小儿肾病综合征激素治疗前后与外周血单个核细胞凋亡关系

为观察小儿肾病综合征(NS)泼尼松治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)的凋亡变化,探讨泼尼松诱导细胞凋亡关系及其临床意义,对50例肾病综合征患儿分别在泼尼松治疗前和治疗后第2、4、6、8周采血,进行细胞凋亡形态观察,计算百分率。结果:治疗前凋亡率为(9.94±6.27)％;第2周为(17.30±5.83)％,第4周为(15.60±4.58)％,第6周为(13.60±6.06)％,第8周为(10.18±4.01)％。治疗前与治疗后2、4、6周比较,均P<0.01,差异有显著性;与第8周(减药2周后)比较,P>0.05,差异无显著性。提示NS患儿使用足量泼尼松治疗可诱导外周血PBMC细胞凋亡增加,也诱导大部分患儿病情缓解,当泼尼松减量后诱导细胞凋亡随之减少。观察外周血单个核细胞的细胞凋亡变化对观察NS的激素治疗有一定的临床意义。     

银杏叶提取物对肾病综合征炎症细胞因子的影响

目的　探讨银杏叶提取物对原发性肾病综合征 (NS)患儿外周血单个核细胞 (PBMC)中炎症细胞因子的影响。方法　将我科 2 0 0 0年 10月～ 2 0 0 4年 10月收治的小儿NS 3 5例 ,随机采用泼尼松加银杏叶提取物和单用泼尼松两种方法治疗 ,共分为 3组 ,治疗前组 3 5例 ,未治疗的患儿 ;银杏叶组 2 0例 ,采用泼尼松加银杏叶提取物治疗 ;激素组 15例仅给强的松治疗 ,3 0d为1个疗程 ,疗程结束后观察疗效。分别于治疗前后观察临床和生化检验指标 ,同时应用酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法检测PBMC培养上清液中IL 1、IL 6、IL 8和TNF α蛋白水平的变化。结果　治疗 1个月后 ,临床症状及血液生化指标等明显改善 ,治疗前组与银杏叶组比较有显著差异 (P均 <0 .0 1) ;银杏叶组明显优于激素组 ,两组有显著差异 (P <0 .0 1)。对 3组IL 1、IL 6、IL 8和TNF α变化进行比较 ,银杏叶组和激素组均较治疗前组明显降低 ,有显著性差异 (均P <0 .0 1) ;银杏叶组较激素组也降低 ,有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论　银杏叶提取物对NS患儿外周血中多种炎症细胞因子有抑制作用 ,对NS治疗有明显疗效 ,可用于辅助激素治疗。     

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目的 观察原发性肾病综合征(PNS)患儿泼尼松治疗前后CD4+CD25+调节性T细胞(CD4+CD25+Tr)的变化,阐明肾上腺糖皮质激素治疗儿童PNS的免疫机制.方法 选择2004-2007年在深圳市儿童医院住院治疗的初发PNS患)L42例,其中激素敏感型32例,激素耐药型10例.同期25例健康体检儿童作为对照组.流式细胞术检测泼尼松治疗前后外周血CD3+CD4+CD8-、CD3+CD4-CD8+、CD4+CD25+Tr的比例,荧光定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测泼尼松治疗前后外周血单个核细胞(PBMC)叉头型基因P3(Foxp3)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTL-4)和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)基因mRNA的表达.结果 与对照组比较,PNS患儿外周血CD3+CD4+CD8-T细胞、CD3+CD4-CD8+T细胞、CD4+CD25+Tr比例无明显改变(P>0.05).激素敏感型PNS患儿CD4+CD25+Tr比例在泼尼松治疗后明显增高,差异有统计学意义(P<0.01);激素耐药型PNS患儿CD4+CD25+Tr比例在泼尼松治疗前后无明显改变(P>0.05).激素敏感型PNS患儿在泼尼松治疗后PBMC细胞Foxp3、CTLA-4和GITR基因mRNA的表达明显增高;而激素耐药型PNS患儿泼尼松治疗前后Foxp3、CTLA-4基因表达无明显改变,仅GITR表达明显增高.结论 泼尼松等肾上腺糖皮质激素类药物可通过上调激素敏感型PNS患儿CD4+CD25+调节性T细胞的表达发挥免疫治疗作用.     

肾病综合征患儿转化生长因子β基因表达与激素反应的关系

目的探讨肾病综合征(NS)患儿血清中转化生长因子β(TGF-β)的浓度和外周血单个核细胞 (PBMC)TGF-β mRNA的表达与激素反应类型的关系。方法将21例NS患儿分为激素敏感型(13例)和激素耐药型(8例),应用ELISA方法检测NS患儿血清和PBMC上清液TGF-β的浓度,采用原位逆转录多聚酶链反应(In Situ-RT PCR)方法检测PBMC中TGF-β mRNA的表达。结果①临床各项指标与激素疗效无关;激素疗效与治疗前血肌酐(SCr)的水平有关。②NS激素耐药型病理以MsPGN为主(57．1％)。③血清TGF-β浓度组间比较差异无显著性(P>0．05)。④PBMC上清液TGF-β浓度在激素敏感型与激素耐药型组间比较差异有显著性(P<0．01); 激素敏感型与对照组比较差异无显著性(P>0．05)。⑤PBMC中TGF-β mRNA表达在激素耐药型组明显增强,激素敏感型组仅有微弱表达,对照组无表达。结论儿童NS中FGF-β产生和mRNA表达与激素反应类型有关,NS 早期检测TGF-β浓度可作为对激素反应的一个预测指标。     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞糖皮质激素受体β表达

目的　探讨原发性肾病综合征 (NS)患儿外周血单个核细胞 (PBMC)内糖皮质激素受体 β(GRβ)mR NA表达与激素 (GC)治疗效应的关系。方法　RT PCR法检测NS患儿PBMC糖皮质激素受体α(GRα)和GRβmRNA表达水平。结果　GC不敏感NS组PBMC内GRβmRNA表达显著高于GC敏感组 (P <0 .0 1) ;GC敏感性与GRβmRNA表达之间呈明显负相关 (r=2 2 .75　P <0 .0 1)。结论　NS患儿外周血PBMC内GRβmRNA不适当表达增加 ,可能是GC治疗不敏感的原因之一     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞内GR α和GR β表达的意义

目的　探讨原发性肾病综合征 (INS)患儿外周血单个核细胞 (PBMC)内两种糖皮质激素受体 (GR)亚型———GRα和GRβ表达水平与糖皮质激素治疗效应之间的关系。方法　应用免疫细胞化学方法、WesternBlot和凝胶电泳迁移率变化方法 (EMSA) ,分别检测不同激素效应INS患儿和正常对照组儿童GRα和GRβ免疫阳性的PBMC数目、PBMC细胞内GRα和GRβ蛋白质表达和GR DNA连接活性。结果　 (1)INS患儿PBMC内同时有GRα和GRβ的表达 ,并以GRα表达为主。 (2 )激素敏感型INS患儿GRα阳性的PBMC细胞数为 (5 0 0± 4 5 ) ,激素抵抗型INS患儿为 (4 7 0± 5 5 ) ,两组相比差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ;而激素抵抗型INS患儿GRβ阳性PBMC细胞数 (2 2 0± 3 5 )明显高于激素敏感型INS患儿 (7 5± 2 0 ) (P <0 0 1)。 (3)WesternBlot实验结果显示 ,激素抵抗型INS患儿PBMC核内GRα蛋白量明显低于激素敏感型INS患儿 ,而GRβ蛋白量却明显高于激素敏感型患儿。(4 )激素抵抗型INS患儿的GR DNA连接能力明显低于激素敏感型患儿。结论　INS患儿PBMC内GRα和GRβ表达比例失调、GRβ表达亢进可能与糖皮质激素抵抗的发生有关     

小儿肾脏病研究室肾病综合征患儿外周血单个核细胞内GR α和GR β表达的意义

目的 探讨原发性肾病综合征(INS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)内两种糖皮质激素受体(GR)亚型--GR α和GR β表达水平与糖皮质激素治疗效应之间的关系. 方法 应用免疫细胞化学方法 、 Western Blot和凝胶电泳迁移率变化方法 (EMSA),分别检测不同激素效应INS患儿和正常对照组儿童GR α和GR β免疫阳性的PBMC数目、PBMC细胞内GR α和GR β蛋白质表达和GR-DNA连接活性. 结果 (1) INS患儿PBMC内同时有GR α和GR β的表达,并以GR α表达为主.(2) 激素敏感型INS患儿GR α阳性的PBMC细胞数为(50.0±4.5),激素抵抗型INS患儿为(47.0±5.5),两组相比差异无显著意义(P>0.05);而激素抵抗型INS患儿GR β阳性PBMC细胞数(22.0±3.5)明显高于激素敏感型INS患儿(7.5±2.0)(P<0.01).(3) Western Blot实验结果显示,激素抵抗型INS患儿PBMC核内GR α蛋白量明显低于激素敏感型INS患儿,而GR β蛋白量却明显高于激素敏感型患儿.(4) 激素抵抗型INS患儿的GR-DNA连接能力明显低于激素敏感型患儿. 结论 INS患儿PBMC内GR α和GR β表达比例失调、GR β表达亢进可能与糖皮质激素抵抗的发生有关.     

肾病综合征高凝状态26例治疗前后的临床分析

目的 探讨肾病综合征（NS）高凝状态治疗前后血液流变学的变化。方法 13例对激素敏感的NS和13例对激素耐药的NS加用抗凝治疗，并观察治疗前后两组病人血液流变学的变化。结果 13例对激素敏感的NS的高凝状态随NS的缓解而明显改善；13例用激素治疗8周耐药的NS加用抗凝治疗后高凝状态和临床症状都趋向好转。结论 说明对激素敏感的NS可以不用抗凝治疗，而对难治性NS抗凝疗法仍是有效的辅助治疗的手段。     

肾病综合征患儿外周血单个核细胞内GRα和GRβ表达的意义

目的探讨原发性肾病综合征(INS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)内两种糖皮质激素受体(GR)亚型--GRα和GRβ表达水平与糖皮质激素治疗效应之间的关系.方法应用免疫细胞化学方法、WesternBlot和凝胶电泳迁移率变化方法(EMSA),分别检测不同激素效应INS患儿和正常对照组儿童GRα和GRβ免疫阳性的PBMC数目、PBMC细胞内GRα和GRβ蛋白质表达和GR-DNA连接活性.结果(1)INS患儿PBMC内同时有GRα和GRβ的表达,并以GRα表达为主.(2)激素敏感型INS患儿GRα阳性的PBMC细胞数为(50.0±4.5),激素抵抗型INS患儿为(47.0±5.5),两组相比差异无显著意义(P>0.05);而激素抵抗型INS患儿GRβ阳性PBMC细胞数(22.0±3.5)明显高于激素敏感型INS患儿(7.5±2.0)(P<0.01).(3)WesternBlot实验结果显示,激素抵抗型INS患儿PBMC核内GRα蛋白量明显低于激素敏感型INS患儿,而GRβ蛋白量却明显高于激素敏感型患儿.(4)激素抵抗型INS患儿的GR-DNA连接能力明显低于激素敏感型患儿.结论INS患儿PBMC内GRα和GRβ表达比例失调、GRβ表达亢进可能与糖皮质激素抵抗的发生有关.     

核转录因子在细胞因子介导的川崎病血管内皮损伤中的作用机理

目的　探讨核转录因子 (NF κB)在诱导川崎病炎性细胞因子及血管内皮细胞损伤中的作用及机理。方法　建立人脐静脉内皮细胞培养模型 ,酶联免疫吸附实验 (ELISA)双抗体夹心法检测川崎病患儿外周血单个核细胞 (PBMC)活化后培养上清液白细胞介素 6 (IL 6 )、白细胞介素 1β(IL 1β)、肿瘤坏死因子α(TNF α)的分泌量 ;采用AnnexinⅤ /PI双染色法 ,流式细胞仪检测川崎病患儿PBMC培养上清液所诱导的内皮细胞凋亡率 ;凝胶电泳迁移率转换实验 (EMSA)检测所活化PBMC核因子NF κB的活性。结果　川崎病组患儿PBMC体外经刺激后IL 6、IL 1β、TNF α等炎性细胞因子的分泌均明显高于正常对照组 (P <0 0 1) ,其培养上清液所诱导的内皮细胞凋亡率 [(38 4± 7 8) %]则较正常对照组 [(2 8± 0 8) %]明显升高。分别加入足量白细胞介素 6单克隆抗体 (IL 6McAb)、肿瘤坏死因子α单克隆抗体 (TNF αMcAb)、白细胞介素 1β受体a(IL 1ra)或联合加入上述阻断剂于川崎病患儿PBMC培养上清液中 ,可不同程度地逆转川崎病患儿PBMC培养上清液所诱导内皮细胞的凋亡。川崎病患儿PBMC刺激活化后NF κB活性显著增高。NF κB抑制剂SN50 明显抑制川崎病患儿PBMC上述细胞因子的分泌 ,与此同时基本阻断川崎病患儿PBMC培养上清液所诱导内皮细     

Effect of the adaptation of the food of the hospitalized child on the cover of the nutritional needs]

AIMS: Denutrition remains a major concern in hospitalized children. Daily experience suggests that the meals proposed by hospital dietetic service, although well-balanced and in accordance with the recommendations, may be poorly accepted and consumed by children. The aims of this study were to assess the effect of modification of foods offer on energy intakes as well as nutriments and minerals and trace elements in hospitalized children. PATIENTS AND METHODS: During a 1-month period, 25 consecutive children (range 4-17 years; 13 girls), hospitalized in our pediatric department were included in the study (reasons for hospitalisation comprised: medical reasons [n=7], orthopedic problem [n=16] or surgery [n=2]). They had no restricted diet and received the usual pediatric hospital feeding according to the French recommended dietary allowances (RDA) (D1). They were compared to 21 children--matched for age, sex, nutritional status and pathology, hospitalized during the following 1-month period--who received a modified diet (D2), elaborated by dieticians according to the child's preference and excluded or limited food usually nonconsumed by the children. Food consumption was prospectively measured for 24h by analysis of the nonconsumed foods, as well as browsing and extra food brought by the family. Analysis of energy, carbohydrate, lipid, protein, iron and calcium intake was made using Bilnut 3 software (Nutrisoft, France). RESULTS: D2 covered 119+/-37% of the median energy needs versus 89+/-37% for D1 (p<0.05). The median energy needs were more often reached with D2 as compared to D1 (62% versus 32%, p<0.05). Protein intake was high in both groups, more importantly with D2 (266+/-111% of RDA versus 193+/-77% with D1, p<0.05). We observed no difference between the 2 diets in regards of fat/carbohydrate balance and iron intake. Calcium intake was increased with the adapted diet: 68+/-26% of RDA with D2 versus 49+/-26% with D1 (p<0.01). CONCLUSION: Adapting food offers to preference influences food and caloric intakes in hospitalized children. This could be an efficient strategy to prevent acute undernutrition in hospital.