固定化细胞转化脱氧胸苷合成2'-脱氧腺苷

目的选择最优的载体包埋固定化AEM0957细胞酶促催化脱氧胸苷和腺嘌呤合成脱氧腺苷。方法分别用琼脂、聚丙烯酰胺、明胶、卡拉胶、海藻酸钠、聚乙烯醇等6种材料包埋固定细菌AEM0957细胞,以此为催化剂转化脱氧胸苷合成脱氧腺苷。结果通过优化反应条件,聚丙烯酰胺固定化细胞催化脱氧胸苷的转化率可达57%,高于游离细胞反应能力,并能多次重复使用,10次重复反应的转化率仍能够保持在32%左右。结论聚丙烯酰胺在稳定性、转化性能等方面优于其它材料,该研究为脱氧腺苷的工业化生产奠定了重要基础。     

埃希菌全细胞转化阿糖尿苷合成阿糖腺苷

利用选择培养基从土壤中筛选到具有高核苷磷酸化酶活性的AEM0812菌株,通过16S rDNA鉴定,初步确定为埃希菌(Escherichia sp.).该菌株的最适生长温度与产酶温度均为37℃,最适产酶pH为7.5～8.0,通气培养最佳产酶的发酵时间为8～9 h.利用该菌全细胞建立了以阿糖尿苷为底物酶促合成阿糖腺苷的反应体系,成功得到阿糖腺苷.优化反应条件,并进行了100 L放大试验,结果阿糖尿苷转化率为78.17%,反应液中阿糖腺苷浓度为9.38 g/L.     

RP-HPLC法测定小鼠各组织中阿糖胞苷及阿糖尿苷浓度

目的:建立在血浆、脑脊液和睾丸组织中同时测定阿糖胞苷及其代谢物阿糖尿苷浓度的反相高效液相色谱法并进行小鼠体检内测定波量长分为析28。0 n方m法,柱:色温谱为柱30为℃X,T进er样ra量C18为,流10动μ相L。为将0.0115 m只o小l.鼠L-随1磷机酸分盐成缓A冲、B液、(Cp H3组=,6分.0)别-乙腹腈腔=注9射5∶阿5,糖流胞速苷为105.09、51 m 0L0.0m、2in 0-010,mg·kg-1,30 min后测定小鼠血浆、脑脊液、睾丸组织中的阿糖胞苷及阿糖尿苷浓度。结果:阿糖胞苷、阿糖尿苷检测浓度线性范围分别为0.25～21.74、0.99～86.96 mg·L-(1r>0.998 8),检测限为0.1～0.4 mg·L-1;平均回收率均≥96%,RSD≤7.19%。阿糖胞苷及阿糖尿苷在小鼠血浆、脑脊液和睾丸组织中的药物浓度有显著性差异,低、中剂量给药组只在血浆中检测出阿糖尿苷。结论:所建立的测定方法简单、快速、准确、重复性好,可为临床上阿糖胞苷和阿糖尿苷血药浓度的监测和药动学研究提供参考。     

HPLC法测定血浆中阿糖胞苷及阿糖尿苷浓度

目的：建立同时测定血浆中阿糖胞苷和阿糖尿苷浓度的高效液相色谱法,并用于1例急性非淋巴细胞白血病患儿的血药浓度监测。方法：采用反相高效液相色谱法,色谱柱：XTerra C18（4．6mm×250mm,5μm）;流动相：0．01mol·L^-1的磷酸盐缓冲液（pH=6．0）;检测波长：280nm;流速：0．95mL·min^-1;柱温：30℃。结果：阿糖胞苷血药浓度在0．25～21．74mg·L^-1范围内线性关系良好（r=0．9996）,检测限为0．1mg·L^-1,日内、日间RSD小于5．0％和8．0％;阿糖尿苷血药浓度在0．99～86．96mg·L^-1范围内线性关系良好（r=0．9993）,检测限为0．4mg·L^-1,日内、日间RSD小于5．0％和8．0％。阿糖胞苷及阿糖尿苷平均提取回收率高于96．0％：结论：本方法简单、快速、准确。适用于临床上阿糖胞苷和阿糖尿苷的血药浓度监测及药动学研究．     

用固定化德阿昆合假单孢（Pseudomonas dacunhae CPU 210001）生产L—丙氨酸

用卡拉胶固定含有L-天门冬氨酸-β脱羧酶活性的德阿昆合假单孢（P.dacunhae)。该固定化细胞经0.1mol/L天冬氨酸铵，0.1mmol/LPLP和0.2mol/L醋酸缓冲液（pH5.1)的活化液处理24小时，酶尖力可从620IU/g湿细胞提高到13000IU/g湿细胞，最佳酶反应条件研究的结果显示，在pH6.2-7.25范围内和底物浓度为0.4-0.5mmol/L时。固定化细胞表现最高的酶活力。设计了一个能维持反应液pH和底物浓度的循环式反应器，能将天门冬氨酸结晶直接转化成丙氨酸，在144小时的连续转化中，固定化细胞的平均活力为7000IU/g湿细胞。     

固定化酵母不对称水解布洛芬乙酯制备S（＋）—布洛芬

用多种固定化载体对含有不对称水解布洛芬酯的脂肪酶的丝孢酵母进行了固定化，海藻酸钙，卡拉胶，聚丙烯酰胺凝胶和ＰＶＡ固定化酵母后，酶活力回收分别为６％，１６％，１８％和７％用自制的高脱乙酰度，高分子量的壳聚糖，通过成囊装置地母细胞，并用戊二醛交联，制得直径１．０ｍｍ左右的固定化酵母细胞壳聚糖多孔微球，酶活力回收达８０％以上，操作半衰期７５天以上，而且每次反应所产生的布洛芬的比旋光度均为（α）＾２０ｂ＝     

大剂量阿糖胞苷治疗时血浆阿糖胞苷及阿糖尿苷的HPLC测定方法

目的建立HPLC法测定大剂量阿糖胞苷治疗时血浆中阿糖胞苷(Ara-C)和阿糖尿苷(Ara-U)的浓度。方法反相高效液相色谱法,色谱柱:Phenomenex Fusion(4.6×150mm,4μm),流动相:0.01M磷酸盐缓冲液(pH=7.2)柱温:30℃,流速:0.8mL.min-1,检测波长:Ara-C:280nm,Ara-U:262nm。结果 Ara-C血药浓度在0.5～20μg.mL-1范围内线性良好(R=0.99),回收率为96.1～105.3%,Ara-U血药浓度在1～40μg.mL-1范围内线性良好(R=0.99),回收率为97.2～104.7%,日间、日内RSD小于5%和10%。结论本方法简便、快速,适合用于临床血药浓度监测和药动学研究。     

固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A的研究

目的利用固定化产氨短杆菌细胞合成辅酶A。方法使用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶为复合载体包埋产氨短杆菌细胞,正交试验确定凝胶配方;正交试验确定合成辅酶A的前体配方;同时考察不同pH、不同表面活性剂对固定化细胞合成辅酶A的影响。结果最佳的凝胶配方为:卡拉胶1.0%,魔芋胶0.4%,刺槐豆胶0.4%;最佳前体配方为:泛酸钙0.3%,半胱氨酸0.3%,ATP 2%;最适pH值为7.0;最适表面活性剂为苯扎溴铵,添加量为0.05%。固定化细胞重复使用8次后,合成辅酶A的活性仍保持在50%以上。结论用卡拉胶、魔芋胶和刺槐豆胶作为复合载体制备的固定化产氨短杆菌细胞,合成辅酶A的能力较高,稳定性较好,具有应用价值。     

阿糖胞苷在大鼠体内转化为阿糖尿苷的药动学研究

目的 建立测定大鼠血浆中阿糖尿苷的LC-MS/MS方法,用于大鼠尾iv注射用盐酸阿糖胞苷后阿糖尿苷在体内的药动学研究。方法 采用LC-MS/MS法。ACQUITY UPLC BEH C₁₈色谱柱（50 mm×2.1 mm,1.7 μm）;流动相：水–乙腈,梯度洗脱;体积流量：0.2 mL/min;柱温：40 ℃;进样量：5 μL。离子源：ESI源;扫描方式：多反应监测（MRM）方式,扫描时间为0.1 s;毛细管电压：2.5 kV;锥孔电压：26 V;离子源温度：110 ℃;去溶剂气温度：350 ℃;去溶剂气流量：500 L/h;锥孔气流量：50 L/h。采用回归方程计算血浆中阿糖尿苷。SD大鼠尾iv注射用盐酸阿糖胞苷,制备血药质量浓度–时间曲线,计算药动学参数。结果 阿糖尿苷在1.0～1 000 ng/mL线性关系良好,日内、日间RSD值均小于15%,准确度在±15%,平均提取回收率在90%以上,基质效应在97.3%,稳定性良好。药动学参数：t_max是1.0 h,C_max是134.2 ng/mL,AUC_0-t是2 316.0 ng•h/mL,t_1/2是4.3 h。结论 该方法适合大鼠尾iv阿糖胞苷后阿糖尿苷在体内的药动学研究。     

HPLC法测定白血病患者血浆中阿糖胞苷及其代谢物浓度

目的建立测定阿糖胞苷(Ara-C)及其代谢产物阿糖尿苷(Ara-U)血药浓度的方法,并用于5例急性髓细胞白血病(AML)患者血药浓度监测.方法采用反相离子对高效液相色谱法,色谱柱DiscoveryRC18柱(5μm,250mm×4.6mm);流动相乙腈-甲醇-0.01mo1·L-1磷酸盐缓冲液(pH4.0,含0.01 mo1·L-1戊烷磺酸钠)(4.51.594,v/v/v);流速1.0m1·min-1;检测波长280nm.结果以峰面积外标法定量,线性范围阿糖胞苷为0.25～25mg·L-1,阿糖尿苷为1～100mg·L-1.最低检测浓度阿糖胞苷为0.1mg·L-1,阿糖尿苷为0.2mg·L-1.日内、日间差阿糖胞苷小于9%和¨%,阿糖尿苷小于1%和3%.绝对回收率为99～105%.结论该方法简便,快速,灵敏度和准确度较高,能满足人体血药浓度监测及药代动力学研究的要求.     

热毒宁、单磷酸阿糖腺苷联合治疗手足口病的疗效分析

目的观察热毒宁联合单磷酸阿糖腺苷治疗小儿手足口病临床疗效。方法将145例手足口病患儿随机分为治疗组73例,对照组72例,对照组予以单磷酸阿糖腺苷10mg／（kg·d）,治疗组在对照组治疗的基础上给予热毒宁0．5～lmL／（kg·d）,1次／天,疗程7d,对临床有效率及体征的变化进行分析。结果治疗组疗效好于对照组,有效率（P〈0．01）及临床症状改善（P〈0．01）均有显著性差异。结论热毒宁联合单磷酸阿糖腺苷治疗手足口病可有效改善临床症状,减少并发症发生,缩短病程。     

大剂量阿糖胞苷治疗儿童急性淋巴细胞白血病的疗效观察

目的:观察大剂量阿糖胞苷(Ara-C)治疗儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)的临床疗效。方法:选择我院2003年11月-2006年11月收治的50例ALL患者,均分为治疗组和对照组。在常规诱导方案联合化疗达到完全缓解后,治疗组给予HD(H:高三尖杉酯碱;D:柔红霉素)联合大剂量Ara-C巩固治疗,对照组仅给予HD巩固治疗。观察、比较2组的临床疗效,患者化疗结束后1、3、5年内的无病生存率及不良反应。结果:治疗组总有效率为88.0%,显著高于对照组(44.0%),2组比较差异有统计学意义(χ2=4.399,P<0.05);治疗组1、3、5年的无病生存率分别为88.0%、64.0%、32.0%,对照组分别为48.0%、20.0%、0,治疗组均显著高于对照组(χ2分别为4.116、5.439、6.821,P<0.05);2组在治疗过程中均出现不同程度的骨髓抑制和胃肠道反应,2组不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:大剂量Ara-C方案巩固治疗儿童ALL临床疗效及安全性较好,可以显著延长患者的无病生存期。     

鞘注甲氨蝶呤或阿糖胞苷污染微量长春新碱所致脊髓损伤不良事件患者半年随访观察

目的：初步观察鞘注甲氨蝶呤或阿糖胞苷污染微量长春新碱所致脊髓损伤患者半年预后情况。方法： 选取三个省份6家医院内发生的29例不良事件患者为随访对象。随访观察时间选择在出现神经损害症状后的6个月进行。由神经内科医生评价患者神经损害症状的转归、恢复情况,填写统一的设计问卷。结果：截止到随访时,该不良事件患者有2例死于原发恶性血液病,22例（81%）发生肌肉萎缩;6例（22%）完全性截瘫,21例（78%）为不完全性截瘫,7例二便障碍（26%）。采取多重治疗方式后,40%存活患者的肌力有改善,不完全截瘫患者肌力改善情况较好。结论：该不良事件病例,脊髓损伤半年后仍遗留不同程度的神经功能残障,预后不良;发生后应积极采取一些脊髓损伤的保护措施,有利于改善损伤病例的康复与预后。     

冷冻干燥法制备阿糖胞苷冻干脂质体粉针研究

本文采用冷冻干燥法制备阿糖胞苷冻干脂质体粉针，并建立了质量控制标准。在扫描电镜和透射电镜观察下，将此脂质体冻干品加注射用水溶解后，能很快重新形成脂质体。算术平均粒径为０．４７５６±０．０８３３μｍ，包封率约３０％。     

阿糖胞苷对羟自由基的清除作用

近年来,有关自由基与癌的研究已被广泛重视.羟自由基(·OH)是最强的氧化剂之一,甚至能引起连KMnO_4都不能引起的反应。·OH具有细胞毒素,因此·OH自由基抑制剂的研究,将会对癌的预防和治疗有一定作用。实验证明阿糖胞苷对羟自由基有一定的清除作用,其清除率随药物浓度的增加而加大,同时证明它对羟自由基的生成速率也有一定抑制作用。     

阿糖胞苷对羟自由基的清除作用

The cell damages caused by superoxide free radical (O₂^-) include a series of biochemical processes, including lipid peroxidation, DNA and chromosomal damage as well as deactivation of enzyme. It has been suggested that the intrinsic attacking agent is hydroxyl free radical (.OH), which is generated through Fenton reaction. Thus, any .OH scavenging agent may inhibit the relevant cell damage. Cytosine arabinoside was found to be able to scavenge .OH generated by Co~(60) radiolysis and Fe(11)-EDTA with H₂O₂ in aqueous solutions. Determination of the fluorescence of hydroxylated derivatives from benzoate was used to estimate the level of .OH. The scavenging percentage and inhibition ratio of .OH by cytosine arabinoside were measured.     

Carboplatinum and cytosine arabinoside in patients with disseminated malignant melanoma

Summary Eighteen patients with disseminated malignant melanoma were treated with a combination of carboplatinum and cytosine arabinoside. There were 14 males and 4 females with median age of 51 years (range 36–68 years). We observed 4 complete responses (CR) and 3 partial responses (PR). Lung metastases, cutaneous and subcutaneous metastases responded more often, while liver and lymph node metastases did not respond. Two groups of toxicities were observed: gastrointestinal and hematological. Only nine grade 3 toxicities were observed. Response rates and low toxicity we observed during this study warrant its use for patients with disseminated malignant melanoma comparing it in a future studies with DTIC containing regimens.     

Comparison of the antitumor activity of gemcitabine and ara-C in a panel of human breast, colon, lung and pancreatic xenograft models

Summary Gemcitabine is a new deoxycytidine analog that exhibits significant cytotoxicity against a variety of cultured murine and human tumor cells. The cytotoxic action of gemcitabine appears to be due to the inhibition of DNA synthesis by inhibition of ribonucleotide reductase and by competition with dCTP for incorporation into DNA. We have previously shown that gemcitabine, but not cytosine arabinoside (ara-C), has a broad spectrum of antitumor activity against 7 different types of murine solid tumors. The activity of gemcitabine was schedule dependent. To further characterize its activity, gemcitabine was tested against 12 human carcinoma xenografts. When given on an every 3 day × 4 schedule, the following percent inhibitions (at maximally tolerated doses [MTD]; MTD/2) in tumor growth were seen: MX-1 mammary (93%; 80%), CX-1 colon (92%; 82%), HC-1 colon (96%; 92%), GC3 colon (98%; 94%), VRC5 colon (99%; 100%), LX-1 lung (76%; 61%), CALU-6 lung (75%; 38%), NCI-H460 lung (45%; 46%), HS766T pancreatic (73%; not tested), PaCa-2 pancreatic (69%; 40%), PANC-1 pancreatic (70%; 60%), and BxPC-3 pancreatic (9%; 19%). In contrast, only the LX-1 lung carcinoma xenograft was responsive to ara-C treatment, which inhibited tumor growth by a marginal 62 percent. Thus, like its activity against murine solid tumors, gemcitabine has excellent antitumor activity against a broad spectrum of human solid tumors.