激活蛋白-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的相关性研究

目的探讨激活蛋白-1(AP-1)在结直肠癌及癌周组织中与 DNA探针结合活性的变化及 AP-1信号转导通路活化与结直肠癌转移的关系.方法采用电泳迁移率分析方法,检测 30例结直肠癌手术切除标本及癌旁 2 cm、5 cm组织和远癌切端组织中 AP-1与 DNA探针的结合活性;采用定量逆转录聚合酶链式反应方法检测各位点血管内皮细胞生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) mRNA转录水平.结果结直肠癌组织 AP-1与 DNA探针的结合活性明显高于癌旁 5 cm组织和远癌切端组织(P< 0.01);结直肠癌组织 AP-1结合活性与肿瘤浸润程度、淋巴结转移呈明显正相关(P< 0.01),而与肿瘤组织学分型以及肿瘤分化程度无显著相关性(P >0.05).结直肠癌组织 VEGF、MMP-9 mRNA转录水平明显高于癌旁组织和癌远切端组织(P< 0.01,P< 0.05).结直肠癌组织 AP-1结合活性增强与 VEGF、MMP-9高表达显著相关(P< 0.01).结论 AP-1信号转导通路与结直肠癌浸润和转移过程密切相关;此通路的活化参与肿瘤转移过程中肿瘤新生血管生成和细胞外基质降解.     

Survivin mRNA 及 BCL-2、VEGF蛋白在直肠癌组织中的表达及意义

目的研究survivinmRNA及Bcl-2、VEGF蛋白在结直肠癌组织中的表达及意义。方法应用组织芯片技术制作正常直肠、腺瘤组织标本各16例及结直肠癌80例石蜡标本,采用原位分子杂交检测survivinmRNA,免疫组织化学SP法检测Bcl-2、VEGF蛋白,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测结直肠癌细胞的凋亡指数。结果(1)正常直肠组织平均survivinmRNA阳性细胞率为8.29%±3.75%,腺瘤组织平均阳性细胞率为20.30%±5.50%,结直肠癌组织平均阳性细胞率为38.07%±8.71%,三者比较,差异有显著性(P<0.01),结直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的survivinmRNA阳性细胞率无统计学差异(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移的survivinmRNA阳性细胞率有统计学差异(P<0.05);(2)结直肠癌组织Bcl-2、VEGF蛋白表达水平明显高于正常直肠组织和腺瘤(P<0.01),结直肠癌组织survivinmRNA阳性细胞率升高与Bcl-2、VEGF蛋白高表达显著相关(P<0.01);(3)结直肠癌survivinmRNA表达程度不同的结直肠癌细胞凋亡指数(apoptosisindex,AI)间存在显著性差异(P<0.01);(4)survivinmRNA阳性细胞率高患者平均生存期为31.6个月,阳性细胞率低患者为45.2个月,前者的年累计生存率(71.43%,20/28)显著低于阳性细胞率低性者(88.89%,40/45)(P<0.05)。结论结肠直肠腺癌中survivin及Bcl-2、VEGF的过表达共同参与了肿瘤的发生,发展,浸润,转移,联合检测上述标志物有一定的临床意义。     

VEGF、MMP-9和PCNA在结直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的检测和对比血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、基质金属蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、增殖细胞核抗原(PCNA)在结直肠癌组织、正常组织中的表达水平,研究三者的相互关系以及临床意义。方法收集78例结直肠癌患者的术后结直肠癌组织样本和正常结直肠组织样本,采用免疫组化SP法检测样本中VEGF、MMP-9和PCNA的表达水平,对其结果进行对比分析。结果 VEGF、MMP-9和PCNA在结直肠癌组织的阳性表达率均高于正常结直肠组织(P<0.05),且与分化程度、浸润深度、Dukes分期和淋巴结转移等临床病理特征相关(P<0.05);VEGF与MMP-9、PCNA,MMP-9与PCNA的表达均呈正相关(P<0.05)。结论结直肠癌组织中VEGF、MMP-9的高表达可促进PCNA的增加,三者的高表达提示结直肠癌的恶化程度高以及有癌组织转移的危险。     

AP-1和MMP-9蛋白在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨转录因子激活蛋白-1(activating protein-1,AP-1)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达特点、相互关系及临床意义.方法 采用免疫组化SABC方法检测比较56例HCC组织和癌旁正常肝组织中AP-1和MMP-9的表达,分析两者与临床病理因素的相关性.结果 HCC组织中AP-1 (c-Jun/c-Fos)和MMP-9阳性表达率均明显高于癌旁正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05).c-Jun和c-Fos蛋白的表达与患者肝内转移、病理分级、TNM分期明显相关(P<0.05或者P<0.01).MMP-9蛋白表达与患者有无肿瘤包膜、肝内转移、TNM分期明显相关(P<0.05或者P<0.01).HCC组织中AP-1(c-Jun/c-Fos)和MMP-9表达呈正相关(r=0.535,P<0.01).结论 AP-1、MMP-9在HCC的发生发展过程中起着重要的作用;AP-1可能通过上调MMP-9的表达和活性而促进HCC的浸润和转移.     

FAK和MMP-9蛋白在结直肠癌组织中的表达及相关性研究

目的 探讨斑激酶(focal adhesion kinase , FAK)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase,MMP-9)在结直肠癌中的表达.方法 采用免疫组化法检测了67例结直肠癌和癌旁组织以及51例正常结直肠黏膜组织中FAK和MMP-9的表达,并比较了不同临床病理参数下FAK和MMP-9的表达情况.结果 结直肠癌组织FAK阳性表达(77.6%,52/67)高于癌旁组织(50.8%,34/67)和正常结直肠黏膜组织(37.3%,19/51),结直肠癌组织中MMP-9染色阳性率(73.1%,49/67)高于癌旁组织(49.3%,33/67)和正常结直肠黏膜组织(31.4%,16/51),不同肿瘤分化、局部分期以及有无淋巴结转移者FAK和MMP-9表达水平存在差异(P<0. 05).结论 FAK和MMP-9在结直肠癌组织高表达,且FAK和MMP-9表达呈正相关,可能成为判断结直肠癌预后的指标之一.     

整合素及相关信号转导因子在结直肠癌转移中的作用机制

目的研究整合素αvβ3、黏着斑激酶(FAK)、纤连蛋白(FN)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在结直肠癌转移中的作用机制。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(SQRT-PCR)和免疫组织化学方法,检测30例结直肠癌标本中整合素αvβ3、FAK、FN和MMP-9mRNA转录水平和蛋白表达变化。结果结直肠癌组织中整合素αvβ3亚基转录水平明显增高(P<0.05),FAK、FN和MMP-9mRNA转录水平随肿瘤浸润深度增加和Dukes分期进展而升高(P<0.05),且在淋巴结转移组升高明显(P<0.05);FAK和细胞外基质中FN、MMP-9蛋白表达水平与其基因mRNA转录水平改变相一致,但基底膜上的FN蛋白表达改变则完全相反。结论结直肠癌细胞转移初始阶段,FN-整合素αvβ3-细胞骨架-FAK系统由细胞外向细胞内传递信号,产生MMP-9等因子,完成癌细胞脱落、黏附、降解、转移的过程,且上述基因的转录、表达水平越高,结直肠癌的侵袭转移潜能越强。     

碳酸酐酶Ⅸ在直肠癌中的表达及其与血管内皮生长因子和肝转移关系

目的 检测缺氧标记物碳酸酐酶Ⅸ(CA-Ⅸ)在128例直肠癌不同部位组织中的表达,探讨它与直肠癌肝转移及与血管内皮生长因子(VEGF)的关系,了解其对直肠癌细胞体外生长能力的影响.方法 以CA-Ⅸ和VEGF为研究对象,应用蛋白免疫印迹方法检测两者在正常直肠组织,直肠腺瘤,直肠癌患者原发癌灶、系膜组织、肝转移组织中的差异性表达,判断它们作为直肠癌和直肠癌转移相关因子的意义.观察CA广谱抑制剂乙酰唑胺对体外直肠癌细胞生长能力的影响.结果有肝转移的直肠癌患者原发灶中VEGF和CA-Ⅸ阳性率均为83.3%,高于正常直肠组织(16.7%和0%)、直肠腺瘤(16.7%和36.7%)和无肝转移直肠原发癌灶(72.1%和65.4%)(P<0.01),肝转移直肠癌患者系膜组织中VEGF和CA-Ⅸ阳性率也高于无肝转移患者,但差异无统计学意义(P>0.05),VEGF与CA-Ⅸ表达和肝转移发生无明显相关.乙酰唑胺能提高不同浓度5-氟尿嘧啶(5-Fu)体外对直肠癌细胞的杀伤能力(P<0.05).结论 CA-Ⅸ在直肠癌组织中高表达,对直肠癌细胞生长增殖有促进作用,但不宜作为诊断肝转移的独立因子.     

FHIT mRNA在结直肠癌中的表达及其与细胞凋亡的相关性

目的研究脆性组氨酸三联体基因(FHIT mRNA)在结直肠癌组织中的表达以及与结直肠癌细胞凋亡的相关性。方法应用组织芯片技术制作正常直肠痔组织、腺瘤组织标本各16例及结直肠癌80例石蜡标本,采用原位分子杂交检测FHIT mRNA,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测结直肠癌细胞的凋亡指数。结果(1)正常直肠组织平均FHIT mRNA阳性细胞率为45.67%±9.39%,腺瘤组织平均阳性细胞率为23.45%±5.06%,结直肠癌组织平均阳性细胞率为15.1%±4.11%,三者比较,差异有统计学意义(P<0.01),结直肠癌患者不同年龄、性别、肿瘤部位、大小、血清CEA水平、组织学类型的FHIT mRNA阳性细胞率无统计学差异(P>0.05);不同分化程度、病理分期、淋巴转移的FHIT mRNA阳性细胞率有统计学差异(P<0.05);(2)FHIT mRNA表达程度不同的结直肠癌细胞凋亡指数(apoptosis index,AI)间存在显著性差异(P<0.01);(3)FHIT mRNA阳性细胞率高患者平均生存期为42.7个月,阳性细胞率低患者为29.8个月,前者的年累计生存率(88.10%,37/42)显著低于阳性细胞率低者(74.19%,23/31)(P<0.01)。结论FHIT基因可能参与结直肠癌细胞凋亡的调节,FHIT基因表达下降可能与结直肠癌的发生密切相关。     

整合素α5β1和血管内皮生长因子在结直肠癌中的表达及临床意义

目的 探讨结直肠癌中整合素α5β1和血管内皮生长因子(VEGF)的表达与各临床病理因素的关系,以及两者在结直肠癌中表达的相关性.方法 对116例结直肠癌患者采用原位杂交染色方法检测正常结直肠黏膜及结直肠癌组织中α5β1和VEGF的表达.结果 结直肠癌组织中α5β1和VEGF的表达阳性率分别为56.00％和61.29％,正常结直肠黏膜两者表达的阳性率分别为4％、6％,与正常结直肠黏膜中的表达阳性率比较差异有统计学意义(P＜0.05);α5β1及VEGF两者表达与性别、年龄、肿瘤大小无明显相关(P＞0.05),在组织学分化差、淋巴结转移、Dukes'分期高者α5β1和VEGF表达率增高,而且浸润深度较深者VEGF表达率增高,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);在结直肠癌组织中α5β1表达和VEGF表达呈正相关(rs=0.63,P＜0.01).结论 α5β1和VEGF在结直肠癌组织中表达增高,提示其参与结直肠癌的发生、发展.     

结直肠癌转移相关基因表达及其临床病理意义

目的评价P53、血管内皮生长因子(VEGF)、上皮钙黏附蛋白(E-CD)、α-连环蛋白(α-CA)及β-连环蛋白(β-CA)在结直肠癌转移潜能和预后判断中的价值。方法应用免疫组织化学ABC法检测76例结直肠癌组织中P53、VEGF、E-CD、α-CA及β-CA的表达。结果(1)结直肠癌组织中P53表达阳性率为47.4%,伴有肝转移的结直肠癌P53阳性表达率明显高于无肝转移者(P<0.05);VEGF表达阳性率为57.9%,VEGF表达阳性的结直肠癌易发生淋巴结转移和肝转移(P<0.01);E-CD、α-CA和β-CA表达在结直肠癌组织中均明显减弱,且与结直肠癌的分化程度密切相关(P<0.01);E-CD表达与结直肠癌转移无明显的相关关系(P>0.05);α-CA、β-CA表达减弱与结直肠癌淋巴结转移显著相关(P<0.01),但与肝转移发生无相关(P>0.05)。(2)P53与VEGF表达显著相关(P<0.05)。(3)Cox模型多因素分析表明,P53和VEGF表达阴性的结直肠癌患者预后较好,而α-CA和β-CA表达减弱者预后较差(P<0.01)。结论结合分析P53、VEGF、α-CA及β-CA的表达有助于对结直肠癌转移方式、转移潜能及预后的判断。     

脆性组氨酸三联体基因蛋白在直肠癌组织中的表达及其与细胞凋亡的相关性研究

目的探讨脆性组氨酸三联体基因蛋白(FHIT)在直肠癌组织中的表达情况及其与细胞凋亡间的关系。方法利用组织芯片和免疫组织化学技术,检测16例正常直肠和16例腺瘤组织标本及80例直肠癌组织中的FHIT、Bax、Bcl-2和survivin基因蛋白的表达,并运用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术(TUNEL)检测直肠癌细胞凋亡。结果(1)直肠癌组织FHIT蛋白异常表达率为53.8%(43/80),其表达减弱与患者年龄、性别及肿瘤组织分型无关(P>0.05);而与肿瘤Dukes分期、淋巴结转移和患者的5年生存率关系密切(P<0.05,P<0.01)。(2)Bax、Bcl-2和survivin在直肠癌组织中的表达率分别为72.5%、51.3%和77.5%;survivin蛋白高表达与FHIT蛋白低表达密切相关(P<0.05);FHIT蛋白表达下降的同时,Bcl-2上调及Bax下调(P<0.01)。(3)FHIT蛋白表达减弱时细胞凋亡指数(AI)也下降;FHIT蛋白不同表达组间的AI比较,P<0.01。结论FHIT基因表达下降可能与直肠癌的发生密切相关,FHIT基因可能参与肿瘤细胞凋亡的调节。     

中期因子、VEGF及MMP-2在结直肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨中期因子(MK)、血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在结直肠癌组织中的表达及临床意义。方法选取2013年2月至2016年2月89例结直肠癌患者癌组织,同时选取癌旁组织作为对照,采用免疫组织化学检测MK、VEGF和MMP-2表达。数据分析采用SPSS 19.0软件,两种组织中MK、VEGF及MMP-2阳性表达率以及与临床特征关系比较使用χ2检验,三者的表达相关性采用Spearman秩相关分析。P0.05表示差异具有统计学意义。结果结直肠癌组织MK、VEGF及MMP-2阳性表达率分别为80.9%、83.2%和89.9%,明显高于癌旁组织(P0.05);Duke分期C-D期患者MK、VEGF及MMP-2阳性表达率分别为93.4%、93.4%和96.7%,明显高于A-B期患者(P0.05);有淋巴结转移患者MK、VEGF及MMP-2阳性表达率分别为93.6%、93.6%和97.9%,明显高于无淋巴结转移患者(P0.05);MK、VEGF及MMP-2阳性表达与结直肠癌患者性别、年龄、肿瘤大小、部位及组织分化无关(P0.05);结直肠癌组织MK表达与MMP-2和VEGF表达呈正相关(r=0.774和0.406,P0.05)。结论 MK、VEGF及MMP-2在结直肠癌组织中的高表达,与Dukes分期和淋巴结转移有一定关系。     

MMP-3在结直肠腺瘤及结直肠癌中的表达与临床意义的相关性研究

目的探讨基质金属蛋白酶MMP-3在结直肠腺瘤及结直肠癌中表达与临床病理参数间相关性。方法应用免疫组织化学方法检测MMP-3在20例结直肠腺瘤和60例结直肠癌中的表达。结果 MMP-3在20例结直肠腺瘤及60例结直肠癌中,阳性表达率分别为10%、41.7%(P=0.031)。MMP-3的阳性表达与淋巴结转移(P=0.017)呈正相关,与预后呈负相关。结论 MMP-3的上调表达可能参与了结直肠癌的发生、发展、浸润及转移,对临床上判断预后具有较大意义。     

结直肠癌组织中p27基因甲基化与其临床病理的关系

目的 检测结直肠癌组织中p27基因启动子区CpG岛甲基化水平及其表达,并结合其临床病理参数进行分析,探讨其在结直肠癌发生发展中的作用.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应分析技术检测106例结直肠癌组织及其正常结直肠黏膜组织、22例结肠腺瘤组织中p27基因启动子甲基化,用免疫组织化学SP方法检测其蛋白表达.结果 本组结直肠癌组织中p27甲基化阳性率为59.4%(63/106),结肠腺瘤组织中为18.2%(4/22),而正常结直肠黏膜组织中为3.8%(4/106),前组与后两组之间相比差异有统计学意义(P＜0.05).低分化组结直肠癌组织中p27甲基化阳性率明显高于高中分化组(48.0%比24.7%,P＜0.05);Dukes-A+B期组与C+D期组之间相比差异有统计学意义(20.0%比41.2%,P＜0.05);有无淋巴结转移两组之间的阳性率相比差异有统计学意义(41.5%比23.1%,P＜0.05);浸润深达浆膜层的结直肠癌组织中的甲基化阳性率与未达浆膜层组相比差异无统计学意义(32.5%比24.1%,P＞0.05).结论 结直肠癌组织中存在p27基因启动子甲基化.p27基因的高甲基化与结直肠癌分化程度、浸润深度、Dukes分期及有无淋巴结转移有关.

Abstract：

Objective To investigate the relationship between p27 gene methylation and pathology of colorectal carcinoma. Methods p27 gene methylation promotor region and p27 protein expression were detected respectively by methylation specificity polymerase chain reaction and immunohistochemical staining SP in 106 cases of colorectal carcinoma and each adjacent normal mucous membrane tissue and 22 cases of colorectal adenoma tissue. Results The positive expression rate of p27 gene methylation was statistically different in colorectal carcinoma tissue compared with normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue (P＜0.05). Their positive expression rate were 59.4% (63/106), 18.2% (4/22) and 3.8%(4/106) respectively in colorectal carcinoma tissue,colorectal adenoma and normal mucous membrane tissue (P ＜ 0. 05). p27 gene methylation in poorly differentiated group was significantly higher than that in welldifferentiated group (48.0% vs. 24. 7%, P ＜0. 05), in Dukes-A + B stage group was significantly lower than that in Dukes C + D stage group(20. 0% vs. 41.2%, P ＜ 0. 05 ), and it was higher in lymph nodes metastases group than that in lymph nodes negative group(41.5% vs. 23. 1%, P ＜0. 05), that in positive serosa infiltration group was higher than negative serosa infiltration group(32. 5% vs. 24. 1%, P ＞ 0. 05 ).Conclusions Methylated p27 gene protein expression in colorectal carcinoma was significantly higher than normal mucous membrane and colorectal adenoma tissue. The methylation rate of p27 gene in colorectal carcinoma was significantly associated with tumor differentiation, invasive depth, Dukes stage, lymph node metastasis.     

VEGF-C与中低位直肠癌淋巴转移的相关性研究

目的 探讨中低位直肠癌组织中血管内皮生长因子-C（VEGF-C）表达与肿瘤淋巴转移的关系。方法 采用RT-PCR方法测定97例中低位直肠癌组织中VEGF浓度及组织中VEGF蛋白的表达。结果 VEGF-CmRNA在中低位直肠癌组织中的表达显著高于癌旁组织和正常组织（P〈O．01）；VEGF-C mRNA与中低位直肠癌病理分期、分化程度密切相关（P〈0．05），有淋巴转移的中低位直肠癌组织中的表达显著高于无淋巴转移者（P〈0．01）。结论 中低位直肠癌组织中VEGF-C与癌肿的浸润和转移密切相关，术前癌肿组织VEGF-C mRNA可作为评价中低位直肠癌预后的有用指标。     

MMP-3在大肠腺瘤及大肠癌中的表达与临床意义

为探讨基质金属蛋白酶3（MMP-3）在大肠腺瘤及大肠癌中的表达与临床病理参数间的相关性,应用免疫组织化学方法检测MMP-3在20例大肠腺瘤和60例大肠癌中的表达。结果显示,（1）MMP-3在20例大肠腺瘤及60例大肠癌中,阳性表达率分别为10％和41．7％（P=0．031）。（2）MMP-3的阳性表达与淋巴结转移（P=0．017）呈正相关,与预后呈负相关。结果表明,MMP-3的上调表达可能参与了大肠癌的发生、发展、浸润及转移,对临床上判断预后具有较大意义。     

血管内皮生长因子和基质金属蛋白酶-9在胃癌中的表达及其在浸润和转移中的作用

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)和基质金属蛋白酶 -9(MMP -9)在胃癌发展、浸润和转移中的作用。方法　应用免疫组织化学法检测 42例胃癌前病变和 5 2例胃癌组织中VEGF和MMP -9表达情况。结果　VEGF随胃癌的发展阳性率逐渐增高 (P <0 .0 5 ) ,侵及浆膜层组VEGF阳性率显著高于未侵及浆膜层组 (P <0 .0 0 5 ) ,淋巴结转移组显著高于无淋巴结转移组 (P <0 .0 5 )。MMP -9随胃癌的发展阳性率逐渐增高 (P <0 .0 5 ) ,侵及浆膜层组MMP -9表达率高于未侵及浆膜组 (P <0 .0 5 ) ,淋巴结转移组MMP -9表达率显著高于无淋巴结转移组 (P<0 .0 5 )。VEGF和MMP -9表达关系密切 (P <0 .0 0 5 )。结论　VEGF和MMP -9均参与胃癌的发展、浸润和转移 ,可作为了解胃癌的生物学行为和判断预后的指标