视网膜母细胞瘤病人体细胞中RB1基因突变的检测

目的检测视网膜母细胞瘤(RB)病人体细胞中RBI基因突变，探讨RBI基因突变的分子生物学机制。方法应用PCR—SSCP技术筛查RB病人白细胞基因组DNA，测序分析确定突变。结果在12例RB病人中，确定3例RBI基因生殖细胞性突变。他们分别是第10外显子中T至A杂合性突变，将苯丙氨酸编码序列变为酪氨酸编码序列；第10外显子1bp碱基缺失(GAT—AT)，发生阅读框架改变；第22外显子中A至T杂合性突变，将精氨酸序列变为终止密码。结论这3例RBI基因生殖细胞性突变的方式为点突变和小缺失，这些突变改变了RBI基因的遗传信息，致使异常的RBI基因蛋白产生，导致视网障母细胞瘤的发生。     

共同性外斜视ARIX基因多态性研究

目的 探讨共同性外斜视患者ARIX基因多态性及意义。方法 19例患者和20例正常对照提取DNA进行PCR扩增，扩增产物分离、纯化、克隆并测序鉴定，测序结果与GenBank中人ARIX基因序列进行同源性比较。结果 8例患者ARIX基因外显子1发生3种类型的核苷酸突变，其中6例为G153A突变，而20例正常人中仅2例出现G153A突变，总的核苷酸突变和G153A突变均显著多于正常人（P=0．0310，P=0．0436）。在具有阳性和阴性家族史患者之间，总的核苷酸突变和G153A突变的差异均无显著统计学意义（P=0．0739，P=0．1287）。结论 ARIX基因多态性，尤其是G153A核苷酸突变可能是共同性外斜视的遗传风险因子。     

全外显子组测序法对一中国常染色体显性遗传先天性白内障家系GJA3基因突变位点的分析

背景 先天性白内障是儿童致盲的重要原因,多数先天性白内障与遗传有关.目前已知的与常染色体显性遗传先天性白内障(ADCC)有关的基因有39个. 目的 采用全外显子组测序法对一ADCC家系的致病突变基因进行筛查和分析.方法 纳入2014年8月-9月在郑州大学第一附属医院就诊的一ADCC家系,分别采集家系中14例患者和14名表型正常成员外周静脉血各10 ml,同期同法采集100名健康体检者10 ml的外周静脉血作为对照.用标准酚-氯仿提取法提取所有受检者基因组DNA,并采用全外显子组测序法将先证者的DNA进行全外显子组测序,与数据库对比后筛选出候选基因突变位点,设计突变基因位点引物后采用PCR技术对家系中受检者及100名健康对照者的该基因位点进行扩增并测序,以验证候选基因的致病性并分析其致病机制.结果 该家系共5代68名成员,患病者20例,遗传方式符合常染色体显性遗传方式.患者均双眼发病,晶状体混浊以皮质性为主.先证者全外显子组测序后分析发现,13号染色体GJA3基因的2号外显子第143位核糖核苷酸A突变为G(c.143A＞G),导致其编码的第48位氨基酸由谷氨酸变为甘氨酸(p.E48G).PCR扩增产物测序结果显示该家系中患病受检者DNA均有此突变,但该家系中表型正常的受检者及100名健康对照者该候选基因均不存在此突变.结论 GJA3基因c.143A＞G为该ADCC家系的致病基因突变位点,增补了GJA3基因的突变谱.     

马凡综合征一家系的致病基因筛查

目的：对中国辽宁省一个具有常染色体显性遗传特点的马凡综合征( Marfan syndrole, MFS )家系进行突变基因的筛查。
　　方法：分别采集家系成员的外周静脉血,提取基因组DNA,通过对与马凡综合征相关的致病基因进行遗传学研究和分析,选取候选基因并设计引物,应用聚合酶链式反应( PCR)扩增DNA片段后进行琼脂糖凝胶电泳分离,利用直接测序法确定致病基因及其突变位点。
　　结果：该家系遗传方式符合常染色体显性遗传,先证者表型为双眼晶状体向鼻上方脱位,通过对候选基因外显子直接测序,发现该家系内患者原纤维蛋白基因-1(fibrillin-1 gene,FBN1)第7个外显子第640位碱基有1个A>G的点突变,此突变导致蛋白第214位的甘氨酸被丝氨酸取代(G214S)。
　　结论：FBN1基因 c. A640G(p. G214S)突变为该马凡综合征家系的致病因素。     

卵黄样黄斑营养不良致病基因的两个新突变

目的 对两个卵黄样黄斑营养不良（Best病）家系进行基因分析,观察其BEST-1基因的突变位点。设计 基因分析。研究对象 2个分别包括4人和3人的Best病家系成员及50名正常对照者。方法  2个家系成员均进行全面的眼科检查,包括最佳矫正视力、裂隙灯检查、彩色眼底照相、无赤光眼底照相、眼底自发荧光照相、荧光素眼底血管造影（FFA）和眼电图（EOG）检查。抽取家系成员和50个正常对照者的外周静脉血,提取DNA,采用聚合酶链式反应（PCR）扩增BEST-1基因直接Sanger测序,Genbank BLAST比对分析,明确其突变位点。主要指标  BEST-1测序图。结果  家系1先证者及其父亲均为单眼病变,后者EOG检查患眼光峰暗谷比值（Arden值）为1.08（<1.5）。眼底像可见患眼黄斑区卵黄样改变,FFA早期病变区仅表现稍低荧光,而眼底自发荧光显示因黄斑区异常脂褐质堆积呈现相应部位高荧光。该家系中其余2名成员各项眼科检查均正常且无视力下降等主诉。2例患者的BEST-1基因在外显子4的第401位碱基发生错义突变（c.401C>G）,该突变导致BEST-1基因编码的氨基酸序列中第105位氨基酸由精氨酸变为甘氨酸（p.Arg105Gly）。家系2先证者为双眼发病,眼底检查双眼黄斑区卵黄样改变,FFA早期病变区仅表现稍低荧光,而眼底自发荧光示相应部位高荧光。其中1例无视力下降主诉,其EOG检查Arden值为1.2（<1.5）。先证者及1例EOG检查异常者的BEST-1基因在外显子2的第236位碱基发生错义突变（c.236T>A）,该突变导致BEST-1基因编码的氨基酸序列中第50位氨基酸由酪氨酸变为天冬酰胺（p.Tyr50Asn）。家系其他成员及50名正常对照者的DNA分析中均未检测到上述两个突变。结论 c.401C>G、c.236T>A突变目前尚未被报道,为Best病家系的两个新的突变位点。     

原纤维蛋白1基因新突变导致单纯性晶状体异位

目的 研究我国单纯性晶状体异位家系的致病基因,并确定基因突变。方法 对单纯性晶状体异位一家系进行临床研究和系谱分析。采集家系中7例患者和3例健康成员的静脉血,提取基因组DNA。通过连锁分析确定致病基因的染色体位点后,应用聚合酶链反应(PCR)扩增原纤维蛋白(FBN)1基因外显子,直接测序确定致病的基因突变。采用PCR和限制性内切酶法进行群体分析。结果单纯性晶状体异位患者的FBN1基因外显子6发生了错义突变,cDNA 640位的鸟嘌呤被腺嘌呤取代(13640A);对应的甘氨酸改变为丝氨酸(G214S)。突变后Eag I内切酶位点消失。家系中健康成员和50名正常人均未发现该突变。结论 FBN1基因新突变G640A(G214S)是该家系单纯性晶状体异位的致病基因突变。（中华眼科杂志,2004,40：828-831)     

喉鳞癌PTEN基因第5、8外显子的测序分析

目的探讨PTEN基因与喉鳞状细胞癌的关系.方法应用聚合酶链反应-单链构像多态性分析(polymerase chain reaction-single-strand conformation polymorphism,PCR-SSCP)和TA克隆PCR产物DNA测序技术,检测喉鳞状细胞癌新鲜或冰冻组织中抑癌基因PTEN第5、8外显子的突变情况.结果60例喉鳞状细胞癌组织中使用SSCP检测发现7例显示电泳迁移率的改变.对这7例阳性样本的PCR产物进行TA克隆后测序,2例第5外显子第474位碱基发生A→T的颠换.2例第5外显子第397、407位碱基发生G→A的转换,导致错义突变;1例第5外显子第405位碱基发生A→T的颠换.1例第8外显子第830位碱基发生C→T的转换,导致错义突变;1例第8外显子第831位碱基发生A→C颠换.结论PTEN基因的外显子5突变可能与喉癌的发生有一定的关系,其机制有待深入研究.     

完全型X连锁先天性静止性夜盲临床和基因研究

目的 明确一国人家族遗传性完全型X连锁先天性静止性夜盲(CSNB)的诊断，并检定致病基因突变。 方法 对一CSNB家系进行临床研究和系谱分析。采集家族中5位患者和16位正常人的静脉血并提取基因组DNA。通过连锁分析确定该病致病基因的染色体位点后，应用聚合酶链反应（PCR）扩增候选基因外显子及其侧翼，直接测序确定致病的基因突变。采用PCR直接测序法进行群体分析。对照组包括正常人群对照和家族内正常对照，按照一定标准入选。 结果 该CSNB家系家族中所有患者NYX基因外显子2发生了错义突变，核苷酸772位的腺嘌呤被胞嘧啶取代（A772C）；对应的苏氨酸改变为脯氨酸 (T258P)，女性携带者均为杂合。家族中正常人及110名正常人群对照均未发现该突变。 结论NYX新突变A772C (T258P )和该家系X连锁CSNB相关。(中华眼底病杂志，2007，23：184-188)     

先天性眼外肌纤维化ARIX基因多态性研究

目的 分析两个先天性眼外肌纤维化(congenital fibrosis of the extrapcular muscles,CFEOM)家系的临床表型,探讨家系ARIX基因多态性及其意义.方法 对两个CFEOM家系中所有成员共13人进行详细的临床检查,确定患者和正常人.提取DNA,进行PCR扩增,扩增产物进行纯化、DNA测序鉴定,测序结果与GenBank中人ARlX基因序列进行同源性比较.结果 两个家系的遗传方式均是常染色体隐性遗传,两个家系中共8例患者均表现为典型的CFEOM特征.家系I中3例患者均在ARIX基因外显子1出现同义突变156C＞T,在外显子2出现116G＞A,也为同义突变;家系Ⅱ中5例患者在ARIX基因外显子2发生两处突变,即21G＞A和116G＞A,其中116G＞A为同义突变;两家系中正常人均无上述改变.结论 此两家系均属于CFEOM2型,ARIX基因突变可能是导致该两家系致病的分子基础.     

国人常染色体显性先天性白内障家系致病基因的突变分析

目的 分析国人6个常染色体显性先天性白内障(ADCC)家系的基因突变,确定其致病基因及突变形式.设计实验性研究.研究对象6个ADCC家系.方法 应用聚合酶链反应(PCR)和DNA直接测序方法,对家系进行ADCC常见致病基因突变分析.主要指标基因序列.结果 对12个ADCC常见致病基因(CRYAA, CRYAB, CRYBB1, CRYBB2, CRYBA1, CRYGS ,CRYGC, CRYGD, GJA8, GJA3, MIP, BESP2)外显子及外显子内含子连接区进行DNA直接测序,发现7种碱基序列改变,并导致相应编码氨基酸变化,分别是位于CRYBB2基因cDNA序列445位C→T(R145W),452位A→G(0147R),461位C→T(T150M)和388位G→T碱基改变(D126Y);GJA8基因cDNA序列1055位A→G碱基替代(E352G);BFSP2基因cDNA序列1295位C→A(A407D)及MIP基因cDNA序列96位T→A碱基改变(Y23N).其中前3种序列改变已报道为单核苷酸多态性(SNP),经过对相应家系其他成员的分析发现后4种序列改变也为SNP.结论 先天性白内障的临床表型与基因型均有明显的遗传异质性,本试验在12个基因外显子及外显子内含子连接区内未发现导致这6个ADCC家系疾病表型的致病基因突变,但是发现了7种SNP改变,其中4种为本研究首次发现.     

Strabisme Alternant - Etude clinique - traitement

The author defines motor and sensory alternation: the term alternation should not be used in isolation, it should always be accompanied by the name of the parameter concerned. Sensory alternation is always found together with motor alternation but the reverse is not true.The examining criteria for a diagnosis of sensory alternation are given, sensory alternation must not be confused with alternating inhibition. Working from clinical observations of cases of motor alternating strabismus, the author selects 2 types of binocular sensory relations which allow one to differentiate between:- cases of primary alternating strabismus- cases of secondary alternating strabismusThese forms will develop in different ways; in both cases a cure is possible providing that the right treatment is prescribed and once prescribed carefully followed, etc. It is always a case of serious forms of strabismus whose developmental period is spread over several years.According to the authors, the frequency of cases of true primary strabismus is from 1–3%, the frequency of cases of secondary alternating strabismus varies according to the type of therapy practised on cases of monocular strabismus with amblyopia. These latter will become cases of alternating strabismus under the influence of certain types of therapy carried out over several years (penalization, rocking, alternated occlusion, etc...).Experimental data on kittens confirm clinical data; kittens placed in abnormal environments during the sensitive period will show modification in the distribution of cortical cells and the absence of binocular cells (either because the excitation of the two eyes was not simultaneous, or not identical: artificial strabismus, occlusion, opaque glasses). This disturbances become irreversible after a certain period of exposure (a function of age, length of exposure, etc...).It is thus necessary to bear in mind: 1) the iatrogenic risks of certain orthoptic treatments, 2) the necessity for a binocular form of treatment as soon as possible, as once a certain stage is passed, cortical plasticity diminishes and the elaboration of normal binocular relations becomes impossible.

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Effects of Adenosine Agonists on Intraocular Pressure and Aqueous Humor Dynamics in Cynomolgus Monkeys

The effects of single or multiple topical doses of the relatively selective A₁adenosine receptor agonists (R)-phenylisopropyladenosine (R-PIA) and N⁶-cyclohexyladenosine (CHA) on intraocular pressure (IOP), aqueous humor flow (AHF) and outflow facility were investigated in ocular normotensive cynomolgus monkeys. IOP and AHF were determined, under ketamine anesthesia, by Goldmann applanation tonometry and fluorophotometry, respectively. Total outflow facility was determined by anterior chamber perfusion under pentobarbital anesthesia. A single unilateral topical application of R-PIA (20–250 μg) or CHA (20–500 μg) produced ocular hypertension (maximum rise=4.9 or 3.5 mmHg) within 30 min, followed by ocular hypotension (maximum fall=2.1 or 3.6 mmHg) from 2–6 hr. The relatively selective adenosine A₂antagonist 3,7-dimethyl-1-propargylxanthine (DMPX, 320 μg) inhibited the early hypertension, without influencing the hypotension. Neither 100 μg R-PIA nor 500 μg CHA clearly altered AHF. Total outflow facility was increased by 71% 3 hr after 100 μg R-PIA. In conclusion, the early ocular hypertension produced by topical adenosine agonists in cynomolgus monkeys is associated with the activation of adenosine A₂receptors, while the subsequent hypotension appears to be mediated by adenosine A₁receptors and results primarily from increased outflow facility.