p27Kip1、cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的 研究口腔鳞癌组织中p27Kip1及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)表达以及与临床生物学特性和细胞增殖的关系.方法 采用免疫组化方法检测53例原发性口腔鳞癌组织及20例正常口腔黏膜组织中p27Kip1及cyclin D1蛋白的表达水平,Ki-67作为细胞增殖活性的指标也被检测.结果 p27Kip1在口腔鳞癌中阳性表达率显著低于正常口腔黏膜组织(P＜0.05),cyclin D1蛋白和Ki-67在口腔鳞癌中阳性表达率显著高于正常口腔黏膜组织(P＜0.05) ;cyclin D1蛋白过表达与临床分级及淋巴结转移有关(P＜0.05),p27Kip1缺失表达与淋巴结转移有关(P＜0.05);p27Kip1负表达和cyclin D1过度表达与细胞增殖评价因子Ki-67呈负相关(r=-0.587和-0.667,P＜0.05).结论 在鳞癌的发生发展过程中,p27Kip1的缺失表达和cyclin D1的过度表达两者可能单独或共同参与.p27Kip1的缺失可能还与口腔鳞癌细胞的分化、转移及增值和预后有关.     

环孢素A对体外人系膜细胞cyclin E,cyclin D1,p27kip1蛋白表达的影响

目的探讨环孢素A(CsA)对人系膜细胞增殖的抑制作用及细胞周期蛋白D1、E、p27kip1表达影响。方法人系膜细胞常规体外培养,分为实验组和对照组,实验组加入不同浓度的CsA(0.1,1,5μmol/L)干预。药物作用24,48,72 h后MTT比色法测定细胞增殖情况。药物作用48 h后采用流式细胞仪检测细胞周期。药物作用48 h后Western blot法检测细胞中cyc-lin D1、cyclin E、p27kip1蛋白质表达情况。结果 CsA对人系膜细胞具有时间、浓度依赖性抑制作用;且浓度依赖性阻滞细胞周期,使G0/G1期细胞增多,S期细胞减少(P<0.05)。CsA浓度依赖性下调cyclin D1、cyclin E蛋白,上调p27kip1蛋白的表达(P<0.05)。结论 CsA通过下调cyclin D1、cyclin E蛋白,上调p27kip1蛋白的表达,调节细胞周期调控通路,阻滞细胞于G0/G1期,有效抑制人系膜细胞的增殖。     

p16、cyclin D1在原发性肺癌的表达及其临床意义

目的:观察并探讨p16、cyclin D1基因在原发性肺癌组织中的表达水平及其与肿瘤病理生物学行为等的关系.方法:采用S-P免疫组化方法检测68例原发性肺癌标本中p16、cyclin D1蛋白的表达.结果:原发性肺癌中p16蛋白表达阳性率显著低于癌旁组织(P＜0.05);cyclin D1在原发肺癌中的阳性率显著高于癌旁组织(P＜0.05).二者表达与肿瘤大小、淋巴结转移、病理分级及疾病分期密切相关(P＜0.05),且二者表达显著负相关(P＜0.05).结论:在原发型肺癌中存在抑癌基因p16编码蛋白的表达下调以及原癌基因cyclin D1表达上调,与肿瘤的进展密切相关.提示二者可能通过影响细胞周期调控在肺癌的发生发展过程中起重要作用.     

NSCLC细胞周期素D1和p27异常表达与化疗敏感性及预后的相关性研究

目的：研究细胞周期素D1(cyclin D1)和p27在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达与化疗敏感性及预后的关系,评价其表达在NSCLC中的临床价值。方法：应用S P方法检测了37例原发性NSCLC石蜡切片中cyclin D1和p27的表达。结果：37例NSCLC患者中,cyclin D1阳性表达者21例（56.76％）,其表达和NSCLC患者的化疗疗效和预后显著相关(P＜0.05)。p27阳性表达率为32.43%(12/37),其表达与NSCLC患者的化疗疗效无相关性(P＞0.05),与患者的生存期显著相关(P＜0.05)。多因素分析表明,cyclin D1可作为NSCLC的独立预后因素。结论：NSCLC中cyclin D1的表达可作为预测化疗疗效和预后的指标;p27的表达可作为NSCLC的预后因素。     

鼻咽癌中细胞周期蛋白E与细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p27kip1的相关性分析

目的: 研究鼻咽癌中细胞周期蛋白E(cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子(p27kip1)的表达及相关性.方法: 以抗cyclin E抗体、抗p27kip1抗体为标记物,采用免疫组织化学方法(Elivision法)对37例鼻咽癌、17例慢性鼻咽炎石蜡标本进行检测,并结合临床资料进行分析.结果: 37例鼻咽癌组织中cyclin E和p27kip1阳性表达率分别为51.4%和45.9%,17例慢性鼻咽炎中cyclin E和p27kip1阳性表达率分别为5.9%和88.2%,两者比较差异有显著性(P＜0.01).Cyclin E阳性表达与病理分型、临床分期、淋巴结转移、颅神经侵犯无关(P＞0.05),但与3年生存率有关(P＜0.05);p27kip1阳性表达与病理分型、临床分期、淋巴结转移无关(P＞0.05),但与颅神经侵犯及3年生存率有关(P＜0.05).Cyclin E与p27kip1二者的表达有负相关性(r=-0.509,χ2=9.745,P=0.002).结论: cyclin E和p27kip1表达可能是判断鼻咽癌生物学行为的指标.     

p27^kip1、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在肾细胞癌中的表达及临床意义

目的：检测p27^kip1、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在肾细胞癌组织和正常肾组织中的表达情况,探讨几种蛋白之间的相关性及其与肾细胞癌各项临床病理参数的关系。方法：采用组织微阵列技术及免疫组化SP法检测p27^kip1、cyclin D1、cyclin D3及Skp2在80例肾细胞癌及40例正常肾组织中的表达并作统计学分析。结果：①肾细胞癌中p27^kip1阳性表达率低于正常肾组织（P=0．007）,cyclin D1、cyclin D3、Skp2阳性表达率高于正常肾组织（分别P=0．001,P=0．04,P=0．024）;②p27^kip1与Skp2表达强度呈负相关（r=-0．262,P=0．019）,p27^kip1与cyclin D1表达强度呈负相关（r=-0．285,P=0．010）,cyclin D1与cyclin D3之间呈正相关（r=0．314,P=0．002）;③p27^kip1的表达与肿瘤分化程度及临床分期呈负相关（P〈0．05）,Skp2表达与肿瘤分化程度呈正相关（P=0．002）。结论：Skp2、p27^kip1的表达与肾细胞癌发生及生物学特性密切相关,为肾细胞癌诊治的研究提供了新的思路和依据。     

p57kip2和cyclin E在人宫颈癌中的表达及其与临床病理及预后的关系

目的:探讨抑癌基因p57kip2和细胞周期素E(cyclin E)在宫颈癌发生发展中的作用及其与临床病理及预后的意义. 方法: 采用免疫组化二步法检测p57kip2和cyclin E在48例宫颈癌、13例宫颈上皮内瘤变(CIN)和15例正常宫颈组织中的表达. 结果: p57kip2在宫颈癌中的阳性表达率为21%,低于正常组(93%)和CIN组(77%),差异有显著性意义(P＜0.01). cyclin E在宫颈癌中的阳性表达率为77%,明显高于正常组(13%),差异有显著性意义(P＜0.01). 在宫颈癌组织中p57kip2和cyclin E的表达呈负相关(r=-0.597, P＜0.01). p57kip2的表达与病理分化程度及肿瘤直径有关(P均＜0.05);cyclin E的表达与病理分化程度及淋巴结转移有关(P＜0.01,P＜0.05). Kaplan-Meier单因素分析宫颈癌患者生存时间与p57kip2,cyclin E阳性表达有关(P＜0.01,P＜0.01). 结论: p57kip2的低表达或缺失和/或cyclin E的高表达可能在宫颈癌发生发展中起重要作用,与不良预后有关,两者在宫颈癌细胞周期调控中可能存在着负反馈调节机制.     

p27kip1和cyclin D1在肾癌中的表达及临床意义

目的:研究肾癌组织中p27kip1和cyclinD1蛋白的表达,探讨其与肾癌生物学特征的内在联系。方法:应用免疫组化S-P法,对53例肾癌及6例正常肾组织中p27kip1和cyclinD1蛋白进行检测。结果:在正常肾组织中p27kip1均呈阳性表达,p27kip1阳性表达率在肾癌不同临床分期,不同病理分级中差异显著(G1～G2:70.00%,G3～G4:27.27%,P<0.05;T1～T2:70.83%,T3～T4:20.69%,P<0.05)。cyclin D1在正常肾组织呈阴性表达,cyclinD1阳性表达率在肾癌不同临床分期,不同病理分级中差异显著(G1～G2:51.35%,G3～G4:27.27%,P<0.05;T1～T2:58.33%,T3～T4:20.69%,P<0.05)。结论:p27kip1和cyclinD1蛋白在肾癌中的表达与肿瘤生物学行为密切相关,p27kip1和cyclinD1在肾癌的发生、发展中起重要作用。     

p27和Cyclin E在膀胱移行细胞癌组织中的表达及意义

目的探讨p27和Cyclin E蛋白在膀胱移行细胞癌组织中的表达及其意义.方法采用免疫组化方法(S-P法)检测45例膀胱移行细胞癌组织和8例正常膀胱组织石蜡切片中p27和Cyclin E蛋白的表达.结果膀胱移行细胞癌组织中p27阳性表达率明显低于正常膀胱组织(P＜0.01);膀胱移行细胞癌组织中Cyclin E阳性表达率明显高于正常膀胱组织(P＜0.05).p27与Cyclin E呈负相关(r=-0.207,P＜0.05).结论提示p27和Cyclin E可以作为判别膀胱癌分化程度的标志物,并作为判断预后的指标.     

p27、cyclin E、Rb蛋白在胃癌中的表达及临床意义

目的:探讨p27、cyclin E和Rb蛋白在胃癌中的表达及其与胃癌病理参数之间的关系.方法:用免疫组化技术(SP法)对10例非瘤病变患者的正常胃黏膜和40例胃癌和癌旁黏膜标本进行染色,分析p27、cyclin E和Rb蛋白表达及其与预后的关系.结果:p27、cyclin E和Rb蛋白在正常胃黏膜与瘤旁黏膜表达差异无统计学意义;p27在胃癌中表达降低,cyclin E蛋白在胃癌中表达增高,呈过度表达,Rb组间差异无统计学意义.p27、cyclin E和Rb蛋白表达与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、预后等胃癌病理参数之间具有相关性.结论:p27、cyclin E和Rb蛋白异常表达与胃癌的发生、发展有关,并可能作为胃癌预后的指标.     

庆大霉素诱导肾小管上皮细胞凋亡及细胞周期调节蛋白表达

目的：观察庆大霉素对体外培养的肾小管上支细胞凋亡的诱导作用；研究在细胞凋亡过程中细胞周期调节蛋白cyclinE、CDK2和p27^kipl蛋白表达的改变，并探讨细胞凋亡与细胞周期调节蛋白表达之间的关系。方法：0．2～3．2mg／ml的庆大霉素作用于体外培养的猪肾近端小管上皮细胞株(LLC-PK1细胞)24～96h,MTT法测定庆大霉素对细胞增殖的抑制率,琼脂糖凝胶电泳法观察凋亡细胞DNA条带，流式细胞术测定细胞凋亡率(AI)和细胞增殖动力学,Western印迹分析检测培养96h时细胞内cyclinE、CDK2和p27^Kipl的蛋白表达。结果：庆大霉素对LLC-PK1细胞增殖有抑制作用，庆大霉素具诱导细胞凋亡的作用,AI呈药物浓度和作用时间依赖性：庆大霉素致细胞周期停滞于G1期。随着庆大霉素浓度的增加，细胞内cyclinE和CDK2蛋白表达逐渐下调．而p27^Kipl蛋白表达则逐渐上调。结论：厌大霉素诱导的LLC—PK1细胞凋亡与细胞周期调节蛋白cyclinE和CDK2表达下调以及p27^Kipl表达上调有关。     

Immunohistochemical study on the expression of cyclin D1 and E in gastric cancer

Cyclin D1 and E have been found to be deregulated and overexpressed in various types of cancers. In order to study the cell cycle regulatory mechanisms in gastric cancer, we have analyzed the protein expression of cyclin D1 and cyclin E in 76 tumor specimens from patients with primary gastric cancer, using immunohistochemistry. Overexpression of cyclin D1 was observed in 38 cases (50.0%). Overexpression of cyclin E was observed in 40 cases (52.6%). There was no significant difference between the expression of cyclin D1 and any clinicopathological factor. Cyclin E overexpression was correlated with a high incidence of lymph node metastasis, a low incidence of T1, and with Stage I. There was no significant difference in survival curves between cyclin D1 (+) and cyclin D1 (-). The survival curves of cyclin E (-) were significantly higher than those of cyclin E (+). These results suggested that in gastric carcinoma, cyclin E overexpression was useful as a prognostic indicator, but cyclin D1 was not.     

透明质酸结合蛋白对肿瘤细胞表达 cyclin E及p27kip1的影响

目的：研究透明质酸结合蛋白（HABP）对人乳腺癌、前列腺癌细胞和牛血管内皮细胞cyclinE及p27^kip1表达的影响。方法：将人脑透明质酸结合蛋白（hbHABP）全长cDNA转染到人乳腺癌细胞（MDA435）和前列腺癌细胞（TSU）中，研究细胞周期蛋白cyclinE及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27^kip1表达的变化。再将这些转基因细胞的培养上清液（CM）加入牛主动脉血管内皮细胞（ABAE）的培养上清液中，观察CM对ABAE的p27^kip1表达的影响。结果：MDA435和TSU细胞转染hbHABP基因后，cyclinE的表达水平均明显低于对照组细胞，而p27^kip1的表达水平均升高。ABAE细胞受CM作用后，p27^kip1的表达水平也高于对照组细胞。结论：hbHABP可能具有下调肿瘤细胞周期蛋白cyclinE和上调细胞周期蛋白依赖性激酶 抑制物p27^kip1的作用，从而抑制肿瘤细胞的生长；同时，hbHABP促进血管内皮细胞p27^kip1的表达，可以抑制肿瘤新生血管的形成。     

Vitamin C Inhibits Benzo[a]pyrene-lnduced Cell Cycle Changes Partly via Cyclin D1/ E2F Pathway in Human Embryo Lung Fibroblasts

Objective To study the molecular mechanism of the inhibitory effects of vitamin C on benzo[a]pyrene （B[a]P）-induced changes of cell cycle in human embryo lung fibroblast （HELF） cells. Methods The stable transfectants, HELF transfected with antisense cyclin D1 and antisense CDK4, were established. Cells were cultured and pretreated with vitamin C before stimulation with B[a]P for 24 h. The expression levels of cyclin DI, CDK4, E2FI, and E2F4 were determined by Western blot. Flow cytometric analysis was employed to detect the distributions of cell cycle. Results B[a]P significantly elevated the expression levels of cyclin D 1, E2F1, and E2F4 in HELF cells. Vitamin C decreased the expression levels of cyclin D 1, E2F1, and E2F4 in B [a]P-stimulated HELF cells. Dose-dependent relationships were not found between the different concentrations of vitamin C （10, 100, 500, 1000, and 5000 lamol/L） and the expression levels of cyclin D 1, E2F1, and E2F4 in HELF cells. The expression levels of cyclin D1, E2FI, and E2F4 in B[a]P-treated transfectants were lower than those in B[a]P-treated HELF cells. The expression levels of cyclin DI and E2F4 treated with vitamin C and antisense cyclin D1 were decreased compared with those treated with antisense cyclin DI alone. The effects of vitamin C combined with antisense CDK4 on the expression levels of cyclin DI and E2FI/E2F4 were similar to those of antisense CDK4 alone. B[a]P progressed HELF cells from GI to S phase. Both vitamin C and antisense cyclin DI suppressed the changes of cell cycle progressed by B[a]P. However, antisense CDK4 did not attenuate the above changes. Vitamin C combined with antisense CDK4 markedly suppressed B[a]P-induced changes of cell cycle as compared with antisense CDK4. But the inhibitory effects of vitamin C combined with antisense cyclin DI on B[a]P-induced changes of cell cycle were similar to those of vitamin C alone or antisense cyclin DI alone. Conclusions B[a]P progressed HELF cells from G1 to S phase via intracellular signaling pathway of cyclin D I/E2F. Vitamin C may modulate this signaling pathway to protect cells from injury caused by B[a]P.     

胃黏膜癌变过程中细胞周期调控基因Rb、Cyclin D1 及CDK4的表达及其意义

目的研究胃黏膜癌变过程中细胞周期调控基因Rb、Cyclin D1及CDK4的表达及其意义.方法采用免疫组化方法对50例胃癌,18例癌旁肠化生,7例癌旁轻中度不典型增生及9例重度不典型增生组织中细胞周期调控基因Rb、Cyclin D1 及CDK4的表达情况进行检测和比较.结果 Rb基因的过度表达在不典型增生及胃癌中检测到,在胃癌组织中的表达强度明显大于重度不典型增生病变(P<0.05),Cyclin D1 及CDK4的表达仅发现在胃癌组织中,胃癌组织中Cyclin D1表达阳性的13例病例中有5例同时表达Rb,2例同时表达CDK4;Rb阳性的17例胃癌组织中有3例同时表达CDK4.结论 Rb,cyclin D1和CDK4的过度表达可能参与胃癌的发生,Rb的过度表达出现在胃黏膜癌变过程的较早期阶段,Cyclin D1和CDK4的过度表达属于胃癌变过程中的较晚期的基因事件.     

细胞型局灶节段性肾小球硬化症的病理变化及其细胞周期调控蛋白的表达

目的:探讨细胞型局灶节段性肾小球硬化症(focal segmental glomerulosclerosis,FSGS)的病理学特征及其细胞周期调控蛋白的表达.方法:收集细胞型FSGS病例17例,肾活检标本进行系统的光镜、免疫荧光及电镜观察,通过免疫组化及免疫电镜方法,检测细胞周期蛋白(cyclin D1,cyclin E,cyclin A及cyclin B1),细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂(cyclin dependent kinase inhibitor-CKI,包括p2l,p27及p57)的表达.结果:细胞型FSGS以上皮细胞增生肥大伴有毛细血管襻的节段硬化或塌陷为突出特征;免疫荧光可见部分病例节段性IgM阳性或阴性;超微结构观察显示增生的细胞兼具足细胞及壁层上皮细胞的特征.细胞型FSGS的增生细胞,cyclin E、cyclin A、cyclin B1及p21表达阳性,而cyclin D1、p27及p57转为阴性.结论:细胞型FSGS的增生细胞可能为损伤的足细胞重现幼稚足细胞的表型特征,重新进入细胞周期进行增殖而形成细胞增生病变;细胞周期蛋白(cyclin E,cyclin A,cyclinB1)表达增加及CKI(p27,p57)表达降低与细胞增生病变的细胞周期调控有关.     

白藜芦醇诱导肺癌细胞凋亡和细胞周期阻滞的分子机制

目的探讨白藜芦醇对肺癌细胞系A549和H1299细胞增殖与细胞周期阻滞及细胞凋亡之间的联系。方法采用MTT法检测白藜芦醇对A549和H1299细胞增殖的影响;用Western印迹法检测白藜芦醇作用后A549和H1299中凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP及细胞周期相关蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2、CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达情况;通过流式细胞仪技术检测白藜芦醇诱导A549和H1299细胞凋亡率以及细胞周期阻滞的影响。结果白藜芦醇对A549和H1299的生长均有抑制作用,呈浓度依赖性;经白藜芦醇处理后,A549和H1299的周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平上调,而周期蛋白CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平下调;A549和H1299的凋亡相关蛋白cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-7、cleaved-caspase-9、cleaved-PARP的表达水平上调;流式细胞仪检测A549和H1299的细胞凋亡率随白藜芦醇的浓度上升而增加,流式细胞仪检测细胞周期即可观察到随白藜芦醇的浓度的增加,细胞周期明显阻滞于G1/S期。结论白藜芦醇可能是通过促进caspases通路的活化,从而促进细胞凋亡;周期蛋白cyclin D1、cyclin D3和CDK2蛋白的表达水平的上调和CDK4、CDK6、p53、p18、p21、p27的表达水平的下调可能是白藜芦醇诱导人肺癌细胞发生G1/S期阻滞的关键机制。