PNP法测定血清α-岩藻糖苷酶的实验室探讨

目的:建立PNP法测定血清α-岩藻糖苷酶(AFU)自动分析方法.方法:根据测定条件的优化实验采用AFU作用于以CPNP为底物的连续监测法直接测定.结果:批内CV<4.8%,批间CV<6.8%,总CV<5.9%,回收率达101.8%,线性:0～313U/L(Y=0.9945X 1.1233r=0.9954);加入TG<4.6mmol/L,BIL<171μmol/L;Hb<100g/L;UA<440μmol/L时无显著干扰.结论:本法简便、准确、快速,适合全自动分析.     

腺苷脱氨酶三试剂测定的全自动分析方法的建立

目的 :在全自动生化仪上建立三试剂测定腺苷脱氨酶 (ADA)活性的方法。方法 :在全自动生化仪上 ,依次加入第 1和第 2试剂 ,预孵育 2 40 s,连续读取空白 6 0 s,在第 32 0秒加入样品 ,在第 6 2 0秒加入腺苷基质液 ,延迟 30 s后用 34 0 nm和 410 nm波长连续监测 12 0 s。结果 :本法试剂稳定 ,可消除氨离子的干扰 ,精密度良好 ,批内 CV2 .2 % ,批间 CV4.1% ,所测酶活性线性范围达 16 0 U/ L,参考值范围 (x± 2 s) :8～ 2 6 U/ L (37o C)。结论 :三试剂全自动分析 ADA,方法设计合理 ,符合自动化分析条件 ,精密度高 ,结果准确 ,可推广应用。     

双试剂连续检测TBA的临床意义

目的:利用全自动生化分析仪,建立一种快速检测总胆汁酸(TBA)活性的方法和正常参考值;方法:双试剂偶联连续监测法,检测60例不同肝病患者和300名健康成人血清TBA活性;结果:其测值(X—±S)分别为48.95±5.73umol/L和5.12±3.46umol/L,差异有显著性(P<0.01);本法批内CV分别为1.99%、2.85%和3.00%,批间CV分别为3.28%3.40%和3.16%,线性范围0-200umol/L;结论:双试剂酶偶联连续监测法,线性好,特异性强,灵敏度高,快速、准确,对肝脏疾病的诊断及临床分级具有重要价值。     

磷钼酸法双试剂在P模块生化分析仪上测定无机磷

目的:建立国产磷钼酸法双试剂测定血清无机磷的自动分析法。方法:利用罗氏P模块生化分析仪的应用功能,建立磷钼酸法双试剂测定血清无机磷的自动分析程序。结果:批内CV为2.02%~3.08%,批间CV为1.54%~1.72%,线性达3.23mmol/L,与进口试剂比较结果相关性良好(r=0.9959)。结论:此试剂重现性好,线性范围宽,结果准确,可消除溶血、黄疸、脂血等因素干扰,且适用于全自动生化分析。     

大麻素受体2激动剂在谷氨酸氧化应激损伤中保护作用实验研究

目的:评价大麻素受体2(CB₂受体)通过抗氧化应激机制在谷氨酸对共培养小胶质细胞和神经元损伤中的保护作用。方法:采用随机数字表法将培养的N9小胶质细胞和HT22神经元分为四组(n=24):对照组(Con组)、谷氨酸组(Glu组)、CB₂受体激动剂AM1241+谷氨酸组(AM1241+Glu组)和AM1241+CB₂受体拮抗剂AM630+谷氨酸组(AM1241+AM630+Glu组)。Con组正常培养24 h; Glu组用含10 mmol/L谷氨酸的培养基孵育24 h; AM1241+Glu组用含2μmol/L AM1241和10 mmol/L谷氨酸的培养基孵育24 h; AM1241+AM630+Glu组含2μmol/L AM1241、6μmol/L AM630及10 mmol/L谷氨酸的培养基孵育24 h。采用MTT法测定细胞活力,采用化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)的含量。结果:与Con组比较,Glu组和AM1241+AM630+Glu组细胞活力和SOD活性降低,LD...     

KHC_3法测定胆红素试剂的研制

目的:探讨建立一种新型KHC3法测定血清总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)的新方法。方法:采用化学氧化法测定血清胆红素反应到达终点时的吸光度,与标准品相比较,求得标本中总胆红素和直接胆红素的浓度。结果:精密度试验TBIL批内高低浓度CV值为0.78%、1.44%;DBIL为0.96%、1.85%。TBIL批间为3.36%、2.66%及3.79%;DBIL批间为4.03%、3.25%及2.96%。线性范围:TBIL可达515μmol/L;DBIL可达171μmol/L;总胆回收率98.4%～105.3%,平均102.1%;DBIL回收率为98.5%～101.5%,平均为99.7%。与其他相关试剂比较TBILγ=0.9954～0.9994;DBILγ=0.9950～0.9985。溶血、脂浊和维生素C干扰试验表明:标本中Hb小于10g/L,TG小于7.55mmol/L,VitC小于0.1g/L,对TBIL和DBIL的测定基本无干扰。结论:本试剂方法简便,结果准确、线性范围宽,试剂稳定,价格低廉,完全可用于检测临床标本。     

对国产总、直接胆红素KHC_3法试剂的评价

目的:评价国产湖南永和阳光生化试剂厂生产的总胆红素(TBIL)和直接胆红素(DBIL)KHC3法试剂在临床应用的可行性。方法:用湖南永和阳光的TBIL、DBIL KHC3法试剂与矾酸盐氧化法试剂和改良J-G法试剂进行比较,并分析其线性范围、准确度和干扰因素。结果:湖南永和阳光KHC3法试剂与矾酸盐氧化法试剂、改良J-G法试剂相关良好,与矾酸盐氧化法试剂比较TBIL:r=0.9952、Y=0.9824X-2.0873,DBIL:r=0.9925、Y=1.1247X-3.1427;与改良J-G法试剂比较:TBIL:r=0.9938、Y=1.0627X+3.3066,DBIL:r=0.9914、Y=1.1983X-2.7554。TBIL浓度为520.0μmol/L范围内线性良好,r=0.9994;DBIL浓度为175.0μmol/L范围内线性良好,r=0.9986。低、中、高值血清标本TBIL的批内和批间CV值分别为2.16%、1.17%、1.16%和3.41%、3.13%、3.30%;DBIL的批内和批间CV值分别为5.22%、2.87%、2.06%和5.80%、4.85%、4.10%。甘油三酯(TG)<8mmol/L、血红蛋白(HB)<10g/L对TBIL、DBIL干扰不明显。结论:湖南永和阳光KHC3法试剂TBIL、DBIL与矾酸盐氧化试剂、改良J-G法试剂相关良好,且抗干扰能力强,其性能指标符合临床使用要求。     

用CLSIEP方案评价总胆红素试剂分析性能

目的通过应用CLSIEP方案分别对国产和进口总胆红素（TBil）试剂的分析性能评价,了解国产总胆红素试剂分析性能能否满足临床需要。方法在同一台全自动生化分析仪上,同时测定试剂准确度、精密度、最低检测限、线性范围、干扰试验、方法比对实验、稳定性观察等7项技术指标。结果两种试剂准确度测定,其相对偏差≤±10％;批间变异系数〈4．0％;国产TBil试剂线性范围0．5—865．0μmol／L,进口试剂线性范围0．4—869．0μmol／L;国产TBil试剂的最低检测限为0．5μmol／L,进口试剂的最低检测限为0．4μmol／L;方法比对实验结果Y=1．0069X＋0．9366．R0=0．9993;抗干扰能力无明显差异;试剂稳定性相近。结论国产总胆红素试剂与进口试剂的分析性能差异无统计学意义。能满足临床实验室的需要。     

循环酶法测定血浆同型半胱氨酸的方法学评价

目的:评价测定血浆同型半胱氨酸(HCY)的循环酶方法。方法:血浆氧化型同型半胱氨酸经三-乙-羧乙基膦(TCEP)还原成游离型HCY,基于HCY甲基转移酶(HMTase),S-腺苷同型半胱氨酸水解酶(SAHase)构成的循环酶体系以及脱氢酶-辅酶体系的原理,用自动生化分析仪测定血浆HCY。结果:测定线性范围达1.5μmol/L～50.0μmol/L;批内CV分别为2.1%、1.7%;日间CV分别为3.7%、4.1%,总CV分别为4.9%、5.2%;回收率96.8%～101.3%;本法和高效液相色谱法比较:R~2=0.9737,Y=0.972X+1.595。t=2.01,P>0.05,差异无显著性;血氨<50.0μmol/L,三酰甘油<11.0 mmol/L,抗坏血酸<10.0 mmol/L,胆红素<500.0μmol/L,血红蛋白<2.0 g/L,谷胱甘肽<0.05 mmol/L时,对结果无明显干扰。结论:本方法具有简便、灵敏等特点,适合血浆HCY的常规和自动化分析。     

微型光谱仪检测血清二氧化碳的研究

目的研究一种基于微型光谱仪和干化学试剂技术快速检测血清二氧化碳浓度的方法。方法根据酶法制备干粉二氧化碳试剂,研究其在微型光谱仪上的检测方法,并对试剂及仪器的性能进行评价,进行统计学分析。结果制备的干试剂结构疏松、溶解性好,90d内反应稳定。用546nm波长检测,其线性范围为15～40mmol/L,批内变异系数(CV)<4%,批间CV<6%,回收率为98.8%～105.8%。当血清内胆红素(TB)<290.40μmol/L,三酰甘油(TG)<11.20mmol/L,无明显干扰,与全自动生化分析仪酶法结果的相关性良好(r=0.956)。结论采用微型光谱仪干试剂法测定血清二氧化碳,是一种可行的检测方法,可用于血清二氧化碳的快速批量测定。     

双试剂溴甲酚绿法测定清蛋白的临床评价

目的 对双试剂溴甲酚绿法测定清蛋白(ALB)进行方法学评价.方法 测定双试剂法的线性范围、批内与批间变异系数、回收率及临床常见干扰因素对测定结果的影响,比较测定结果与单试剂法的差异.结果 双试剂法测定ALB线性范围可达13.2～84.7g/L,批内与批间变异系数(CV)分别为0.53%和1.88%,平均回收率为98.3%,血红蛋白13.0g/L以下、三酰甘油19.6mmol/L以下无显著性干扰.双试剂法与单试剂法测ALB结果高度相关(Y=0.967 4X+0.450 4,r=0.997);测定高脂、黄疸、溶血标本 ALB,两种方法间差异有统计学意义(P<0.005).结论 双试剂溴甲酚绿法测定ALB的方法学性能良好,符合临床使用要求,可用于生化常规检测.     

β_2-微球蛋白的全自动生化分析仪测定法

目的:评价全自动生化分析仪测定β2微球蛋白(β2MG)的方法。方法:采用日常病人混合血清为标本,进行线性测定、精密度测定、回收实验、干扰实验等方法学评价实验。结果:全自动生化分析仪测定β2微球蛋白的线性范围为0mg/L～16mg/L,批内和批间的SD和CV均小于5%,平均回收率为98.7%;胆红素含量在497μmol/L内无干扰。结论:全自动生化分析仪进行β2微球蛋白的测定,适用于临床。     

离子对HPLC测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量

目的:建立同时测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量的离子对HPLC方法。方法:采用依利特Hypersil ODS(250mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以0.02mol/L磷酸二氢钾溶液-甲醇(80∶20,含0.01mol/L庚烷磺酸钠),用磷酸调pH至3.5为流动相,检测波长285nm,采用峰面积外标法。结果:甲硝唑和芬布芬线性范围分别为21～100μg/ml(r=0.9999)和16～79μg/ml(r=0.9999);平均回收率分别为100.2%(RSD=0.93%)和100.4%(RSD=0.44%)。结论:采用离子对HPLC法测定牙周康胶囊中甲硝唑和芬布芬含量,方法准确,操作简便,回收率高。     

L-蛋氨酸γ-裂解酶法测定血清总同型半胱氨酸方法的建立与评价

目的:建立一种L-蛋氨酸γ-裂解酶法测定血清中同型半胱氨酸含量的方法,并对该方法的准确度、精密度和线性范围等指标进行评价。方法:在全自动生化分析仪上通过定量测定亚甲蓝在670nm处的吸光率来计算血清总同型半胱氨酸的含量,通过精密度、回收试验、线性试验、干扰试验、参考范围并与高效液相色谱法(HPLC)对比等方法进行方法学评价。结果:批内变异系数(CV)分别为2.5%、2.9%;日间CV分别为3.9%、4.5%,总CV分别为5.2%、5.6%;回收率分别为98.5%、92.7%;线性范围1.0-40.0μmol/L;本法与高效液相色谱法(HPLC)比较:Y=1.020 X-0.868,R2=0.966,t=2.01,P>0.05,差异无显著性;不同浓度的干扰物显示对结果无明显干扰;参考值范围分别为男性(11.74±4.08)μmol/L,女性(8.96±3.11)μmol/L。结论:L-蛋氨酸γ-裂解酶测定血清中同型半胱氨酸方法的建立成功,方法学评价效果良好。     

脲酶-亮氨酸脱氢酶偶联法测定尿素的方法学评价

目的对脲酶．亮氨酸脱氢酶偶联法测定尿素方法学进行系统评价。方法通过线性试验、灵敏度试验、精密度试验、回收试验、干扰试验及方法学比较试验来分析。结果线性范围为0．32～46．20mmol／L;批内和日间CV％分别为1．8％和3．2％;平均回收率为97．1％;胆红素≤400μmol／L、血红蛋白≤6．6g／L、NH4^＋≤6．5mmol／L对测定无明显干扰;本方法（y）和脲酶-谷氨酸脱氢酶偶联法（x）对比相关性良好（y=1．0834x-0．5382,R^2=0．999）。结论该方法抗内源性氨干扰的能力强于脲酶．谷氨酸脱氢酶偶联法,为一种值得推广、简单、快速、准确、精密、线性范围宽,可应用于全自动分析仪的新方法。     

全自动两点速率法测定α-L-岩藻糖苷酶

目的:建立全自动测定α-L-岩藻糖苷酶(AFU)的两点速率法.方法:用全自动日立7080分析仪两点速率法对测定α-L-岩藻糖苷酶(AFU)的实验参数进行研究.用该法测定了120例健康者的血清样本AFJ的活性.结果:该法最低检出限为1.7 U/L,线性范围可达146U/L(r=0.9997),批内CV为2.8%和1.7%,批间CV为3.6%和2.3%,回收率为99.5%.胆红素＜136.5 μmol/L,甘油三脂＜4.92 μmol/L的情况下,对测定结果无显著影响.结论:本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,干扰少,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪分析.     

葡萄糖脱氢酶连续监测法的研究

目的建立葡萄糖脱氢酶连续监测法,优化其检测条件。方法按酶连续监测法测定要求,对克隆的枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶表达酶液进行测定,确定反应体系的底物浓度、最适pH、反应温度、延滞时间、测定时间、检测范围等。结果以葡萄糖和NAD 为底物时,用连续监测法检测葡萄糖脱氢酶是可行的。当葡萄糖、NAD 的终浓度分别为100mmol/L和2mmol/L时,在反应pH74,37℃,延滞时间30s,测定时间60s等条件下,检测上限可达10000U/L。结论连续监测法能用于测定葡萄糖脱氢酶,快速简便,结果可靠。     

HPLC法间接测定肿瘤患者外周血DPD的活性

目的 建立高效液相色谱法(HPLC)间接测定肿瘤患者外周血二氢尿嘧啶脱氢酶(DPD)活性的方法.方法 采用HPLC法测定肿瘤患者血浆中内源性物质二氢尿嘧啶(H2U)和尿嘧啶(U)的比值,间接估算DPD的活性.色谱柱:Xterra RPC18 (250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-0.02 mol/L磷酸二氢钠(pH4.0),比例为5∶95;流速为1.0 mL/min,H2U和U检测波长分别为204 nm、260 nm.结果 H2U线性范围为62.5 ～2 000μg/L,线性方程为:Y=7.48×10 -4X+ 1.24×10-1,r=0.999 7(n=6),批内RSD小于7.7％,批间RSD小于13.8％,方法学回收率为99.63％ ～ 103.02％;U线性范围为15.625 - 500 μg/L,线性方程为:Y=3.42×10-3X+2.58×10-2,r=0.999 3(n=6),批内RSD小于8.3％,批间RSD小于13.4％,方法学回收率为98.38％～109.08％.结论 本方法可用于肿瘤患者外周血DPD活性的常规监测.     

血清C反应蛋白测定的方法学比较

目的:对全自动干化学法测定血清C反应蛋白(CRP)进行应用评价。方法:在VITROS-250型干式生化分析仪上测定血清CRP,并同时在日立7600型全自动生化分析仪上检测。结果:血清CRP的检测限为7.0～110.0 mg/L;高、中、低浓度的批内CV分别为1.79%、1.90%和2.46%,批间CV分别为1.95%、2.53%和3.62%;回收率平均为98.2%;与日立7600型全自动生化分析仪相关系数R2=0.989 5,相关方程为Y∧=0.970 2X+0.431 9;血红蛋白2.0 g/L,胆红素浓度356μmol/L,三酰甘油浓度7.8 mmol/L,对全自动干化学法测定基本无干扰。结论:干化学法测定CRP快速、准确、可靠。     

碳酸酐酶法测定尿锌

目的:确立灵敏、准确、特异且试剂稳定的碳酸酐酶法以测定尿锌.方法:用3%三氯醋酸沉淀尿中蛋白质,释放出来的锌离子复活脱辅基的碳酸酐酶,以醋酸对硝基酚作为酶促反应底物进行测定.结果:线性范围达61.2 μmol/L,回收率为95.6%～103.8%,批内和批间变异系数分别小于3.5%与4.9%,本法(X)与原子吸收分光光度法(Y)比较具有良好的相关性,Y=0.996X 0.33,r=0.98.Cu2 、Fe2 、Mn2 各200 μmol/L对锌测定均无影响;Co2 10 μmol/L、胆红素342 μmol/L以下对本法测定尿锌结果也无干扰.结论:该法具有特异、准确、灵敏且试剂稳定等优点,适合于生化分析仪检测尿锌.