体外培养人成骨细胞随供体的增龄而改变

目的　观察体外培养的不同年龄组人成骨细胞形态、增殖与功能改变。方法　选取≤5岁 ,30～ 4 0岁 ,5 0～ 6 0岁和≥ 70岁四个年龄组的髂骨、股骨近端或股骨颈松质骨进行培养。培养期间应用相差倒置显微镜活体观察与碱性磷酸酶染色观察成骨细胞的生物学特性。一代成骨细胞生长至汇合时消化计数继续培养 ,二代成骨细胞分别于培养 1天 ,5天检测细胞增殖率 (MTT法 ) ,5天时检测碱性磷酸酶 (ALP)活性 ,14天时送电镜室进行透射电镜观察。结果　活体观察提示成骨细胞随增龄其胞体增大、变薄、空泡增多、突起拉长 ,汇合时趋向于长梭形 ,各年龄组成骨细胞碱性磷酸酶染色均呈阳性反应 ;电镜观察提示成骨细胞随增龄变得瘦长、细胞器减少、高尔基体不发达、糖原增多并呈堆积现象、溶酶体增多、出现空泡 ,细胞核内异染色质增多。成骨细胞生长至汇合时的细胞数与MTT相对比值随增龄而降低 (P <0 .0 1) ;ALP活性随增龄呈增高趋势 ,但差异无统计学意义。结论体外培养不同年龄组人成骨细胞的形态与增殖能力随年龄增加而发生衰老改变     

体外培养人成骨细胞Ⅰ型胶原合成与表达的增龄性改变

目的探讨体外培养不同年龄组人成骨细胞Ⅰ型胶原（COL-1）表达的增龄性改变. 方法选择＜5岁、30～40岁、50～60岁及70～79岁4个年龄组骨折患者的松质骨,用1：1 DMEM-Ham F-12培养液进行培养.第2代细胞培养至7 d和13 d,分别定量留取培养48 h的条件培养液,第2代细胞一部分经诱导培养至14 d进行电镜观察,另一部分培养至14 d抽提细胞内总RNA,用逆转录聚合酶链反应方法半定量检测COL-1基因表达,并进行各年龄组比较. 结果成骨细胞经体外诱导培养后透射电镜下观察,细胞外基质中可见大量原胶原;细胞培养至7 d和13 d Ⅰ型前胶原羧基端前肽（PICP）检测值均随年龄增长逐渐降低,与年龄之间呈显著负相关（男性7 d： r=-0.503, P＜0.05, 13 d： r=-0.662, P＜0.01; 女性7 d： r=-0.658, P＜0.01, 13 d： r=-0.770, P＜0.01）;各年龄组成骨细胞均检测到COL-1基因mRNA表达,表达量＜5岁组较低,30～40岁组最高,之后随年龄增长逐渐降低,其表达量和年龄呈显著正相关（男性r=0.331,女性r= 0.327,均为P＜0.05）,性别间差异无统计学意义. 结论体外培养人成骨细胞可合成原胶原,PICP分泌随增龄而降低,不同年龄组人成骨细胞均表达COL-1 mRNA,30～40岁后表达量随年龄增长而降低.     

前列腺素E2促进老年大鼠成骨细胞骨形成及其机制研究

目的　探讨前列腺素E2 (PGE2 )对老年雄性大鼠胫骨上段松质骨的作用。　方法　取2 0月龄Wistar雄性大鼠 ,分别皮下注射PGE2 (3mg·kg 1·d 1) 10d和 30d。用体内双荧光标记法、不脱钙组织切片 ,以骨组织形态计量学方法观察胫骨上段松质骨骨小梁和骨髓腔的动态和静态参数变化。　结果　PGE2 作用 10d骨小梁表面成骨细胞周长OB/BS〔(12 3± 7 6 ) %〕和类骨质周长OS/BS〔(2 0 4± 7 2 ) %〕明显高于对照组〔(1 6± 0 7) %和 (4 3± 1 7) % ,P <0 0 1〕 ,骨小梁表面和髓腔出现多层排列的前成骨细胞OPC ,形成多细胞成分而钙化不全的新生骨小梁WB ;PGE2 作用 30d矿化骨形成率BFR/BV〔(815 4± 137 9) %·年 1〕和骨量BV/TV〔(4 2 1± 12 6 ) %〕明显高于对照组〔(15 4 9± 14 6 5 ) %·年 1和 (13 5± 3 2 ) % ,P <0 0 1〕 ,骨髓脂肪组织面积F/TV由 (18 2± 5 6 ) %减少到 (11 4± 3 6 ) % (P <0 0 5 )。　结论　PGE2 在短期内有刺激老年大鼠松质骨成骨细胞骨形成 ,增加骨量的作用。     

无症状上消化道憩室的增龄性改变

目的回顾性分析无症状上消化道憩室的增龄性改变。方法选择2003年1～12月无消化道症状的上消化道造影体检的老年前期及老年人645例，年龄50～79岁，按年龄分为50～59岁（206例）、60～69岁（201例）、70～79（238例）组，分别对各年龄组发生上消化道憩室的例数、部位和个数进行分析，比较无症状上消化道憩室的增龄性变化。结果各年龄组发生消化道憩室的例数随增龄而增加，分别为37例（18．0％）、56例（27．9％）、68例（28．6％），后两组与50～59岁组比较，差异有统计学意义（均为P〈0．05）；各年龄组食道、胃和十二指肠发生憩室个数随增龄而增多，70～79岁组与50～59、60～69岁组比较，差异有统计学意义（均为P〈0．05）。上消化道憩室以十二指肠降部居多，161例中有104例（61．6％），各组十二指肠降部憩室发生的构成比分别为11．7％（24例）、21．4％（43例）、15．5％（37例）。结论老年人消化道憩室是一种退行性改变，随增龄其检出率和憩室个数增加，且以十二指肠降部憩室居多。     

高级糖化终末产物骨质疏松

本文介绍了高级糖化终末产物随年龄的增中在体内的积累及其对成骨细胞增殖和发化的影响以及高级糖化终物与人单核巨噬细胞和成骨细胞结合并刺激这些细胞合成和释放细胞在子和生长因子、抑制骨形成，促进骨吸收，从而导致骨吸收和骨形成鲜偶联，使骨吸收大于骨形成，以此提示老年性骨质疏松的发病机理。     

依普拉芬对大鼠成骨细胞增殖分化及一氧化氮合成的影响

目的研究依普拉芬对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖分化以及一氧化氮(nitric oxide,NO)合成的影响。方法体外分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,将不同浓度的依普拉芬加入培养液,测定细胞增殖情况、碱性磷酸酶(ALP)活性及钙化结节以及培养基中NO浓度。结果与阴性对照组相比,依普拉芬可增加成骨细胞数量(P<0.01),提高细胞的ALP活性和促进钙化结节形成,增加培养液中NO浓度(P<0.01)。其中,依普拉芬浓度在10~8~10~5mol/L之间作用最为显著。结论一定浓度的依普拉芬可以促进体外培养成骨细胞的增殖、分化的作用,这种作用可能是通过增加细胞内NO合成进行调控的。     

氟化物对骨形成中成骨细胞的影响及机制

氟化物作为促骨形成药物之一 ,最早被推荐应用于骨质疏松症的临床治疗 ,目前仍是唯一可供临床使用的有效的促骨形成的药物。近年来由于成骨细胞 (osteoblast OB)培养技术及基因工程技术的发展 ,对氟化物刺激骨形成作用有了更进一步的认识 ,有助于我们对氟中毒时氟骨症机制的探讨。1　氟化物对成骨细胞的直接作用　　氟是一种已知可影响骨形成的非激素因子。具有双相调节作用。长期小剂量氟可促进骨形成 ;大剂量可引起骨质疏松或骨硬化。在人体和动物实验研究中 ,较多学者报道氟中毒时骨量增多是由于 OB数增多 ,活性增加 ,生命周期延长 [1 …     

重组人结缔组织生长因子对人成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响

目的 研究重组人结缔组织生长因子(rCTGF)对人成骨细胞增殖、分化及凋亡的影响.方法 用rCTGF干预体外培养的人成骨细胞,采用[3H]-TdR掺入法检测人成骨细胞增殖率,α-磷酸萘酚法测定细胞内碱性磷酸酶活性变化,放射免疫法测定骨钙素含量的变化,Western印迹法检测Ⅰ型胶原表达的变化,应用流式细胞仪检测rCTGF埘成骨细胞凋亡的影响.结果 rCTGF呈剂量依赖性促进人成骨细胞增殖,200 ng/ml rCTGF达最大效应;rCrrGF干预显著促进人成骨细胞分化,rCTGF旱剂量依赖性增加Ⅰ型胶原、骨钙素表达及碱件磷酸酶活性;rCTGF干预可显著减少成骨细胞凋亡.结论 rCTGF可显著促进人成骨细胞增殖、分化,并抑制人成骨细胞凋亡.     

老年人成骨细胞骨形成功能的衰退与治疗

老年骨质疏松症病理与成骨细胞骨形成功能衰退有关。≥70岁老年人成骨细胞骨髓来源和增残能力降低，数量减少，形态出现胞体松散、变薄、埸陷、胞浆多空泡、糖原堆积和细胞器减少等退行性改变，Ⅰ型胶原、骨钙素（BGP）、胰岛素样生长因子（IGF）-1等骨形成因子的合成分泌降低。骨重建偶联因子骨保护蛋白（OPG）分泌减少，而破骨细胞分化因子（ODF）却在较高水平，与老年人骨吸收仍相对偏高有关。因此，促进成骨细胞骨形成功能治疗是老年人骨质疏松症康复的重要措施，如重组人甲状旁腺素（rhPTH)（1-34）、OPG、维生素D、他汀类药物等。补肾中药促进成骨细胞骨形成功能的研究正受到重视，在老年骨质疏松症治疗中的应用将日益广阔。     

脱氢表雄酮对离体大鼠成骨细胞的影响

目的探讨脱氢表雄酮(DHEA)对离体大鼠成骨细胞的影响。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,取传一代细胞,分别给予10-5、10-7、10-9mmol/L DHEA培养72h,以10-8mmol/L雌二醇(E2)为阳性对照,另设空白对照组。碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,MTT法检测成骨细胞的增殖能力,PNPP法测定ALP活性。行矿化结节染色,低倍镜下测量矿化结节面积并计算面积比,观察DHEA对矿化能力的影响。结果和空白对照组相比,不同浓度DHEA组成骨细胞增殖能力均有上升,其中以10-7mmol/L DHEA组最显著(P<0.01),其作用和E2相似(P>0.05);不同浓度DHEA组ALP的活性均升高,亦以10-7mmol/L DHEA组最显著(P<0.01),10-7、10-9mmol/L DHEA的作用和E2相似(P>0.05);10-9mmol/L DHEA组单位细胞数的ALP活性高于空白对照组(P>0.05)。不同浓度DHEA组矿化面积及矿化面积比均有显著增加(P<0.01),其作用和E2相似。结论DHEA在体外促进大鼠成骨细胞生长和增殖,提高ALP活性,并促进骨矿化物质在骨内沉积。     

雷公藤多甙体外对成骨细胞功能表达的影响

目的 观察雷公藤多藤多甙（ＭＴ）体外对成骨细胞（ＧＢ）功能表达的影响,以进一步探讨雷公藤（ＴＷ）致女性骨质疏松的机制。方法 分离新生ＳＤ大鼠头盖骨ＯＢ进行原代培养,经５～６ｄ至汇合,传代后加入不同浓度ＭＴ,用对硝基苯磷酸法和考马斯亮草稿 法作碱性硝酸酶（ＡＬＰ）比比活性测定,苯素红染色法作钙化结节计数测定ＯＢ矿化能力。结果 培养６ｄ,ＭＴ１μｇ／ｍｌ起显著抑制ＯＢ ＡＬＰ比活性（Ｐ〈０．０５）,培     

维生素K2对成骨细胞增殖和分化的影响

目的探讨维生素Ｋ２对体外培养的新生大鼠成骨细胞增殖与分化的影响。方法从新生大鼠颅骨分离出成骨细胞，采用细胞计数、３Ｈ－胸腺密啶核苷掺合试验、放免法测定细胞内骨钙素（ｂｏｎｅγ－ｃａｒｂｏｘｙｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＢＧＰ）浓度，观察维生素Ｋ２对成骨细胞的影响。结果实验中加入维生素Ｋ２１０－５、１０－６、１０－７及１０－８ｍｏｌ／Ｌ，成骨细胞生长数量分别为２８×１０５、２６×１０５、２９×１０５及３０×１０５／ｍｌ，ＢＧＰ分别为３８．１２±６．４７、４６．６５±４．５９、３４．３８±５．２２及３２．２２±４．８６ｎｇ／１０６细胞；而对照组为３２×１０５／ｍｌ及１９．９２±３．６７ｎｇ／１０６细胞。表明维生素Ｋ轻度抑制成骨细胞增殖，但可明显增加ＢＧＰ的含量。结论维生素Ｋ有望作为治疗骨质疏松的新药物。     

Cbfα1:成骨细胞分化的关键转录因子

核心结合因子α1(Cbfα1)是从属于runt结构域基因家族的转录因子 ,可结合于小鼠骨钙素基因 2启动子区成骨细胞特异顺式作用元件 ,并激活该基因的转录 ,此外Cbfα1还可调节成骨细胞中多个基因的表达。研究发现 ,Cbfα1过两个阶段发挥对骨形成的调节作用 :其一为胚胎期骨细胞的界定 ,其二为出生后成骨细胞的进一步分化、成熟。另外 ,Cbfα1可能通过影响核因子κB受体活化因子配体 (RANKL)的mRNA水平而调节破骨细胞的骨吸收功能。因此Cbfα1是调节成骨细胞分化和骨形成的关键转录因子。     

卡托普利对体外新生大鼠颅骨成骨细胞的影响

目的 观察卡托普利对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化的影响。方法 应用酶序列消化分离培养法培养新生大鼠颅骨成骨细胞。在新生大鼠颅骨成骨细胞体系中加入不同浓度的卡托普利,应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法、碱性磷酸酶染色法、紫外分光光度法、原子吸收光谱法鉴定成骨细胞,观察卡托普利对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶含量、钙和羟脯氨酸含量的影响。结果卡托普利能促进成骨细胞增殖,实验中最佳作用浓度是10^-11 mol/L,最佳作用时间是24h。卡托普利促进成骨细胞表达碱性磷酸酶,实验是最佳作用浓度是10^-11 mol/L,最佳作用时间是3d。卡托普利降低成骨细胞上清液中钙含量,对细胞内差劲脯氨酸的含量没有影响。结论 卡托普利有促进成骨细胞增殖和促进碱性磷酸酶表达的作用。     

结缔组织生长因子与软骨细胞及成骨细胞的增殖分化

肥大带软骨细胞和功能活跃的成骨细胞均可高水平表达结缔组织生长因子(CTGF)，CTGF可促进软骨细胞和成骨细胞的增殖，促进软骨细胞(如X型胶原)和成骨细胞相关表型(如碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原)的发生，在骨和软骨的发育以及骨量维持方面发挥重要作用。另外，CTGF还参与了骨折愈合及病变软骨的修复过程。转化生长因子-β、前列腺素E2等可能参与了CTGF基因表达的调控。     

雌二醇对大鼠成骨细胞凋亡受体mRNA表达的影响

目的建立成骨细胞体外培养模型，并研究雌二醇（E2）对体外培养大鼠成骨细胞主要凋亡受体mRNA的调节作用，探讨E2抑制成骨细胞凋亡的机制。方法用新生大鼠颅盖骨进行成骨细胞的原代培养并进行纯化和鉴定；应用TNF-α（200U／ml）以及TNF-α＋E2（10^-8mol／L）进行刺激；用AO-EB染色观察成骨细胞凋亡并计数和计算凋亡率；应用RT—PCR的方法测定成骨细胞的Fas、FasL、TNFR1、TNFR2 mRNA的相对表达量。结果10^-8mol／L的E2明显抑制由TNF-α诱导的成骨细胞Fas、TNFR1 mRNA的表达（P〈0．01），但是对FasL、TNFR2 mRNA的表达没有影响（P〉0．05）。结论雌激素可以通过调节成骨细胞凋亡受体的表达来改变成骨细胞对致死性细胞因子如TNF-α．和FasL等的凋亡敏感性，从而抑制其凋亡。选择性抑制成骨细胞凋亡受体的表达可能有助于增加成骨。     

体外培养人成骨细胞OPG、ODF基因表达与增龄相关

选择≤ 5岁 ,3 0～ 40岁 ,5 0～ 60岁 ,≥ 70岁四个年龄组的松质骨进行成骨细胞培养 ,第二代细胞培养至 14天用RT PCR检测骨保护蛋白 (OPG)、破骨细胞分化因子 (ODF)基因表达 ,结果显示不同年龄组人成骨细胞OPGmRNA、ODFmRNA表达量与年龄明显相关     

PPARγ2内源性配体对成骨细胞骨代谢相关基因表达的影响

目的 探讨PPARγ2内源性配体氧化低密度脂蛋白(Ox-LDL)、15脱氧-前列腺素J2( 15d-PGJ2)、白三烯B4(LTB4)在骨代谢中的作用.方法 体外培养大鼠成骨细胞,分别加入不同浓度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4干预24 h,RT-PCR检测成骨细胞PPARγ2、NF-κB活化受体配体(RANKL)、碱性磷酸酶(ALP)、护骨素mRNA表达水平,分别比较上述3种PPAR-γ2内源性配体对骨代谢相关基因表达的影响.结果 不同浓度Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4均呈剂量依赖性下调成骨细胞RANKL、ALP、护骨素mRNA的表达水平,同时呈剂量依赖性上调PPARγ2 mRNA的表达水平,组间比较差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 PPARγ2内源性活化配体Ox-LDL、15d-PGJ2、LTB4可能通过激活PPARγ2转录活性抑制成骨细胞成骨标记物基因的表达,从而参与增龄相关的骨质疏松的发病过程.     

氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响

目的 观察不同浓度氟对体外培养的小鼠成骨细胞增殖活力的影响。方法 采用胶原酶消化分离培养小鼠乳鼠颅盖骨成骨细胞，应用四唑盐(MTT)比色法，观察氟对培养的成骨细胞增殖活力的影响。结果 染氟0.5mg／L以下，细胞增殖活力变化不明显，染氟1．0～4．0mg／L时成骨细胞增殖活力明显增强，与对照组比较差异有显著意义，且此作用呈剂量和时间依赖性。结论 氟在一定剂量范围对体外培养的小鼠成骨细胞的增殖有促进作用。     

Osterix：与成骨细胞分化和骨形成有关的转录因子

Osterix(Osx)是一种新发现的与成骨细胞分化和骨形成有关的转录因子，只在发育的骨组织中特异性表达。Osx基因剔除的Osx(-／-)小鼠完全丧失骨形成能力。Osx(-／-)小鼠／胚胎间叶细胞仍能正常表达Runx2，Osx可能位于成骨细胞分化路径中Runx2的下游，前成骨细胞分化为成熟的成骨细胞需要Osx的存在。同时Osx可能是转录因子Sox9和软骨细胞的一种负向调控子，可阻止骨／软骨祖细胞向软骨细胞的分化。