Resistin基因对TNF-α诱导血管内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:研究抵抗素(resistin)基因对TNF-α诱导血管内皮细胞ECV304表达细胞闻黏附分子1(ICAM-1)的影响.方法:应用分子生物学技术,将resistin基因克隆到载体pEGFP-C1中构建质粒pEG/Resi,脂质体转染ECV304,转染6 h加入20 μg/L TNF-α诱导.用RT-PCR方法分别检测转染18、30、42和54h时resistin和ICAM-1 mRNA表达;同时用免疫印迹法检测resistin蛋白的表达,并用ELISA方法检测各期ECV304上清ICAM-1蛋白表达.结果:经酶切鉴定和测序证实质粒pEG/Resi构建成功并可在ECV304中表达;相同TNF-α诱导条件下转染resistin基因组的ICAM-1表达水平始终高于未转染组,在resistin基因表达高峰(30和42 h)ICAM-1 mRNA和蛋白表达量较未转染组均显著升高(P＜0.05);且ICAM-1 mRNA和蛋白表达水平均随resistin基因表达量的增加而升高.结论:Resistin基因能够增强TNF-α诱导ECV304细胞表达ICAM-1.     

TNFα对大鼠肺微血管内皮细胞NO的产生及NOS mRNA表达的影响

目的 阐明肿瘤坏死因子α（ＴＮＦα）对内皮细胞一氧化氮（ＮＯ）的产生及两型一氧化氮合酶（ＮＯＳ）ｍＲＮＡ表达的影响及其规律。方法 以大鼠微血管内皮细胞为材料,测定细胞培养上清液中ＮＯ２＾－水平并应用定量ＲＴ／ＰＣＲ技术检测内皮细胞ＮＯＳ ｍＲＮＡ表达水平。结果 应用ＴＮＦα（１００ｎｇ／ｍｌ）作用于内皮细胞６ｈ后,发现培养上清液ＮＯ２＾－水平较对照组显著升高（Ｐ〈０．０５）,而６ｈ以内两组无显著差     

黄芪注射液对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子的影响及其分子机制

目的 观察黄芪注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κβ(NF-κβ)激活与白介素-6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)分泌的影响,探讨其分子机制.方法 体外培养的第2代HUVECs用于实验,免疫组织化学分析检测细胞NF-κβ亚单位p65的表达程度,Western blot检测核内NF-κβ含量变化,ELISA法检测培养液中IL-6、ICAM-1浓度.结果 TNF-α有效激活NF-κβ并诱导HUVECs分泌IL-6、sICAM-1增加;黄芪注射液预先孵育2 h能抑制NF-κβ表达并减轻TNF-α诱导的上述反应.结论 TNF-α可能通过激活NF-κβ使IL-6、sICAM-1增加,从而损伤血管内皮功能;黄芪注射液对上述反应有拮抗作用,推测是通过抑制NF-κβ途径实现血管内皮保护功能.     

不同剂量雌激素对大鼠脑缺血-再灌注后ICAM-1，TNF-α表达的影响

目的：探讨不同剂量雌激素对雄性大鼠脑缺血-再灌注损伤后脑保护作用及其可能的机制．方法-选用雄性sD大鼠200只,体质量250—300g,随机分为5大组：假手术组（SO组）,缺血-再灌注组（I／R组）,雌激素大剂量组（EC组）、中剂量组（EB组）、小剂量组（EA组）、雌激素治疗组（E：组）,每组大鼠40只．应用免疫组化法测定大鼠大脑皮质ICAM-1,TNF-α表达情况．采用两样本均数的t检验对数据进行分析．结果：大鼠200只均进入结果分析,I／R组各时间点ICAM-1,TNF-α的表达24h峰值分别为（94．62±5．72）,（41．68±2．46）,高于SO组[（2．32±0．41）,（1．88±0．28）,P〈0．01]和E：各剂量治疗组[（68．28±4．14）,（39．35±6．63）,（40．90±6．09）和（19．22±0．96）,（11．92±1．36）,（12．75±1．03）,P〈0．05]．在E2组各剂量组中在3,24,48h,雌激素EA组的表达高于EB及EC组（P〈0．05）;EB,EC组间在各灌注时间点差异无统计学意义．在表达时间上,I／R组和E2组缺血2h再灌注3h即有ICAM-1开始表达,在12h明显升高,24h达到高峰．结论：雌激素可能通过抑制TNF-α的激活,减少ICAM-1的表达起到脑保护的作用,且雌激素的脑保护作用呈一定的量效关系．     

TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的研究

血管内皮细胞对维持心血管系统的正常功能有着重要的作用,它的凋亡引起的血管萎缩衰退,不仅在临床上造成很多人类疾病而且会促进感染性休克的发生、发展。肿瘤坏死因子α有着强大的细胞毒性,可以造成血管内皮细胞凋亡。本文对肿瘤坏死因子α造成血管内皮细胞凋亡的机制进行综述。     

姜黄素对TNF-α诱导的HUVEC表达ICAM-1的调节作用

目的 :细胞间黏附分子(intercellular adhesion molecule,ICAM)-1在炎症性肠病患者肠道炎症的发生中起着十分重要的作用。肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α可诱导内皮细胞ICAM-1的过度表达。本研究通过姜黄素干预人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC),观察姜黄素是否能够影响TNF-α诱导ICAM-1的表达。方法:从新生儿脐带中获取HUVEC进行原代培养,取第3~5代的细胞,并将其分成3个实验组:空白对照组,不做处理;TNF-α组,加入10 ng/ml TNF-α干预3 h;姜黄素组,先加入10μmol/L姜黄素干预2 h,再加入10 ng/ml TNF-α干预3 h。通过流式细胞仪检测3组HUVEC细胞表面ICAM-1的表达量;同时通过免疫荧光技术观察3组细胞表达ICAM-1的荧光强度;Real-time PCR技术检测3组细胞中ICAM-1 m RNA的表达。结果:1流式细胞检测发现,TNF-α组中HUVEC表面ICAM-1的表达较空白对照组明显增加[(88.69±3.14)%vs(9.82±1.21)%,P<0.01];姜黄素组中ICAM-1表达[(41.85±8.39)%]较TNF-α组明显下降(P<0.01),但高于空白对照组(P<0.01);2免疫荧光检测也显示,TNF-α组中HUVEC细胞表面ICAM-1的表达强度明显高于空白对照组,而姜黄素组ICAM-1的表达强度较TNF-α组减弱。3Real-time PCR显示,TNF-α组中ICAM-1 m RNA的表达较空白对照组增加(34.70±14.99 vs 1.03±0.26,P<0.05);姜黄素组中ICAM-1 m RNA表达(15.34±8.42)较TNF-α组下降(P<0.01),比空白对照组增加(P<0.05)。结论:姜黄素可抑制TNF-α诱导的HUVEC表面ICAM-1蛋白的表达,这与其能够抑制细胞内ICAM-1 m RNA的表达有关。     

早期小剂量糖皮质激素对儿童重症肺炎血清TNF-α、sICAM-1水平的影响

目的观察早期小剂量糖皮质激素对儿童重症肺炎血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)水平的影响。方法选取2014年4月—2015年3月陕西省人民医院儿科收治的重症肺炎患儿82例,根据抽签法随机分为观察组和对照组,每组41例。对照组采取常规治疗,观察组早期给予小剂量糖皮质激素。记录比较2组患儿的体征与症状好转时间,治疗前和治疗7d后血气和炎性因子指标,并进行临床疗效评价。结果观察组总的临床疗效明显高于对照组[92.68%(38/41)vs.73.17%(30/41),χ~2=5.513,P<0.05]。观察组咳嗽消失、体温恢复正常、肺外症状好转及住院时间明显短于对照组[(9.23±1.32)d、(3.04±0.32)d、(5.24±0.63)d、(10.23±1.45)d vs.(14.28±1.38)d、(5.15±1.03)d、(8.31±1.35)d、(15.37±2.34)d,t=16.933、12.527、13.195、11.956,P<0.01]。治疗后7d,观察组的氧分压(PO_2)、二氧化碳分压(PCO_2)水平明显高于对照组[(9.24±2.42)kPa、(5.43±1.24)kPa vs.(8.21±1.45)kPa、(4.56±0.97)kPa,t=2.338、3.539,P<0.05,P<0.01]。治疗后7d,观察组的TNF-α、sICAM-1明显低于对照组[(26.43±2.45)ng/L、(15.32±4.15)ng/L vs.(53.21±5.32)ng/L、(24.19±4.87)ng/L,t=29.277、8.877,P<0.01],而IL-10高于对照组[(115.32±17.43)pg/ml vs.(87.42±15.32)pg/ml,t=7.698,P<0.01]。结论重症肺炎患儿早期给予小剂量短疗程糖皮质激素治疗,能明显改善血气指标及血清TNF-α、sICAM-1水平,有效地缓解患儿的临床症状,临床疗效显著。     

黄芪对梗阻性黄疸幼鼠肝细胞TNF-α及ICAM-1表达的影响及意义

目的：探讨肿瘤坏死因子（TNF‐α）、细胞间黏附分子‐1（ICAM‐1）在梗阻性黄疸（OJ）肝细胞损伤中的作用,以及黄芪对OJ幼鼠肝细胞TNF‐α及ICAM‐1表达的影响及临床意义。方法将90只Wistar大鼠随机分为正常对照组、OJ组、OJ＋黄芪（A）三组,OJ＋A组给予黄芪注射液250 mg／100 g体质量腹腔注射,作用7 d后应用放射免疫法检测各组血清TNF‐α含量,免疫组织化学法检测肝细胞 TNF‐α、ICAM‐1的表达。结果①血清检测：ALT在OJ及OJ＋ A明显高于对照组,在OJ组明显高于OJ＋A组;DBIL在OJ组与OJ＋A无显著差别。②OJ组及OJ＋A组血清TNF‐α含量明显高于正常对照组;OJ组实验鼠血清TNF‐α高于OJ＋黄芪组;③TNF‐α及ICAM‐1在肝细胞的表达：OJ组及OJ＋A组的表达较正常对照组明显增强,OJ组表达强于OJ＋A组。结论本研究结果表明OJ大鼠出现肝功能损害,肝细胞TNF‐α、ICAM‐1表达增强;应用黄芪有助于减轻OJ所致的肝功能损害,对肝细胞有保护作用,其机制可能与降低肝细胞内TNF‐α、ICAM‐1表达有关。     

sVCAM-1、TNF-α在妊娠高血压发病机制中的作用

妊娠高血压(pregnancy-induced hypertension，PIH)是妊娠期严重危害母婴健康的疾病之一，其病因目前尚不清楚。随着生殖免疫学研究的不断发展，免疫机制在PIH发病中的作用日益受到重视。黏附分子是多细胞生物的重要功能分子，它不仅是急性排斥反应的始动因素，而且在免疫应答、对移植物排斥反应及血管内皮细胞活化中起重要作用。     

谷氨酰胺对肝移植大鼠肠黏膜NF-κB、ICAM-1、TNF-α表达的影响

目的 研究谷氨酰胺(Glutamine,Gln)对原位肝移植(orthotopic liver transplantation,OLT)大鼠肠黏膜内核转录因子-κB(NF-κB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响.方法 选择健康雄性Wistar大鼠70只,按随机数字表法分为对照组(n=10)、原位肝移植组(OLT组,n=30)和原位肝移植+Gln组(EEN组,n=30);对照组只分离肝十二指肠韧带,OLT组和EEN组按改良的两袖套法进行原位肝移植.EEN组受体在术前3d、术后3h开始给予肠内营养混悬液能全力+谷氨酰胺灌胃,OLT组及对照组受体仅给予肠内营养混悬液.对照组分离肝十二指肠韧带12 h后,OLT组和EEN组肝移植后12、24、72 h分别取回肠肠壁组织免疫组化测定肠组织NF-κB与ICAM-1的表达,荧光定量PCR(fluorescence quantitive-polymerase chain reaction,FQ-PCR)测定肠黏膜TNF-α mRNA表达、HE染色观察回肠组织的病理改变,测定微绒毛长度.结果 与对照组比较OLT组和EEN组肝移植后12、24、72 h,NF-κB、ICAM-1、TNF-αmRNA表达明显升高,肠黏膜损害明显加重,差异有统计学意义(P＜0.01);而肝移植后12、24、72 h EEN组与OLT组比较,NF-κB、ICAM-1、TNF-α mRNA表达明显下降,肠黏膜损害明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 大鼠原位肝移植可引起肠组织中NF-κB活化,ICAM-1、TNF-α表达上调导致肠黏膜屏障损伤,Gln能抑制肝移植大鼠肠黏膜NF-κB活性,减少ICAM-1、TNF-α的表达而起到肠黏膜保护作用.     

病毒性心肌炎小鼠血清ICAM-1和TNF-α的变化及意义

目的探讨病毒性心肌炎小鼠血清细胞间黏附分子-1(intercellu lar adhesion molecu le-1,ICAM-1)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)的水平及两者的相关性和心肌病理变化。方法Balb/c雄性小鼠随机分为两组:正常对照组和柯萨奇B3病毒感染组,测定不同时期血清TNF-α和ICAM-1的水平和心肌病理变化。结果感染组7 d和14 d ICAM-1及TNF-α的水平和心肌病理变化均高于对照组,血清中ICAM-1与TNF-α水平呈正相关。结论ICAM-1与TNF-α在不同时期水平变化表明它们在病毒性心肌炎的发生发展中发挥重要作用。     

TNF-α诱导支气管上皮细胞表达ICAM-1

目的：探讨支气管上皮细胞活化对ICAM-1基因和细胞表面ICAM-1蛋白质表达的影响。方法：用10ng／ml TNF-α作用于正常培养的支气管上皮细胞（BEAS-2B）12h，通过RT-PCR分析ICAM-1在BEAS-2B细胞中的基因表达和用流式细胞仪分析ICAM-1在BEAS-2B细胞表面蛋白质量。结果：TNF-α与BEAS-2B细胞共同培养12h。可上调BEAS-2B细胞ICAM-1基因的表达和增加BEAS-2B细胞表面的ICAM-1蛋白质量。结论：TNF-α可诱导BEAS-2B细胞ICAM-1基因和蛋白质表达。     

TNF-α对人脐静脉内皮细胞中NO和eNOS的影响

目的 讨论肿瘤坏死因子-α（TNF—α）对内皮细胞一氧化氮（NO）产生及内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性的影响。方法 以人脐静脉内皮细胞（HUVEC）为实验材料，检测与不同浓度TNF—α作用不同时间后．细胞培养上清液和细胞中NO水平的变化，以及细胞eNOS活性的改变。结果 （1）随着TNF—α浓度的升高，eNOS的活性减弱，而细胞和上清液中NO的含量增加；（2）随着干预时间的延长，eNOS的活性减弱；而细胞和上清液中NO的含量在作用24h后升高，且明显高于对照组；（3）L一单甲基精氨酸（L—NMMA）和地塞米松（DXM）均能阻断TNF-α引起的细胞和细胞上清中NO的表达增加。结论 TNF-α降低eNOS活性，却在高浓度和长时间作用后增加NO的合成，可能与激活诱导型一氧化氮合酶有关，因为NO的变化可以被L—NMMA和DXM阻断。     

内皮型一氧化氮合酶在TNF-α和AngⅡ致内皮细胞凋亡中的作用

目的 探讨TNF-α和AngⅡ在导致内皮细胞凋亡过程中eNOS的表达变化以及NF-κB在这一过程中的作用．方法对NF-κB的抑制剂PDTC预处理和未预处理的原代培养脐静脉内皮细胞，用TNF-α和AngⅡ分别来进行干预，后用RT-PCR来检测eNOS的mRNA表达，Western blot来检测eNOS和IκBα的蛋白表达，EMSA来检测NF-κB的活性，TUNEL法来检测细胞的凋亡．结果 在TNF-α和AngⅡ的干预下，eNOS的mRNA和蛋白表达与对照组比较显著下降（P〈0．05），细胞凋亡发生显著增加（P〈0．05）；NF-κB的抑制剂PDTC能抑制TNF-α和AngⅡ引起的细胞凋亡的发生，但未能抑制住TNF-α和AngⅡ引起eNOS表达的下降．结论 在TNF-α和AngⅡ作用于内皮细胞时，eNOS和NF-κB对防止细胞凋亡都有保护作用，但NF-κB没有参与TNF-α和AngⅡ引起eNOS表达下降的过程．     

辛伐他汀对兔硬化髂动脉TNF-α的影响

目的研究辛伐他汀对兔粥样硬化髂动脉肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响. 方法30只雄性新西兰大白兔,分别予普通饲料喂养(n=8)及高脂喂养(胆固醇1g/d,猪油10g/d;n=22)6周.高脂喂养2周后行髂动脉内膜球囊损伤术;术后辛伐他汀组(n=12)予辛伐他汀15mg/d;分组喂养4周后处死所有动物取一侧病变髂动脉做病理切片,用免疫组化方法观察TNF-α的表达情况;取另一侧病变髂动脉抽提总RNA和总蛋白,分别应用半定量逆转录多聚酶链式反应和Western蛋白印迹测定TNF-αmRNA和蛋白质水平的表达. 结果辛伐他汀可以显著降低兔血浆总胆固醇,降低粥样硬化髂动脉组织TNF-α的表达,正常对照组、基础对照组和辛伐他汀组动脉壁 TNF-α mRNA的相对值分别为0.16±0.024、0.56±0.050、0.37±0.031,相互间有统计学差异(P＜0.05),Western blot 检测和免疫组化结果一致. 结论辛伐他汀可以显著降低兔粥样硬化髂动脉组织TNF-α的表达.     

被动吸烟对血管内皮舒张功能和血清TNF-α的影响

目的 探讨被动吸烟对健康青年人血管内皮舒张功能和血清肿瘤坏死因子（TNF-α）的影响。方法 采用超声肱动脉内径测量法，观察被动吸烟、主动吸烟及正常对照组各30例血流介导和硝酸甘油介导的肱动脉内径变化；同时测定各组外周血清TNF-α含量。结果 三组肱动脉内径基础值及硝酸甘油介导的肱动脉舒张差异均无统计学意义（P〉0．05），而血流介导的血管扩张被动吸烟组与正常对照组间差异有统计学意义（P〈0．01），与吸烟组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。主、被动吸烟组TNF-α含量均高于正常组（P〈0．01），而两组间差异无统计学意义。结论 被动吸烟导致健康青年人群血管内皮舒张功能损伤可能与血清TNF-α增加有关。     

丹参单体对TNF-α诱导大鼠动脉平滑肌细胞NF-Κb和ICAM-1的影响

目的观察丹酚酸B和丹参酮ⅡA对肿瘤坏死因子(TNF-α)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)核因子κB(NF-κB)和细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响,探讨丹参单体抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制。方法体外培养大鼠主动脉VSMC;RT-PCR法和免疫细胞化学法检测VSMCICAM-1mRNA和ICAM-1蛋白的表达;细胞ELISA和免疫细胞化学法检测NF-κB的表达。结果TNF-α上调VSMCICAM-1mRNA和ICAM-1蛋白的表达,提高NF-κB水平(P<0.01)。两种丹参单体都抑制上述因子的表达,以丹酚酸B效果更佳。结论丹参单体抗AS的机制之一是抑制炎症相关因子的表达,丹酚酸B抗炎效果优于丹参酮ⅡA。