姜黄素对甲状腺癌细胞SW579增殖和凋亡的影响

目的天然药物以毒性低、安全范围广、药源丰富越来越受到人们的关注,本课题旨在研究姜黄素对甲状腺癌SW579细胞增殖、细胞周期和凋亡的影响,并探讨姜黄素抗癌的作用机制。方法甲状腺癌SW579细胞株经0~40μmol/L的不同浓度姜黄素作用12 h、24 h、48 h后,采用MTT法检测姜黄素对细胞增殖的抑制作用;经0~20μmol/L的不同浓度姜黄素作用7 d后,平板克隆形成实验检测姜黄素对甲状腺癌SW579细胞增殖的抑制作用;经0~20μmol/L的不同浓度姜黄素作用24 h后,采用流式细胞仪检测甲状腺癌SW579细胞周期;经0~20μmol/L的不同浓度姜黄素作用48 h后,采用流式细胞仪检测甲状腺癌SW579细胞凋亡率,并采用蛋白质印迹法检测甲状腺癌SW579细胞株中Cyclin B1、p21、bad和Bcl-xl的蛋白水平。结果 MTT结果显示姜黄素能显著抑制人甲状腺癌SW579细胞的生长增殖,抑制作用呈现时间及浓度依赖性;平板克隆实验提示,姜黄素作用甲状腺癌细胞后克隆形成数目下降,形成集落变小,并且呈浓度依赖性;流式细胞仪分析显示姜黄素能阻滞细胞周期于G0/G1期,并且呈浓度依赖性;流式细胞仪分析显示姜黄素能增加甲状腺癌细胞凋亡率;western blot检测显示姜黄素可抑制细胞周期蛋白Cyclin B1的表达,同时下调凋亡相关蛋白Bcl-xl,而姜黄素对P21和Bad的表达无影响。结论姜黄素能下调Cyclin B1、Bcl-xl的表达,显著抑制人甲状腺癌SW579细胞在体外的增殖。     

BRAF干扰对甲状腺癌SW579细胞系的影响

目的:研究BRAF干扰对甲状腺癌SW579细胞系的影响.方法:设计合成了2对siRNA干扰序列,脂质体转染进入甲状腺癌SW579细胞,采用RT-PCR检测干扰的效果.对干扰成功的细胞系,检测细胞增殖、细胞周期和丝裂原活化蛋白/细胞外信号调节激酶(mitogen-activated protein signa1-regulated kinase/extracellular signal-regulated kinase,MEK/ERK)信号通路相关蛋白的变化.结果:2种siRNA转染甲状腺癌SW579细胞系后,显著地抑制了BRAF mRNA及蛋白水平的表达(P＜0.01),SW579的生长增殖受到抑制,细胞周期发生改变,G1/S期增加,同时,MEK/ERK信号通路的激活受到抑制.结论:干扰BRAF可能通过失活MEK/ERK信号通路而抑制SW579细胞系的生长和增殖.     

Staurosporine对甲状腺癌SW579细胞的促凋亡作用

【目的】研究星形孢菌素促进人甲状腺癌细胞SW579凋亡的作用,从而为肿瘤治疗寻找新的方向。【方法】MTT法检测ST对SW579细胞增殖的抑制作用。流式细胞术检测细胞周期分布及细胞凋亡情况。用Hochest33258及MDC染色方法分别检测细胞的凋亡及自噬发生情况。Western blotting用于检测相关蛋白的表达情况。【结果】通过MTT检测发现staurosporine对SW579增殖的抑制呈浓度和时间依赖性。流式细胞术检测发现staurosporine对SW579细胞具有G0~G1期阻滞。【结论】Staurosporine能够诱导对SW579细胞凋亡从而抑制肿瘤细胞的增殖。     

GPI-PLD过表达对甲状腺癌细胞株SW579生物学特征的影响

目的研究GPI-PLD基因转染并过度表达对SW579细胞的影响。方法用脂质体转染法将GPI-PLD真核表达载体pcDNA3.1（＋）/GPI-PLD转入SW579细胞,以未转染的SW579细胞及转染空载体pcDNA3.1（＋）的细胞为对照,筛选出阳性细胞克隆。以胎盘碱性磷酸酶为底物,定量检测GPI-PLD活性,RT-PCR法确定GPI-PLDmRNA表达水平。细胞计数绘制生长曲线,台盼蓝排斥法观察补体介导的细胞毒（CDC）杀伤率,ELISA检测癌胚抗原（CEA）的表达情况。结果阳性细胞克隆GPI-PLD酶活性水平比对照组升高约3倍,GPI-PLD mRNA表达水平约增加6倍;GPI-PLD基因过度表达可促进GPI锚定的蛋白质如CEA和PLAP等被大量水解释放入培养基,导致细胞增殖能力减弱,对补体杀伤的敏感性增强。结论成功将GPI-PLD基因转染入SW579细胞,并在细胞中稳定表达。GPI-PLD过表达能抑制肿瘤细胞增殖,增强肿瘤细胞对补体杀伤的敏感性。     

五味子多糖对甲状腺癌细胞株SW579凋亡及survivin表达的影响

 目的：探讨五味子多糖对人甲状腺癌SW579细胞株的生长抑制作用及其机制。 方法：48只成年雄性Wistar大鼠分为阴性对照组和药物组,阴性对照组予以生理盐水,药物治疗组予以不同剂量的五味子多糖,分别提取其血清。SW579细胞分为空白组、阴性对照组和药物组。空白组为15%小牛血清的RPMI-1640培养液,阴性对照组细胞加入阴性组大鼠的纯化血清,药物组分别加入不同浓度（100、200 和 400 mg·kg^-1）的含药血清,AO/EB荧光染色和流式细胞仪检测细胞凋亡情况,MTT法检测细胞增殖情况,Western blotting检测细胞survivin的表达。 结果：流式细胞术结果显示,低、中和高剂量药物组细胞凋亡率为8.63%、35.63%和38.32%,明显高于空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率(4.23%和4.10%)（P<0.01）,并随剂量增加而增加。阴性对照组细胞生长抑制率为（0.12±0.06）%,低、中和高剂量药物组细胞生长抑制率为（27.51±1.62）%、（34.69±0.79）% 和 （45.83±1.33）%,药物组与阴性对照组比较差异有统计学意义（P<0.01）。Western blotting　检测低、中、高剂量药物组细胞survivin的表达明显低于空白对照组和阴性对照组(P<0.01)。结论：五味子多糖能有效抑制人甲状腺癌细胞株SW579中survivin基因表达,诱导SW579细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖。     

下调CXCR4基因对甲状腺癌细胞SW579增殖和侵袭能力的影响

目的 探讨下调CXCR4基因对甲状腺癌细胞SW579体外增殖和侵袭能力的影响及可能的机制.方法 用脂质体2000将CXCR4-siRNA瞬时转染SW579细胞(RNAi组),同时设立阴参组(只用脂质体而不用siRNA)和空白组(细胞不做任何处理).通过MTT增殖实验和侵袭实验研究CXCR4对细胞增殖和侵袭能力的影响;采用Western blot方法检测RNA干扰后ERK和AKT的磷酸化水平.结果 CXCR4表达水平下调后SW579细胞体外增殖能力减弱,增殖抑制率为32.2%.RNAi组侵袭的细胞数为13.8±1.48个,与空白组和阴参组比较显著减少(P<0.01).Western blot结果显示RNA干扰后总AKT和磷酸化AKT水平均下降,以磷酸化AKT下降最为显著,而ERK表达水平无明显变化.结论 通过RNA干扰下调CXCR4的表达能够显著抑制SW579细胞的增殖和侵袭能力;CXCR4对SW579细胞增殖和侵袭的影响可能是通过调节PI3K/AKT信号通路实现的.     

紫杉醇联合顺铂对甲状腺癌细胞SW579增殖、迁移的影响

目的探讨紫杉醇联合顺铂对甲状腺癌细胞SW579增殖、迁移的影响。方法在DMEM培养液(含15%胎牛血清)中加入细胞,在37℃、5%CO2培养箱中培养,到80%左右融合后分为试验组、空白对照组(只含DMEM培养基),试验组又分为3μmol/L紫杉醇组(紫杉醇组)、30μmol/L顺铂组(顺铂组)、3μmol/L紫杉醇+30μmol/L顺铂联合用药组(联合用药组),MTT法检测细胞相对活力,流式细胞数检测细胞周期,细胞迁移试验,细胞侵袭试验,Western blot法检测相关蛋白表达,然后统计分析各组细胞活力、细胞周期、细胞迁移、侵袭能力、AKT信号通路、细胞周期相关蛋白、细胞MMP表达。结果联合用药组细胞活力、细胞周期S、G2、细胞迁移、细胞侵袭能力均显著低于顺铂组、紫杉醇组、空白对照组(P0.05),细胞周期G1显著高于顺铂组、紫杉醇组、空白对照组(P0.05)。顺铂组、紫杉醇组细胞活力、细胞周期S、G2、细胞迁移、细胞侵袭能力均显著低于空白对照组(P0.05),细胞周期G1均显著高于空白对照组(P0.05)。联合用药组PTEN/GADPH、P27/GADPH表达均显著高于顺铂组、紫杉醇组、空白对照组(P0.05),P-AKT/AKT、CyclinD1/GADPH、MMP-2/GADPH、MMP-9/GADPH表达均显著低于顺铂组、紫杉醇组、空白对照组(P0.05)。顺铂组、紫杉醇组PTEN/GADPH、P27/GADPH表达均显著高于空白对照组(P0.05),P-AKT/AKT、CyclinD1/GADPH、MMP-2/GADPH、MMP-9/GADPH表达均显著低于空白对照组(P0.05)。结论紫杉醇联合顺铂能够显著抑制甲状腺癌细胞SW579增殖、迁移。     

PDCD4对甲状腺癌SW579细胞调亡及成瘤能力的影响

目的 研究程序性细胞死亡因子4(PDCD4)诱导的对甲状腺癌SW579细胞凋亡效应及抑制成瘤能力的可能作用机制.方法 将对数生长期的细胞分为两组,观察组先予以PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激14 h进行细胞的收集,然后加入tPA刺激细胞进行收集.对照组未加PDCD4凋亡相关基因Bax的刺激和tPA刺激.应用AnnexinV/PI和API等标记,Cyclins/DNA双标流式细胞仪检测甲状腺癌SW579细胞的凋亡及周期特异性,运用RT-PCR的方法检查Caspase-3、Caspase-9活化情况.结果 处于静止期的外周血对PDCD4凋亡诱导不敏感,而G1期PDCD4诱导甲状腺癌SW579细胞出现了明显的细胞凋亡.PDCD4诱导的细胞凋亡主要是在细胞周期的G1期发生.观察组的Caspase-3、Caspase-9 mRNA的表达值分别为(1.12±0.56)、(1.10±0.29),显著高于对照组的(0.82±0.31)、(0.72±0.26),差异有统计学意义(P<0.05).结论 PDCD4诱导的细胞凋亡与甲状腺癌SW579细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了Caspase活化,参与细胞凋亡及可能抑制细胞成瘤能力.     

RNAi沉默Survivin基因对人甲状腺癌SW579增殖的影响

目的:应用RNAi技术封闭Survivin基因,对甲状腺癌细胞增殖的影响,探讨RNA干扰survivin基因表达治疗甲状腺癌的可行性。方法:实验设为空白组、脂质体组、阴性对照组和RNAi组。RNAi组是针对Survivin基因的有效序列合成DNA正义链及反义链,经变性、退火,形成双链DNA,与pGenesil-1线性质粒构建重组体,经脂质体转染SW579细胞。各组利用RT-PCR、Western-bloting检测survivin表达情况;MTT法检测细胞增殖的变化,流式细胞仪检测转染后SW579细胞凋亡的变化。结果:RT-PCR、Western blotin结果显示,转染survivin基因重组体组的mRNA和蛋白水平的表达与其它各组比较均明显下调(P<0.01),转染后SW579细胞生长率下降,凋亡指数明显增加(P<0.01)。结论:特异封闭survivin基因,能够有效地抑制甲状腺癌细胞的增殖,诱导其凋亡的发生。     

ATRA对甲状腺鳞癌SW579细胞株NIS表达的影响

目的 观察全反式维甲酸体外诱导甲状腺鳞癌细胞株SW579形态学和NIS表达的变化.方法 分别以终浓度为2×10-5 mol/L、4×10-5 mol/L、6×10-5 mol/L、8×10-5 mol/L的维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;利用RT-PCR的方法观察钠碘转运体表达的变化.结果 ATRA作用48小时后,可见细胞形态改变;但NIS mRNA表达水平未见明显变化(P＞0.05).结论 不同浓度的ATRA可诱导SW579细胞形态学变化,但不能提高NIS的表达.     

蛋白激酶CK2抑制剂TBB对甲状腺鳞癌细胞株SW579CK2β和Akt表达的影响

目的：观察四溴苯三唑(TBB)对甲状腺鳞癌SW579细胞株CK2β和Akt表达的影响,探讨TBB抗甲状腺癌的作用机制。方法：体外培养SW579细胞,实验分为对照组（未加任何处理组和DMSO组）、TBB组（终浓度为25 μmol/L）和Wortmannin组(终浓度为100 nmol/L)。MTT比色法测定细胞生长抑制率,同时测定蛋白激酶CK2的活性。采用RT-PCR方法检测SW579细胞CK2β及Akt的mRNA表达,分析各处理组CK2β及Akt基因表达变化。采用Western blotting方法检测SW579细胞CK2β及Akt的蛋白表达,分析各处理组CK2β及Akt的蛋白表达变化。结果：与对照组比较,TBB组SW579细胞生长抑制率明显增加（P<0.01）,细胞内CK2的活性明显降低（P<0.01）。RT-PCR结果表明,与对照组比较,TBB组CK2β的mRNA 表达水平显著降低（P<0.01）,Akt的mRNA 表达水平无明显变化（P>0.05）。Western blotting结果表明,与未处理组比较,Wortmannin组内源性CK2的活性无明显变化（P>0.05）,TBB组CK2β的表达明显降低（P<0.01）,同时Akt Thr308和Ser473磷酸化状态受到抑制（P<0.01）,总Akt水平无明显变化。结论：TBB可降低SW579细胞蛋白激酶CK2β的表达,进而再下调Akt的活性。     

C - myc和PTEN蛋白在宫颈癌中的表达

目的探讨宫颈癌组织中C - myc和PTEN蛋白表达的临床意义.方法应用免疫组化PV -9000两步法检测70例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常宫颈组织中C- myc和PTEN的表达.结果C - myc蛋白在宫颈癌中表达的阳性率为72.9% (51/70),明显高于CIN42.5% (17/40)和正常宫颈组织10%(2/20) (P＜0.05); C-myc的表达在组织学分级、病理学类型、淋巴结转移等组间差异均有显著性意义(P＜0.05),而与年龄及临床分期组间比较差异无显著性意义(P＞0.05);PTEN蛋白的表达率在正常宫颈组织90%(18/20)、CIN57.5% (23/40)及宫颈癌35.7% (25/70)中逐渐下降(P ＜0.05);PTEN蛋白的表达在淋巴结转移及临床分期组间差异均有显著性意义(P＜0.05),而在年龄、组织学分级及病理学类型组间比较差异无显著性意义(P＞0.05);C - myc和PTEN蛋白的表达呈负相关(r=- 0.484,P=0.000).结论 C- myc和PTEN与宫颈癌的发生、发展可能相关,二者联合检测可能为宫颈癌的早期诊断和治疗提供一定的理论依据.     

C - myc和PTEN蛋白在宫颈癌中的表达

目的探讨宫颈癌组织中C - myc和PTEN蛋白表达的临床意义.方法应用免疫组化PV -9000两步法检测70例宫颈癌、40例宫颈上皮内瘤变(CIN)及20例正常宫颈组织中C- myc和PTEN的表达.结果C - myc蛋白在宫颈癌中表达的阳性率为72.9% (51/70),明显高于CIN42.5% (17/40)和正...     

维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579细胞增殖的影响

目的 观察全反式维甲酸(all-trans-retinoic acid,ATRA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579诱导分化作用中细胞增殖的影响.方法 以终浓度为10-7、5×10-7、10-6、5×10-6、10-5 mol/L的全反式维甲酸作用SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用MTT比色法测定细胞存活率;流式细胞仪检测细胞周期.结果 全反式维甲酸能使细胞趋向良性分化,抑制了肿瘤细胞增殖,使细胞滞留在S期.结论 全反式维甲酸对甲状腺鳞癌细胞株SW579有剂量依赖性的增殖抑制作用,并且在低浓度时(10-7、5×10-7、10-6 mol/L)可能对细胞具有诱导分化作用.     

TSA对甲状腺鳞癌细胞株SW579增殖的影响

目的 探讨曲古抑菌素A(trichostatin A,TSA)对甲状腺鳞癌细胞株SW579生长增殖的影响.方法 分别以终浓度为25、50、100、200、400 nmol/L的TSA作用于SW579细胞株,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞的体外增殖、吖啶橙染色荧光显微镜观察细胞形态及细胞凋亡、流式细胞术检测细胞凋亡率的改变.结果 TSA作用后对细胞的增殖有抑制作用;吖啶橙染色后光镜下观察发现有典型的凋亡小体生成;流式细胞仪分析凋亡率随TSA浓度的升高而升高(P＜0.05).结论 不同浓度的TSA可抑制SW579细胞增殖,促进细胞凋亡,且呈剂量依赖性.     

结肠癌组织C/EBPα表达及其对SW480细胞侵袭的影响

目的研究结肠癌组织CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBPα)的表达,及其过表达对结肠癌SW480细胞系侵袭性的影响。方法利用免疫组化方法检测48例结肠癌患者的癌组织与正常组织C/EBPα表达情况,并统计分析C/EBPα的表达与结肠癌临床病理参数之间的关系。构建p CDGFP-C/EBPα真核表达质粒,通过细胞划痕实验观察转染对结肠癌SW480细胞系迁移能力的影响,并检测与肿瘤侵袭相关蛋白KLF5、MMP-2、MMP-9、ECD的的表达。结果免疫组化结果显示,正常组织C/EBPα的低表达率为6.25%,而结肠癌组织C/EBPα的低表达率为68.75%,两组比较差异有统计学意义(P0.05),且低表达C/EBPα的患者肿瘤直径越大、TMN分期越晚、淋巴结转移概率越大。细胞划痕实验显示,划痕48h、72h后,正常SW480细胞的迁移率分别为53.16%、80.77%,而过表达C/EBPα的SW480细胞的迁移率分别为23.57%、31.89%,两组比较差异有统计学意义(P0.05);免疫印记实验表明,过表达C/EBPα的SW480细胞的KLF5、MMP-2、MMP-9表达明显降低,而ECD表达明显升高。结论 C/EBPα在结肠癌组织低表达,且与结肠癌的TMN分期和转移有密切关系,C/EBPα过表达能够显著降低结肠癌细胞的侵袭性,对今后结肠癌的早期诊断和基因靶向治疗有重要指导意义。     

黄参方剂诱导胃癌癌前病变细胞凋亡和影响BCL—2蛋白表达的研究

目的：探讨黄参方剂对胃癌癌前病变细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法：将７２例胃癌癌前变患者随机分为２组,治疗组３７例,口服黄参方剂６０ｍｌ／ｄ;对照组３５例,口服维酶素片１２片／天,疗程２月。治疗后胃镜同一部位取材,检测治疗前后细胞凋亡指数和ＢＣＬ－２蛋白的表达。采用原位末端标记法（ＴＵＮＥＬ）检测细胞凋亡,采用免疫组化检测ＢＣＬ－２蛋白的表达。结果：黄参方剂组服药前后细胞凋亡指数分别为（１９．８     

C—myc在卵巢肿瘤的表达

用免疫组织化学方法检测４１例卵巢癌，１０例卵巢良性肿瘤及８例正常卵巢组织，结果显示，正常卵巢及卵巢良性肿瘤无一例检测出Ｃ－ｍｙｃ基因蛋白的表达；Ｃ－ｍｙｃ在卵巢癌的阳性表达率为４３．９％，６０％出现在Ⅲ期以上，分化差的患者，用Ｃ－ｍｙｃ阳性表达的患者预示着差的预后。提示．Ｃ－ｍｙｃ阳性表达可作为预测预后的指标。     

间断性缺氧对结肠癌SW480细胞HIF1-α和生存素表达的影响

目的 模拟肿瘤缺氧环境,观察缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factor 1-α,HIF1-α)和生存素在结肠癌SW480细胞中的表达变化.方法 用三气培养箱模拟肿瘤间断性缺氧环境,免疫荧光检测HIF1-α和生存素蛋白的表达部位,RT-PCR和Western blot检测HIF1-α和生存素m...