膜蜕膜化的过程,在绒毛的发生、发育、胎盘形成和组织结构改建及功能完善等方面发挥着重要作用。     

小鼠子宫蜕膜化对uNK细胞分布及成熟性的影响

目的:探讨子宫自然杀伤(Uterine natural killer,uNK)细胞在小鼠妊娠早期子宫的分布及其调节.方法:用uNK细胞特异性的DBA-lectin抗体,对正常妊娠、延缓着床和人工诱导蜕膜化子宫壁内uNK细胞进行免疫组织化学标记.结果:在胚胎着床前,DBA-lectin染色主要分布于一些血管内皮细胞.至妊娠第5 d,胚胎着床以后,NK细胞分布于子宫的系膜侧基质中,主要是一些小的、未成熟的uNK细胞.至妊娠第7、8 d时,NK细胞分布于子宫的系膜侧蜕膜中,且逐渐变大和成熟,胞浆颗粒变得越来越致密.在人工诱导蜕膜化模型中,uNK细胞在子宫内膜的分布及成熟性与正常妊娠过程基本相似.结论:在妊娠早期,小鼠uNK细胞分布及成熟性主要受子宫内膜蜕膜化的影响.     

瘦素诱导人肝星状细胞活化及其作用机制

目的探讨瘦素通过何种机制诱导人肝星状细胞(HSCs)活化及其机制。方法采用瘦素处理体外培养HSCs细胞的方法,模拟高瘦素血症对肝纤维化影响的研究模型,经过不同时间和不同浓度的瘦素处理后,Western-blot方法检测TGF-β1、SREBP-1c、α-SMA和Ⅰ型胶原的蛋白表达量。结果瘦素可以促进HSCs表达α-SMA、Ⅰ型胶原和TGF-β1的表达,而抑制SREBP-1c的蛋白表达。结论瘦素活化人肝星状细胞参与肝纤维化过程,其中机制可能与激活TGF-β1通路和抑制SREBP-1c表达有关。     

妊娠小鼠子宫GMG细胞中活性蛋白与胚泡植入关系的研究

取孕 1 3～ 1 4d小鼠的子宫腺细胞区 ,经细胞分离和蛋白提取获得颗粒子宫腺细胞 (GMG细胞 )中的活性蛋白。将注入活性蛋白的 1 0只孕 3d小鼠作为实验组 ;对照组 1 0只小鼠给予PBS。注射后 5d取子宫观察胚胎着床情况并计算孕胚数。结果 :实验组有 9只可见胚胎 ,胚胎数为 1 1 2个 ;对照组有 7只可见胚胎 ,胚胎数为 87个。提示 :GMG细胞中的活性蛋白对胚泡着床可能有一定促进作用     

胚泡着床过程相关因子及在生育调节中意义

胚胎着床(Blastocyst implantation)是一复杂的生理过程,涉及细胞的生长、分化、识别和粘附等作用,需要不同功能分子参与,其具体机制尚不清楚。由于着床是成功妊娠的第一步,所以着床研究是最终解决不孕的关键,抗着床则使发展抗生育方法的切入点。胚泡着床与肿瘤转移侵袭的生物学性行为相似,可能有原癌基因、粘附分子、细胞因子等多种分子调控,整个过程贯穿不同的信号传导。