孕妇HCMV感染及妊娠结局分析

目的了解孕妇感染HCMV后对胚胎、胎儿及妊娠结局的影响.方法采用ELISA方法对4148例长沙地区孕妇进行TORCH-IgM检测.结果在对4148例长沙地区孕妇进行TORCH-IgM检测中,发现有62例孕妇为HCMV-IgM阳性,阳性率为1.5%.在随访的58例孕妇中,妊娠结局为自然流产者达31%(18/58);为死胎及胎儿畸形者达19%(11/58),显著高于其他异常妊娠结局者(P＜0.001).结论HCMV宫内感染是导致胚胎和胎儿自然流产的主要原因之一,同时也是导致胎儿宫内死亡、畸形发生的主要原因.因此,提高孕妇免疫能力,加强孕期健康教育,避免和减少易感因素的接触,是降低胎儿宫内感染的主要措施;另外,大力推广孕前优生检测也是防止胎儿宫内感染发生的重要手段.     

HCMV既往感染对大学生神经行为的影响

目的探讨巨细胞病毒（HCMV）既：往感染与大学生神经行为特征之间的关系。方法招募87名在校大学生,采用伯乐．神经行为测试评价系统（B．NES）进行测试,同时采血分离血清检测受试对象的HCMVIgG抗体,采用SPSS软件对B．NES测试结果进行统计分析。结果有76人既往感染过巨细胞病毒,11人未感染过,巨细胞病毒的感染率为87．36％。既往感染HCMV的大学生在情感状态测试的“忧郁沮丧”方面得分为8．89±6．60,低于未感染的大学生组（15．73±9．00）,差异有统计学意义（P〈0．05）;在情感状态测试的其他方面、学习记忆、感知与心理运动方面感染组和对照组均差异无统计学意义（P〉0．05）。结论既往感染HCMV与抑郁的情感状态水平的降低存在关联。     

母血中胎儿有核红细胞计数与宫内感染的关系

目的探讨母血中胎儿有核红细胞数量与巨细胞病毒宫内感染之间的关系。方法收集54例巨细胞病毒宫内感染孕妇和68例非感染孕妇的外周血样本,富集胎儿有核红细胞后计数。每例样本取2个胎儿有核红细胞并用PEP-PCR技术证实其胎源性。结果宫内感染组的胎儿有核红细胞数量与100个有核细胞数的比值显著高于非感染组(P<0.05)。结论巨细胞病毒宫内感染孕妇外周血中的胎儿有核红细胞数量比正常妊娠者增高,对进一步阐明该病的病生机制具有一定的意义。     

HCMV抗原（pp65）血症检测技术诊断活动性HCMV感染

人类巨细胞病毒（ｈｕｍａｎｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，ＨＣＭＶ）感染在人群中广泛存在，自从１９８８年ＨＣＭＶ抗原血症检测技术建立以来，该技术发展迅速，检测外周血ＰＭＮＬｓ中的ＨＣＭＶ晚期结构抗原ｐｐ６５是早期、快速、准确、定量诊断活动性ＨＣＭＶ感染的主要手段。本综述主要涉及ＨＣＭＶ抗原（ｐｐ６５）血症检测技术及其临床意义的研究近况。     

抗HCMV不同多肽McAb的鉴定

目的为了将单克隆抗体 (Mc Ab)用于诊断技术 ,我们首先建立了 13株抗人巨细胞病毒 (HCMV)的 Mc Ab,选取 6株 Mc Ab作进一步鉴定。方法这 6株 Mc Ab的鉴定主要采用间接免疫荧光试验、免疫印迹试验等方法。结果间接免疫荧光试验表明 :Mc Ab8B8相应的多肽为早期抗原 ;而 Mc Ab7B4、7D7、7E7、7E11、8D6的相应病毒多肽为晚期抗原。免疫印迹试验的结果表明 :Mc Ab7B4、7D7、7E7、7E11、8B8、8D6相应的病毒多肽分子量分别为 46、15 0、38、5 1、72、6 5 kd。结论 Mc Ab8B8可不用于 HCMV的快速诊断。     

应用PCR技术对孕妇HCMV感染的前瞻性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对１５６ 例孕妇尿中ＨＣＭＶ 进行检测,并追踪观察１１４ 例新生儿脐血中ＨＣＭＶ 垂直传播情况。结果表明：１１ 例孕妇尿ＨＣＭＶＤＮＡ 检测阳性,孕期感染率为７－０５％ ,有异常妊娠史孕妇感染率（１４－７１ ％ ）较正常孕妇（４－９２ ％） 明显升高。９ 例ＨＣＭＶ 阳性孕妇有４ 例观察新生儿脐血ＨＣＭＶＤＮＡ 阳性,占４４％ ,而ＨＣＭＶＤＮＡ阴性孕妇无１ 例新生儿脐血出现阳性结果。我们认为ＰＣＲ方法是检测ＨＣＭＶ宫内感染的可靠而灵敏的指标,对ＨＣＭＶＤＮＡ阳性的孕妇应进一步检查羊水,如羊水ＨＣＭＶＤＮＡ也阳性,应终止妊娠。     

金樱冲剂对不良孕产史妇女HCMV感染的疗效观察

本研究为探讨中药金缨冲剂对活动性巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染孕妇及不良产史妇女的治疗效果。采用酶联免疫吸附试验,以ＨＣＭＶ ＩｇＭ阳性作为活动性ＨＣＭＶ感染的指标,转阴性为疗效判断标准。通过１６４例临床疗效观察,治疗后有１４８例转阴。总有效率为９０．２４％。     

HCMV宫内感染与脑组织损伤的相关性研究进展

人巨细胞病毒(human cytomagelovirus,HCMV)感染是胎儿宫内感染中的最常见原因,明显的中枢神经系统缺陷症状是受感染后出生婴儿的常见表现,本文综述了HCMV宫内感染致脑组织损伤的研究现状.     

血管平滑肌细胞HCMV感染与动脉粥样硬化关系的研究进展

人类巨细胞病毒感染后血管平滑肌细胞的增殖、脂质代谢改变及其免疫病理损伤在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用.本文综述了HCMV感染SMC及其在AS发病机制中的作用.     

HCMV感染对人THP-1细胞HLA-G及其受体表达的影响

目的:研究人巨细胞病毒(HCMV)感染对人THP-1细胞人类白细胞抗原G(HLA-G)异构体及其受体表达的影响探讨HLA-G在HCMV逃逸宿主免疫应答中的作用。方法:HCMV Towne株感染THP-1细胞后,采用RT-PCR和Western blot检测HLA-G异构体mRNA和蛋白水平,流式细胞术检测THP-1细胞HLA-G及其表面受体ILT2、ILT4的表达,ELISA检测细胞培养上清中IL-10及可溶性HLA-G(sHLA-G)水平,同时检测细胞存活率。结果:HCMV感染后细胞未出现明显凋亡,细胞存活率高。HCMV感染THP-1细胞1 d后HLA-G1、-G3、-G4和-G5的mRNA表达明显上调,HLA-G1和HLA-G5的蛋白表达明显上调。THP-1细胞HLA-G、ILT2和ILT4的表达在感染1 d后明显上调。sHLA-G水平在感染1 d后显著升高,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01)。THP-1细胞培养上清液IL-10水平在感染1 d后明显上调,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论:HCMV感染THP-1细胞能诱导HLA-G异构体的差异表达,以HLA-G1和HLA-G5为主,且上调其表面受体ILT2/ILT4的表达。同时,HCMV感染能诱导THP-1细胞分泌IL-10。该研究为进一步探讨HCMV逃避机体免疫应答的机制提供实验依据。     

HCMV感染标本24小时培养物的原位杂交检测方法

本文探讨了一项检测短期(24 h)培养标本的HCMV感染的原位杂交方法。HCMV核酸探针用HRP直接标记,经原位杂交后与DAB-H_2O_2反应显示紫褐色阳性信号,背景为NFR负染成浅粉红色。经探索,蛋白酶K 50～100μg/ml、NFR负染15 s可取得理想结果。临床上采集22份有异常妊娠史妇女及5份无自然流产史的健康妇女的尿液标本,平行作1天及7天培养,然后同时原位杂交的结果表明,仅1例标本7天检出可疑阳性而1天检出阴性,余检测结果全部吻合,检出阳性率无显著性差异。因此,24h培养标本原位杂交结果可靠,可作为检测HCMV感染的早期快速诊断新方法。     

先天性巨细胞病毒感染胎儿的临床研究

目的探讨先天性巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)感染与胎儿先天畸形和孕妇合并异常妊娠的关系.方法追踪42例孕期诊断为宫内HCMV感染胎儿的妊娠结局,应用PCR技术于生后1w内检测新生儿血、尿或唾液HCMV DNA;对孕母的妊娠史加以回顾性分析.结果 HCMV感染可损害多器官,脑和肾是HCMV感染最常攻击的靶器官,各占先天畸形胎儿的28%,与其他器官损害相比差异有显著意义;HCMV感染不是产前诊断HCMV宫内感染的唯一指征,73.9%宫内诊断为HCMV感染的胎儿其孕母合并异常妊娠. 结论先天性HCMV感染与胎儿畸形和孕妇合并异常妊娠关系密切.脑、肾是HCMV感染最常攻击的靶器官,合并异常妊娠史的孕妇宫内HCMV感染率较高.临床上对于合并胎儿先天畸形和异常妊娠史的孕妇,尤其胎儿脑、肾畸形者,应常规检查有无宫内HCMV感染.     

涎腺导管上皮细胞体外感染HCMV模型的建立

目的　建立涎腺导管上皮细胞体外人巨细胞病毒 (HCMV)感染模型。方法　用免疫细胞化学方法初步鉴定涎腺导管上皮细胞 (HSG)角蛋白 8(cytokeratin 8,CK8)和角蛋白 18(CK18)抗原的表达 ;观察HCMV感染HSG后导致的病变 ;观察宿主细胞中病毒颗粒的超微结构 ;用RT PCR及nest RT PCR检测HCMVIE1(即刻早期 1) /IE2基因的转录 ;用免疫细胞化学法检测HCMV感染细胞中IE1/IE2蛋白的表达。结果　呈上皮样贴壁生长的HSGCK8和CK18阳性表达 ;HCMV感染后 12小时 ( 12h .p .i.)即可见细胞病变 ,6 0h .p .i.CPE已极为明显 ,72h .p .i.绝大部分细胞出现病变。感染的HSG细胞在细胞核、内质网、细胞质中出现数量不等的 3种不同形态的疱疹病毒样颗粒。宿主细胞中可检测到HCMVIE1/IE2的转录以及IE1/IE2蛋白的表达。结论　成功建立了涎腺导管上皮细胞体外HCMV感染模型     

HCMV感染孕妇外周血中胎儿细胞的分离

目的运用不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法分选孕妇外周血中的胎儿有核红细胞。方法取20名人巨细胞病毒抗原血症(pp65)阳性的孕妇外周EDTA抗凝血,经不连续密度梯度离心初步富集、免疫磁珠法分选及胎儿细胞。结果 20名pp65阳性孕妇外周血中分选到胎儿有核红细胞的有16例,10份正常妊娠妇女外周血细胞涂片中发现胎儿有核红细胞数9例。10份未妊娠妇女外周血细胞涂片中均未发现胎儿有核红细胞。结论不连续密度梯度离心及免疫磁珠分离法结合特异性抗体-HbF标记、识别能有效地分选出母血中胎儿有核红细胞,应用于进一步的无创性产前诊断,将有着良好的应用前景。     

孕妇血清中人类巨细胞病毒DNA含量与胎儿宫内感染的关系

目的探讨孕妇血清中人类巨细胞病毒DNA(HCMV DNA)含量与胎儿宫内感染发生率的关系.方法用PCR方法结合荧光探针的体外扩增和检测技术,检测186例HCMV感染孕妇及胎儿或新生儿血清、胚胎、绒毛中HCMVDNA拷贝数.结果胎儿发生宫内感染及妊娠不良结局与其母素血清HCMV DNA含量有关,随着孕妇血清中HCMV DNA含量的增高,胎儿宫内感染及不良妊娠结局的危险性也呈显著增高趋势.结论孕妇血清HCMV DNA含量升高是胎儿感染HCMV并发生妊娠不良结局的重要因素之一.     

中药金叶败毒制剂对HCMV感染细胞细胞周期调控抑制基因WAF1/CIP1 mRNA影响的实验研究

目的通过研究人巨细胞病毒感染人胚肺成纤维细胞后细胞周期调控抑制基因WAF1/CIP1mRNA的变化及中药金叶败毒制剂对p21WAF1/CIP1mRNA的调节,探讨中药金叶败毒制剂体外对HCMV感染的阻断和治疗效应及其机制.方法采用RT-PCR方法检测病毒感染后不同时间细胞中p21WAF1/CIP1mRNA的变化,检测中药金叶败毒制剂干预后p21WAF1/CIP1mRNA的变化.结果病毒感染后不同时间细胞中p21WAF1/CIP1mRNA呈先下降后上升趋势,而中药金叶败毒制剂可部分阻止这种趋势.结论中药金叶败毒制剂部分上调HCMV感染引起的p21WAF1/CIP1mRNA下降,可能是中药金叶败毒制剂抗HCMV效应的作用机制之一.     

感染HCMV的腮腺导管上皮细胞CK和EMA丢失

目的 研究人类巨细胞病毒(HCMV)感染对腮腺导管上皮细胞表型产生的影响。方法 用免疫组化方法检测腮腺巨细胞包涵体病石蜡包埋组织中巨细胞病毒以及早期抗原、CK、EMA等的表达．结果 腮腺导管上皮细胞感染人巨细胞病毒后，作为上皮性标志物的CK和EMA表达呈阴性。结论 人巨细胞病毒感染腮腺导管上皮细胞使其CK和EMA丢失。单层上皮角蛋白网具有维持上皮细胞机械力学完整性的功能。     

HCMV对涎腺导管上皮细胞组织蛋白酶D表达的影响

目的研究HCMV对涎腺导管上皮细胞组织蛋白酶D表达的影响。方法用免疫组化方法研究腮腺巨细胞包涵体病(PCID)石蜡包埋组织中组织蛋白酶D的表达;用Westernblot法研究HCMV感染对体外培养的涎腺导管上皮细胞组织蛋白酶D表达的影响;用半定量RT-PCR法研究HCMV对体外培养的涎腺导管上皮细胞组织蛋白酶D转录水平的影响。结果 PCID组织包涵体巨细胞组织蛋白酶D表达呈阳性。HCMV感染体外培养的涎腺导管上皮细胞0～96h,组织蛋白酶D前体和有活性的重链组织蛋白酶D缓慢上调但一直保持在正常水平以下;有活性的单链组织蛋白酶D很快上调,而且在96h达到正常水平的1.91倍;导管上皮细胞组织蛋白酶D的mRNA水平和蛋白水平呈反向平行关系。结论 HCMV可诱导涎腺导管上皮细胞活性单链形式组织蛋白酶D的表达上调。     

先天性HCMV感染新生儿尿液中病毒载量与疾病严重度的关系探讨

目的探讨新生儿尿液中人巨细胞病毒（HCMV）病毒载量与先天性感染的关系及与HCMV所致疾病严重程度的关系。方法采集98例经PCR方法确诊的有症状及无症状的先天性HCMV感染新生儿尿液标本,用实时荧光定量PCR法（FQ—PCR）检测尿液中巨细胞病毒载量。结果98例先天性HCMV感染的新生儿中85例在出生后有临床症状（86％）。无症状感染和有症状感染的新生儿尿液中平均HCMV病毒载量分别是1．4×10^5拷贝／ml和3．1×10^6拷贝／ml,P〈0．01,差异有统计学意义。结论先天性HCMV感染的新生儿中无症状感染者尿液中病毒载量显著低于有症状感染者,提示病毒载量与疾病严重程度相关。